二萜化合物在制備治療前列腺癌的藥物中的應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從干燥祖師麻中分離得到的二祗類化合物在 治療前列腺癌中的醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 祖師麻為瑞香科(Thymelaeaceae)植物黃瑞香(Da地ne giraldii化tsche)、凹葉 瑞香(D. retusa Hemsl)、陜甘瑞香（又名唐古特瑞香）（D. tangutica Maxim)的根皮及莖皮， 其性溫、味辛苦，具有桂風濕，活血止痛之功效。秋季采收，除去細根，剝?nèi)「ず颓o皮而后 曬干而成。別名：狗皮柳、祖絲麻等。主要分布在山西、陜西、四川、青海、甘肅等地。祖師麻主 要用于治療散疲止痛、桂風通絡(luò)、胃痛、頭痛、四肢麻木、風濕搏痛、跌打損傷、關(guān)節(jié)炎、類風 濕性關(guān)節(jié)痛等。該藥在±耳其民間治療類風濕性關(guān)節(jié)炎和腰腿疼痛等癥效果頗佳。
[0003] 祖師麻的化學成分研究始于二十世紀屯十年代，王明時等首次從祖師麻中分離得 到了香豆素類化合物，隨后對祖師麻的化學成分研究就逐漸開展起來。現(xiàn)有研究表明祖師 麻中除了含有主要活性成分香豆素類化合物W外，還含有黃酬類、木脂素類、二祗類等多種 化合物。
[0004] 祖師麻在臨床上主要應用于抗炎、鎮(zhèn)痛W及抗追疾等方面。近年來通過進一步的 研究發(fā)現(xiàn)祖師麻在抗腫瘤W及治療腎小球腎炎等方面也有著顯著的功效。現(xiàn)市售的成藥主 要包括祖師麻片、祖師麻風濕膏、祖師麻關(guān)節(jié)止痛膏、祖師麻膠囊、祖師麻緩釋微丸、祖師麻 注射液等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從干燥祖師麻中分離得到的一種二祗類化合物在制備 治療前列腺癌的藥物中的醫(yī)藥用途。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得W實現(xiàn)的：
[0007] 二祗化合物式（I)在制備治療前列腺癌的藥物中的應用，它從祖師麻分離獲得，具 有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I):
[0009 ]作為優(yōu)選，化合物(I)從祖師麻分離獲得，分離步驟包括：
[0010] SOI:將祖師麻干燥、粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇 味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃 取物和正下醇萃取物；
[0011] S02:步驟SOl中乙酸乙醋萃取物用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用75~85%乙醇洗 脫10個柱體積，收集75~85%乙醇洗脫液，減壓濃縮得乙醇洗脫物浸膏；
[0012] S03:步驟S02中乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為75:1、45:1、20:1、 12:1和1:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得至化個組分；
[001引 S04:步驟S03中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為20:1、12:巧P5:1的 二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；
[0014] S05:步驟S04中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為 75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合 物(I);
[0015] 上述乙醇的濃度均為體積百分濃度。
[0016] 進一步的，步驟S02在乙酸乙醋萃取物用10%乙醇洗脫8個柱體積之前，對乙酸乙 醋萃取物用大孔樹脂除雜。
[0017] 作為優(yōu)選，所述步驟S02中大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0018] 作為優(yōu)選，所述步驟a中國用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為80%。
[0019] 本發(fā)明在制備治療前列腺癌的藥物中的應用時，可W直接使用，或者W藥物組合 物的形式使用。該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學上可接受 的、對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。發(fā)明人通過CCK-8法和集落形成試 驗已驗證上述化合物（I)對前列腺癌細胞株P(guān)C3和DU145的作用，且抑制作用具有濃度一一 時間依賴性關(guān)系。因此化合物(I)可能成為晚期前列腺癌治療中的一個具有潛力的選擇。因 此，本發(fā)明的化合物(I)具有在制備治療前列腺癌的藥物中的醫(yī)藥用途。
【附圖說明】
[0020] 圖1為化合物(I)結(jié)構(gòu)式；
[0021] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實驗ECD值比較；
[0022] 圖3為不同濃度化合物（I)作用7化后PC3和DU145存活率；
[0023] 圖4為10.0 mg/L化合物（I)作用不同時間后PC3和DUl 45存活率。
【具體實施方式】
[0024] 下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應當理解，可W對 本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0025] 實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[00%]試劑來源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0027]審恪方法：（a)將干燥祖師麻（IOkg)粉碎，用80%乙醇熱回流提?。?