天麻和天麻素治療非酒精性脂肪肝的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及天麻/天麻素治療非酒精性脂肪肝的新用途及其獨(dú)特的分子機(jī)理。
【背景技術(shù)】：
[0002] 非酒精性脂肪肝是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪過(guò)度 蓄積為主要特征的病理綜合征，主要原因與脂肪和葡萄糖代謝紊亂等有關(guān)。主要病理生理 表現(xiàn)為肝臟脂肪變性、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肝功能異常等。隨著我國(guó)國(guó)民經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展和人民 生活水平提高，非酒精性脂肪肝的發(fā)生率不斷增加。脂肪肝如不及時(shí)加以控制，會(huì)導(dǎo)致肝硬 化甚至肝癌。目前，非酒精性脂肪肝的治療除了生活習(xí)慣改變、運(yùn)動(dòng)、飲食結(jié)構(gòu)改變，尚無(wú)針 對(duì)性的藥物治療。本發(fā)明通過(guò)科學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，天麻/天麻素通過(guò)獨(dú)特的分子機(jī)理明顯改善非 酒精性脂肪肝，而且無(wú)毒副作用。這一新的功效，迄今為止尚未見(jiàn)有國(guó)內(nèi)外的相關(guān)報(bào)道。
[0003] 天麻原名赤箭，在我國(guó)有2000多年的臨床應(yīng)用歷史，天麻的主要有效成分是天麻 素(4-羥甲基苯-β-D吡喃葡萄糖苷）。天麻/天麻素目前在臨床上主要用于治療神經(jīng)系統(tǒng)疾 病，如椎一基底動(dòng)脈供血不足、頭痛、眩暈等，尚沒(méi)有開(kāi)發(fā)成治療非酒精性脂肪肝的成功產(chǎn) 品。
[0004] 本發(fā)明的目的是提供傳統(tǒng)中草藥天麻/天麻素在治療非酒精性脂肪肝發(fā)明的新用 途及其獨(dú)特分子機(jī)理。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0005] 本發(fā)明涉及:天麻和天麻素在制備治療非酒精性脂肪肝的產(chǎn)品中的用途。
[0006] 本發(fā)明涉及:天麻中的天麻素在制備治療非酒精性脂肪肝產(chǎn)品中的用途。
[0007] 本發(fā)明涉及的產(chǎn)品包括而不限于:藥品、食品、保健品。
[0008] 本發(fā)明涉及:包括而不限制，天麻或天麻素在制備上調(diào)肝細(xì)胞?；o酶A氧化酶3 (AC0X3)的mRNA和蛋白的表達(dá)水平的藥物的用途。
[0009] 本發(fā)明涉及:天麻或天麻素制成口服劑型。
[0010] 本發(fā)明涉及:天麻采用微粉，其粒度是200-1000目。
[0011 ]本發(fā)明涉及:天麻采用如下比例的米麻、箭麻組成:米麻與箭麻之間的比例是：1 -10:20-300;其中米麻的粒度是200-1000目、箭麻的粒度是80-600目。
[0012]本發(fā)明涉及:天麻的劑量是200-1000毫克。
[0013]本發(fā)明涉及:天麻素的劑量是5-10毫克。
[0014] 本發(fā)明涉及片劑，該片劑的組成如下：
[0015] 800目米麻20-40克、200目箭麻220-500克;或天麻素3-10克
[0016] 200目重結(jié)晶乳糖40-120克，和，600目噴霧干燥乳糖50-140克;和 [00 17]預(yù)膠化淀粉10-40克；和
[0018] 硬脂酸鎂2-10克;和
[0019] 抗壞血酸鈉2-6克。
[0020]本發(fā)明涉及片劑，該片劑的優(yōu)選組成如下：
[0021 ] 800 目米麻20、25、30、40克、200目箭麻220、320、420、500克;或天麻素3、6、8、10克
[0022] 200目重結(jié)晶乳糖40、60、80、120克，和，600目噴霧干燥乳糖50、60、80、100、120、 140克；和
[0023] 預(yù)膠化淀粉10、20、30、40克;和
[0024] 硬脂酸鎂2、6、8、10克;和 [0025] 抗壞血酸鈉2、4、6克。
[0026] 本發(fā)明涉及片劑，該片劑的優(yōu)選組成如下：
[0027] 800 目米麻20、25、30、40克、200目箭麻220、320、420、500克;或天麻素3、6、8、10克 [0028] 200目重結(jié)晶乳糖40、60、80、120克，和，600目噴霧干燥乳糖50、60、80、100、120、 140克；和
[0029]微晶纖維素20、30、40克；
[0030] 預(yù)膠化淀粉10、20、30、40克；和 [0031 ] 交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮40、60、80克;和
[0032] 硬脂酸鎂2、4、6、8、10克;和
[0033] 微粉硅膠2、4、6、8、10 克 [0034] 說(shuō)明書附圖
[0035]圖1大鼠肝臟油紅染色正常對(duì)照 [0036]圖2大鼠肝臟油紅染色高脂對(duì)照 [0037]圖3大鼠肝臟油紅染色結(jié)果天麻素 10mg/kg
