一種負載紫薯皮活性物質(zhì)的納米囊泡的制備方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明公開了一種負載紫薯皮活性物質(zhì)的納米囊泡的制備方法，屬于囊泡領域。
【背景技術(shù)】
[0002]囊泡作為一種重要的自組裝納米結(jié)構(gòu)，是由一些特殊的分子構(gòu)成的由一個雙層膜或多層膜圍起來的一種納米空心球。近年來越來越多的在藥物和基因傳輸，納米反應器，細胞膜表面修飾等方面應用。是從原理上來講，只要同時具有親水和疏水部分的兩親分子，都有可能聚集成囊泡結(jié)構(gòu)。因此，很多具有親疏水性質(zhì)的高分子都可以用來制備囊泡結(jié)構(gòu)，例如:嵌段共聚物，可以用來人工合成囊泡。相比于脂質(zhì)體囊泡，高分子囊泡有許多優(yōu)勢，例如，更加穩(wěn)定，可變的透過性，結(jié)構(gòu)牢固，在化學改性和生物應用方面有更高的應用潛力。
[0003]兩親性嵌段聚合物在水中可以進行自組裝形成囊泡雙層膜，但目前廣泛應用的脂質(zhì)體類囊泡的穩(wěn)定性較差，容易破裂并產(chǎn)生囊泡膜間融合。而聚合物囊泡能顯著提高囊泡的機械性能。如果聚合物囊泡的表面為親水性聚氧乙烯鏈，就可以改變囊泡表面的物理化學性質(zhì)，使其具有較好的水溶性和穩(wěn)定性。這種聚合物囊泡有較強的增溶能力，其疏水的雙層膜具有較好的牢固性和穩(wěn)定性，同時也具有良好的生物相容性和滲透性。當其作為藥物載體時，可賦予藥物更好的生物相容性和靶向性。
[0004]紫薯中營養(yǎng)成分豐富多樣，含有淀粉、蛋白質(zhì)、粗脂肪、多糖、膳食纖維素，還含有多種維生素、胡蘿卜素、色素、綠原酸以及鈣、磷、鐵等微量元素紫薯花青素分子結(jié)構(gòu)中含有多個酚羥基，生物活性顯著，也已將紫薯色素應用于化妝品和紡織品染織中，由于天然色素安全可靠用途廣泛，且種類繁多，不少天然色素兼有營養(yǎng)和藥理作用，具有非常廣闊的開發(fā)應用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題:針對兩親性嵌段聚合物在可以形成囊泡雙層膜，但目前應用的脂質(zhì)體類囊泡的穩(wěn)定性較差，容易破裂并產(chǎn)生囊泡膜間融合，聚合物囊泡作為藥物載體時載藥率低的問題，提供了一種負載紫薯皮活性物質(zhì)的納米囊泡的制備方法，本發(fā)明從紫薯皮中得到活性物質(zhì)，再制備得兩親性嵌段共聚物，利用兩親性嵌段共聚物，將紫薯活性物質(zhì)負載在嵌段共聚物中，形成納米囊泡，本發(fā)明制備得到的納米囊泡具有顯著的機械性能，作為藥物載體不僅具有較高的載藥率，同時也有良好的生物相容性和滲透性，兩親性嵌段共聚物負載紫薯皮活性物質(zhì)制得囊泡，可大幅度提高紫薯皮活性的水溶性和靶向性，而且應用更方便，效果更顯著。
[0006]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
(I)取200?300g紫薯皮，洗凈后干燥、粉碎、過篩得80?100目紫薯皮粉末，
按液料比10?12mL/g加入質(zhì)量分數(shù)80%乙醇溶液，混合后在350?450W功率下提取70?90s，將提取液在2000?3000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離15?20min，去除沉淀物，得上清液，將上清液再5000?7000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離15?20min，去除沉淀物，得上清液，將上清液在60?70°C下蒸饋40?60min，得濃縮液；
(2)將上述的濃縮液用0.1?0.3μπι微濾膜過濾，收集微濾后的液體，將微濾后
的液體再用0.05?0.08μηι超濾膜過濾，收集濾液后的液體，即為紫薯皮活性液，備用；
(3)準確稱取8?1ge-己內(nèi)酯、8?1g聚乙二醇、50?80mL甲苯并加入圓
底燒瓶中，攪拌至固體完全溶解，溶解后向燒瓶中加入ε -己內(nèi)酯質(zhì)量0.1?0.3%的辛酸亞錫為催化劑，將燒瓶密封，并放入油浴中，在160?180°C和300?400r/min條件下進行攪拌反應10?12h，反應結(jié)束后，將所得的產(chǎn)物溶于二氯甲烷中，過濾，得過濾物；
(4)將上述過濾物按固液比1:8重新溶解于甲醇中再重新沉淀進行純化，抽濾
后將沉淀物重復上述溶解步驟2?3遍，將最終得到沉淀物放入真空烘箱中干燥至恒重，即可得到PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物；
(5)按重量份數(shù)計，分別選取60?70份上述PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物，20?30份步驟(2)的紫薯皮活性液和5?8份二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇，將其溶于2?4倍體積的二氯甲烷中，在茄行瓶中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)制成均勻薄膜，抽真空過夜去除里面殘留的有機溶劑，在茄形瓶中加入總體積20%的雙蒸水，在50?70 0C下水化2?4h，震蕩混勻，在O?5°C的冰浴下進行超聲處理15?20min，即可得到納米囊泡分散液，隨后將分散液移入透析袋中，在裝有超純水的燒杯中透析，透析時間為5?8h，每隔一小時換水一次，透析后將其在12000?150001'/1]1；[11下離心分離20?251]1；[11，收集沉淀物，并將沉淀物進行冷凍干燥，即可得到負載紫薯皮活性物質(zhì)的納米囊泡。
