一種具有抗ev71病毒作用的復(fù)方滸苔多糖組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及保健品技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種具有抗EV71病毒作用的復(fù)方滸苔多糖組合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]腸道病毒71型，簡稱為EV71，是引起手足口病的最主要的病原體之一，多發(fā)生于5歲以下幼兒，其中，I歲以下嬰兒發(fā)病率最高。手足口病具有極高的傳染性，目前關(guān)于治療以及預(yù)防傳染的方法較少。
[0003]申請?zhí)枮镃N201510340906.2的中國專利公開了一種海帶/海帶多糖提取物在制備抗EV71藥物中的應(yīng)用；申請?zhí)枮镃N201410108714.4的中國專利公開了一種馬尾藻多糖在制備用于治療或預(yù)防腸病毒71型感染的組合物中的用途；申請?zhí)枮镃N201310028254.X的中國專利公開了一種魚腥草水提液及其制備方法和應(yīng)用?，F(xiàn)有技術(shù)中公開的這些提取物、多糖物質(zhì)對研制抗EV71病毒藥物提供了一定的指導(dǎo)意義，具有重要的參考價值。
[0004]然而如何提供一種高效抗EV71病毒的藥物，仍然是一個急需解決的難題。
[0005]滸苔多糖具有抗病毒、抗菌、降血糖、降血脂等生物活性，還能增強免疫力和調(diào)節(jié)人體代謝過程。研究發(fā)現(xiàn)，滸苔多糖能實現(xiàn)抗EV71病毒的作用，而且安全無毒。
[0006]黃芩為唇形科多年生草本植物，以根入藥，具有清熱燥濕，瀉火解毒功效，其所含的活性因子主要是黃酮類。薄荷為食藥兩用的多年生草本植物，具有疏散風(fēng)熱、清利頭目、利咽、透疹、疏肝解郁之功效，其功效主要來源于所含有的揮發(fā)油和黃酮類物質(zhì)。金銀花是藥食兩用的草本植物，具有清熱解毒、涼血化淤之功效，含有留醇、芳香油等活性成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種具有抗EV71病毒作用的復(fù)方滸苔多糖組合物及其制備方法。該藥物組合物富含滸苔多糖，并且復(fù)配黃芩、金銀花以及薄荷組合提取物，產(chǎn)生協(xié)同增效作用，能有效的抗EV71病毒，提高嬰幼兒的自身免疫力。
[0008]為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種具有抗EV71病毒作用的復(fù)方滸苔多糖組合物，由以下重量份的組分組成:滸苔多糖45?65份，黃芩、金銀花和薄荷的復(fù)合提取物20?25份;其中復(fù)合提取物中，原料黃芩、金銀花以及薄荷的重量比為2:2:1。
[0009]所述的滸苔多糖的制備方法為:以滸苔為原料，經(jīng)烘干、粉碎后，制得滸苔粉末;滸苔粉末經(jīng)水提醇沉法制得提取物;提取物經(jīng)純凈水復(fù)溶、除蛋白后，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、冷凍干燥制得消1笞多糖。
[0010]所述的滸苔多糖的制備方法，具體步驟為:
(1)將滸苔清洗干凈后，于55?65°C烘干，粉碎過20目篩，制得滸苔粉末，備用；
(2)取步驟(I)的滸苔粉末，加入純凈水，料液比為Ig:30?40 ml,80-90 °C浸提3?5 h，提取結(jié)束后，離心15?20 min，取上清液備用;將離心的殘渣重復(fù)提取2~3次，合并上清液； (3)將步驟(2)的上清液在55?60°C進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，將上清液濃縮為原體積的1/5?1/4;
(4)往步驟(3)濃縮的上清液中加入3?4倍體積的95%(v/v)乙醇，置于2~4°C條件下8?10 h后，離心15?20 min，所得沉淀物即為提取物；
(5)向步驟(4)所得提取物中加入純凈水，進行攪拌復(fù)溶，并除蛋白3~5次;所述的除蛋白的方法為:Sevag法、聚酰胺法、三氯乙酸法、酶解法中的一種或幾種；
(6)將步驟(5)得到的滸苔多糖溶液在55?60°C進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，將上清液濃縮為原體積的1/5?1/4，冷凍干燥，粉碎，過50?80目篩，得到滸苔多糖。
[0011]步驟(2)中、步驟(4)中所述的離心的轉(zhuǎn)速均為3500?4500 r/min。
[0012]步驟(5)中沉淀物與純凈水的比例為:1 mg:2-5 ml。
[0013]所述的復(fù)合提取物的制備方法為:將黃芩、金銀花以及薄荷按2:2:1重量比混合，先經(jīng)醇提制得醇提物;醇提得到的濾渣再經(jīng)80?90 °C水提制得水提物;最后將醇提物、水提物復(fù)合，即為復(fù)合提取物。
[0014]所述的復(fù)合提取物的制備方法，具體步驟為:
(1)將黃芩、金銀花以及薄荷清洗干凈后，分別于55?65°C烘干，粉碎過20目篩，制得粉末，備用；
(2)將黃芩、金銀花和薄荷混勻，加入65%?80%(v/v)的乙醇溶液，料液比為I g: 4?6 ml，回流提取2?3h，過濾;濾渣重復(fù)提取2~3次，合并濾液，離心15-20 min，取上清液，在50?65。C條件下減壓濃縮至浸膏狀，冷凍干燥后粉碎過50?80目篩，得到黃芩、金銀花和薄荷的復(fù)合醇提物；