化X3次），合 并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次)和水飽和的正 下醇(化X3次)萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物(431g)和正下醇萃取物；（b) 步驟(a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用 75%乙醇洗脫10個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏（157g); (C)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為75:1(8個柱體積）、45:1 (8個柱體積）、20:1 (8個柱體積）、12:1 (8個柱體積)和1:1 (5個柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯 度洗脫得到5個組分；（d)步驟(C)中組分4(49g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為 20:1(8個柱體積）、12:1(10個柱體積)和5:1(8個柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3 個組分；（e)步驟(d)中組分2(25g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度 為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10-12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合 物（I)(35mg)。
[0028] 結(jié)構(gòu)確證:HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z 511.2308,結(jié)合核磁特征可得分子式為 C27H3608，不飽和度為 10。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)Sh(郵m，DMSO-ds，500MHz): H-I (2.47，t，J = 13.5) ，H-l(1.57，dd，J=13.5,3.5)，H-2(2.54，m)，H-3(5.69，t，J = 5.0)，H-4(3.01，d J = 5.0)，H-7(1.75，ddd，J=15.5，12.5,2.0)，H-7(1.26，m)，H-8(1.92，m)，H-8(1.54，t，J = 12.5) ，H-9(3.37，dd，J = 9.5,4.5)，H-ll(3.01，d，J = 2.5)，H-12(3.36，d，J = 2.5)，H-16 (0.91，d，J=7.5)，H-17(1.07，s)，H-18(0.93，s)，H-19(0.79，s)，H-20(l.ll，s)，H-2' (8.05，d，J = 7.0)，H-3'（7.44，t，J = 7.0)，H-4'（7.52，t，J = 7.0)，H-5'（7.44，t，J = 7.0)， H-6,（8.05，d，J = 7.0)，9-OH(4.55，d，J = 4.5)，ll-OH(5.36，s)，12-OH(5.：M，s)，15-OH (6.45,3);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)扣（口口111，0150-(16，1251化）：42.3(細2，1-〇,35.7(邸，2-〇， 78.4(CH，3-C)，54.1(CH，4-C)，212.3(C，5-C)，49.0(C，6-C)，31.8(Ol2,7-C)，29.2(CH2,8-C)，79.5(CH，9-C)，38.8(C，10-C)，79.3(CH，11-C)，70.1(CH，12-C)，56.0(C，13-C)，208.1 (C，14-C)，85.1(C，15-C)，16.2(Ol3，16-C)，18.9(ai3，17-C)，25.1(CH3，18-C)，14.7(ai3， 19-C)，10.5(CH3,20-C)，131.1(C，1'-C)，130.2(CH，2'-C)，129.3(CH，3'-C)，133.5(CH，4'-〇，129.3(邸，5'-〇，130.2(邸，6'-〇，167.2((：，7'-〇;碳原子標記參見圖1。紅外光譜表明 該化合物含有徑基（3583,3502和3378。111-1)，幾基（1708和1689(3111-1)和芳環(huán)（1605和1496畑1 -1)基團。Ih醒R譜顯示該化合物含有一個苯甲酯基部分姐8.05 (2H，d，J = 7. OHz，H-2 '和護 6'），7.52aH，t，J = 7.0Hz，H-4'）和7.44(2H，t，J = 7.0Hz，H-3'和H-5'）；四個含氧次甲基5 H5.69(t，J = 5.0Hz，H-3)，3.37(dd，J = 9.5,4.5Hz，H-9)，3.01(d，J = 2.5Hz，H-llWP3.36 ((1^ = 2.5化，護12);五個甲基如0.91((1^ = 7.5化，出-16)，1.07(出-17)，0.93(出-18)， 0.79化3-19)和1.1U曲-20)。除了苯甲酯基部分，1化NMR和DEPT譜顯示20個碳信號，除了對 應上述的功能單元外還包括六個季碳(兩個幾基碳SC212.3，208.1和一個含氧碳SC85.1)。 根據(jù)核磁數(shù)據(jù)分析表明該化合物是一個雙祗醇苯甲酸醋類化合物。歷B村普中，此-1與C-2， C-3，C-4，C-15和C-16;H-3與C-1，C-15和C-7' ；出-16與C-1，C-巧PC-3;0H-15與C-4和C-14的 相關(guān)性，W及結(jié)合運些質(zhì)子和共振碳的化學位移，表明該化合物含有一個連有甲基和苯甲 酷片段的五元環(huán)，此外C-15位連有一個徑基基團。通過HMBC譜中H-4與C-5和C-6;曲-17與C-5，C-6和C-13 ;曲-20與C-6，C-13和C-14; 0H-15與C-14的相關(guān)性，可知1，4-環(huán)己二酬通過C-4 和C-15與五元環(huán)相連，且C-6和C-13位連有兩個甲基。此外，H-9和H-Il與C-18和 與 C-12和C-13;H-12 與 C-13和〇20;曲-17 與 C-7;出-18 和出-19 與 C-9，C-10 和 C-11;出-20 與 0-12;0護9與(：-9和(：-10的相關(guān)性表明八元環(huán)通過(：-6和(：-13與六元環(huán)相連，(：-9，(：-11和(：-12位各連有一個徑基，W及C-IO位連有兩個甲基。NOESY譜中，H-12與出-19的相關(guān)性表明它 們?yōu)閑-構(gòu)型。此外，H-3與H-巧陽-4;H-4與H-2，H-巧陽3-17;H-9與H-U和出-18的相關(guān)性表明 運些質(zhì)子為Q-構(gòu)型。綜合氨譜、碳譜、歷B村普和NOESY譜，W及文獻關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)， 可基本確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本 一致(圖2)。
[0029] 實施例2:化合物(I)單純應用過程中的藥理作用試驗
[0030] 一、材料和儀器
[0031] 前列腺癌細胞株P(guān)C3(ArCC-C化-1435)、前列腺癌細胞株DU145(ATCC-HTB-81)。化 合物（I)自制，HPLC歸一化純度大于98%，用二甲基亞抓(DMSO)配制成濃度為l.Og/L的儲存 液備用。