倒地鈴提取物在制備治療糖尿病的藥物制劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種倒地鈴提取物中的應(yīng)用。更具體地說(shuō)，本發(fā)明設(shè)及一種倒地鈴提 取物在制備治療糖尿病的藥物制劑中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 倒地鈴是無(wú)患子科植物倒地鈴(Cardiospermum halicacabum L.)干燥全草，又名 假苦瓜、鬼燈籠、=角燈籠，生于曠野、田邊、灌叢中。主要分布廣東、廣西、福建、臺(tái)灣等西南 各地，民間多用于治療糖尿病、肺炎、黃痘、淋病、風(fēng)濕、跌打損傷、蛇咬傷等。本課題組對(duì)倒 地鈴降血糖的藥理作用進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，其乙醇提取物能明顯降低四氧喀晚性糖尿病小鼠 和腎上腺素性糖尿病小鼠的血糖值，篩選出乙酸乙醋和正下醇部位為降血糖的有效部位， 從有效部位分離并鑒定了 11個(gè)化合物，其中包括蒲公英賽醇、30-赤楊醇等化學(xué)成分。a-葡 萄糖巧酶(a-glucosidase)能催化淀粉或薦糖消化的最后一步而產(chǎn)生豐富的糖類物質(zhì)，目 前是治療糖尿病的主要祀點(diǎn)之一。臨床上用于治療糖尿病的Q-葡萄糖巧酶抑制劑主要有阿 卡波糖、伏格列波糖、米格列醇等，但運(yùn)些化合物具有一定的副作用，因此，找一種安全、療 效可靠治療糖尿病的天然藥物具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。因此，本研究W倒地鈴有效部位的主 要成分蒲公英賽醇、30-赤楊醇為研究對(duì)象，Wa-葡萄糖巧酶為祀點(diǎn)，對(duì)其體外抗糖尿病的 作用進(jìn)行進(jìn)一步篩選。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問(wèn)題，并提供至少后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。
[0004] 本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種倒地鈴提取物在制備治療糖尿病的藥物制劑中 的應(yīng)用，倒地鈴提取物，即蒲公英賽醇和30-赤楊醇均能抑制a-葡萄糖巧酶活性，其抑制性 與對(duì)照品阿卡波糖高相近，可用于治療糖尿病的等疾病。
[000引為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的運(yùn)些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種倒地鈴提取物在制備治 療糖尿病的藥物制劑中的應(yīng)用。
[0006] 優(yōu)選的是，所述的倒地鈴提取物在制備治療糖尿病的藥物制劑中的應(yīng)用，所述倒 地鈴提取物為蒲公英賽醇或泌-赤楊醇。
[0007] 優(yōu)選的是，所述的倒地鈴提取物在制備治療糖尿病的藥物制劑中的應(yīng)用，所述藥 物制劑為包括有效量的倒地鈴提取物和藥學(xué)上可接受的輔料組成。
[0008] 優(yōu)選的是，所述的倒地鈴提取物在制備治療糖尿病的藥物制劑中的應(yīng)用，所述藥 物制劑為注射劑、片劑、丸劑、膠囊、懸浮劑或乳劑。
[0009] 本發(fā)明至少包括W下有益效果:本發(fā)明所述的倒地鈴提取物-蒲公英賽醇和泌-赤 楊醇有望用于治療糖尿病等Wa-葡萄糖巧酶為祀點(diǎn)的相關(guān)疾病，經(jīng)O-葡萄糖巧酶抑制實(shí)驗(yàn) 表明，蒲公英賽醇和30-赤楊醇均能抑制a-葡萄糖巧酶活性，其抑制性與對(duì)照品阿卡波糖高 相近，可用于治療糖尿病的等疾病;該藥物可W制成藥學(xué)上的常見(jiàn)劑型，包括制成注射劑、 片劑、丸劑、膠囊、懸浮劑或乳劑。
[0010] 通過(guò)體外a-葡萄糖巧酶的抑制實(shí)驗(yàn)，證明了倒地鈴提取物-蒲公英賽醇和泌-赤楊 醇對(duì)Q-葡萄糖巧酶具有很強(qiáng)的抑制活性，對(duì)Q-葡萄糖巧酶抑制的ICso值分別為0.82mg/m巧口 0.78mg/ml〇
[0011] 本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過(guò)下面的說(shuō)明體現(xiàn)，部分還將通過(guò)對(duì)本 發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
【附圖說(shuō)明】
[0012] 圖1為不同濃度的泌-赤楊醇對(duì)a-葡萄糖巧酶的抑制率；
[0013] 圖2為不同濃度的蒲公英賽醇對(duì)a-葡萄糖巧酶的抑制率。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，W令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說(shuō)明書 文字能夠據(jù)W實(shí)施。
