預(yù)防和改善低骨量和骨質(zhì)疏松癥的草本植物的組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種適用于在受試者中活化環(huán)磷酸腺苷(cAMP)響應(yīng)元件的組合物，預(yù)防和改善低骨量和骨質(zhì)疏松癥的草本植物組合物，更具體的涉及所述的中草藥組合中的有效部位及其制備方法。所述組合物的活性物質(zhì)由以下組成：I)淫羊藿屬，II)槲蕨屬，以及III)當(dāng)歸屬、鼠尾草屬或枸杞屬中的至少一種。在某些實施方案中，所述組合物由活性物質(zhì)組成，即，所述組合物由淫羊藿屬、槲蕨屬、以及當(dāng)歸屬、鼠尾草屬或枸杞屬中的至少一種組成。在第一實施方案中，所述組合物的活性物質(zhì)由淫羊藿屬、槲蕨屬以及當(dāng)歸屬組成。在第二實施方案中，所述組合物的活性物質(zhì)由淫羊藿屬、槲蕨屬以及鼠尾草屬組成。在第三實施方案中，所述組合物的活性物質(zhì)由淫羊藿屬、槲蕨屬以及枸杞屬組成。在各實施方案中，所述組合物除所述活性物質(zhì)之外還包含至少一種非活性物質(zhì)。本發(fā)明還公開了一種制備所述組合物的方法。
【專利說明】預(yù)防和改善低骨量和骨質(zhì)疏松癥的草本植物的組合物 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明總體上涉及一種用于在受試者中活化環(huán)磷酸腺苷（CAMP)響應(yīng)元件的組合 物，預(yù)防和改善低骨量和骨質(zhì)疏松癥，并且更具體地說一種包含淫羊藿屬、槲蕨屬、以及當(dāng) 歸屬、鼠尾草屬或枸杞屬中的至少一種的組合物，所述組合物用于預(yù)防和改善低骨量和骨 質(zhì)疏松癥的草本植物。
[0002] 相關(guān)技術(shù)描述 骨質(zhì)疏松癥是以骨量減少，骨微觀結(jié)構(gòu)退化，導(dǎo)致骨骼脆性增加，易于骨折的一種疾 病。骨質(zhì)疏松癥嚴重威脅中、老年人，尤其是絕經(jīng)后女性的身體健康，據(jù)統(tǒng)計平均三位超過 50歲的女性就有一位患有骨質(zhì)疏松癥，全球約兩億女性受骨質(zhì)疏松癥的困擾。健康骨骼 不斷的進行骨重建過程，通過骨骨形成和骨吸收的動態(tài)平衡調(diào)節(jié)骨量多少。。特殊時期如青 春期、絕經(jīng)期或疾病均可以使骨代謝平衡傾向骨形成或者傾向骨吸收，從而增加骨量活著 減少骨量。而，絕經(jīng)期時雌激素水平降低，導(dǎo)致骨代謝失衡，骨吸收大于骨形成，最終導(dǎo)致低 骨量甚至骨質(zhì)疏松癥。
[0003] 早期診斷與預(yù)防是治療骨質(zhì)疏松癥的關(guān)鍵。而骨密度值減少所致的低骨量，骨強 度同樣會降低，與骨質(zhì)疏松無質(zhì)的區(qū)別，只是程度上的差別：隨著年齡增加，其從生理上變 化向病理改變的發(fā)展程，其發(fā)生率明顯高于骨質(zhì)疏松。因此，我們更應(yīng)注重對低骨量患者的 防治。
[0004] 許多常規(guī)治療是通過減緩或抑制炎癥反應(yīng)抑制骨吸收，或者通過刺激骨形成來改 善骨質(zhì)疏松。雖然這種方法有效，但化學(xué)藥物治療骨質(zhì)疏松的副作用時有報道。
[0005] 越來越多的研究表明植物來源提取物可以預(yù)防和改善低骨量和骨質(zhì)疏松。在本領(lǐng) 域，需要植物來源提取物用于藥物或保健品，從而調(diào)節(jié)骨代謝，預(yù)防和治療低骨量和骨質(zhì)疏 松。
[0006] 發(fā)明概述 公開了一種組合物。所述組合物適用于在受試者中活化環(huán)磷酸腺苷（cAMP)響應(yīng)元件， 預(yù)防和改善低骨量和骨質(zhì)疏松癥。所述組合物的活性物質(zhì)由以下組成：1)淫羊藿屬，II)槲 蕨屬，以及III)當(dāng)歸屬、鼠尾屬草或枸杞屬中的至少一種。
[0007] 在某些實施方案中，所述組合物由活性物質(zhì)組成，即，所述組合物由淫羊藿屬、槲 蕨屬、以及當(dāng)歸屬、鼠尾草屬或枸杞屬中的至少一種組成。在本公開的第一實施方案中，所 述組合物的活性物質(zhì)由淫羊藿屬、槲蕨屬以及當(dāng)歸屬組成。在本公開的第二實施方案中，所 述組合物的活性物質(zhì)由淫羊藿屬、槲蕨屬以及鼠尾草屬組成。在本公開的第三實施方案中， 所述組合物的活性物質(zhì)由淫羊藿屬、槲蕨屬以及枸杞屬組成。在各實施方案中，所述組合物 除活性物質(zhì)之外還包含至少一種非活性物質(zhì)。
[0008] 還公開了一種制備所述組合物的方法。所述方法包括以下步驟：提供淫羊藿屬，提 供槲蕨屬，以及提供當(dāng)歸屬、鼠尾草屬或枸杞屬中的至少一種。所述方法還包括以下步驟： 合并淫羊藿屬、槲蕨屬、以及當(dāng)歸屬、鼠尾草屬和/或枸杞屬以制備所述組合物。
[0009] 附圖簡述 通過結(jié)合附圖，參考以下詳細說明將更容易地認識和更好地理解本公開的其它優(yōu)勢， 其中： 圖1是說明各種實施例⑴抑制核因子-k B(NFkB)的白細胞介素-1 0 (IL-1 0 )活性 的不同水平（Y)的的條形圖；并且 圖2是說明各種實施例（X)活化環(huán)磷酸腺苷（cAMP)響應(yīng)元件的不同水平（Y)的的條 形圖。
[0010] 發(fā)明詳述 公開了一種組合物（"組合物"）以及一種形成組合物的方法（"方法"）。所述組合 物適用于在受試者中活化環(huán)磷酸腺苷（CAMP)響應(yīng)元件，預(yù)防和改善低骨量和骨質(zhì)疏松癥。 所述受試者通常是人類，更通常是絕經(jīng)前、絕經(jīng)或絕經(jīng)后的女性，最通常是絕經(jīng)或絕經(jīng)后女 性，并且又最通常是絕經(jīng)后女性。其他受試者也可以考慮，包括但不限于各種年齡的男性和 女性。
