一種新型負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種新型負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前癌癥的發(fā)病率高，因其早期診斷效率低，篩查手段有限，確診時(shí)多數(shù)癌癥患者已屬于晚期。癌癥患者的治療包括徹底的腫瘤減滅輔以一線聯(lián)合化療方案，對(duì)60%?80%的初治癌癥患者有一定療效，但其中50%?80%的患者會(huì)在初治后復(fù)發(fā)。并且，化療藥物雖然能夠有效的殺死腫瘤細(xì)胞，但是化學(xué)療法最大的缺點(diǎn)是不能夠?qū)⒆銐蛄康乃巹┹斔偷缴眢w的病灶部位，并且化療藥物具有較強(qiáng)的毒副作用。而小分子藥物具有快速?gòu)捏w內(nèi)清除的特點(diǎn)因而又需要大量的藥物。此外，還有一些患者因?yàn)闊o(wú)法耐受化療藥物的毒性反應(yīng)而終止化療，從而導(dǎo)致癌癥進(jìn)展迅速甚至死亡。因此，在保障患者生活質(zhì)量的前提下提高化療療效是當(dāng)前癌癥治療中亟待解決的問(wèn)題。
[0003]阿霉素(doxorubicin，Dox)又稱(chēng)多柔比星，屬于高效的廣譜抗癌藥物。在臨床應(yīng)用時(shí)，Dox主要通過(guò)插入細(xì)胞DNA，引發(fā)拓?fù)洚悩?gòu)酶Π破壞DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)來(lái)發(fā)揮藥效的。迄今為止，Dox單獨(dú)或與其他抗腫瘤藥物聯(lián)合用藥，均被認(rèn)為是治療實(shí)體腫瘤，如:乳腺癌、肺癌、卵巢癌、胃癌、肝癌等的一種強(qiáng)有力的化療藥物，亦是治療卵巢癌極為有效的藥物之一。但由于其心臟毒性等副作用使應(yīng)用受限，阿霉素作為化療藥物，主要毒副作用有手足綜合征、黏膜炎、骨髓抑制;對(duì)復(fù)發(fā)和難治性卵巢癌有一定的作用，特別是對(duì)鉑類(lèi)敏感患者，生存期及總費(fèi)用較應(yīng)用拓?fù)涮婵涤忻黠@優(yōu)勢(shì)，但對(duì)鉑類(lèi)耐藥患者卻不能提高生存率。因此，研究新的藥物劑型，通過(guò)將藥物靶向輸送到腫瘤部位達(dá)到靶向治療是當(dāng)前亟待解決的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，現(xiàn)提供一種以膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球?yàn)檩d體的新型負(fù)載阿霉素的納米級(jí)藥物載體及其制備方法。
[0005]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:一種新型負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米級(jí)藥物載體，其創(chuàng)新點(diǎn)在于:由阿霉素和載體構(gòu)成，所述載體為膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球，所述新型負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的顆粒直徑為75-115nm。
[0006]本發(fā)明的另一個(gè)目的是公開(kāi)一種新型負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的制備方法，其創(chuàng)新點(diǎn)在于:包括3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成、膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球的制備和負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的制備三個(gè)步驟，完成新型負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的制備;具體步驟如下:
3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成的具體步驟如下: (1)將5.16g氫氧化鈉用雙蒸餾水制成50ml水溶液，將5.0g間氨基苯硼酸一水合物溶解在氫氧化鈉水溶液中；
(2)在10分鐘內(nèi)將5.2mL64.4mmol的丙烯酰氯攪拌下逐滴加入上述的冷卻溶液中，攪拌30分鐘，隨后升到室溫并繼續(xù)攪拌2小時(shí)；
(3)將步驟(2)所得的混合物用鹽酸調(diào)節(jié)pH到8，過(guò)濾得到沉淀物，選用25mL冷水進(jìn)行洗滌，所述洗滌次數(shù)為3次，然后在真空環(huán)境下進(jìn)行干燥；
(4)將步驟(3)干燥所得的沉淀物溶解于50mL乙醇水溶液中，所述乙醇水溶液中的乙醇與水的體積比為80:20，過(guò)濾，將過(guò)濾液靜置過(guò)夜，過(guò)濾所得白色固體，在真空環(huán)境下進(jìn)行干燥，得到白色固體，即完成了 3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成；
膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球的制備的具體步驟如下:
(5)將120mg膠原蛋白-1型和90mg3-丙稀酰胺基苯硼酸加熱溶解于1mL蒸饋水中，所述加熱溫度為40-50°C ；自然冷卻；
(6)將9.4mg的4，4-偶氮雙加入到步驟(5)所得的冷卻溶液中，再用氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)溶液的PH值到6.3;利用水浴鍋將反應(yīng)溶液加熱到90°C，緩慢攪拌，反應(yīng)混合物會(huì)慢慢變藍(lán)，完成膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球的制備；
負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的制備的具體步驟如下:
(7)將制備的5mg/mL膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球溶液用氫氧化鈉的水溶液調(diào)節(jié)PH值到8.4，所述膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球溶液為5ml;
(8)將ImL濃度為3mg/mL的鹽酸阿霉素水溶液逐滴加入到納米微球的水溶液中，攪拌下反應(yīng)12小時(shí)，離心去上清，將沉淀物重新分散在水溶液中或5%葡萄糖的注射液中，即完成了負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的制備。
