9-O-β-D-小檗紅堿葡萄糖醛酸苷在制備降糖藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及小築紅堿II相代謝產(chǎn)物9-O-0-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧(BRBG)降糖 活性和潛在應(yīng)用價(jià)值，有望通過(guò)進(jìn)一步研究成為一類(lèi)創(chuàng)新藥物，還設(shè)及生物樣本中該化合 物的分離、純化和制備。
【背景技術(shù)】
[0002] 小築堿是從傳統(tǒng)中藥黃連中分離的一種具有多重藥理作用的生物堿。作為其主要 的代謝產(chǎn)物之一，小築紅堿（即9-去甲基小築堿)近些年來(lái)被發(fā)現(xiàn)具有多重藥理活性，前期 研究發(fā)現(xiàn)具有比小築堿更強(qiáng)的體內(nèi)降血糖作用。本發(fā)明中的BRBG為小築紅堿9-0-位葡萄糖 醒酸取代產(chǎn)物，是小築紅堿體內(nèi)最主要的代謝產(chǎn)物，與小築紅堿體內(nèi)發(fā)揮藥效密切相關(guān)。研 究發(fā)現(xiàn)其可W促進(jìn)肝臟細(xì)胞葡萄糖的消耗和利用，促進(jìn)葡萄糖類(lèi)似物的攝取，促進(jìn)糖原合 成。但到目前為止，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)有關(guān)小築紅堿葡萄糖醒酸巧藥理活性的研究報(bào)告。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所用的BRBG采用常規(guī)的分離純化方法從生物樣本中制得。本實(shí)驗(yàn)室采用 LC-MS-PDA檢測(cè)分析，其純度達(dá)95%，經(jīng)質(zhì)譜(MS)法和核磁共振(Ih-NMR)法分析鑒定，本研 究所用的BRBG產(chǎn)品化學(xué)結(jié)構(gòu)正確，即9-O-0-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧純度和化學(xué)結(jié)構(gòu)符合 展開(kāi)生物學(xué)活性和藥理作用的研究要求。
[0004] 發(fā)明人通過(guò)對(duì)小築紅堿體內(nèi)代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)小築紅堿體內(nèi)主要代謝產(chǎn)物 之一 BRBG具有良好的降糖作用，有望經(jīng)過(guò)進(jìn)一步研究用于臨床降血糖和糖尿病治療。
[0005] 本發(fā)明的有益效果
[0006] 本發(fā)明提供了小築紅堿體內(nèi)活性代謝產(chǎn)物9-O-0-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧具有 良好的降糖藥效證據(jù)，為制備新型降糖藥物提供更好的選擇。
【附圖說(shuō)明】
[0007] 圖1為口-TOF測(cè)定的MSl和MS2特征離子碎片。
[000引圖2為BRBG促進(jìn)k02肝細(xì)胞葡萄糖消耗。其中，Blank為空白對(duì)照組;BBR為陽(yáng)性對(duì) 照組(小築堿50iiM)，BRB和服BG分別為小築紅堿和9-O-0-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧給藥組 (濃度分別為5，20,50咖）。沖<0.05，*沖<0.01，**沖<0.0 Olvs空白對(duì)照組。
[0009] 圖3為BRBG促進(jìn)k02肝細(xì)胞攝取巧光標(biāo)記葡萄糖類(lèi)似物(2-N抓G) Control為未給 藥的空白對(duì)照組，BRB和BRBG分別為小築紅堿和9-O-0-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧給藥組(濃 度為50咖）。
[0010] 圖4為9-O-0-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧促進(jìn)肝細(xì)胞糖原生成。其中，Blank為空白 對(duì)照組;BBR為陽(yáng)性對(duì)照組(小築堿50iiM)，BRB和BRBG分別為小築紅堿和9-0-e-D-小築紅堿 葡萄糖醒酸巧給藥組(50iiM)。*沖<0.01，林沖<0.001VS空白對(duì)照組。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 本發(fā)明通過(guò)下面的實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的解釋?zhuān)⒉灰馕吨景l(fā)明僅限于此。
[0012] 實(shí)施例1. 9-O-0-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧分離制備和結(jié)構(gòu)鑒定。
