一種蜂膠提取物的逆流超聲制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及蜂膠活性成分開發(fā)利用領(lǐng)域，特指一種蜂膠提取物的逆流超聲制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蜂膠是蜜蜂采集植物幼嫩枝芽或汁液，并混入自身上聘腺分泌物形成的混合物。 含有多中有機酸、酪類、脂類、高級醇類、祗締類、黃酬類等多種具有生理活性的成分。其不 同形式的提取物具有抑菌、促進傷口愈合、麻醉、抗氧化、調(diào)節(jié)血糖等多種生理功效。因為蜂 膠產(chǎn)量很少，全球年產(chǎn)量不足800噸，因此研究蜂膠的活性組分提取技術(shù)，盡可能提高蜂膠 的利用率，節(jié)約運一寶貴資源，是目前的蜂膠開發(fā)的一個瓶頸問題。
[0003] 乙醇提取蜂膠中活性成分已有報道，如已公開的發(fā)明專利"一種蜂膠黃酬提取物 的制備方法及其用途"（公開號:CN103520213A)，提取時間化，提取率52%~56 %。和本方法 相比，雖然提取率相當(dāng)，但是本方式的提取時間縮短了48%~99%。"蜂膠提取方法"（公開 號:CN104095174A)，提取時間30h，提取率23.5%~34.5 %，本方法與之相比，時間縮短了86 ~99.8%，提取率提高了85.5~172%。上述普通醇提和本方法相比提取效率低、提取時間 長。利用超聲波促進蜂膠提取的方法也有報道，如已公開的發(fā)明專利"一種蜂膠的提純方 法"（公開號:CN104719760A)，提取時間25min。提取物黃酬含量8.7%~12.3 %，本方法與之 相比，提取時間相當(dāng)，提取物黃酬含量增加了215%~229%。"一種超聲波技術(shù)提取蜂膠功 能性成分的方法"（公開號:CNl 528130A)，提取時間25min，提取率34.26 %，提取物黃酬含量 10.02%，本方法與之相比，提取時間相當(dāng)，提取率增加了37.2 %~66.8%，提取物黃酬含量 增加了79.6%~279%。上述方法所用超聲波均為靜態(tài)間歇式處理方式，和本方法相比，提 取效率仍較低，提取時間仍較長，且溫度升高易造成熱敏性成分損失。
[0004] 因為超聲波是一種縱向波，波的發(fā)出方向是超聲波工具頭正下方一定距離內(nèi)，所 W常規(guī)超聲波提取把超聲探頭直接插入容器中，容器中能夠被處理的物料占總料液量的比 例很小，處理效果較差，如公考號為CN1528130A的發(fā)明專利。本方法讓物料逆向于超聲波探 頭縱波方向，保證了物料全部被處理，改善了處理效果。
[0005] 有關(guān)超聲波多頻組合提取的方法已有報道，如公開號為CN102764620B的發(fā)明專利 公開的一種逆流通過式超聲設(shè)備，該方法是物料流在諸多平行的超聲頭下方流過，和本方 法相比，物料流并未與與超聲波縱波發(fā)出方向逆向流動，傳質(zhì)效果較差。公開號為 102764619A公開的一種順序工作多頻非接觸和接觸組合式超聲處理設(shè)備、CN102764621A順 序工作多頻接觸式超聲輔助提取和超聲輔助反應(yīng)設(shè)備均為靜態(tài)提取設(shè)備，和本方法相比， 物料流并未與與超聲波縱波發(fā)出方向逆向流動，傳質(zhì)效果較差。
[0006] 蜂膠等生物資源中很多有效成分是很好的抗氧化劑，但是很多抗氧化劑本身也容 易被氧化失效，超聲波提取過程中產(chǎn)生大量自由基，會造成提取物生物活性下降，本方法在 超聲提取的同時通過氮氣保護，減少了活性成分的氧化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種蜂膠提取物的逆流超聲制備方法。
[0008] 本發(fā)明的上述目的是通過W下手段來實現(xiàn)的：
[0009] -種蜂膠提取物的逆流超聲制備方法，按照下述步驟進行：
[0010] (1)原料冷凍粉碎至全部過80目篩，按液料比10:1-50:1 (mL: g)加入質(zhì)量濃度為50 ~90%的乙醇-水溶液調(diào)配，調(diào)配好的料液用蠕動累WlOO~500mL/min的進料速度累入逆 流超聲波提取室，
[0011] (2)通入1〇1111/111111~100〇1111/111111的純度〉99.999%的氮氣進行保護，惰性氣體同時 起到攬拌作用，W保證超聲波處理均勻。
[0012] (3)用超聲波的頻率為20、22、25、28、33、40曲z中的一種或幾種結(jié)合同步或依次處 理，超聲功率500W~2000W，超聲工作/間歇時間比為1:10~10:1，料液初始溫度20~60°C， 超聲時間5~25min。