[0011] 不希望受任何具體理論的約束或限制，認為CAMP響應(yīng)元件（CRE)是許多細胞外和 細胞內(nèi)信號的會聚點，包括cAMP、鈣、G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR)以及神經(jīng)營養(yǎng)因子。這些信號 中的一些影響受試者的骨量。
[0012] 甲狀旁腺激素（PTH)的間歇應(yīng)用已充分確立了對嚙齒動物和人類的骨量的合成 代謝作用。認為PTH信號轉(zhuǎn)導(dǎo)一般經(jīng)由cAMP、蛋白激酶A(PKA)以及cAMP響應(yīng)元件結(jié)合蛋 白（CREB)通路來介導(dǎo)。PTH結(jié)合至PTH受體并且誘導(dǎo)cAMP形成，從而活化PKA，繼而磷酸 化并活化CREB，CREB是堿性亮氨酸拉鏈（bZIP)結(jié)構(gòu)域DNA-結(jié)合蛋白大家族中的一個成 員?；罨腃REB聯(lián)合其它共活化劑經(jīng)由CRE結(jié)合至目標(biāo)基因并且激活其轉(zhuǎn)錄。在這個途 徑中，CREB通過轉(zhuǎn)換PTH信號以激活基因表達來發(fā)揮關(guān)鍵作用。
[0013] 這類基因表達可以影響成骨細胞分化，這是骨形成的一個重要步驟。認為成骨細 胞和破骨細胞是通過包括PTH的若干激素來調(diào)節(jié)的，當(dāng)成骨細胞和破骨細胞之間失衡，骨 吸收大于骨形成就導(dǎo)致低骨量和骨質(zhì)疏松癥。組合物的另外的方面和益處在下文中進一步 描述。
[0014] 所述組合物的活性物質(zhì)由以下組成：1)淫羊藿屬，II)槲蕨屬，以及III)當(dāng)歸屬、 鼠尾草屬或枸杞屬中的至少一種。這些組分中的每一個都在下文中更詳細地描述。在某 些實施方案中，所述組合物由活性物質(zhì)組成，即，所述組合物由淫羊藿屬、槲蕨屬、以及當(dāng)歸 屬、鼠尾草屬或枸杞屬中的至少一種組成。在本公開的第一實施方案中，所述組合物的活性 物質(zhì)由淫羊藿屬、槲蕨屬以及當(dāng)歸屬組成。在本公開的第二實施方案中，所述組合物的活性 物質(zhì)由淫羊藿屬、槲蕨屬以及鼠尾草屬組成。在本公開的第三實施方案中，所述組合物的活 性物質(zhì)由淫羊藿屬、槲蕨屬以及枸杞屬組成。在其它實施方案中，活性物質(zhì)III)包括組分 的組合，例如，當(dāng)歸屬和鼠尾草屬、當(dāng)歸屬和枸杞屬、鼠尾草屬和枸杞屬、或當(dāng)歸屬、鼠尾草 屬以及枸杞屬。在這些實施方案中，活性物質(zhì)III)的組分可以以各種重量比存在。
[0015] 在各實施方案中，包括那些其中組合物由活性物質(zhì)I)、II)以及III)組成的實施 方案，所述組合物不含其它活性物質(zhì)。這里的"其它活性物質(zhì)"一般意味著所述組合物不 含不同于淫羊藿屬、槲蕨屬、當(dāng)歸屬、鼠尾草屬以及枸杞屬的其它類型的中藥（TCM;或"中 草藥"）。其它類型的TCM在本領(lǐng)域中是理解的。其它類型的TCM的實例在國際公布號TO 01/22934 A2中通常描述為"生物活性物質(zhì)"，所述文獻的內(nèi)容以引用的方式并入。在某些 實施方案中，所述組合物可以包含如下所述的非活性物質(zhì)。如果利用的話，所述非活性物質(zhì) 不同于其它類型的TCM。
[0016] 淫羊藿屬，又名淫羊藿屬植物、主教帽、仙女翅膀、山羊草、粗暴羊肉藥草（rowdy lamb herb)、蘭迪牛肉草（randy beef grass)、或淫羊藿（Yin Yang Huo,在中國），它是小 檗科的顯花植物屬。大部分的淫羊藿屬物種是中國特有的，其中較小數(shù)量分布在亞洲的其 它地方以及地中海地區(qū)的一些地方。淫羊藿屬物種通常是多年生草本植物，由地下走莖長 成。在某些實施方案中，所述淫羊藿屬是淫羊藿。
[0017] 用于這種組分的科學(xué)分類一般如下一目：毛茛目；科：小檗科；以及屬：淫羊藿屬。 淫羊藿屬（E.)的示例性物種包括但不限于：粗毛淫羊藿（E. acuminatum)、高山淫羊藿 (E. alpinum)、齡北淫羊藿（E. baiealiguizhouense)、保靖淫羊藿（E. baojingensis)、 齡北淫羊藿（E. borealiguizhouense)、短莖淫羊藿（E. brachyrrhizum)、心葉淫羊藿 (E. brevicornum)、鐘花淫羊藿（E. campanulatum)、綠藥淫羊藿（E. chlorandrum)、E. circinatocucullatum、毯毛淫羊藿（E. coactum)、寶興淫羊藿（E. davidii)、德務(wù)淫羊藿 (E. dewuense)、梅花淫羊藿（E. diphyllum)、長蕊淫羊藿（E. dolichostemon)、無距淫羊 藿（E. ecalcaratum)、高莖淫羊藿（E. elatum)、川西淫羊藿（E. elongatum)、恩施淫羊 藿（E. enshiense)、紫距淫羊藿（E. epsteinii)、方氏淫羊藿（E. fangii)、川鄂淫羊藿 (E. fargesii)、天全淫羊藿（E. flavum)、木魚坪淫羊藿（E. franchetii)、腺毛淫羊藿（E. glandulosopilosum)、長距淫羊藿（E. grandiflorum)、湖南淫羊藿（E. hunanense)、鎮(zhèn)坪 淫羊藿（E. ilicifolium)、荊州淫羊藿（E. jingzhouense)、朝鮮淫羊藿（E. koreanum)、 寬萼淫羊藿（E. latisepalum)、齡嶺淫羊藿（E. leptorrhizum)、時珍淫羊藿（E. lishihchenii)、裂葉淫羊藿（E. lobophyllum)、大萼淫羊藿（E. macrosepalum)、膜葉淫 羊藿（E. membranaceum)、直距淫羊藿（E. mikinorii)、多花淫羊藿（E. multiflorum)、天 