[0013] 方法:取小築紅堿灌胃給藥后的生物樣品（尿液、膽汁等），沉淀蛋白并過(guò)濾，旋蒸 濃縮，液相制備柱分離純化。目標(biāo)產(chǎn)物凍干處理后，LC-MS-PDA分析純度，IT-TOF分析碎片特 征，DMS0-d6溶解Ih NMR 500MHz核磁共振波譜儀測(cè)定結(jié)構(gòu)。
[0014] 結(jié)果：其口-T0F碎片特征如圖l，MSl[M + H]+m/z 498.1379，推測(cè)結(jié)構(gòu)為 [C2甜24N010] +，MS2[M+H]+m/z 322.1070,推測(cè)結(jié)構(gòu)為[C19H16N04] +。
[0015] 其核磁共振氨譜結(jié)果如下：
[0016] iH-NMR，7.75(lH，s，H_l)，7.08(lH，s，H_4)，3.20(2H，o，H_5)，5.02-5.05(lH，m，H_ 6),4.87-4.91(lH，m，H_6),10.09(1H，S，H_8)，8.16-8.18(lH，d，8.5甜Z，H_11),8.00-8.02 (lH，d，9.10Hz，H_12)，8.87(lH，s，H_13)，6.17(2H，s，2,3-0CH20)，4.03(3H，s，10-0CH3)， 4.89-4.91(IH，d，7.55Hz,GlcUA-I).
[0017] 解析目標(biāo)化合物iH-醒R譜共振峰歸屬，結(jié)合離子碎片推測(cè)其結(jié)構(gòu)為9-0-e-D-小築 紅堿葡萄糖醒酸巧，結(jié)構(gòu)式如式I。
[0019] 實(shí)施例2. 9-O-0-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧促進(jìn)肝細(xì)胞葡萄糖消耗。
[0020] 方法:取心02細(xì)胞株，用含10%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，傳代接種 于96孔板中，每孔含2(K)化培養(yǎng)基，培養(yǎng)至一定密度后，棄除初始培養(yǎng)基加入不同含藥無(wú)血 清培養(yǎng)基，分別為：空白對(duì)照組、SOiiM小築堿組為陽(yáng)性對(duì)照組、SiiM小築紅堿組、20yM小築紅 堿組、50測(cè)小築紅堿組、5測(cè)小築紅堿葡萄糖醒酸巧組、20測(cè)小築紅堿葡萄糖醒酸巧組、SOiiM 小築紅堿葡萄糖醒酸巧組，每組N=5。給藥后解育2地，測(cè)培養(yǎng)基上清葡萄糖含量，并計(jì)算培 養(yǎng)基中葡萄糖的消耗量。
[002U 結(jié)果：測(cè)定結(jié)果表明，小築紅堿（BRB，5iiM，P<0.05;20iiM，50iiM，P<0.01，vs 81日1110和小築紅堿葡萄糖醒酸巧（81^6，扣]\1，20咖，？<0.05;50咖，？<0.001，￥8 81日111〇都 能夠顯著的促進(jìn)心〇2肝細(xì)胞葡萄糖消耗。顯示作為小築紅堿的代謝產(chǎn)物，9-O-0-D-小築紅 堿葡萄糖醒酸巧具有很好的體外降糖藥效，結(jié)果如圖2所示。
[0022] 實(shí)施例3. 9-0-e-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧促進(jìn)肝細(xì)胞對(duì)巧光標(biāo)記的葡萄糖類(lèi)似 物的攝取。
[0023] 方法:取心02細(xì)胞株，用含10 %胎牛血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，傳代接種 于巧光板中，待細(xì)胞生長(zhǎng)至一定密度后，棄除初始培養(yǎng)基加入不同含藥無(wú)血清培養(yǎng)基，分別 為：空白對(duì)照組、小築紅堿組(50iiM)、小築紅堿葡萄糖醒酸巧組(50iiM)。給藥后解育24h，棄 含藥培養(yǎng)基，含IOOiiM巧光標(biāo)記的葡萄糖類(lèi)似物（2-NBDG，2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-l，3-diazol-4-yl)Amino)-2-Deo巧glucose)的無(wú)血清培養(yǎng)基解育60min后，PBS潤(rùn)洗S遍。于巧 光倒置纖維鏡下觀察各組巧光強(qiáng)度差異。
[0024] 結(jié)果:測(cè)定結(jié)果表明，小築紅堿和9-O-0-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧（50咖)可W促 進(jìn)肝細(xì)胞心〇2對(duì)巧光標(biāo)記的葡萄糖類(lèi)似物攝取，提示9-O-0-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧具有 很好的體外降糖藥效，結(jié)果如圖3所示。
