S0-d6)S211.39(s),208.98(s),169.80(s),160.73(s),143.02 (s),131.42(s),127.05(s),85.91(s),82.25(s),66.70(s),65.63(s),58.62(s),56.55 (s),56.61(s),53.30(s),52.45(s),51.52(s),45.29(s),40.06(s),38.52(s),38.17(s), 34.73(s),33.17(s),29.35(s),28.38(s),26.34(s),25.00(s),23.45(s),22.05(s),20.67 (s)，20.07(s)，19.31(s)，18.41(s)，17.73(s)，14.59(s).
[0029] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C42出3N2〇io:765.5265;found:765.5261。
[0030]
[0031 ] Schiglautone A的〇-(二徑乙胺基）乙基衍生物
[0032] 實(shí)施例5 Schiglautone A的0-(二氯乙胺基）乙基衍生物（IV)的合成
[0033] 將實(shí)施例4所獲得的Schiglautone A的0-(二徑乙胺基）乙基衍生物（382mg， 0.5mmol)溶于8mL氯仿，逐滴加入氯化亞諷(0.238g，2mmol)，反應(yīng)物加熱回流化。將反應(yīng)物 冷卻至室溫，滴加甲醇分解過(guò)量的氯化亞諷，減壓濃縮除去溶劑。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化 (石油酸/丙酬100:1，v/v)，得到化合物IV的淡黃色膠狀固體(0.297g，71 %)。
[0034] 1h 醒R(500MHz，DMS0-d6)Sl3.87(s，lH)，6.01(s，lH)，5.50(d，J = 8.4Hz，2H)， 3.61(s，4H)，3.55(s，4H)，3.45(s，2H)，3.40(s，2H)，2.98(s，lH)，2.73(d J=17.4Hz，4H), 2.67-2.57(m,6H),2.54(s,2H),2.40(s,lH),2.10(s,lH),1.99(s,2H),1.78(s,lH),1.73 (d，J=16.9Hz，4H)，1.58(d，J = 3.0Hz，2H)，1.46(d，J = 3.0Hz，2H)，1.43(s，lH)，1.37(s， lH)，1.22(s，lH)，1.17(dd，J=18.9，ll.lHz，4H)，0.95-0.83(m，10H)，0.80(d J = 20.0Hz, 3H)，0.78(d J = 20.0Hz，3H)，0.73(d J = 20.0Hz，3H).
[003引"C NMR(125MHz，DMS0-d6)δ211.19(s)，208.87(s)，169.79(s)，160.85(s)，143.24 (s)，131.74(s)，127.50(s)，85.69(s)，82.13(s)，66.71(s)，65.84(s)，56.87(s)，55.80 (s),53.19(s),52.44(s),51.64(s),45.51(s),40.38(s),39.22(s),38.30(s),38.05(s), 34.77(s),33.28(s),29.56(s),28.72(s),26.45(s),25.21(s),23.79(s),22.05(s),20.77 (s)，20.30(s)，19.76(s)，18.41(s)，17.85(s)，14.81(s).
[0036] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C4抽69Ci4N2〇6:839.3880;found:839.3881。
[0037]
[0038] 實(shí)施例6組合物抗膜腺纖維化活性
[00例 1材料
[0040] 1.1動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，體重180-200邑。
[0041 ] 1.2 組合物劑量:0.9mg/kg。
[0042] 組合物的制備：將研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的65mg化合物III的粉末和研磨之后過(guò)200 目網(wǎng)的35mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用滿輪攬拌儀混合即得到lOOmg組合物， 使用時(shí)用水溶解運(yùn)1 OOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0043] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0044] 2.1造模方法:Wistar大鼠 W腹腔注射dl-乙硫氨酸250mg/天，連續(xù)2個(gè)月，可出現(xiàn) 膜臟腺細(xì)胞減少，間質(zhì)內(nèi)脂肪及結(jié)締組織的增生。
[0045] 2.2分組及給藥方法
[0046] 模型大鼠隨機(jī)分為模型組，組合物0.9mg/kg組、化合物III 0.9mg/kg組和化合物 IV 0.9mg/kg組，另設(shè)空白對(duì)照組。給藥組于造模開(kāi)始后給藥，口服連續(xù)30天;60天時(shí)解剖動(dòng) 物。
[0047] 2.3檢測(cè)指標(biāo)
[004引2.3.1實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)取膜臟稱重。