[0013] (4)提取結(jié)束后，提取液采用100(K)r/min冷凍離屯、除去不溶的固體雜質(zhì)。上清液采 用真空濃縮濃縮至浸膏，得到蜂膠提取物，同時回收溶劑。
[0014] 其中所述的步驟(3)優(yōu)選用超聲波的頻率為20、28、40曲Z同步組合使用，超聲功率 800W，超聲工作/間歇時間比為3:1，料液初始溫度40°C，超聲時間15min。
[0015] 本發(fā)明所具有的優(yōu)點是:利用逆流聚能式超聲波循環(huán)提取蜂膠中的活性成分，同 時通過氮氣保護易氧化成分在超聲提取中損失，與現(xiàn)有方法相比，提取時間縮短了48~ 99.8 %，可溶性物質(zhì)提取率提高了 37.2~172 %，提取物黃酬含量提高了 46~279 %。
【附圖說明】
[0016] 圖1本發(fā)明所用逆流超聲波提取裝置；1為超聲波發(fā)生器1; 2為超聲波工具頭;3為 氮氣管;4為氮氣瓶;5為超聲波提取室;6為儲料槽;7為蠕動累；
[0017] 圖2本發(fā)明生產(chǎn)蜂膠提取物的工藝路線。
【具體實施方式】
[0018] 圖1為本發(fā)明所用逆流超聲波提取裝置;裝置由超聲波發(fā)生器1、超聲波工具頭2、 儲料槽6、蠕動累7、超聲波提取室5及其之間的連接管路、氮氣瓶4、氮氣管3及其間連接管路 等組成。其中超聲波發(fā)生器1控制超聲波工具頭2分別發(fā)出頻率為20、22、25、28、33、40曲z的 超聲波。
[0019] 具體實施過程如下（如圖2所示）：原料冷凍粉碎至全部過80目篩。按液料比10:1-50 :1 (mL: g)加入質(zhì)量濃度為50~90 %的食用乙醇水溶液調(diào)配，調(diào)配好的料液用蠕動累W 100~500mL/min的進料速度累入逆流超聲波提取室，通入lOml/min~lOOOml/min的純度〉 99.999 %的氮氣進行保護，惰性氣體同時起到攬拌作用，W保證超聲波處理均勻。用超聲波 的頻率為20、22、25、28、33、40k化中的一種或幾種結(jié)合同步或依次處理，超聲功率500W~ 2000W，超聲工作/間歇時間比為1:10~10:1，料液初始溫度20~60°C，超聲時間5~25min， 整個超聲過程中物料逆向于超聲波縱波方向。提取結(jié)束后，提取液采用l〇〇(K)r/min冷凍離 屯、除去不溶的固體雜質(zhì)。上清液采用真空濃縮濃縮至浸膏，得到蜂膠提取物，同時回收溶 劑。
[0020]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但本發(fā)明不限于下述實施例，對于本領(lǐng) 域一般技術(shù)人員而言，在不背離本發(fā)明原理的前提下對它所做的任何顯而易見的改動，都 屬于本發(fā)明的構(gòu)思和所附權(quán)利要求的保護范圍。
[0021 ]本發(fā)明中蜂膠中有效成分總提取率的測定方法如下：
[0022]將提取后所得提取液的上清液倒入干燥稱重過的濾紙及玻璃漏斗，過濾到錐形瓶 中，再用少量的乙醇洗涂燒杯和濾紙兩次，然后將殘渣及濾紙與玻璃漏斗在50°C下干燥至 恒重。按照下式進行總提取率的計算：
(1)
[0024] 式中:m-樣品質(zhì)量(g) ;mi-濾紙和漏斗質(zhì)量(g) ;m2-濾紙、漏斗和殘渣質(zhì)量(邑）。
[0025] 本發(fā)明中蜂膠中黃酬提取率的測定方法如下：
[00%]用電子天平精確稱取蘆下標(biāo)準(zhǔn)品0.0050g，于25mL容量瓶中，并用70%乙醇溶解定 容，配制成0.2mg/血的標(biāo)準(zhǔn)溶液。用移液槍移取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分別置 于25mL容量瓶中，加去離子水至6mL，參比液直接加去離子水至6mL，依次加入5 %亞硝酸鋼 ImL，搖勻靜置6min。加入10 %硝酸侶ImL，搖勻靜置6min;再加入4.3 %氨氧化鋼IOmL，最后 加蒸饋水定容，搖勻靜置15min。空白參照液直接加入6mL蒸饋水，后面依次加入相同的試劑 為參比。用紫外分光光度計在510nm波長處測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0027]準(zhǔn)確吸取定容后的提取液ImL, W80%乙醇為稀釋液，稀釋10倍，按上述方法測定、 按照下式計算黃酬提取率。
(2)
[0029] 式中：X-由回歸方程得到的黃酬濃度(mg/mL) ;m-樣品的質(zhì)量(g); 10-稀釋倍 數(shù);240-提取液的總體積(mU。
[0030] 常規(guī)提取步驟:原料100g冷凍粉碎至全部過80目篩。按液料比10: ImL/g加入濃度 為75%(v/v)的食用乙醇水溶液調(diào)配后進行提取。提取過程中持續(xù)對料液進行攬拌，W保證 料