[0025] 實(shí)施例4. 9-O-0-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧促進(jìn)肝細(xì)胞糖原生成。
[00%]方法:取心02細(xì)胞株，用含10 %胎牛血清DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，傳代接種 于6孔板中。待細(xì)胞生長(zhǎng)至一定密度后，棄除初始培養(yǎng)基加入不同含藥無(wú)血清培養(yǎng)基，分別 為:空白對(duì)照組、小築堿組(50山〇、小築紅堿組(50山〇、小築紅堿葡萄糖醒酸巧組巧OiiM)。給 藥后解育24h，測(cè)定細(xì)胞中糖原含量。
[0027] 結(jié)果:測(cè)定結(jié)果表明，小築紅堿和9-O-0-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧（50咖)可W促 進(jìn)肝臟細(xì)胞糖原生成，結(jié)果如圖4所示。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 如式I所示的9-0-β-0-小築紅堿葡萄糖醒酸巧在制備治療糖尿病、高血糖和糖代謝 素亂藥物中的應(yīng)用；式I;分子式：[C2甜24Ν010] +;分子量:498.14。2. 式I所示9-0-β-0-小築紅堿葡萄糖醒酸巧與藥學(xué)上可接受的酸結(jié)合所形成的鹽，所 述藥學(xué)上可接受的酸為巧樣酸、馬來(lái)酸、班巧酸、富馬酸、蘋(píng)果酸、氨漠酸、硝酸、酒石酸、草 酸、較酸、甲橫酸、泛酸、鹽酸、硫酸、亞硫酸、焦亞硫酸、氨硫酸、憐酸、二氨憐酸、亞硫酸、丙 酬酸、尼克酸、乳酸、乳清酸、抗壞血酸、葉酸、甲酸、乙酸、丙酸、下酸、戊酸、甘油酸、徑乙酸、 牛橫酸、甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽，其特征在于，還含有一種或多種其它降血糖活性成分。4. 一種降血糖藥物的組合物，由式I所示的9-0-β-0-小築紅堿葡萄糖醒酸巧或權(quán)利要 求2所述的鹽與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體制成。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于:還含有一種或多種其它降血糖活性 成分。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于:在藥物組合物中，式I所示的9-0-β-D-小築紅堿葡萄糖醒酸巧的純度大于95%。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于：組合物被制成臨床上可接受的劑 型，包括口服W及胃腸外給藥形式的劑型。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，所述劑型為片劑、膠囊、口服液、糖 漿、顆粒、滴丸、日崩片、緩釋片、貼劑、微丸、微囊、脂質(zhì)體、微球、緩控釋制劑、控釋制劑、水 針、凍干粉針、無(wú)菌粉針或輸液。9. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的藥物組合物，其特征在于:所述藥學(xué)上可接受的載體選自 填充劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、溶劑、助溶劑、抗氧劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、抑調(diào)節(jié)劑。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種具有降糖作用的化合物，9-O-β-D-小檗紅堿葡萄糖醛酸苷，其為具有多重藥理活性的小檗紅堿(又名9-去甲基小檗堿)體內(nèi)最主要的代謝產(chǎn)物。通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，給予9-O-β-D-小檗紅堿葡萄糖醛酸苷后，肝細(xì)胞對(duì)于葡萄糖的消耗和攝取量以及糖原合成量增加。該發(fā)現(xiàn)可能導(dǎo)致一種新型降糖藥物的發(fā)現(xiàn)，具有潛在的對(duì)于臨床治療糖尿病等相關(guān)疾病的應(yīng)用價(jià)值。
【IPC分類(lèi)】A61P3/08, A61P3/10, A61K31/706
【公開(kāi)號(hào)】CN105535010
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610118576
【發(fā)明人】王廣基, 阿基業(yè), 楊娜, 趙玉清, 孫潤(rùn)彬, 何駿, 馮思琦, 黃京秋
【申請(qǐng)人】中國(guó)藥科大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2016年3月2日