[0015] 需要說(shuō)明的是，下述實(shí)施方案中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法，所 述試劑和材料，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑獲得。
[0016] 30-赤楊醇的結(jié)構(gòu)式為：
[0017] -、提取過(guò)程
[001引 1、原料準(zhǔn)備
[0019] 倒地鈴全草采于廣西南寧郊區(qū)，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院中藥鑒定教研室廖月葵高級(jí)實(shí)驗(yàn) 師鑒定為無(wú)患子科植物倒地鈴化rdiospermum halicacabum L.干燥全草。標(biāo)本存于廣西中 醫(yī)學(xué)院中藥化學(xué)教研室。
[0020] 2提取與分離
[0021] 倒地鈴干燥全草粗粉25kg，用95%乙醇滲漉提取，收集10倍量滲漉液；藥渣再用 60 %乙醇滲漉提取，收集10倍量滲漉液，合并滲漉液，減壓濃縮得到總浸膏。浸膏加適量水 懸浮后依次用石油酸、氯仿、醋酸乙醋、正下醇萃取，回收溶劑，得到相應(yīng)部位的萃取物。
[0022] 石油酸部位140g經(jīng)硅膠柱色譜，用石油酸-醋酸乙醋梯度洗脫，得到化合物1 (1.98g)和5個(gè)粉末粗結(jié)晶A、B、C、D、E，A和B粉末經(jīng)硅膠柱色譜分離得到化合物2(30mg)和3 (6.5mg); C、D、E、F粉末經(jīng)石油酸-醋酸乙醋反復(fù)重結(jié)晶得到化合物1 (192.4mg)。
[0023] 醋酸乙醋部位SOg經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜（氯仿-丙酬)分離和氯仿-甲醇反復(fù)重結(jié)晶， 得到化合物2(452mg);
[0024] 其中，化合物1:白色針狀結(jié)晶（氯仿），Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽(yáng)性。EI-MS m/z:426[M] +,408,393,274,259,245,205,173,119,109,95,69,55 〇lH-NMR(400MHz,CDC13) 5:1.15，1.09，1.04，1.00,0.98,0.94,0.93,0.85(3H，s，CH3X8)，3.46(lH，br s，H-3)，5.62 (lH，d，J = 4.Wz，H-12);13C-Mffi(l〇〇MHzCDC13)S:19.6(C-l)，27.8(C-2)，76.3(C-3)， 40.8(C-4),141.6(C-5),122.1(C-6),23.6(C-7),47.4(C-8),34.6(C-9),49.7(C-10),33.1 (C-11),30.3(C-12),37.8(C-13),38.9(C-14),34.5(C-15),34.8(C-16),30.1(C-17),43.0 (C-18),35.0(C-19),28.2(C-20),32.0(C-21),39.3(C-22),28.9(C-23),25.4(C-24),16.2 (C-25) ,18.2(C-26), 18.4(C-27),32.4(C-28),32.0(029)，36.0(030)。W上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) 報(bào)道基本一致，故鑒定化合物I為泌-赤楊醇。
[0025] 化合物2:白色針狀結(jié)晶（氯仿），mp 248~249°C，Libe;rmann-Bu;rchard反應(yīng)呈陽(yáng) 性。與蒲公英賽醇對(duì)照品共薄層，在3種展開(kāi)系統(tǒng)中Rf值完全一致，且顯色相同，故鑒定化合 物2為蒲公英賽醇。
[0026] 二、實(shí)驗(yàn)研究
[0027] 1、體外a-葡萄糖巧酶活性的測(cè)定
[002引所有測(cè)試都是用Microplate reader ELX808TM型酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek公司），在37 °C條件下測(cè)定。數(shù)據(jù)分析軟件使用化igin軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，使用阿卡波糖作為對(duì)照品。
[0029] 1.1酶促反應(yīng)體系的選定
[0030] 在酶標(biāo)版上加入170ul的PBS緩沖液，再分別加入a-葡萄糖巧酶（Iu)IOul,在反應(yīng) 溫度37°C條件下放置20min后。加入IOul不同濃度的底物，即濃度分別為0.3125mg/ml、 0.625mg/ml、1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml的對(duì)硝基甲酪葡萄巧(pNPG)，迅速混合均勻后于 反應(yīng)溫度37°C放置20min后，測(cè)定混合溶液在400皿處吸光度(OD)，通過(guò)調(diào)節(jié)底物濃度不同， 對(duì)混合液的吸光度進(jìn)行檢測(cè)，篩選出合適的底物濃度，W配成最佳的酶促體系。
[0031 ]表1底物不同濃度時(shí)混合溶液的OD值
