一種散沫花提取物及其提取方法、應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種散沫花提取物及其提取方法、應(yīng)用，涉及天然產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng)域。散沫花提取方法包括以下步驟：用溶劑浸提散沫花，得到浸提液，然后濃縮除去溶劑。本發(fā)明提供的散沫花提取方法，是一種新的從散沫花中提取出抑菌物質(zhì)的方法，制得的散沫花提取物具有較高的抑菌活性，對于細菌、真菌有明顯的殺傷力，而且可以進一步分離制成多種臨床藥劑來防治細菌、真菌所引起的疾病，有效率高，抑菌效果好。
【專利說明】
_種散沬花提取物及其提取方法、應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物提取技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種散沫花提取物及其提取 方法、應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 人們的生活環(huán)境中，周圍的病菌時刻在侵害人體，大多數(shù)的時候，人體體內(nèi)的免疫 系統(tǒng)都可以應(yīng)付這些病菌的入侵。但如果病菌突然大量繁殖，超過了防御系統(tǒng)所能應(yīng)付的 范圍，人就會生病。因此，抑制細菌和真菌等病菌的滋生是很重要的，特別是醫(yī)療行業(yè)。但在 醫(yī)療行業(yè)中，隨著廣譜抗生素的廣泛應(yīng)用，耐藥致病真菌和致病細菌不斷增多，醫(yī)學(xué)界一直 致力于尋找安全有效的抗菌藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種散沫花提取方法，利用提取方法能夠得到抑菌效果非 常好的散沫花提取物。
[0004] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種散沫花提取物，其對于細菌和真菌有明顯殺傷 力。
[0005] 本發(fā)明的另一目的在于提供散沫花提取物在醫(yī)藥和保健品中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供散沫花提取物在抑菌、抗菌藥物中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：
[0008] -種散沫花提取方法，包括以下步驟：用溶劑浸提散沫花，得到浸提液，然后濃縮 除去溶劑。
[0009] 另外，一種散沫花提取物，通過上述的散沫花提取方法提取得到。
[0010] 另外，上述的散沫花提取物在醫(yī)藥和保健品中的應(yīng)用。
[0011]另外，上述的散沫花提取物在抑菌、抗菌藥物中的應(yīng)用。
[0012] 另外，上述的散沫花提取物在局部化膿感染、陰道炎、肺炎、偽膜性腸炎、心包炎、 敗血癥、膿毒癥中的應(yīng)用。
[0013] 相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明包括以下有益效果:本發(fā)明是針對細菌、真菌等，提出一 種新的從散沫花中提取出抑菌物質(zhì)的方法，現(xiàn)有技術(shù)中沒有人利用散沫花進行過抑菌物方 面的提取，所以該方法本身就是一種創(chuàng)新。本發(fā)明制得的散沫花提取物具有較高的抑菌活 性，對于細菌、真菌有明顯的殺傷力，而且可以進一步分離制成多種臨床藥劑來防治細菌、 真菌所引起的疾病，有效率高，抑菌效果好。
【具體實施方式】
[0014] 為使本發(fā)明實施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明實施例中 的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建 議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn) 品。
[0015] 下面對本發(fā)明實施例的散沫花提取物及其提取方法、應(yīng)用進行具體說明。
[0016] 散沫花提取方法包括以下步驟：