平山淫羊藿（E. myrianthum)、蘆山淫羊藿（E. ogisui)、小葉淫羊藿（E. parvifolium)、 少花淫羊藿（E. pauciflorum)、阿爾及利亞淫羊藿（E. perralderianum)、齒瓣淫羊藿 (E. pinnatum)、茂汶淫羊藿（E. platypetalum)、齒瓣淫羊藿（E. pinnatum)、假巫山淫 羊藿（E. pseudowushanense)、柔毛淫羊藿（E. pubescens)、淫羊藿（E. pubigerum)、普 定淫羊藿（E. pudingense)、青城山淫羊藿（E. qingchengshanense)、革葉淫羊藿（E. reticulatum)、強莖淫羊藿（E. rhizomatosum)、箭葉淫羊藿（E. sagittatum)、常綠淫羊藿 (E. sempervirens)、大葉淫羊藿（E. setosum)、神農(nóng)架淫羊藿（E. shennongjiaensis)、 水城淫羊藿（E. shuichengense)、星花淫羊藿（E. stellulatum)、四川淫羊藿（E. sutchuenense)、E. trifoliolatobinatum、偏斜淫羊藿（E. truncatum)、巫山淫羊藿（E. wushanense)以及竹山淫羊藿（E. zhushanense)。淫羊藿屬的兩個或更多物種之間的雜種 也是可能的。在各實施方案中，淫羊藿屬可以選自上述物種中的一個或多個。
[0018] 淫羊藿屬植物的任何部分都可用來生產(chǎn)在本公開的組合物中所用的材料，包括但 不限于根、莖、地下莖、葉、花、果實和/或這些部分的提取物。淫羊藿屬可以未加工形式、懸 浮形式、脫水形式、濃縮形式或提取物形式使用。通常，淫羊藿屬呈干燥或液體形式，更通常 呈干燥形式。如果利用的話，這種組分和/或所述組合物的其它組分的提取物可以經(jīng)由本 領(lǐng)域中理解的常規(guī)提取方法，如通過水（例如蒸汽）提取或通過溶劑（例如醇）提取而獲 得。本公開不限于具體的提取方法。
[0019] 淫羊藿屬可以以各種量存在于組合物中。在各實施方案中，淫羊藿屬基于100重 量份活性物質(zhì)計以至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45或 至少50重量份的量存在。在進一步的實施方案中，淫羊藿屬基于100重量份活性物質(zhì)計以 不大于80、不大于75、不大于70、不大于65、不大于60、不大于55或不大于50重量份的量 存在。其它量也可以考慮并且可以根據(jù)需要或要求經(jīng)由常規(guī)實驗容易地測定。
[0020] 淫羊藿屬中的主要活性成分被認為是淫羊藿苷。淫羊藿苷是黃酮醇苷，一種類黃 酮類型。不希望受任何具體理論的約束或限制，認為淫羊藿屬（特別是淫羊藿苷）刺激骨 組織中的成骨細胞活性。
[0021] -般說來，槲蕨屬經(jīng)常是指槲蕨/hrtraei入中華槲蕨（Drj7?aria baronii) n 5^WM (Drynaria propinqua)^M.^W. (Pseudodrynaria coronans)Stl 根。其它常見名稱包括巖連姜槲蕨你roosiiA骨碎補（Gu Sui Bu)(在中國）、槲蕨 地下莖（歷maria Rhizome)以及青海骨碎補（Rhizoma Z^rj^ariae)。其中，懈蕨（Z^rj^aria 是水龍骨科中的美洲劍蕨種。槲蕨屬含有大約16個物種以及一個天然雜種。美 洲劍蕨是附生或巖生的并且原產(chǎn)于熱帶非洲、南亞、東亞、東南亞、澳洲以及大洋洲。槲蕨植 物是附生草本植物。
[0022] 用于這種組分的科學(xué)分類一般如下一目：真蕨目；科：水龍骨科；以及屬：槲蕨屬。 槲蕨屬（D.)的示例性物種包括但不限于：團葉槲蕨（D. bonii)、川滇槲蕨（D. delavayi)、 descensa 懈蕨（D. descensa)、內(nèi)卷劍蕨（D. involuta)、羅倫懈蕨（D. laurentii)、毛 槲蕨（D. mollis)、小槲蕨（D. parishii)、石蓮姜槲蕨（D. propinqua)、櫟葉槲蕨（D. quercifolia)、硬葉槲蕨（D. rigidula)、巖連姜槲蕨（D. roosii)、秦嶺槲蕨（D. sinica)、 法斗槲蕨（D. sparsisora)、沃氏槲蕨（D. volkensii)、威氏槲蕨（D. willdenowii)、以及 叢林槲蕨（D. X dumicola)(雜種）。槲蕨屬的兩個或更多物種之間的雜種也是可能的。 在各實施方案中，槲蕨屬可以選自上述物種中的一個或多個。
[0023] 槲蕨屬植物的任何部分都可用來生產(chǎn)在本公開的組合物中所用的材料，包括但不 限于根、莖、地下莖、葉、花、果實和/或這些部分的提取物。通常，使用根、莖或地下莖，更通 常使用地下莖。如本領(lǐng)域中所理解，地下莖是經(jīng)常在地下發(fā)現(xiàn)的植物的一般改變的地下莖。 在某些實施方案中，槲蕨屬是槲蕨地下莖。槲蕨屬可以未加工形式、懸浮形式、脫水形式、濃 縮形式或提取物形式使用。通常，槲蕨屬呈干燥或液體形式，更通常呈干燥形式。沙灼熱是 一種用來干燥槲蕨屬的常規(guī)方法，但是也可以使用其它干燥方法。本公開不限于用于這種 或任何其它組分的具體干燥方法。
[0024] 槲蕨屬可以以各種量存在于組合物中。在各實施方案中，槲蕨屬基于100重量份 活性物質(zhì)計以至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45或至少 50重量份的量存在。在進一步的實施方案中，槲蕨屬基于100重量份活性物質(zhì)計以不大于 80、不大于75、不大于70、不大于65、不大于60、不大于55或不大于50重量份的量存在。其 它量也可以考慮并且可以根據(jù)需要或要求經(jīng)由常規(guī)實驗容易地測定。
