一種復(fù)方丹參片的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)方丹參片的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 復(fù)方丹參片記載于藥典標(biāo)準(zhǔn)，處方為丹參450g、三七141g、冰片8g，以上三味，丹參 加乙醇加熱回流1.5小時(shí)，提取液濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至適量，備用；藥渣加50%乙醇 加熱回流1.5小時(shí)，提取液濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至適量，備用;藥渣加水煎煮2小時(shí)，煎 液濾過(guò)，濾液濃縮至適量。三七粉碎成細(xì)粉，與上述濃縮液和適量的輔料制成顆粒，干燥。冰 片研細(xì)，與上述顆?；靹颍瑝褐瞥?33片，包薄膜衣；或壓制成1000片，包糖衣或薄膜衣，即 得?；钛?，理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹，癥見(jiàn)胸悶、心前區(qū)刺痛；冠心病心絞痛 見(jiàn)上述癥候者。三藥入方，多效合一。心腦同治、修復(fù)血管、調(diào)脂降壓。改善缺血、缺氧、胸悶、 心痛等癥狀。口服，一次3片，一日3次，每片0.5g。
[0003] 現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有復(fù)方丹參片在提取制備方面采用超臨界技術(shù)的報(bào)道，而采用 打粉等方法，工藝粗糙、復(fù)雜、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過(guò)大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本 品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)方丹參片的制備方 法。
[0005] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種復(fù)方丹參片在制備抑制人腎小球系膜MC細(xì)胞 增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過(guò)如下的方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 一種復(fù)方丹參片的制備方法，由丹參450g、三七141g、冰片8g作為原料藥制成，所 述的方法由下列步驟組成:取上述藥材加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶 劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-3010^，溫度30_50°(：，0)2流量1-31111/^ 生藥· min，萃取時(shí)間150_180min，得超臨界萃取物，制粒，壓片，每片重0.5g。
[0008] 所述復(fù)方丹參片的制備方法，所述C02超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百 分比為5%。
[0009] 所述復(fù)方丹參片的制備方法，所述C02超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C， C02流量2ml/g生藥· min，萃取時(shí)間160min。
[0010] 所述復(fù)方丹參片在制備抑制人腎小球系膜MC細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，復(fù)方丹參片 由丹參450g、三七141g、冰片8g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取上述藥材加 入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃 取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，C02流量l-3ml/g生藥· min，萃取時(shí)間150-180min，得超臨 界萃取物，粉碎成細(xì)粉，制粒，壓片，每片重〇. 5g。
[0011] 所述復(fù)方丹參片在制備抑制人腎小球系膜MC細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于 復(fù)方丹參片的制備方法中所述C02超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0012]所述復(fù)方丹參片在制備抑制人腎小球系膜MC細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于 復(fù)方丹參片的制備方法中所述C02超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02流量2ml/g 生藥· min，萃取時(shí)間160min。
[0013]現(xiàn)有技術(shù)中，復(fù)方丹參片一次5~7片，一日3~4次，每0.5g，采用本發(fā)明制備成的 復(fù)方丹參片每片〇.5g，但含有的藥材量比原來(lái)多，在同樣服用量的情況下具有更多活性成 分。
【具體實(shí)施方式】
[0014]以下通過(guò)實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。
[0015]實(shí)施例1:取丹參450g、三七141g、冰片8g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾 帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力30MPa，溫度30°C，C02流量lml/g 生藥· min，萃取時(shí)間180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，制粒，壓片，每片0.5g。
[0016]實(shí)施例2:取丹參450g、三七141g、冰片8g，加入到⑶2超臨界萃取器中，乙醇作為夾 帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%，萃取壓力15MPa，溫度50°C，C02流量lml/g 生藥· min，萃取時(shí)間180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，制粒，壓片，每片0.5g。
[0017]實(shí)施例3:取丹參450g、三七141g、冰片8g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾 帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02流量2ml/g 生藥· min，萃取時(shí)間160min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，制粒，壓片，每片0.5g。
[0018] 實(shí)施例4:復(fù)方丹參片抑制人腎小球系膜MC細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料
[0019] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0020] 1.1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株:人腎小球系膜MC細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)，DMEM+10 % FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0021 ] 1.2實(shí)驗(yàn)藥物:研究藥物:本發(fā)明復(fù)方丹參片:按實(shí)施例3方法制備。藥液儲(chǔ)液:稱取 l〇〇mg復(fù)方丹參片內(nèi)容物，混懸于5ml無(wú)水乙醇中，0.2μηι濾器過(guò)濾，500μ1 doff管分裝，-20 °C存儲(chǔ)，同時(shí)0.2μπι濾器過(guò)濾無(wú)水乙醇以備對(duì)照組之用。
[0022] 1.3實(shí)驗(yàn)試劑:0觀\1(618邙公司0&1吣.12100-0611^〇1如.758137) ;胎牛血清（浙 江天杭生物科技有限公司Lot .No. 100419) ;NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司 Cat ·Νο· 11810-033Lot ·Νο · 1088387) ;Trypsin(AMRESC0公司批號(hào)：2010/04) ;EDTA(AMRESC0 公司批號(hào)：2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0 公司批號(hào)：2010242); Streptomycin Sulfate(AMRESC0公司批號(hào)：2010382);無(wú)水乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司批 號(hào)：080310182) ;MTT(Biosharp批號(hào)：0793) ;PBS(實(shí)驗(yàn)室自配）；