[0017]步驟A:用溶劑浸提散沫花，得到浸提液。
[0018] 散沫花為千屈菜科(Lyth raceae)植物，具有很大的開發(fā)價值，散沫花全草各部位 均可入藥，可治發(fā)燒、頭痛、痢疾、疥瘡、貧血、失眠和智力缺陷等多種疾病;對傷口愈合和部 分炎癥也有一定療效。而本發(fā)明通過提取方法得到散沫花的提取物，進行體外抑菌活性的 研究，為進一步開發(fā)和研究新型臨床抗菌藥物奠定了基礎(chǔ)。
[0019] 步驟A中，浸提的方法(第一種浸提方法)可以包括:利用索氏提取法對散沫花提取 10~14h，過濾;散沫花與溶劑的用量比為0.8~lg:0.8~lmL。
[0020] 步驟A中，浸提的方法(第二種浸提方法)也可以包括:在5~40°C下，利用溶劑浸泡 散沫花18~33h，過濾。
[0021 ]其中，浸泡時保證溶劑剛好浸沒散沫花即可。
[0022] 在第二種浸提方法中，浸泡具體可以為:浸泡2~3次，每次浸泡9~11天，每次倒出 浸泡液。也就是說，在浸泡散沫花時，可以將散沫花浸泡2~3次，每次浸泡9~11天，每次浸 泡時都需用溶劑浸沒散沫花，每一次浸泡完、要更換溶劑時，就將浸泡液倒出，留用，然后過 濾，再進行后續(xù)操作。因為每次浸泡后，溶劑中都溶解有大量的有效成分，接近飽和，所以更 換溶劑，浸泡2~3次的操作，能夠給予散沫花新的溶劑以實現(xiàn)有效成分的繼續(xù)溶解，使散沫 花的有效成分盡可能完全的溶解在溶劑中。
[0023]以上兩種浸提方法中，溶劑均選自水、甲酰胺、三氟乙酸、二甲基亞砜、乙腈、富馬 酸二甲酯、六甲基磷酰胺、甲醇、900~980mlVL的乙醇、乙酸、異丙醇、吡啶、四甲基乙二胺、 丙酮、三乙胺、正丁醇、二氧六環(huán)、四氫呋喃、甲酸甲酯、三丁胺、甲乙酮、氯仿、乙酸乙酯中的 一種或多種。利用第一種浸提方法浸提時，溶劑優(yōu)選水或900~980mL/L的乙醇;利用第二種 浸提方法浸提時，溶劑優(yōu)選900~980mL/L的乙醇，因為水只能溶解水溶性有效成分，而乙醇 既可以溶解水溶性有效成分，又可以溶解油溶性有效成分，得到的浸泡液的有效成分種類 更多，含Μ更多。
[0024] 上述的溶劑中所提到的水選擇蒸餾水、去離子水、超純水中的一種或多種，優(yōu)選蒸 餾水。水的選擇能夠避免引入新的細菌、雜質(zhì)，從而就避免了對制得的提取物的不利影響。
[0025] 散沫花提取方法還包括步驟Β:濃縮除去溶劑。
[0026] 對于利用第二種浸提方法得到的浸泡液，若浸泡了 2~3次，則得到2~3份浸泡液， 那么濃縮時可以將這2~3份浸泡液分開濃縮，然后再合并濃縮物。當(dāng)然，也可以先將浸泡液 混合，再將得到的混合物進行濃縮。
[0027]散沫花提取方法還可以包括步驟C:將步驟Β得到的物質(zhì)與80~120mL/L的配制溶 劑配制成450~550mg/ml的樣液即可。
[0028] 其中，配制溶劑選自水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙酸、二甲基亞砜中的一種或多 種，優(yōu)選丙酮。此種操作是將提取出的有效成分保存在有機溶劑中，避免有效成分的污染和 質(zhì)變。
[0029]散沫花提取方法還可以包括步驟D:將樣液置于0~10 °C下冷藏保存。如此，在需要 時取用即可，而無需重新配制，方便操作和實驗。
[0030] 上述過程中使用的散沫花可以為干的散沫花，也可以為鮮散沫花，優(yōu)選干散沫花， 因為干的散沫花含水量低。在0~10°c下保存樣液后，在后期使用時，可能需要將其中的有 效成分分離出（多通過減壓濃縮），而若使用的溶劑又為乙醇，則新鮮的散沫花中的水分會 與乙醇互溶，形成共沸物，導(dǎo)致減壓濃縮時難以將乙醇蒸發(fā)干凈。
[0031] 而因為優(yōu)選干散沫花，采摘的散沫花又都為鮮散沫花，所以在步驟A之前，還可以 包括預(yù)處理:將采集的新鮮散沫花曬干。預(yù)處理還可以包括:將散沫花進行粉碎。粉碎操作 能夠增加液體浸溶的面積，加強提取效果。而粉碎粒徑并無嚴格要求，利用常規(guī)的中藥材粉 碎機粉碎即可，優(yōu)選市售的破壁粉碎機。當(dāng)然，也可以不進行粉碎操作。