[0025] 不希望受任何具體理論的約束或限制，認為槲蕨屬（特別是巖連姜槲蕨 (D. roosii))有效預(yù)防骨細胞的再吸收和骨質(zhì)疏松癥，提高骨密度，并且對于骨愈合/生長 有治療作用。
[0026] 在各實施方案中，淫羊藿屬（E)與槲蕨屬（D)以約2:1至約1:2、約1. 5:1至約 1:1. 5、或約1:1的重量比（E:D)存在。意外地，
【發(fā)明人】們發(fā)現(xiàn)淫羊藿屬和槲蕨屬之間的協(xié) 同作用。具體地說，發(fā)現(xiàn)當(dāng)淫羊藿屬與槲蕨屬以接近或等于1:1的比率（初始原料重量比） 一起使用時，它們比組分單獨使用或預(yù)期響應(yīng)更顯著地激活CRE響應(yīng)性測定。此外，發(fā)現(xiàn)當(dāng) 這個比率的淫羊藿屬與槲蕨屬體內(nèi)使用時，淫羊藿屬和槲蕨屬改善雌激素缺乏模型系統(tǒng)的 骨礦物密度。這些及另外的益處在下文中進一步描述。
[0027] 當(dāng)歸屬植物是多年生草本植物。在各實施方案中，在本公開的組合物中所利用的 當(dāng)歸屬是當(dāng)歸（Angelica sinensis)。當(dāng)歸通常被稱為當(dāng)歸（dong quai)(在中國）或"婦人 參（female ginseng)"并且當(dāng)歸的干燥的根通常被稱為當(dāng)歸（Chinese angelica)。當(dāng)歸屬 具有幾種不同的常見名稱，如當(dāng)歸（Radix Angelicae Sinensis)、當(dāng)歸（Chinese angelica root)、當(dāng)歸（dongquai)、當(dāng)歸（don quai)、當(dāng)歸草、當(dāng)歸（tong-kui)、當(dāng)歸（tang kuei)等 等。
[0028] 用于這種組分的科學(xué)分類一般如下一目：傘形目；科：傘形科；以及屬：當(dāng)歸屬。 當(dāng)歸屬（A.)的示例性物種包括但不限于：東當(dāng)歸（A. acutiloba)、A. adzharica、寬大 當(dāng)歸（A. ampla)、圓葉當(dāng)歸（A. archangelica)、銳葉當(dāng)歸（A. argute)、紫莖當(dāng)歸（A. atropurpurea)、布氏當(dāng)歸（A. breweri)、加利福尼亞當(dāng)歸（A. californica)、卡里當(dāng)歸 (A. callii)、坎比當(dāng)歸（A. canbyi)、長鞘當(dāng)歸（A. cartilaginomarginata)、白]E (A. dahurica)、A. dawsonii、齒狀當(dāng)歸（A. dentate)、毛珠當(dāng)歸（A. genuflexa)、朝鮮當(dāng)歸（A. gigas)、光滑當(dāng)歸（A. glabra)、格雷當(dāng)歸（A. grayi)、哈拉雷當(dāng)歸（A. harae)、亨德森當(dāng) 歸（A. hendersonii)、日本當(dāng)歸（A. japonica)、濱海當(dāng)歸（A. keiskei)、kingie 當(dāng)歸（A. kingie)、線裂當(dāng)歸（A. lineariloba)、亮葉當(dāng)歸（A. lucida)、厚皮當(dāng)歸（A. pachycarpa)、 線葉當(dāng)歸（A. palustris)、圓當(dāng)歸（A. pancicii)、羽狀當(dāng)歸（A. pinnata)、重齒毛當(dāng) 歸（A. pubescens)、羅斯當(dāng)歸（A. roseana)、錫金當(dāng)歸（A. sikkimensis)、當(dāng)歸（A. sinensis)、糖邊當(dāng)歸（A. scabrida)、林當(dāng)歸（A. sylvestris)、絨毛當(dāng)歸（A. tomentosa)、 A. triquinata)、ubatakensis 當(dāng)歸（A. ubatakensis)、美葉當(dāng)歸（A. ursine)、毒當(dāng)歸（A. venenosa)、以及韋氏當(dāng)歸（A. wheeleri)。當(dāng)歸屬的兩個或更多物種之間的雜種也是可能 的。在各實施方案中，當(dāng)歸屬可以選自上述物種中的一個或多個。
[0029] 當(dāng)歸屬植物的任何部分都可用來生產(chǎn)在本公開的組合物中所用的材料，包括但不 限于根、莖、地下莖、葉、花、果實和/或這些部分的提取物。通常，使用根、莖或地下莖，更通 常使用根或地下莖。當(dāng)歸屬的活性成分一般見于根和地下莖中。當(dāng)歸屬可以未加工形式、 懸浮形式、脫水形式、濃縮形式或提取物形式使用。通常，當(dāng)歸屬呈干燥或液體形式，更通常 呈干燥形式。
[0030] 當(dāng)歸屬可以以各種量存在于組合物中。在各實施方案中，當(dāng)歸屬基于100重量份 活性物質(zhì)計以至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45或至少 50重量份的量存在。在進一步的實施方案中，當(dāng)歸屬基于100重量份活性物質(zhì)計以不大于 80、不大于75、不大于70、不大于65、不大于60、不大于55或不大于50重量份的量存在。其 它量也可以考慮并且可以根據(jù)需要或要求經(jīng)由常規(guī)實驗容易地測定。