本發(fā)明的應用方法:本發(fā)明制備的負載紫薯皮活性物質(zhì)的納米囊泡在25°C時可以保持穩(wěn)定2?4個月的穩(wěn)定性，能使紫薯皮活性物質(zhì)在水溶液中的濃度從原來的0.8?1.2yg/mL增加到0.1?0.5mg/mL，使其在紫薯具有通便、防癌、抗癌、清除自由基、抗衰老、抗突變、改善肝功能、降血壓、防動脈硬化等方面功能顯著。
[0007]本發(fā)明的有益效果是:
(1)本發(fā)明制備得到的聚合物囊泡具有顯著的機械性能，作為藥物載體不僅具有較高的載藥率，同時也有良好的生物相容性和滲透性；
(2)本發(fā)明制備得到兩親性嵌段共聚物負載紫薯皮活性物質(zhì)，可大幅度提高紫薯皮活性的水溶性和靶向性。
【具體實施方式】
[0008]首先取200?300g紫薯皮，洗凈后干燥、粉碎、過篩得80?100目紫薯皮粉末，
按液料比10?12mL/g加入質(zhì)量分數(shù)80%乙醇溶液，混合后在350?450W功率下提取70?90s，將提取液在2000?3000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離15?20min，去除沉淀物，得上清液，將上清液再5000?7000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離15?20min，去除沉淀物，得上清液，將上清液在60?70 °C下蒸饋40?60min，得濃縮液;將的濃縮液用0.1?0.3μηι微濾膜過濾，收集微濾后的液體，將微濾后的液體再用0.05?0.08μπι超濾膜過濾，收集濾液后的液體，即為紫薯皮活性液，備用;準確稱取8?1ge-己內(nèi)酯、8?1g聚乙二醇、50?80mL甲苯并加入圓底燒瓶中，攪拌至固體完全溶解，溶解后向燒瓶中加入ε-己內(nèi)酯質(zhì)量0.1?0.3%的辛酸亞錫為催化劑，將燒瓶密封，并放入油浴中，在160?180°C和300?400r/min條件下進行攪拌反應10?12h，反應結(jié)束后，將所得的產(chǎn)物溶于二氯甲烷中，過濾，得過濾物;將過濾物按固液比1:8重新溶解于甲醇中再重新沉淀進行純化，抽濾
后將沉淀物重復上述溶解步驟2?3遍，將最終得到沉淀物放入真空烘箱中干燥至恒重，即可得到PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物；按重量份數(shù)計，分別選取60?70份PCL-b-PEG-b-PCL兩親性三嵌段共聚物，20?30份紫薯皮活性液和5?8份二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇，將其溶于2?4倍體積的二氯甲烷中，在茄行瓶中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)制成均勻薄膜，抽真空過夜去除里面殘留的有機溶劑，在茄形瓶中加入總體積20%的雙蒸水，在50?70°C下水化2?4h，震蕩混勻，在O?5°C的冰浴下進行超聲處理15?20min，即可得到納米囊泡分散液，隨后將分散液移入透析袋中，在裝有超純水的燒杯中透析，透析時間為5?8h，每隔一小時換水一次，透析后將其在12000?15000r/min下離心分離20?25min，收集沉淀物，并將沉淀物進行冷凍干燥，即可得到負載紫薯皮活性物質(zhì)的納米囊泡。
[0009]實例I
首先取200g紫薯皮，洗凈后干燥、粉碎、過篩得80目紫薯皮粉末，按液料比10mL/g加入質(zhì)量分數(shù)80%乙醇溶液，混合后在350W功率下提取70s，將提取液在2000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離15min，去除沉淀物，得上清液，將上清液再5000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離15min，去除沉淀物，得上清液，將上清液在600C下蒸餾40min，得濃縮液;將的濃縮液用0.1wn微濾膜過濾，收集微濾后的液體，將微濾后的液體再用0.05μπι超濾膜過濾，收集濾液后的液體，即為紫薯皮活性液，備用;準確稱取8g ε -己內(nèi)酯、8g聚乙二醇、50mL甲苯并加入圓底燒瓶中，攪拌至固體完全溶解，溶解后向燒瓶中加入ε-己內(nèi)酯質(zhì)量0.1%的辛酸亞錫為催化劑，將燒瓶密封，并放入油浴中，在160°C和300r/min條件下進行攪拌反應10h，反應結(jié)束后，將所得的產(chǎn)物溶于二氯甲烷中，過濾，得過濾物;將過濾物按固液比I: 8重新溶解于甲醇中再重新沉淀進行純化，抽濾后將沉淀物重復上述溶解步驟2遍，將最終得到沉淀物放入真空烘箱中干燥至恒重，SP可得到PCL-b