[0032] 本發(fā)明提供的散沫花提取物，是通過上述的散沫花提取方法提取得到。其可以應(yīng) 用于醫(yī)藥和保健品中，應(yīng)用于抑菌、抗菌藥物中，主要應(yīng)用于金黃色葡萄球菌等引起的局部 化膿感染和陰道炎、肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染疾病。散 沫花提取物可以按照藥劑學(xué)方法，經(jīng)進一步分離制成多種臨床藥劑來預(yù)防和治療細菌、真 菌所引起的疾病，主要制成外用藥，可以涂敷使用，可以制成洗液使用，當(dāng)然，也可以制成內(nèi) 服藥。
[0033] 本發(fā)明還提供了散沫花提取物在醫(yī)藥和保健品中的應(yīng)用。
[0034] 本發(fā)明提供的散沫花提取方法優(yōu)選以下三種(簡述）：
[0035] (1)利用蒸餾水作為溶劑，通過索氏提取法進行提取，然后濃縮、配制;得到的散沫 花提取物命名為水提取物；
[0036] (2)利用900~980mL/L的乙醇作為溶劑，通過索氏提取法進行提取，然后濃縮、配 制;得到的散沫花提取物命名為乙醇提取物；
[0037] (3)利用900~980mL/L的乙醇浸泡散沫花3次，然后濃縮、配制;得到的散沫花提取 物命名為乙醇浸泡物。
[0038]利用上述三種方法得到的散沫花提取物進行抑菌活性檢測：
[0039] 檢測方法：采用濾紙擴散法檢測散沫花提取物的體外抑菌活性和最小抑菌濃度 (MIC值）；將保存在配制溶劑中的散沫花提取物濃縮取出，配制成一定濃度梯度的溶液，用 于體外抑菌實驗。
[0040] 材料:水提取物、乙醇浸泡物和乙醇提取物；
[0041 ]儀器:JJJ1000型電子天平，CCA-1111型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司），HV-85型全自動高壓滅菌器，BD400電熱培養(yǎng)箱；
[0042]對象:菌種(包括真菌和細菌）；
[0043] 真菌：白色念珠菌Candida albicans(ATCC10231)，克柔假絲酵母菌Candida krusei (ATCC14243)，串珠鏡刀菌Fusarium moniliforme(ATCC2490)，黃曲霉Asperqillus flavus(ATCC2003)，尖抱鏡刀菌Fusarium oxyporum(AT(X41029)，變紫青霉Penicillium purpurascens(ATCC40687)，表皮葡萄球菌Staphylococcus epidermidis(ATCC12228)，光 滑念珠菌Candida glabrata(ATCC15126)，尖抱鏡刀菌Fusarium oxyporum(ATCC41029)，黑 曲霉Aspergillus niger(ATCC16404)〇
[0044] 細菌：金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus(ATCC25923)，枯草芽抱桿菌 bacillus subtilis(ATCC11774)，鮑曼不動桿菌Acinetobacter baumanii(ATCC19606)，大 腸埃希氏菌Escherichia coil(ATCC25922)，奠鏈球菌Streptococcus faecalis (ATCC29212)，銅綠假單胞菌Pseudomonas aeruginosa(ATCC27853)，奇異變形桿菌Proteus mirabilis(ATCC7002)，蘇云金桿菌Bacillus thuringiensis(ATCC10792)，腸炎沙門氏菌 Salmonella enteritidis(ATCC50335)，阪崎腸桿菌Bntorobater sakazakii(ATCC29544)， 弗氏梓檬酸桿菌Citrobacter freundii (ATCC43864)，溶血性鏈球菌Streptococcus hemolyticus Rolly(ATCC21059)，焚光假單胞菌Pseudomonas fluorescens Migula (ATCC13525)，肺炎克雷伯菌Klebsiella Pneumoniae(ATCC200603)，副溶血性弧菌Vibrio parahaemolyticus(ATCC17802)〇
[0045] 抑菌率的計算公式:抑菌率％ =(抑菌圈直徑/平板直徑）X 100%
[0046] 其中，平板直徑為90mm。
