一類黃烷化合物在預防或治療黑色素瘤中的應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，一類黃烷化合物在預防或治療黑色素瘤方面的藥物和 保健品方面的新用途。
【背景技術】
[0002] 黑色素瘤是目前惡性腫瘤中發(fā)病率增長最快的一種，在我國，黑色素瘤的發(fā)病率 也在不斷增高，每年新發(fā)病例已超過10000例。目前，黑色素瘤的治療方法主要包括手術、 化療、免疫治療及靶向治療。多數(shù)早期患者通過手術能夠治愈，但對于進展期患者，化療通 常效果不佳，因此，尋找更為有效的化療藥物單獨或輔助治療具有一定意義。
[0003] 自噬是目前涉及生物學、醫(yī)學、植物學和微生物學等領域的一個快速發(fā)展的研究 熱點。尤其在生物醫(yī)學界，許多研究人員正在積極探討自噬在各種疾病中的作用，研究疾病 中自噬水平調控的分子機制，以期利用自噬為臨床疾病治療尋找新的有效靶點。這些疾病 包括感染性疾病、心腦血管疾病、癌癥、代謝紊亂性疾病和神經退行性疾病等。
[0004] 細胞自噬是細胞在饑餓、能量缺乏等代謝應激狀態(tài)下的一種分解代謝過程，細胞 內的蛋白等大分子、細胞器和胞質通過自噬作用被包裹、消化、降解成核苷、氨基酸和脂肪 酸等可被重復循環(huán)利用的物質，用作合成新的大分子和能量來源ATP，從而維持細胞基本的 生命活動。自噬參與維持蛋白代謝平衡及細胞內環(huán)境的穩(wěn)定，其在清除細胞內廢物、結構重 建以及細胞生長發(fā)育中起著重要作用。自噬既是細胞的一種正常生理活動，也可在細胞遭 受各種刺激（缺氧，缺營養(yǎng)，化學物質刺激，微生物入侵，細胞器損傷，異常蛋白堆積等）時 作為應激反應而發(fā)生。自噬不僅具有維持細胞自我調節(jié)、促進細胞生存的作用，過度活躍的 自嗤活動也可以引起細胞死亡，即"自嗤性細胞死亡（autophagic cell death)"。
[0005] 腫瘤細胞的自噬是一把雙刃劍：一方面，自噬可以清除腫瘤細胞內折疊異常的蛋 白和功能異常的細胞器例如線粒體，抑制細胞應激反應，最終防止基因組損傷從而抑制癌 癥發(fā)生。另一方面，在腫瘤生長的后期，腫瘤細胞可利用自噬作用使自身在營養(yǎng)缺乏和低氧 或缺氧的狀況下得以存活。因此，在腫瘤發(fā)生發(fā)展的不同階段，自噬可能對腫瘤細胞有不同 的影響。
[0006] 機體內的活性氧自由基（Reactive oxygen species, R0S)通過其濃度調節(jié)著機體 細胞的生死平衡。隨著自由基生物學研究的發(fā)展，研究者們逐漸認識到ROS可雙向調控某 些腫瘤細胞的凋亡和增殖，并發(fā)現(xiàn)了自由基與細胞信號轉導之間的內在關聯(lián)。細胞內ROS 堆積是腫瘤細胞與正常細胞的重要差異之一，鑒于腫瘤細胞這一特性，利用某些可增加細 胞氧化應激的化合物可達到對腫瘤細胞與正常細胞的差異調節(jié)：一方面ROS水平的進一步 增加可引起腫瘤細胞的凋亡或壞死；另一方面，正常細胞中ROS水平的增加仍在細胞生理 承受范圍內，不會引起細胞凋亡。
[0007] 黃烷及其聚合物是廣泛存在于傳統(tǒng)藥用植物中的一類化學成分，藥理活性研究結 果表明，黃烷類化合物具有抗腫瘤、降糖、神經保護、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎等方面的活 性，而黃烷聚合物近年來雖有活性方面的報道，但其研究尚未成熟，且其結構復雜，單體化 合物不易提純。文獻報道，黃烷聚合物可以通過硫解的方法進行降解，得到4位被硫代的黃 烷衍生物，但由于產物比較復雜，不易分離純化，因此目前已報道的黃烷衍生物中4位被雜 原子取代的衍生物較少。
[0008] 課題組在對紅景天的化學成分研究過程中發(fā)現(xiàn)，紅景天中的黃烷聚合物要么以 ECG為聚合單元，要么以EGCG為聚合單元，不同紅景天中黃烷聚合單元不同。與其他植物如 葡萄籽中的黃烷聚合單元不同的是，3-位羥基均被沒食子酰化，因此，反應產物比較單一， 后處理簡單。利用此結構特點，我們對此類衍生物進行了進一步的衍生化合成，并對其藥理 活性進行深入研究，結果顯示，該類化合物能夠激活自噬，選擇性增加腫瘤細胞ROS水平， 抑制腫瘤生長。目前，國內尚未有報道此類黃烷衍生物激活自噬，選擇性增加腫瘤細胞ROS 水平，也未有此類黃烷衍生物在治療或預防黑色素瘤方面的專利申請。

【發(fā)明內容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于提供一類新的黃烷化合物。
[0010] 本發(fā)明的另一目的在于提供一類黃烷化合物的制備方法。
[0011] 本發(fā)明的再一目的在于提供一種藥物組合物，其包括至少一個上述黃烷化合物及 藥用載體和/或賦形劑。
[0012] 本發(fā)明的又一目的在于提供一類黃烷化合物在制備用于預防和/或治療黑色素 瘤的產品中的應用。