[0023] 1.4實(shí)驗(yàn)器材:萊卡倒置顯微鏡(德國(guó)Leica型號(hào)：DM1L);可見(jiàn)-紫外光微孔板檢測(cè) 儀(美國(guó)MD公司型號(hào)：SPECTRA MAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號(hào)：3111);超凈臺(tái)（蘇凈集團(tuán) 安泰公司制造型號(hào)：SW-CJ-ΖΠ ));純水儀(美國(guó)Spring公司型號(hào)：S/N 020579);精密移液器 (法國(guó)吉爾森公司型號(hào):P2);電子天平(德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào):BT323S);全自動(dòng)高壓 滅菌鍋（日本SANYO公司型號(hào):MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型 號(hào):DHG9123A);冰箱（西門(mén)子公司型號(hào):KG18V21TI);液氮罐(CBS型號(hào)：2001);低速離心機(jī) (上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào):ΚΑ-1000);0.2μπι濾器(MILLIPORE型號(hào)：SLGP033RB); 10cm培養(yǎng) 皿(NEST公司）、96孔培養(yǎng)板(NEST公司）；細(xì)胞計(jì)數(shù)板;離心管、移液管、Tips若干。
[0024] 2實(shí)驗(yàn)方法：1)人腎小球系膜MC細(xì)胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng) (10cm培養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml 0.25 %胰蛋白酶-0.04 %EDTA，37 °C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打 細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，l〇〇〇rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3 X 104個(gè)>1。2)將細(xì)胞種 入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180μ1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中（37 °C，5 % C02)常規(guī) 培養(yǎng)。3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50%-70%，加入復(fù)方丹參片溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24K4) 24h后加入20μ1 MTT溶液(5mg/ml，即0.5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)處。5)411后扣板法倒去上清，用吸 水紙輕輕拍干，每孔加入200μ1二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。 在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液）， 對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。7) 結(jié)果以藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表示:細(xì)胞增值抑制率（％ )=(對(duì)照孔0D值-給藥孔0D值)/對(duì)照 孔0D值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0025] 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果:MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì) 人腎小球系膜MC細(xì)胞增殖抑制有差異(P〈0.05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性(P〈 〇. 01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異(P〈0.001)。
[0026] 表1復(fù)方丹參片對(duì)人腎小球系膜MC細(xì)胞增殖抑制影響研究(又土 SD)
[0027]
[0028] 注：與對(duì)照組比較，*P〈0 · 01;林P〈0 · 001
[0029] 4實(shí)驗(yàn)結(jié)論:復(fù)方丹參片可以抑制人腎小球系膜MC細(xì)胞增殖，減少人腎小球系膜MC 細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種復(fù)方丹參片的制備方法，由丹參450g、三七141g、冰片8g作為原料藥制成，其特 征在于所述的方法由下列步驟組成:取上述藥材加入到C0 2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶 劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，⑶ 2流量 l-3ml/g生藥· min，萃取時(shí)間150-180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，制粒，壓片，每片 重0.5g。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述復(fù)方丹參片的制備方法，其特征在于所述C02超臨界萃取夾帶劑 占總萃取溶劑的體積百分比為5%。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述復(fù)方丹參片的制備方法，其特征在于所述C02超臨界萃取的萃取 壓力20MPa，溫度40°C，C〇2流量2ml/g生藥· min，萃取時(shí)間160min。4. 復(fù)方丹參片在制備抑制人腎小球系膜MC細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于復(fù)方丹 參片由丹參450g、三七141g、冰片8g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取上述藥 材加入到C0 2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力 15-30MPa，溫度30-50°C，C02流量l-3ml/g生藥· min，萃取時(shí)間 150-180min， 得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，制粒，壓片，每片重〇. 5g。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述復(fù)方丹參片在制備抑制人腎小球系膜MC細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng) 用，其特征在于復(fù)方丹參片的制備方法中所述C0 2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積 百分比為5 %。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述復(fù)方丹參片在制備抑制人腎小球系膜MC細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng) 用，其特征在于復(fù)方丹參片的制備方法中所述C0 2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C， C〇2流量2ml/g生藥· min，萃取時(shí)間160min。
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥制劑領(lǐng)域，具體提供一種復(fù)方丹參片的制備方法，由丹參450g、三七141g、冰片8g作為原料藥制成，采用超臨界萃取制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了復(fù)方丹參片在制備抑制人腎小球系膜MC細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【IPC分類】A61K31/045, A61K36/537, A61P13/12, A61K9/20
【公開(kāi)號(hào)】CN105582051
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610119591
【發(fā)明人】趙明亮
【申請(qǐng)人】南京正亮醫(yī)藥科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年5月18日
【申請(qǐng)日】2016年3月2日