一種吲哚二酮哌嗪類化合物在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種吲哚二酮哌嗪類化合物在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)化合物1,2,3,4?tetrahydro?2?methyl?3?methylene?1,4?dioxopyrazino[1,2?a]indole對白色念珠菌、綠色木霉、黑曲霉、黃曲霉都具有很強(qiáng)的抑制作用，表明化合物1,2,3,4?tetrahydro?2?methyl?3?met hylene?1,4?dioxopyrazino[1,2?a]indole具有很好的抗真菌活性，具有良好的應(yīng)用開發(fā)前景。因此，本發(fā)明為研究與開發(fā)新的抗真菌藥物提供了候選藥物，為開發(fā)利用海洋真菌來源的天然活性物質(zhì)提供了科學(xué)依據(jù)。
【專利說明】
一種吲哚二酮哌嗪類化合物在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及化合物1，2,3,4-七61:瓜117(11'〇-2-11161:1171- 3-methylene-l，4_dioxopyrazino[ 1，2_a] indole在制備抗真菌藥物和作為抗真菌藥物活 性成分中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] 由于陸棲微生物活性物質(zhì)的大量開發(fā)和應(yīng)用，尋找新種屬或特殊性狀的微生物及 其代謝產(chǎn)生的新型抗菌、抗腫瘤藥物越來越難，于是，人們將目光紛紛投向海洋特殊環(huán)境中 的微生物。海洋真菌是海洋微生物的重要組成部分，這類真菌不但種類多，分布廣，而且生 存在低溫、高壓、高鹽、高寒、寡營養(yǎng)等獨(dú)特的環(huán)境中，必然會產(chǎn)生一些與陸地真菌不同的代 謝系統(tǒng)和防御物質(zhì)，包括抗菌、抗腫瘤、抗病毒等活性物質(zhì)，研究人員從中發(fā)現(xiàn)了一些具有 生物活性的新天然產(chǎn)物，包括一些具有新穎骨架的化合物。因此，海洋真菌在發(fā)掘藥物先導(dǎo) 化合物方面有很大的潛力，從海洋真菌中尋找新的抗菌、抗腫瘤藥物已成為新藥研發(fā)的熱 點(diǎn)。
[0003] 海洋中存在著許多自然條件特殊的環(huán)境，尤其是深海海洋環(huán)境，使生活于深海中 的海洋微生物處于獨(dú)特的物理、化學(xué)和生態(tài)環(huán)境中，在永久黑暗、高水壓、貧營養(yǎng)、劇變的溫 度梯度、高鹽度和高濃度的有毒物質(zhì)包圍下，它們形成了極為特殊的生物結(jié)構(gòu)、代謝機(jī)制系 統(tǒng)。由于這種極端的環(huán)境，使深海海洋真菌能產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎、活性獨(dú)特的代謝產(chǎn)物，具有巨 大的應(yīng)用價值，可為新藥和生物農(nóng)藥的開發(fā)提供優(yōu)異的種質(zhì)資源。因此，深海微生物活性物 質(zhì)是研究開發(fā)海洋新藥的必然而有效的選擇。
[0004] 化合物1，2,3,4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxopyrazino[l，2_ 已]；[11(1016是從深海真菌0；[01101：01]1〇1115^68〇6]_卩；[1?3110代謝產(chǎn)物中分離純化得到，其結(jié)構(gòu) 式如（I)所示：
式⑴
[0006]化合物1，2,3,4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4_dioxopyrazino[l，2_ a]indole的結(jié)構(gòu)與文南犬"Wan-Ling Liang,Xiu Le ,Hou-Jin Li ,et al.Exploring the chemodiversity and biological activities of the secondary metabolites from the marine fungus Neosartorya pseudofischeri[J].Mar Drugs,2014,12(11):5657-5676."