[0038] 圖4:天麻素處理HepG2細(xì)胞后能劑量依賴性上調(diào)AC0X3的mRNA表達(dá)水平 [0039]圖5:天麻素處理HepG2細(xì)胞后能劑量依賴性上調(diào)AC0X3的蛋白表達(dá)水平
【具體實(shí)施方式】 [0040] 實(shí)施例1
[0041 ] 天麻片組方篩選
[0042]
[0043] 天麻素片組方篩選
[0044]
[0045]本發(fā)明分別采用脂肪乳劑灌胃和高脂肪高膽固醇飼料投喂來(lái)誘導(dǎo)大鼠非酒精性 脂肪肝模型，以天麻素、天麻微粉、及其片劑用來(lái)治療動(dòng)物，以立普妥或舒降之為陽(yáng)性對(duì)照 藥，觀察天麻素、天麻微粉、及其片劑對(duì)脂肪肝的改善作用。
[0046]另外在體外實(shí)驗(yàn)中研究天麻素改善脂肪肝的分子機(jī)理。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下：
[0047] 實(shí)施例2
[0048]天麻素及其片劑對(duì)脂肪乳劑誘導(dǎo)大鼠非酒精性脂肪肝的預(yù)防作用
[0049] 1、材料：
[0050]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:雄性SD大鼠40只，體重140-160g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限 公司許可證編號(hào)：SCXX(京）2007-0001。飼養(yǎng)環(huán)境，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所實(shí) 驗(yàn)動(dòng)物房(SPF級(jí)），許可證編號(hào)為:SYXK(京)2007-0013。
[0051] 脂肪乳劑配置：自制脂肪乳劑配方含豬油30%，膽固醇10%，吐溫-8010%，丙二醇 20%，膽鹽3%，水27%。將豬油、膽固醇和吐溫80加熱融化混合制成油相，膽鹽溶解于水后， 與丙二醇混勻制成水相。適當(dāng)冷卻后將油相和水相混合充分?jǐn)嚢杌靹蛑瞥芍救閯?。藥物?天麻素，白色粉末，浙江誠(chéng)意藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào):20091005。
[0052] 天麻素片劑，天麻素片組方5的片劑
[0053] 陽(yáng)性藥：阿托伐他汀鈣片（立普妥兒1?11'01〇批號(hào)；1965091(.生產(chǎn)日期2009.11，有 效期2012.10，輝瑞制藥有限公司。
[0054]試劑盒:總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)、高密度脂蛋 白膽固醇(HDL-c)和GPT、G0T試劑盒購(gòu)買自北京中生生物工程高科技公司。
[0055] 主要儀器:全自動(dòng)生化分析檢測(cè)儀(HITACHI 7060 Automatic Analyzer)、臺(tái)式離 心機(jī)等。
[0056] 2、方法
[0057]大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2d后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為5個(gè)組，正常對(duì)照組6只，高脂(模型） 對(duì)照組10只，其余每組8只動(dòng)物，即天麻素10mg/kg組、天麻素片劑50mg/kg組、立普妥2 · 5mg/ kg組?？崭?2h稱重，眼眶后靜脈叢采血，檢測(cè)血清TC、TG、LDL-C的基礎(chǔ)值。
[0058]按上述實(shí)驗(yàn)4組給予普通基礎(chǔ)飼料。模型對(duì)照組，天麻素、天麻素片劑及立普妥組 給予高脂乳(劑量20ml/kg)。灌胃半小時(shí)后給予天麻素 10mg/kg、天麻素片劑及LPT 2.5mg/ kg，灌胃容量為10ml/kg。連續(xù)給予4周。動(dòng)物自由進(jìn)食和飲水，每周稱體重2次，于給藥第2 周、第4周空腹12h眶靜脈叢采血，測(cè)定血清1'(：、了6、〇^-(：、601'、6?1'指標(biāo)。采用北京中生生物 工程高技術(shù)公司提供的試劑盒測(cè)定。
[0059]病理檢查：給藥4周后，處死動(dòng)物，取各組肝臟用10%福爾馬林固定，分別修塊，經(jīng) 梯度酒精脫水，石蠟包埋，切片(厚度5μΜ)ΗΕ染色，光鏡觀察。另取肝臟液氮冷凍，油紅染色 觀察肝臟脂肪顆粒。
[0060] 統(tǒng)計(jì)分析:方差分析結(jié)合組間t檢驗(yàn)。
[0061] 3、結(jié)果 [0062] 病理結(jié)果：
[0063] 1)正常對(duì)照組:5例（5/5)肝組織未見(jiàn)肝細(xì)胞脂肪變性、肝細(xì)胞壞死、肝纖維組織增 生及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