[0031] 不希望受任何具體理論的約束或限制，認為當(dāng)歸屬（特別是當(dāng)歸（A. sinensis)) 有效預(yù)防骨細胞的再吸收和骨質(zhì)疏松癥，提高骨密度，并且對于骨愈合/生長有治療作用。 [0032]鼠尾草屬植物是多年生草本植物。在各實施方案中，在本公開的組合物中所利用 的鼠尾草屬是丹參（Sa^Via組7(iorrAiza)。丹參又名一串紅、中國鼠尾草、紅丹參（Radix Salviae miltiorrhiza)、丹參（tan shen)、丹參（danshen)或丹參（dan shen)(在中國）。 [0033] 用于這種組分的科學(xué)分類一般如下一目：野芝麻目；科：唇形科；以及屬：鼠尾草 屬。鼠尾草屬（S.)的示例性物種包括但不限于：白鼠尾草（S. apiana)、戟葉鼠尾草（S. cacaliifolia)、墨西哥鼠尾草（S. divinorum)、鳳梨鼠尾草（S. elegans)、水果鼠尾草 (S. fruticosa)、突歐鼠尾草（S. hispanica)、紫絨鼠尾草（S. leucantha)、櫻桃鼠尾草 (S. microphylla)、丹參（S. miltiorrhiza)、林蔭鼠尾草（S. nemorosa)、藥用鼠尾草（S. officinalis)、快樂鼠尾草（S. sclarea)、一串紅（S. splendens)、以及深藍鼠尾草（S. guaranitica)。鼠尾草屬的兩個或更多物種之間的雜種也是可能的。在各實施方案中，鼠 尾草屬可以選自上述物種中的一個或多個。
[0034]鼠尾草屬植物的任何部分都可用來生產(chǎn)在本公開的組合物中所用的材料，包括但 不限于根、莖、地下莖、葉、花、果實和/或這些部分的提取物。通常，使用根、根的外部（例 如根皮）和/或地下莖。鼠尾草屬可以未加工形式、懸浮形式、脫水形式、濃縮形式或提取 物形式使用。通常，鼠尾草屬呈干燥或液體形式，更通常呈干燥形式。
[0035] 鼠尾草屬可以以各種量存在于組合物中。在各實施方案中，鼠尾草屬基于100重 量份活性物質(zhì)計以至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45或 至少50重量份的量存在。在進一步的實施方案中，鼠尾草屬基于100重量份活性物質(zhì)計以 不大于80、不大于75、不大于70、不大于65、不大于60、不大于55或不大于50重量份的量 存在。其它量也可以考慮并且可以根據(jù)需要或要求經(jīng)由常規(guī)實驗容易地測定。
[0036] 不希望受任何具體理論的約束或限制，認為鼠尾草屬（特別是丹參（S. miltiorrhiza))有效預(yù)防骨細胞的再吸收和骨質(zhì)疏松癥，提高骨密度，并且對于骨愈合/ 生長有治療作用。
[0037] 在各實施方案中，在本公開的組合物中所利用的枸杞屬是寧夏枸杞。寧夏枸杞 是茄科中的枸杞的兩個物種中的一個，枸杞子或西方雪果由其收獲，其它是枸杞（Lycium chinense)。其原產(chǎn)于歐洲的東南部和亞洲。它又名中國雪果、中國枸杞、喜瑪拉雅枸杞、西 藏枸杞、米堤亞人衆(zhòng)果、巴巴里枸杞（barbary matrimony vine)、阿蓋爾公爵的茶樹（Duke of Argyll's tea tree)、阿蓋爾公爵的茶樹（Duke of Argyll's tea plant)、穆拉里 (Murali)(在印度）、紅色枸杞或濱藜葉枸杞。
[0038] 用于這種組分的科學(xué)分類一般如下一目：前目；科：前科；以及屬：枸杞屬。枸杞屬 (L.)的示例性物種包括但不限于：尖葉枸杞（L. acutifolium)、多刺枸杞（L. afrum)、阿 梅吉諾枸杞（L. ameghinoi)、小針裂葉枸杞（L. amoenum)、毛葉枸杞（L. andersonii)、沙 地枸杞（L. arenicola)、南方枸杞（L. austral)、寧夏枸杞（L. barbarum)、bosciifolium 枸杞（L. bosciifolium)、伯蘭特枸杞（L. berlandieri)、短柄枸杞（L. brevipes)、加 利福利亞枸杞（L. californicum)、卡羅萊納州枸杞（L. carolinianum)、智利枸杞（L. chilense)、中國枸杞（L. chinense)、灰毛枸杞（L. cinereum)、桶果枸杞（L. cooperi)、傾 伏枸杞（L. decumbens)、鋪地枸杞（L. depressum)、eenii 枸杞（L. eenii)、歐洲枸杞（L. europaeum)、露蕊枸杞（L. exsertum)、ferocissimum 枸杞（L. ferocissimum)、弗里芒氏 枸杞（L. fremontii)、南非枸杞（L. gariepense)、grandicalyx 枸杞（L. grandicalyx)、 hassei 枸杞（L. hassei)、密刺枸杞（L. horridum)、陸地枸杞（L. hirsutum)、大齒 枸杞（L. macrodon)、短毛酸衆(zhòng)枸杞（L. mascarenense)、灌木枸杞（L. nodosum)、尖 果枸杞（L. oxycarpum)、白花枸杞（L. pallidum)、柏氏枸杞（L. parishii)、絲葉枸 杞（1^.口；[11；1^01；[11111)、軟毛枸杞（1^卩油61'11111111)、細葉枸杞（1^411111；[111111)、黑果枸杞（1. ruthenicum)、三明治枸杞（L. sandwicense)、裂萼枸杞（L. schizocalyx)、非洲枸杞（L. schweinfurthii)、沙威枸杞（L.shawii)、肖克利枸杞（L. shockleyi)、sokotranum 枸杞 (L. sokotranum)、strandveldense 枸杞（L. strandveldense)、纖葉枸杞（L. tenue)、 tenuispinosum 枸杞（L. tenuispinosum)、四蕊枸杞（L. tetrandrum)、texanum 枸杞（L. texanum)、托雷枸杞（L. torreyi)、tweedianum 枸杞（L. tweedianum)、以及紅果枸杞 (L.villosum)。枸杞屬的兩個或更多物種之間的雜種也是可能的。在各實施方案中，枸杞 屬可以選自上述物種中的一個或多個。