中的1個吲哚二酮哌嗪類化合物報道一致，但到目前為止，國內(nèi)外文獻(xiàn)尚未有關(guān)1,2， 3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene_l，4_dioxopyrazino[ 1，2_a]indole抗真菌活性 的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0007]本發(fā)明的第一個目的1，2,3,4_七61^&117(11'〇-2-11161:1171-3-11161:11716116-1，4-dioxopyrazino[ 1，2_a] indole在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明通過抗白色念珠菌（Candida albicans)、綠色木霉（Trichoderma viride)、黑曲霉(Aspergillus niger)或黃曲霉(Aspergillus flavus)活性測試發(fā)現(xiàn)，在 每片濾紙片中化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene_l，4-dioxopyrazino [l，2-a]indole或制霉菌素的含量為10yg時，對白色念珠菌、綠色木霉、黑曲霉或黃曲霉抑 菌圈直徑分別為20、25、20、30mm，陽性對照藥物制霉菌素對上述供試菌株的抑菌圈分別為 18、20、23、15mm;選擇 200、100、80、60、40、20、1 Oyg/mL 時測定化合物1，2,3,446釷&1^扣〇- 2-methyl-3-methylene_l，4_dioxopyrazino[ 1，2_a]indole或制霉菌素對白色念珠菌、綠 色木霉、黑曲霉或黃曲霉的最低抑制濃度(MIC值），確定化合物1，2,3,4-以杜&1^扣〇-2-methy 1-3-methy lene-1，4-dioxopyraz ino [ 1，2_a] indo le對白色念珠菌、綠色木霉、黑曲霉 和黃曲霉的MIC值分別為80、80、60、60邱/1^;制霉菌素對上述4株供試菌的10(：值分別為60、 60、80、60lig/mL。實驗結(jié)果表明：化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene_l，4_ dioxopyrazino[ 1，2_a] indole 具有顯著的抗真菌活性。因此，化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene_l，4_dioxopyrazino[ 1，2_a] indole能用于制備抗真菌藥物。
[0009] 所述的抗真菌藥物優(yōu)選為抗白色念珠菌、綠色木霉、黑曲霉或黃曲霉的藥物。
[0010] 本發(fā)明的第二個目的是提供一種抗真菌藥物，其特征在于，包含有化合物1，2,3， 4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene_l，4_dioxopyrazino[ 1，2_a] indole作為活性成分。
[0011] 所述的抗真菌藥物優(yōu)選為白色念珠菌、綠色木霉、黑曲霉或黃曲霉的藥物。
[0012] 本發(fā)明發(fā)現(xiàn)化合物1，2,3,4-七61:^117(11'〇-2-11161:1171-3-11161:11716116-1，4-dioxopyrazino[l，2-&];[11(1016對白色念珠菌、綠色木霉、黑曲霉或黃曲霉都具有很強(qiáng)的抑 制作用，表明化合物1，2，3，4-tetrahydr0-2-methyl-3-methylene-l，4_dioxopyrazino[ 1， 2-a]indole具有較好的抗真菌活性，可用于制備抗真菌藥物，具有良好的應(yīng)用開發(fā)前景。因 此，本發(fā)明為研究與開發(fā)新的抗真菌藥物提供了候選藥物，為開發(fā)利用海洋真菌來源的天 然活性物質(zhì)提供了科學(xué)依據(jù)。
[0013] 本發(fā)明所涉及的深海真菌Dichotomomyces cejpii FS110公開于文獻(xiàn):楊小M，陳 玉嬋，李浩華，章衛(wèi)民.23株海洋真菌的分子鑒定及其抗植物病原真菌和細(xì)胞毒活性研究， 2014,（8): 132-137。該菌株本
【申請人】也持有，并保證自申請日起20年內(nèi)向公眾提供。
【具體實施方式】：
[0014] 以下實施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。
[0015] 實施例1:
[0016] 采用濾紙片法測定化合物1，2,3,4-七61:抑117(11'〇-2-11161:1171-3-11161:11716116-1，4-dioxopyraz ino [ 1，2_a ] indo 1 e對白色念珠菌、綠色木霉、黑曲霉或黃曲霉抗菌活性。
[0017] 將化合物1，2,3,4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxopyrazino[l， 2-a] indole用DMS0溶解，并稀釋至濃度為2mg/mL。