[0013] 為解決本發(fā)明的技術問題，本發(fā)明采用如下技術方案：
[0014] 本發(fā)明第一方面提供了一類黃烷化合物在其結構如下：
[0015]
[0016] 本發(fā)明第二方面提供了制備本發(fā)明黃烷化合物的方法。
[0017] 該類衍生物是通過對天然藥物中的黃烷聚合物進行衍生化反應后分離純化得到 的。具體通過以下幾個步驟實現(xiàn)：
[0018] 1)該部位的提取參照之前中國專利，專利申請?zhí)枮?01010587820. 7的紅景天有 效部位的提取方法，將含有黃烷聚合物的中藥材粉碎，用6-12倍量的有機溶劑提取2-5 次；將提取液過濾后進行減壓濃縮，除去溶劑，即得藥材總提取物；
[0019] 2)將藥材總提取物進行大孔吸附樹脂柱分離，洗脫液減壓濃縮，經冷凍干燥后即 得黃烷聚合物部位；
[0020] 3)將黃烷聚合物部位通過加入硫代試劑進行硫解反應。
[0021] 步驟1)中優(yōu)選的有機溶劑選自甲醇、乙醇或丙酮。甲醇、乙醇或丙酮的優(yōu)選濃度 為30-95% (和水的混合物的質量比）；
[0022] 步驟1)中為加快提交效率，提取方式優(yōu)選采用50-80°C ;
[0023] 步驟1)中優(yōu)選的含有黃烷聚合物的中藥材選自原料藥材選自大花紅景天、狹葉 紅景天、高山紅景天、玫瑰紅景天、德欽紅景天、喜馬紅景天、帕里紅景天、菱葉紅景天、四裂 紅景天、云南紅景天、大株紅景天、長鞭紅景天、唐古特紅景天、圣地紅景天、小叢紅景天、庫 頁紅景天兒茶、虎杖、大黃、密花豆、桂皮、鉤藤、金雞納皮。
[0024] 步驟2)中大孔吸附樹脂柱所選流動相優(yōu)選為純水-95%乙醇梯度系統(tǒng)；每個梯度 的洗脫體積為2-4個柱體積。
[0025] 步驟2)中優(yōu)選的大孔樹脂選自弱極性或中性大孔樹脂。
[0026] 步驟 2)中更優(yōu)選的大孔樹脂選自 Diaion HP-10、20、30、40、50、DM301、NKA-9、 AB-8、D101、DM130、LSA-10、LSA-20、DM-18、D312。
[0027] 步驟3)中選擇硫解試劑為2, 4, 6-三甲基芐硫醇，其結構如下
[0028]
[0029] 本發(fā)明第三方面涉及以本發(fā)明化合物作為活性成份的藥物組合物。該藥物組合物 可根據(jù)本領域公知的方法制備?？赏ㄟ^將本發(fā)明化合物與一種或多種藥學上可接受的固體 或液體賦形劑和/或輔劑結合，制成適于人或動物使用的任何劑型。本發(fā)明化合物在其藥 物組合物中的含量通常為〇. 1-95重量％。
[0030] 本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道 或非腸道，如口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、 陰道、直腸等。
[0031] 給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可以是溶液劑（包 括真溶液和膠體溶液）、乳劑（包括ο/w型、w/o型和復乳）、混懸劑、注射劑（包括水針劑、 粉針劑和輸液）、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑和搽劑等；固體劑型可以是片劑（包括普通片、腸溶 片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片）、膠囊劑（包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊）、 顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣（粉）霧劑、噴霧劑等；半固體劑型可以是軟 膏劑、凝膠劑、糊劑等。
[0032] 本發(fā)明化合物可以制成普通制劑、也制成是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種 微粒給藥系統(tǒng)。
[0033] 為了將本發(fā)明化合物制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種賦形劑，包括稀 釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑。稀釋劑可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳 糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是水、乙 醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠 漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡 波姆、聚