[0039] 枸杞屬植物的任何部分都可用來生產(chǎn)在本公開的組合物中所用的材料，包括但不 限于根、莖、地下莖、葉、花、果實和/或這些部分的提取物。通常，使用根，更通常使用根的 外部（例如根皮）。枸杞屬可以未加工形式、懸浮形式、脫水形式、濃縮形式或提取物形式使 用。通常，枸杞屬呈干燥或液體形式，更通常呈干燥形式。
[0040] 枸杞屬可以以各種量存在于組合物中。在各實施方案中，枸杞屬基于100重量份 活性物質(zhì)計以至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少35、至少40、至少45或至少 50重量份的量存在。在進一步的實施方案中，枸杞屬基于100重量份活性物質(zhì)計以不大于 80、不大于75、不大于70、不大于65、不大于60、不大于55或不大于50重量份的量存在。其 它量也可以考慮并且可以根據(jù)需要或要求經(jīng)由常規(guī)實驗容易地測定。
[0041] 不希望受任何具體理論的約束或限制，認為枸杞屬（特別是寧夏枸杞（L. barbarum))有效預(yù)防骨細胞的再吸收和骨質(zhì)疏松癥，提高骨密度，并且對于骨愈合/生長 有治療作用。
[0042] 在各實施方案中，所述組合物除活性物質(zhì)之外還包含至少一種非活性物質(zhì)。換句 話說，所述組合物可以由活性物質(zhì)和至少一種非活性物質(zhì)組成。各種非活性物質(zhì)可以被利 用，但對于受試者，例如對于人類將是生物學(xué)上可接受的。此外，這類非活性物質(zhì)將不會負 面地影響活性物質(zhì)，例如通過降解活性物質(zhì)1)、11)以及III)中的一或多種。在某些實施 方案中，所述非活性物質(zhì)選自以下的組：生物學(xué)上可接受的填充劑、生物學(xué)上可接受的媒介 物（或載體）或其組合。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以根據(jù)需要或要求選擇合適的非活性物 質(zhì)。如果利用的話，本公開不限于一種或多種具體的非活性物質(zhì)。
[0043] 所述組合物可呈各種形式。在某些實施方案中，所述組合物呈固體、液體或凝膠形 式。組合物可以根據(jù)針對受試者的所要類型或施用途徑來定制。例如，所述組合物可以定 制為呈經(jīng)口 /可攝取的形式、局部/皮膚形式、或可注射/輸注形式。用于經(jīng)口 /可攝取使 用的組合物的實例包括固體和液體形式，如丸劑、片劑、膠囊、錠劑、糖漿、粉末、凝膠、溶液、 混懸液或酊劑。用于皮膚/局部使用的組合物的實例包括固體、液體以及凝膠形式，如軟膏 劑、霜劑、凝膠、擦劑、糊劑、薄膜或貼片。用于注射/輸注的組合物的實例包括液體和混懸 液形式，如那些一般定制用于靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮內(nèi)或皮下注射的形式。本領(lǐng)域的普通技術(shù) 人員可以根據(jù)需要或要求將所述組合物定制為合適的形式。
[0044] 所述組合物可以按要求每日、每日若干次或以使得實現(xiàn)或獲得所要結(jié)果的任何合 適的方案來施用。施用頻率將取決于若干因素，包括所要的CRE活化水平。給藥同樣如此， 例如活性物質(zhì)的劑量。一般說來，方案包括向受試者每日施用至少一次。在每次施用期間 利用的組合物的量可取決于若干因素，包括所要結(jié)果的水平以及具體組合物。本公開不限 于具體的施用方案。
[0045] 所述方法包括以下步驟：提供淫羊藿屬，提供槲蕨屬，以及提供當(dāng)歸屬、鼠尾草屬 或枸杞屬中的至少一種。所述方法還包括以下步驟：合并淫羊藿屬、槲蕨屬、以及當(dāng)歸屬、鼠 尾草屬和/或枸杞屬以制備所述組合物。所述組合物的組分可以以任何順序合并。所述組 分可以使用常規(guī)的儀器、方法或技術(shù)合并。
[0046] 本公開的工業(yè)實用性和進一步的益處 不希望受任何具體理論的約束或限制，以下描述旨在說明而非限制本發(fā)明。所述組合 物可以用作增加骨密度和改善骨健康產(chǎn)品。認為所述組合物適用于治療和/或預(yù)防骨代謝 失衡（骨吸收/骨形成），低骨量/或骨質(zhì)疏松癥的一種負面特征。用本公開的組合物， 認為淫羊藿屬和槲蕨屬協(xié)同活化CRE以改善骨礦物密度。此外，認為當(dāng)歸屬、鼠尾草屬和/ 或枸杞屬（當(dāng)歸屬和/或鼠尾草屬尤其如此）的進一步協(xié)同作用相對于淫羊藿屬與槲蕨屬 單獨的組合改善骨小梁結(jié)構(gòu)。
[0047] 有利的是維持或改善身體骨重建以及抑制破壞骨的發(fā)炎過程的能力。經(jīng)由施用 所述組合物，cAMP及其CRE的活化改善受試者的骨構(gòu)建活動。具體地說，認為骨形態(tài)發(fā)生 蛋白-2 (BMP-2)(主要的骨構(gòu)建激素）是通過cAMP上調(diào)的。
[0048] 另外的骨構(gòu)建激素，甲狀旁腺激素（PTH)和甲狀旁腺激素相關(guān)肽（PTHrP)經(jīng)由其 與PTH受體的相互作用以及隨后的BMP-2上調(diào)來提高cAMP水平。CRE活化的這些改進造成 切除卵巢的（即雌激素缺乏的）大鼠模型中骨的增加，所述切除卵巢的大鼠模型是用于模 擬包括人類的動物中的骨質(zhì)疏松癥的充分表征和接受的動物模型。因此，認為所述組合物 解決了至少兩種生物活動以實現(xiàn)骨密度維持。
[0049] 說明組合物的以下實施例旨在說明而非限制本發(fā)明。 實施例
[0050] 評估組分以測定抗炎活性及其激活CRE活化的骨構(gòu)建途徑的能力。發(fā)現(xiàn)并選擇淫 羊藿屬和槲蕨屬。另外，評估其它組分以確定骨結(jié)構(gòu)改善。發(fā)現(xiàn)并且選擇當(dāng)歸屬、鼠尾草屬 以及枸杞屬。