[0047] 結(jié)果:記錄實驗數(shù)據(jù)，進行分析，數(shù)據(jù)記載表明，水提取物、乙醇浸泡物和乙醇提取 物對各菌種均有一定的抑制作用。水提取物對金黃色葡萄球菌抑制率達16.07%以上；乙醇 浸泡物對糞鏈球菌抑制率達16.96%以上;乙醇提取物對糞鏈球菌抑制率達22.60%以上。 [0048]結(jié)論:水提取物、乙醇浸泡物和乙醇提取物均具有較好的抑菌活性，能夠明顯地殺 傷細菌細胞，能夠抑制大腸桿菌ATCC25922、糞鏈球菌ATCC29212、白色念珠菌ATCC10231等 多種菌種的生長，乙醇的提取物的抑菌效果更為顯著。散沫花的三種提取物對細菌、真菌具 有預(yù)防和治療作用，因此，可用于預(yù)防治療細菌、真菌所引起的疫病，可大力推廣研制以藥 用。
[0049]以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的特征和性能作進一步的詳細描述：
[0050] 實施例一
[0051 ]本實施例提供的散沫花提取方法，包括以下步驟：
[0052] a.將采集的新鮮散沫花曬干后，粉碎備用；
[0053] b.稱取200g經(jīng)粉碎的散沫花，加入200ml蒸餾水，采用索氏提取法提取12h，過濾；
[0054] c.對步驟b得到的液體進行濃縮，直至其中不含水分；
[0055] d.以100mL/L的丙酮為配制溶劑，將步驟C得到的物質(zhì)配制成500mg/m 1的樣液，BP 得到散沫花提取物，于4°C下保存?zhèn)溆谩?br>[0056]本實施例還提供了通過上述方法制得的散沫花提取物，其應(yīng)用于抑菌、抗菌藥物 中。
[0057] 實施例二
[0058]本實施例提供的散沫花提取方法，包括以下步驟：
[0059] a.將采集的新鮮散沫花曬干后，粉碎備用；
[0060] b.稱取200g經(jīng)粉碎的散沫花，加入200ml乙醇，乙醇濃度為950mL/L，然后采用索氏 提取法提取12h，過濾；
[0061 ] c.將步驟b得到的液體濃縮至無醇味；
[0062 ] d.以100mL/L的丙酮為配制溶劑，將步驟C得到的物質(zhì)配制成500mg/m 1的樣液，即 得到散沫花提取物，于5 °C下保存?zhèn)溆谩?br>[0063]本實施例還利用上述的抑菌活性檢測方法對散沫花提取物的體外抑菌活性和最 小抑菌濃度(MIC值)進行了檢測，實驗方法同上文，實驗數(shù)據(jù)如表1~表7。
[0064]表1乙醇提取物對糞鏈球菌的抑菌活性

[0077]
[0078] 對實驗數(shù)據(jù)進行處理，關(guān)于體外抑菌活性和最小抑菌濃度測定的處理結(jié)果為：乙 醇提取物的抑菌效果非常顯著，其中對糞鏈球菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、銅綠假單 胞菌、奇異變形桿菌和串珠鐮刀菌具有較好的抑制作用，抑制率分別為:22.60 %、20.82 %、 19.34%、19.20%、18.58%。對糞鏈球菌的最低抑制濃度為3.9mg/ml，對金黃色葡萄球菌、 白色念珠菌、銅綠假單胞菌、奇異變形桿菌和串珠鐮刀菌的最低抑制濃度均為15.6mg/ml。 [0079]本實施例還提供了通過上述方法制得的散沫花提取物，其應(yīng)用于抑菌、抗菌藥物 中。
[0080] 實施例三
[0081 ]本實施例提供的散沫花提取方法，包括以下步驟：
[0082] a.將采集的新鮮散沫花曬干后，粉碎備用；
[0083] b.稱取200g經(jīng)粉碎的散沫花，在15°C下，利用950mlVL的乙醇浸泡散沫花，總共浸 泡3次，每次浸泡10天，每次浸泡時都用乙醇浸沒散沫花，每次浸泡完成都倒出浸泡液，將三 次浸泡得到的三份浸泡液混合，然后過濾；
[0084] c.對混合后的浸泡液進行濃縮，直至無醇味；
[0085] d.以10OmL/L的丙酮為配制溶劑，將步驟C得到的物質(zhì)配制成500mg/m 1的樣液，即 得到散沫花提取物，于6 °C下保存?zhèn)溆谩?br>[0086]本實施例還提供了通過上述方法制得的散沫花提取物，其應(yīng)用于抑菌、抗菌藥物 中。
[0087]實施例四
[0088]本實施例提供的散沫花提取方法，包括以下步驟：
[0089] a.采集的新鮮散沫花，曬干備用；