[0049] 2.3.2膜臟徑脯氨酸含量測(cè)定取lOOmg樣本在水中勻漿，110°C 10N肥1中水解20小 時(shí)。HC1用氮?dú)鈸]發(fā)，水解產(chǎn)物用雙蒸水溶解后過(guò)濾。取0.5ml液體與3ml構(gòu)祿酸憐酸緩沖液 (0.15M構(gòu)祿酸加0.6M憐酸氨二鋼)和0.5ml溶于9M憐酸的1M過(guò)艦酸混合。加1.75ml提取緩沖 液巧份甲苯:5份2-甲基-1-丙醇：2份1-丙醇），震蕩30min，離屯、。組織相(0.61111)與化^1血 S試劑混合放置15min。在565nm測(cè)定吸收度，用4-徑-1-脯氨酸制作標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度，含量 Wug/g組織表示。
[0化0] 2.3.3組織學(xué)檢查膜臟組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，染色后鏡檢。對(duì)纖維 化情況評(píng)分(0-3分）。
[0051 ] 3 結(jié)果
[0052] 3.1組合物對(duì)大鼠膜臟臟器系數(shù)的影響
[0053]實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將大鼠處死、解剖，稱量體重和膜臟重并計(jì)算其與體重的比值(膜臟 臟器系數(shù)），結(jié)果見(jiàn)表1。組合物對(duì)膜臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較有顯著性差異。化合 物ΠΙ和化合物IV對(duì)膜臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較無(wú)顯著性差異。
[0化4] 表1
[0化5]
[0化6] *表示於0.05,與模型組比較
[0057] 3.2膜臟徑脯氨酸含量測(cè)定
[0058] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)各組大鼠進(jìn)行肺部徑脯氨酸含量測(cè)定，結(jié)果如表2。組合物對(duì)徑脯 氨酸含量的影響，與模型組比較有顯著性差異?；衔铴唉┖突衔颕V對(duì)徑脯氨酸含量的影 響，與模型組比較無(wú)顯著性差異。
[0059] 表 2
[0060]
[0061] *表示於0.05,與模型組比較
[0062] 3.3組織學(xué)檢查
[0063] 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，將大鼠處死、解剖;標(biāo)本常規(guī)包埋、固定、肥染色，鏡檢。
[0064] 結(jié)果:模型組第60天可見(jiàn)膜導(dǎo)管周圍嚴(yán)重炎癥反應(yīng);嗜中粒細(xì)胞核淋己細(xì)胞浸潤(rùn)， 間質(zhì)水腫，出血W及偶見(jiàn)膜泡細(xì)胞壞死;膜泡細(xì)胞消失位置及膜泡間出現(xiàn)纖維化。
[0065] 組合物可減少炎癥反應(yīng)和纖維化。評(píng)分結(jié)果見(jiàn)表3。組合物對(duì)評(píng)分的影響，與模型 組比較有顯著性差異。
[0066] 表 3
[0067]
[0068] *表示於0.05，與模型組比較;空白對(duì)照組的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和纖維化評(píng)分都為0.
[0069] 結(jié)論:本發(fā)明通過(guò)組合物對(duì)大鼠膜腺纖維化的影響，證實(shí)了組合物具有抗膜腺纖 維化的作用。因此，組合物可作為活性成分用于制備抗膜腺纖維化的藥物。而化合物III和 化合物IV無(wú)此活性，不能用于制備抗膜腺纖維化的藥物。
[0070] 實(shí)施例7本發(fā)明所設(shè)及組合物片劑的制備
[0071] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0072] 實(shí)施例8本發(fā)明所設(shè)及組合物膠囊的制備
[0073] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為65%和35%，IV；.2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為65 %和35 %充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)胰腺纖維化所引起的胰臟臟器系數(shù)下降。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)胰腺纖維化所引起的羥脯氨酸含量升高。6. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)胰腺纖維化所引起的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)升高。
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物上的用途。本發(fā)明公開(kāi)了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有預(yù)防或治療胰腺纖維化的作用，具有開(kāi)發(fā)預(yù)防或治療胰腺纖維化藥物的價(jià)值。
【IPC分類】C07C213/08, C07C213/02, A61K31/195, C07C217/12, A61P1/18, C07D295/088, A61K31/5377
【公開(kāi)號(hào)】CN105596344
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201511009989
【發(fā)明人】吳俊華, 周未末
【申請(qǐng)人】南京大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年5月25日
【申請(qǐng)日】2015年12月29日