[0051] 參看圖1，淫羊藿屬和槲蕨屬抑制主要的炎癥信號傳導(dǎo)途徑，在骨質(zhì)疏松癥期 間被激活的活化的B細胞的核因子k-輕鏈增強子。另外，淫羊藿屬和槲蕨屬增強CRE 活化，一種骨重建活動。如圖1中一般所示且如下所述，淫羊藿屬和槲蕨屬抑制核因 子-k MNFkB)的白細胞介素-1 MIL-1 0 )活化。
[0052] 將含有NFkB/Re 1結(jié)合元件控制熒光素酶表達的4個拷貝（pGL4. 17，Promega Corporation, Madison, WI)的 A549 細胞在 Bay 11-7085 ( "對照"或"對照（Con.) " ；25 剛)、淫羊藿屬（"Epi. ";40噸/ml)或槲蕨屬（""Dry. ";40噸/ml)存下或不存在下用 IL-10 (100 pg/ml)處理。在圖 1 的 X軸中，i 未被處理，ii 是 IL-10，iii 是 IL-10+Con.， iv是IL-1 0 +Epi.，并且v是IL-1 0 +Dry.。圖1的Y軸是相對發(fā)光單位（RLU)。圖表/誤 差線表示平均RLU 土標(biāo)準(zhǔn)偏差（std. dev)。
[0053] 參看圖2,當(dāng)淫羊藿屬與槲蕨屬以特殊比率一起使用時，它們以超過這些任一個 單獨的組分協(xié)同提高cAMP水平以增強CRE活化。具體地說，如圖2中一般所示并且如下所 述，淫羊藿屬與槲蕨屬協(xié)同以活化CRE。
[0054] 使用人類胚腎（HEK)細胞以及含有3個CREB結(jié)合位點的CRE響應(yīng)性熒光素酶載 體構(gòu)建體（pGL4. 29，Promega Corporation, Madison, WI)制造穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染子。這些細胞 或未被處理或用毛喉素（"Fsk. "；100 nM)、淫羊藿屬（Epi. ;40 μg/ml)、槲蕨屬（Dry.; 40 y g/ml)或淫羊藿屬和槲蕨屬（"觀察的";40 y g每種/ml)處理。在圖2的X軸中， I是未處理的，II是Fsk.，III是Epi.，IV是Dry.，V是預(yù)期的，并且VII是觀察的。"預(yù)期 的"平均值表示加在一起的來自在40 μg/ml下的淫羊藿屬和在40 μg/ml下的槲蕨屬的 單一組分響應(yīng)的相加。如所示，所觀察的大于所預(yù)期的，這證實了淫羊藿屬和槲蕨屬之間的 協(xié)同作用。圖2的Y軸是RLUs。圖表/誤差線表示平均RLUs 土標(biāo)準(zhǔn)偏差。
[0055] 當(dāng)淫羊藿屬和槲蕨屬以1:1的比率（初始原料重量比）使用時，它們比任一單獨 使用組分或預(yù)期反應(yīng)更顯著地激活CRE響應(yīng)性測定。此外，當(dāng)這個比率的淫羊藿屬與槲蕨 屬體內(nèi)使用時，這些組分改善雌激素缺乏模型系統(tǒng)的骨礦物密度（下表1)。以下表1說明淫 羊藿屬和槲蕨屬處理組在卵巢切除術(shù)（或卵巢摘除術(shù)）之后是如何維持骨礦物密度（BMD) 的。
[0057] 在有和沒有（"假"）卵巢切除術(shù)的外科手術(shù)之后，將個體隨機分配到6個處理組。 個體或未被處理（"〇vx"）或進一步分成5組；雌激素（E 2)0. 105 mg/kg/天；淫羊藿屬和槲 蕨屬（Epi + Dry);淫羊藿屬及槲蕨屬及枸杞屬（Epi + Dry + Lyc);淫羊藿屬及槲蕨屬及 當(dāng)歸屬（Epi + Dry + Ang);或淫羊藿屬及槲蕨屬及鼠尾草屬（Epi + Dry + Sal)2 g/kg/ 天。槲蕨屬是槲蕨地下莖，當(dāng)歸屬是當(dāng)歸，枸杞屬是寧夏枸杞（根皮），并且鼠尾草屬是丹 參。
[0058] 樣品喂養(yǎng)3個月之后，測定每個個體的BMD并且取平均值。通過方差分析（AN0VA) 分析數(shù)據(jù)并且具有不同上標(biāo)（即a或b)的平均值在P〈0. 05水平下是不同的。
[0059] 如表1所示，次要組分（即當(dāng)歸屬、枸杞屬和/或鼠尾草屬）與主要組分（即淫羊 藿屬和槲蕨屬）的使用不會負面地影響所處理個體的骨密度。每種組合物均能很好的發(fā)揮 維持和改善骨密度作用，并且比未處理的模型組（0VX)組表現(xiàn)得更好。
[0060] 如表2所示，相對于單獨使用主要組分（即淫羊藿屬和槲蕨屬），次要組分（當(dāng)歸 屬和/或鼠尾草屬)與主要組分（即淫羊藿屬和槲蕨屬）的組合進一步改善了骨小梁HE染 色評分，既骨組織的微觀結(jié)構(gòu)。以下表2說明次要組分與主要組分的組合對骨小梁蘇木精 &伊紅（HE)染色評分優(yōu)于主要組分單獨處理組。
[0061] ^2
[0062] 在有和沒有（"假"）卵巢切除術(shù)的外科手術(shù)之后，將卵巢切除術(shù)后的個體隨機分配 到6個處理組。未處理的模型組（Ovx)或進一步分成5組：雌激素（E 2)0. 105 mg/kg/天；淫 羊藿屬和槲蕨屬（Epi + Dry) 2.0克/千克/天；淫羊藿屬及槲蕨屬及枸杞屬（Epi + Dry + Lyc) 2. 3克/千克/天；或淫羊藿屬及槲蕨屬及當(dāng)歸屬（Epi + Dry + Ang) 2. 6克/千 克/天；或淫羊藿屬及槲蕨屬及鼠尾草屬（Epi + Dry + Sal) 2. 3克/千克/天。
[0063] 樣品喂養(yǎng)3個月之后，完整取出左側(cè)股骨，剔除周圍軟組織，脫鈣完全后切片。選 擇脛骨近段干骺端，矢狀位，連續(xù)切片，待切片烘干后按照常規(guī)HE染色步驟進行HE染 色、拍照。并且根據(jù)中國食品藥品監(jiān)督局制定的《增加骨密度功能評價方法(征求意見稿)保 健食品評價試驗項目、試驗原則及結(jié)果判定》進行評分并取平均值。通過AN0VA分析數(shù)據(jù)并 且具有不同上標(biāo)（即a、b或c)的平均值在P〈0. 05水平下是不同的。