[0064] 2)高脂組:7例(7/7)肝細(xì)胞脂肪變性，3例為輕度病變，3例為中度病變，1例為重度 病變。5例(5/7)小灶性肝細(xì)胞壞死伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)，其中4例為輕度病變，1例為中度病變。 [0065] 3)天麻素10mg/kg組:7例（7/7)肝細(xì)胞脂肪變性，均為輕度病變。5例(5/7)小灶性 壞死伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)，均為輕度病變。
[0066] 4)天麻素片劑50mg/kg組:4例（5/7)肝細(xì)胞脂肪變性，均為輕度病變。3例（3/7)小 灶性壞死伴炎細(xì)胞浸潤(rùn)，均為輕度病變。
[0067]結(jié)論：
[0068]受試物天麻素10mg/kg劑量、天麻素片劑50mg/kg作用4周對(duì)高脂飼養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞 脂肪變性有一定的改善作用。
[0069]油紅染色結(jié)果:高脂組肝臟較正常對(duì)照組出現(xiàn)顯著脂肪蓄積，天麻素10mg/kg治療 4周能減少大鼠肝臟脂肪蓄積(圖1、2、3)。
[0070] 血脂指標(biāo)：
[0071] 高脂對(duì)照組較正常組TC、TG、LDL-C顯著增高。天麻素、天麻素片劑治療2周即對(duì)上 述指標(biāo)有顯著作用。見(jiàn)表1.
[0072](表1)天麻素、天麻素片對(duì)大鼠血脂的影響(給藥2周）
[0074] *、#為高脂對(duì)照與正常對(duì)照比較？<0.05，？<0.01;#、##為給藥組與高脂對(duì)照比 較 Ρ<0·05，Ρ<0·01。
[0075] 實(shí)施例3
[0076] 天麻微粉及其片劑對(duì)高脂飼料誘導(dǎo)大鼠非酒精性脂肪肝的治療作用
[0077] 1、材料
[0078] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:Wistar雄性大鼠41只，體重140_160g，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究 所繁育場(chǎng)提供，動(dòng)物(大鼠）許可證編號(hào)為SCXK(京)2005-10013;飼養(yǎng)環(huán)境，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 藥物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房(三級(jí)），許可證編號(hào)為:SYXK(京)2004-0001。
[0079] 高脂飼料配方72.5%普通基礎(chǔ)飼料、10%蛋黃粉、10%熟豬油、5%葡萄糖、2%膽 固醇、0.5%膽鹽。中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所營(yíng)養(yǎng)部提供，飼料許可證編號(hào)為SCXK-2006-0003〇
[0080] 藥物:天麻微粉，由全天麻，采用常規(guī)工藝烘干，200目超微粉碎制得，
[0081 ]組方4的片劑，
[0082] 舒降之（Simvastatin Tablets)，杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：W1093 20060210ο
[0083] 2、方法
[0084] 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5d后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)分為5組，分別為正常對(duì)照組(η = 8)、高脂對(duì) 照組(η = 9)、舒降之10mg/kg組(η = 8)、天麻微粉1000mg/kg組(η = 8)、天麻片組方4的片劑 560mg/kg組(η = 8)。正常對(duì)照組給予普通基礎(chǔ)飼料;模型對(duì)照組、天麻微粉、組方4、舒降之 組給予高脂飼料。建模4周后開(kāi)始給藥治療，同時(shí)繼續(xù)給予高脂飼料。治療8周以后處死動(dòng) 物，取肝臟用10%福爾馬林固定，分別修塊，經(jīng)梯度酒精脫水，石蠟包埋，切片（厚度5μΜ)， H · E染色，光鏡下檢查。
[0085] 3、結(jié)果
[0086] 病理結(jié)果：
[0087] 1)正常對(duì)照組:正常對(duì)照組肝組織未見(jiàn)肝細(xì)胞脂肪變性、肝細(xì)胞壞死、肝纖維組織 增生及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
[0088] 2)高脂組:高脂組中9例(9/9)重度肝細(xì)胞脂肪變性，5例(5/9)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，2例(2/ 9)纖維組織增生，1例（1 /9)片狀肝細(xì)胞壞死。
[0089] 3)舒降之組:舒降之組中5例（5/8)重度肝細(xì)胞脂肪變性，3例（3/8)中度肝細(xì)胞脂 肪變性，未見(jiàn)肝細(xì)胞壞死、纖維組織增生和炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
[0090] 4)天麻微粉組:天麻微粉組中6例(6/8)重度肝細(xì)胞脂肪變性，2例（