(3)將步驟(2)醇提完成后得到的濾渣，加入蒸餾水，其中濾渣與蒸餾水的比例為Ig:20 ml，80?90 °C水浴2?3h，用4?6層的紗布過濾，擠壓濾干，用80?90 °C蒸餾水洗脫濾渣2?3次，得到的上清液，離心15?20 min，抽濾，于55?60°C進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮至浸膏，冷凍干燥，粉碎，過50?80目篩，得到黃芩、金銀花和薄荷的復(fù)合水提物；
(4 )將步驟(2 )的復(fù)合醇提物和步驟(3 )的復(fù)合水提物混合，制得復(fù)合提取物。
[0015]步驟(2)、步驟(3)中所述的離心轉(zhuǎn)速為:2500?4000 r/min條件下。
[0016]本發(fā)明的有益效果在于:
1)滸苔多糖與中藥黃芩、薄荷和金銀花提取物復(fù)配的復(fù)合物，產(chǎn)生協(xié)同增效作用，經(jīng)藥效學(xué)實驗，具有很強的抗腸道病毒71型的效果，防治效果好，可提高嬰幼兒的自身免疫力；
2)工藝操作簡便，成本價格低，安全可靠，適合工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)。
【附圖說明】
[0017]圖1為復(fù)方滸苔多糖藥物體外抗腸道病毒71型試驗效果圖。
【具體實施方式】
[0018]本發(fā)明用下列實施例來進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明的保護范圍并不限于下列實施例。
[0019]實施例1
一種具有抗EV71病毒作用的復(fù)方滸苔多糖組合物，由以下重量份的組分組成:滸苔多糖45份，黃芩、金銀花和薄荷的復(fù)合提取物25份;其中復(fù)合提取物中，原料黃芩、金銀花以及薄荷的重量比為2:2:1。
[0020]所述的滸苔多糖的制備方法，具體步驟為:
(1)將滸苔清洗干凈后，于60°C烘干，粉碎過20目篩，制得滸苔粉末，備用；
(2)取步驟(I)的滸苔粉末，加入純凈水，料液比為Ig:35 ml,85 °C浸提4 h，提取結(jié)束后，離心17 min，取上清液備用;將離心的殘渣重復(fù)提取3次，合并上清液；
(3)將步驟(2)的上清液在270C進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，將上清液濃縮為原體積的1/5;
(4)往步驟(3)濃縮的上清液中加入3倍體積的95%(v/v)乙醇，置于3°C條件下9 h后，離心17 min，所得沉淀物即為提取物；
(5)向步驟(4)所得提取物中加入純凈水，進行攪拌復(fù)溶，并除蛋白4次;所述的除蛋白的方法為:Sevag法；
(6 )將步驟(5 )得到的滸苔多糖溶液在57 °C進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，將上清液濃縮為原體積的1/4，冷凍干燥，粉碎，過80目篩，得到滸苔多糖。
[0021 ] 步驟(2)中、步驟(4)中所述的離心的轉(zhuǎn)速均為4000 r/min。
[0022]步驟(5)中沉淀物與純凈水的比例為:1 mg:4 ml。
[0023]所述的復(fù)合提取物的制備方法，具體步驟為:
(1)將黃芩、金銀花以及薄荷清洗干凈后，分別于60°C烘干，粉碎過20目篩，制得粉末，備用;
(2)將黃芩、金銀花和薄荷混勻，加入70%(v/v)的乙醇溶液，料液比為Ig: 5 ml，回流提取2.5 h，過濾;濾渣重復(fù)提取2次，合并濾液，離心17 min，取上清液，在60 °C條件下減壓濃縮至浸膏狀，冷凍干燥后粉碎過80目篩，得到黃芩、金銀花和薄荷的復(fù)合醇提物；
(3)將步驟(2)醇提完成后得到的濾渣，加入蒸餾水，其中濾渣與蒸餾水的比例為Ig:20 ml,85 °C水浴2 h，用5層的紗布過濾，擠壓濾干，用80?90°C蒸餾水洗脫濾渣2次，得到的上清液，離心18 min，抽濾，于57 °C進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮至浸膏，冷凍干燥，粉碎，過80目篩，得到黃芩、金銀花和薄荷的復(fù)合水提物；
(4 )將步驟(2 )的復(fù)合醇提物和步驟(3 )的復(fù)合水提物混合，制得復(fù)合提取物。
[0024]步驟(2)、步驟(3)中所述的離心轉(zhuǎn)速為:3000 r/min條件下。
[0025]實施例2
一種具有抗EV71病毒作用的復(fù)方滸苔多糖組合物，由以下重量份的組分組成:滸苔多糖65份，黃芩、金銀花和薄荷的復(fù)合提取物20份;其中復(fù)合提取物中，原料黃芩、金銀花以及薄荷的重量比為2:2:1。
[0026]所述的滸苔多糖的制備方法，具體步驟為:
(1)將滸苔清洗干凈后，于55°C烘干，粉碎過20目篩，制得滸苔粉末，備用；
(2)取步驟(I)的滸苔粉末，加入純凈水，料液比為Ig:30 ml,80 °C浸提5 h，提取結(jié)束后，離心15 min，取上清液備用;將離心的殘渣重復(fù)提取3次，合并上清液；
(3)將步驟(2)的上清液在550C進行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，將上清液濃縮為原體積的1/4;
(4)往步驟(3)濃縮的上清液中加入4倍體積的95%(v/v)乙醇，置于4°C條件下8 h后，離心20 min，所得沉淀物即為提取物；
(5)向步驟(4)所得