[0090] b.選用二甲基亞砜作為溶劑，利用索氏提取法對散沫花提取10h，過濾;其中，散沫 花與二甲基亞砜的用量比為〇.8g:lmL;
[0091] c.將步驟b得到的溶液濃縮至不含二甲基亞砜，即得到散沫花提取物。
[0092] 本實施例還提供了通過上述方法制得的散沫花提取物，其應(yīng)用于醫(yī)藥中。
[0093] 實施例五
[0094]本實施例提供的散沫花提取方法，包括以下步驟：
[0095] a.選用新鮮的散沫花；
[0096] b.在40°C下，利用去離子水浸泡散沫花33h;
[0097] c.將步驟b得到的溶液濃縮至不含水分；
[0098] d.以120mL/L的乙酸為配制溶劑，將步驟c得到的物質(zhì)配制成550mg/ml的樣液，即 得到散沫花提取物，于10°c下保存?zhèn)溆谩?br>[0099] 本實施例還提供了通過上述方法制得的散沫花提取物，其應(yīng)用于保健品中。
[0100] 以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技 術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修 改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種散沫花提取方法，其特征在于，包括以下步驟： 用溶劑浸提散沫花，得到浸提液，然后濃縮除去所述溶劑。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的散沫花提取方法，其特征在于，上述浸提的方法包括:利用索 氏提取法對所述散沫花提取10~14h，過濾;所述散沫花與所述溶劑的用量比為0.8~lg: 0 · 8~lmL〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的散沫花提取方法，其特征在于，所述浸提的方法包括:在5~40 °C下，利用所述溶劑浸泡所述散沫花18~33h，過濾。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的散沫花提取方法，其特征在于，所述浸泡具體為:浸泡2~3次， 每次浸泡9~11天，每次倒出浸泡液。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的散沫花提取方法，其特征在于，所述溶劑選自水、甲酰胺、三氟 乙酸、二甲基亞砜、乙腈、富馬酸二甲酯、六甲基磷酰胺、甲醇、900~980mlVL的乙醇、乙酸、 異丙醇、吡啶、四甲基乙二胺、丙酮、三乙胺、正丁醇、二氧六環(huán)、四氫呋喃、甲酸甲酯、三丁 胺、甲乙酮、氯仿、乙酸乙酯中的一種或多種，優(yōu)選水或900~980mL/L的乙醇。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的散沫花提取方法，其特征在于，所述濃縮之后，還包括:將濃縮 得到的物質(zhì)與80~120mL/L的配制溶劑配制成450~550mg/ml的樣液，所述配制溶劑選自 水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙酸、二甲基亞砜中的一種或多種，優(yōu)選丙酮。7. -種散沫花提取物，其特征在于，通過權(quán)利要求1~6任一項所述的散沫花提取方法 提取得到。8. 權(quán)利要求7所述的散沫花提取物在醫(yī)藥和保健品中的應(yīng)用。9. 權(quán)利要求7所述的散沫花提取物在抑菌、抗菌藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求7所述的散沫花提取物在局部化膿感染、陰道炎、肺炎、偽膜性腸炎、心包 炎、敗血癥、膿毒癥中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P31/04GK105832784SQ201610436020
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年6月17日
【發(fā)明人】高非, 楊軍輝, 王祝年
【申請人】中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所