[0007]本發(fā)明的有益效果如下:
(I)本發(fā)明的載藥納米微球在不同PH值溶液中釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體作為阿霉素抗腫瘤藥物的載體，可以有很好緩釋的效果和腫瘤部位選擇性釋放的特性?？瞻椎哪z原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球?qū)?xì)胞沒(méi)有細(xì)胞毒性。載藥納米微球有較好的緩釋功能及潛在降低毒副作用的可能。在相同的給藥劑量下，載藥納米微球組對(duì)皮下移植瘤的增長(zhǎng)有較好的抑制作用。
[0008](2)本發(fā)明制備方法制得的納米微球粒徑較均一，分散性好，溫度在25-55°C之間，納米載體穩(wěn)定性好，由于阿霉素在酸堿溶液中存在方式不一樣，在酸性溶液中，阿霉素是水溶性離子的形式，在堿性溶液中，阿霉素是非離子的疏水性中性形式，因而我們制備的納米級(jí)藥物載體在不同PH的液體中的釋放試驗(yàn)表明在pH為7.4的溶液中，只有大約6%的阿霉素從納米微球中釋放出來(lái)。當(dāng)溶液的pH降低到6.0時(shí)，釋放量增多，約有19%的負(fù)載的阿霉素從納米微球中釋放出來(lái)。隨著pH值的繼續(xù)降低至5.0時(shí)，釋放量繼續(xù)增大，約有33%的負(fù)載的阿霉素從納米微球中釋放。當(dāng)pH降低至4.0時(shí)，釋放量明顯增大，約有76%的負(fù)載的阿霉素從納米微球中釋放。因而我們可以得出，負(fù)載阿霉素的納米微球在中性溶液中釋放少量阿霉素，且釋放緩慢，在酸性溶液中具有快速釋放大量阿霉素。此種在中性溶液中釋放少，在酸性溶液中快速釋放的現(xiàn)象，在腫瘤的研究當(dāng)中是有重大意義的，對(duì)于腫瘤組織有很好的選擇性。通過(guò)釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果，證明負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)作為阿霉素抗腫瘤藥物的載體，可以有很好緩釋的效果和腫瘤部位選擇性釋放的特性。
【具體實(shí)施方式】
[0009]以下由特定的具體實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式，熟悉此技術(shù)的人士可由本說(shuō)明書(shū)所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)及功效。
[0010]—種新型負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體，由阿霉素和納米載體構(gòu)成，載體為膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球，新型負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的顆粒直徑為75-115nm。
[0011]實(shí)施例1
一種新型負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的制備方法，包括3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成、膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球的制備和負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的制備三個(gè)步驟，完成新型負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的制備；具體步驟如下:
3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成的具體步驟如下:
(1)將5.16g氫氧化鈉用雙蒸餾水制成50ml水溶液，將5.0g間氨基苯硼酸一水合物溶解在氫氧化鈉水溶液中；
(2)在10分鐘內(nèi)將5.2ml64.4mmol的丙烯酰氯攪拌下逐滴加入上述的冷卻溶液中，攪拌30分鐘，隨后升到室溫并繼續(xù)攪拌2小時(shí)；
(3)將步驟(2)所得的混合物用鹽酸調(diào)節(jié)pH到8，過(guò)濾得到沉淀物，選用25mL冷水進(jìn)行洗滌，洗滌次數(shù)為3次，然后在真空環(huán)境下進(jìn)行干燥；
(4)將步驟(3)干燥所得的沉淀物溶解于50mL乙醇水溶液中，乙醇水溶液中的乙醇與水的體積比為80: 20，過(guò)濾，將過(guò)濾液靜置過(guò)夜，過(guò)濾所得白色固體，在真空環(huán)境下進(jìn)行干燥，得到白色固體，即完成了 3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成；
膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球的制備的具體步驟如下:
(5)將120mg膠原蛋白-1型和90mg3-丙稀酰胺基苯硼酸加熱溶解于1mL蒸饋水中，加熱溫度為40°C ；自然冷卻；
(6)將9.4mg的4，4-偶氮雙加入到步驟(5)所得的冷卻溶液中，再用氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)溶液的PH值到6.3;利用水浴鍋將反應(yīng)溶液加熱到90°C，緩慢攪拌，反應(yīng)混合物會(huì)慢慢變藍(lán)，完成膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球的制備；
負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的制備的具體步驟如下:
(7)將制備的5mg/mL膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球溶液用氫氧化鈉的水溶液調(diào)節(jié)PH值到8.4，膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)納米微球溶液為5ml;
(8)將ImL濃度為3mg/mL的鹽酸阿霉素水溶液逐滴加入到納米微球的水溶液中，攪拌下反應(yīng)12小時(shí)，離心去上清，將沉淀物重新分散在水溶液中或5%葡萄糖的注射液中，即完成了負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的制備。
[0012]本實(shí)施例下制備得到的新型負(fù)載阿霉素的膠原蛋白-聚(3-丙烯酰胺基苯硼酸)的納米級(jí)藥物載體的顆粒直徑為79.3nm。
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