[0033] 由表1可知，混合溶液的吸光度OD值發(fā)現(xiàn)隨著底物濃度的增加而增加，而OD值過(guò)高 或者過(guò)低，都會(huì)導(dǎo)致測(cè)出來(lái)的數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確，最佳的OD值為0.7-1.0左右，因此可W確定最佳 底物濃度為1.25mg/ml，因此選定酶促反應(yīng)體系為:①170ul的PBS緩沖液;②IOul的a-葡萄 糖巧酶（Iu);③IOul的底物(濃度為1.25mg/ml的對(duì)硝基甲酪葡萄巧），此種酶促體系下，有 利于酶促反應(yīng)的進(jìn)行。
[0034] 1.2 IC日日值的計(jì)算
[0035] 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將沒(méi)有加入樣品時(shí)的酶活力定為100%，那么加入不同濃度樣品后 的酶活力為相對(duì)活力百分?jǐn)?shù)(即殘余活力百分?jǐn)?shù)）：
[0036] 作圖可知，相對(duì)活力為50%時(shí)將對(duì)應(yīng)樣品濃度時(shí)，即為ICso值；
[0037] 其中，將市面上普遍用來(lái)治療糖尿病的一種口服降糖藥-阿卡波糖作為對(duì)比；
[003引1.2.1 30-赤楊醇的ICso的計(jì)算
[0039]由圖1可W知道，在測(cè)定赤楊醇對(duì)a-葡萄糖巧酶的抑制作用中，30-赤楊醇的ICso值 為0.75mg/ml，相比對(duì)照品阿卡波糖（ICsq = O.8mg/ml)要好，并且隨著泌-赤楊醇濃度的增加 抑制率也隨著升高，其通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制位于小腸的各種a-葡萄糖巧酶，使淀粉類分解為葡 萄糖的速度減慢，從而減緩腸道內(nèi)葡萄糖的吸收，降低餐后高血糖，從而達(dá)到有效治療糖 尿病的目的。
[0040] 1.2.2蒲公英賽醇ICso的計(jì)算
[0041] 在測(cè)定蒲公英賽醇對(duì)a-葡萄糖巧酶的抑制作用中，由圖2可W知道，蒲公英賽醇的 ICso值為0.82mg/ml，與對(duì)照品阿卡波糖（IC5Q = 0.8mg/ml)相近，并且隨著蒲公英賽醇濃度 的增加抑制率也隨著升高，其通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制位于小腸的各種O-葡萄糖巧酶，使淀粉類分 解為葡萄糖的速度減慢，從而減緩腸道內(nèi)葡萄糖的吸收，降低餐后高血糖，從而達(dá)到有效治 療糖尿病的目的。
[0042] 表2.化合物對(duì)a-葡萄糖巧酶抑制活性的ICso值
[0044] 綜上所述，蒲公英賽醇、30-赤楊醇對(duì)a-葡萄糖巧酶的抑制活性與對(duì)照品阿卡波糖 相近。本發(fā)明為研究開(kāi)發(fā)新的抗糖尿病藥物提供了新的思路。
[0045] 盡管本發(fā)明的實(shí)施方案已公開(kāi)如上，但其并不僅僅限于說(shuō)明書和實(shí)施方式中所列 運(yùn)用，它完全可W被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對(duì)于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地 實(shí)現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限 于特定的細(xì)節(jié)和運(yùn)里示出與描述的實(shí)施例。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種倒地鈴提取物在制備治療糖尿病的藥物制劑中的應(yīng)用。2. 如權(quán)利要求1所述的倒地鈴提取物在制備治療糖尿病的藥物制劑中的應(yīng)用，其特征 在于，所述倒地鈴提取物為蒲公英賽醇或3β-赤楊醇。3. 如權(quán)利要求1所述的倒地鈴提取物在制備治療糖尿病的藥物制劑中的應(yīng)用，其特征 在于，所述藥物制劑為包括有效量的倒地鈴提取物和藥學(xué)上可接受的輔料組成。4. 如權(quán)利要求1所述的倒地鈴提取物在制備治療糖尿病的藥物制劑中的應(yīng)用，其特征 在于，所述藥物制劑為注射劑、片劑、丸劑、膠囊、懸浮劑或乳劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種倒地鈴提取物在制備治療糖尿病的藥物制劑中的應(yīng)用，所述倒地鈴提取物為蒲公英賽醇和/或3β-赤楊醇，經(jīng)α-葡萄糖苷酶抑制實(shí)驗(yàn)表明，蒲公英賽醇和3β-赤楊醇均能抑制α-葡萄糖苷酶活性，其抑制性與對(duì)照品阿卡波糖高相近，可用于治療糖尿病的等疾病。
【IPC分類】A61K31/56, A61P3/10
【公開(kāi)號(hào)】CN105534990
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510880543
【發(fā)明人】霍麗妮, 韋建華, 陳睿, 李培源, 盧汝梅
【申請(qǐng)人】廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2015年12月4日