[0018]取對數(shù)生長期的白色念珠菌用生理鹽水調(diào)配至濃度為106CFU/mL的菌液；其它真 菌調(diào)配至孢子數(shù)為1〇6個/mL的孢子懸液，吸取制備好的菌液或孢子懸浮液lmL于培養(yǎng)皿中， 倒入已冷卻至合適溫度的PDA培養(yǎng)基，混合均勾，用無菌鑷子夾取厚度為1.5mm、直徑為6mm 的濾紙片置于含菌平板上，在濾紙片上分別滴加提取液5此作為樣品組，以DMSO代替發(fā)酵提 取液作為空白對照組，以制霉菌素作陽性對照組將平板置于28°C恒溫箱培養(yǎng)72h，用十字測 量法測量抑菌圈直徑的大小。重復(fù)三次，計算抑菌圈直徑的平均值。
[0019] 實驗結(jié)果如表1所示：
[0020] 表1:化合物1，2，3，4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4-dioxopyrazino [1，2-a]indole對真菌的抑制作用(.；cn = 3)
[0022] 實施例2
[0023] 采用濾紙片法測定化合物1，2,3,4-七61:抑117(11'〇-2-11161:1171-3-11161:11716116-1，4-dioxopyraz ino [ 1，2_a ] indo 1 e對白色念珠菌、綠色木霉、黑曲霉、黃曲霉的最低抑菌濃度。
[0024] 用DMS0將化合物1，2,3,4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4_ (1:1(?(^5^&2；[110[1，2-&];[11(1016或制霉菌素分別稀釋至200、100、80、60、40、20、10邱/111匕吸 取濃度為106CFU/mL的白色念珠菌液或106個/mL的其它真菌孢子懸浮液lmL放入平板中，倒 入已冷卻至合適溫度的PDA培養(yǎng)基，混合均勻。用無菌鑷子夾取厚度為1.5mm、直徑為6mm的 濾紙片置于含菌平板上，同時在濾紙片上分別滴加上述濃度的化合物1，2,3,4_ tetrahydr0-2-methyl-3-methylene_l，4_dioxopyrazino[ 1，2_a]indole或制霉菌素5uL， 置于28°C恒溫箱培養(yǎng)72h，觀察濾紙片周圍的抑菌圈，以濾紙片周圍有抑菌圈的濾紙片所含 樣品的最低濃度為最低抑菌濃度(MIC值）。
[0025] 實驗結(jié)果如表2所示：
[0026] 表2:化合物1，2，3，4_tetrahydro-2-methyl-3-methylene_l，4-dioxopyrazino [l，2-a]indole對真菌的最低抑制濃度(MIC值）Gn = 3)
[0028] 注："+"表示有抑菌圈，表示無抑菌圈，化合物指的是：化合物1，2，3，4-tetrahydro-2-methy1-3-methylene-1，4_dioxopyrazino[1，2_a]indole〇
[0029] 綜合所述，化合物1，2,3,4_七6^&117(11'〇-2-1116七1171-3-1116七11716116-1，4-dioxopyrazino[l，2_a]indole對白色念珠菌、綠色木霉、黑曲霉、黃曲霉具有很強(qiáng)的抑制作 用，可用于制備抗真菌藥物。因此，本發(fā)明的實現(xiàn)為研究與開發(fā)新的抗真菌藥物提供了候選 藥物，為開發(fā)利用海洋真菌來源的天然活性物質(zhì)提供了科學(xué)依據(jù)。
【主權(quán)項】
1 ·化合物1，2,3,4-tetrahydr〇-2-methyl-3-methylene-l，4_dioxopyrazino[l，2_a] indole在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗真菌藥物為抗白色念珠菌 (Candida albicans)、綠色木霉(Trichoderma viride)、黑曲霉(Aspergillus niger)或黃 曲霉(Aspergillus flavus)藥物。 3 · -種抗真菌藥物，其特征在于，含有化合物1，2,3,4-丨61^3117(11'〇-2-11161:1171-3-methylene-1，4_dioxopyrazino[ 1，2_a] indole 作為活性成分。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗真菌藥物，其特征在于，所述的抗真菌藥物為抗白色念珠 菌、綠色木霉、黑曲霉或黃曲霉藥物。
【文檔編號】A61K31/4985GK105853433SQ201610250637
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月20日
【發(fā)明人】李浩華, 范震, 章衛(wèi)民, 孫章華, 劉洪新, 葉偉
【申請人】廣東省微生物研究所