[0064] 如表2中所示，當(dāng)歸屬或鼠尾草屬在含有淫羊藿屬和槲蕨屬的組合物中的使用能 進一步改善雌激素缺乏模型大鼠的骨小梁結(jié)構(gòu)，從而使得這些組合物相對于主組分組合物 進一步改善骨健康的更有效的配方。
[0065] 本公開的組合物改善cAMP介導(dǎo)的骨重建活性以及雌激素缺失所引起的骨吸收活 性（抗炎性反應(yīng)）。許多產(chǎn)品和公司將其增加骨密度的功能性成分技術(shù)聚焦在補充鈣或抗 炎癥反應(yīng)。這些努力沒有取得成功。本公開的組合物優(yōu)化細胞內(nèi)cAMP的產(chǎn)生以促進身體 的骨重建活性并且抑制炎性反應(yīng)或骨吸收（破壞）活性。此外，本公開還能增加骨密度和 進一步改善骨組織的微觀結(jié)構(gòu)。
[0066] 本發(fā)明已經(jīng)以說明性方式在本文中描述，并且可以理解的是已使用的術(shù)語旨在具 有描述文字的本質(zhì)而非限制。本發(fā)明的許多修改和變化根據(jù)以上教義是可能的。本發(fā)明可 以以不同于具體描述的方式在所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)實施。獨立和從屬權(quán)利要求（單項 從屬和多項從屬）的所有組合的主題在本文中被明確地預(yù)期。
【主權(quán)項】
1. 一種用于在受試者中活化環(huán)磷酸腺苷（CAMP)響應(yīng)元件的，預(yù)防和改善低骨量和骨 質(zhì)疏松癥的草本植物組合物，所述組合物的活性物質(zhì)由以下組成： I)淫羊藿屬； Π )槲蕨屬；以及 ΠΙ)以下的至少一種： 當(dāng)歸屬、 鼠尾草屬或 枸杞屬。2. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其中： i) 所述活性物質(zhì)III)是當(dāng)歸屬； ii) 所述當(dāng)歸屬是當(dāng)歸；或 iii) i)和 ii)兩者。3. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其中： i) 所述活性物質(zhì)III)是鼠尾草屬； ii) 所述鼠尾草屬是丹參；或 iii) i)和 ii)兩者。4. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其中： i) 所述活性物質(zhì)III)是枸杞屬； ii) 所述枸杞屬是寧夏枸杞；或 iii) i)和 ii)兩者。5. 如權(quán)利要求1所述的組合物，其中： i) 所述淫羊藿屬是淫羊藿； ii) 所述槲蕨屬是槲蕨地下莖；或 iii) i)和 ii)兩者。6. 如權(quán)利要求1至5中任一項所述的組合物，其中所述淫羊藿屬（E)和所述槲蕨屬 (D)以約2:1至約1:2,或者約1. 5:1至約1:1. 5的重量比（E:D)存在。7. 如權(quán)利要求6所述的組合物，其中所述E:D是約1:1。8. 如權(quán)利要求1至5中任一項所述的組合物，其中所述淫羊藿屬和所述槲蕨屬中的每 一種基于100重量份所述活性物質(zhì)計分別以至少10重量份或者至少15重量份或者至少20 重量份或者至少25重量份的量存在。9. 如權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述活性物質(zhì)III)基于100重量份所述活性物 質(zhì)計以至少10重量份或者至少15重量份或者至少20重量份或者至少25重量份的量存在。10. 如權(quán)利要求1至5中任一項所述的組合物，其由所述活性物質(zhì)組成。11. 如權(quán)利要求1至5中任一項所述的組合物，其還包含至少一種非活性物質(zhì)。12. 如權(quán)利要求11所述的組合物，其中所述至少一種非活性物質(zhì)選自以下的組：生物 學(xué)上可接受的填充劑、生物學(xué)上可接受的媒介物或其組合。13. 如權(quán)利要求12所述的組合物，其由所述活性物質(zhì)和所述至少一種非活性物質(zhì)組 成。14. 如權(quán)利要求1至5中任一項所述的組合物，其呈固體、液體或凝膠的形式。15. -種用于在受試者中活化環(huán)磷酸腺苷（cAMP)響應(yīng)元件，預(yù)防和改善低骨量和骨 質(zhì)疏松癥的草本植物的組合物，所述組合物由以下組成： I)淫羊藿屬； Π )槲蕨屬；以及 ΠΙ)以下的至少一種： 當(dāng)歸屬、 鼠尾草屬或 枸杞屬。16. 如權(quán)利要求15所述的組合物，其中所述淫羊藿屬（E)與所述槲蕨屬（D)以約2:1 至約1:2或者約1. 5:1至約1:1. 5的重量比（E:D)存在。17. 如權(quán)利要求16所述的組合物，其中所述E:D是約1:1。18. -種制備用于在受試者中活化環(huán)磷酸腺苷（cAMP)響應(yīng)元件，預(yù)防和改善低骨量 和骨質(zhì)疏松癥的草本植物的組合物的方法，所述方法包括以下步驟： 提供淫羊藿屬； 提供槲蕨屬； 提供當(dāng)歸屬、鼠尾草屬或枸杞屬中的至少一種；以及 合并所述淫羊藿屬、所述槲蕨屬、以及所述當(dāng)歸屬、所述鼠尾草屬和/或所述枸杞屬以 制備所述組合物。19. 如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述組合物如權(quán)利要求1或15所述。
【文檔編號】A61K36/537GK105853489SQ201510031935
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2015年1月22日
【發(fā)明人】韓強, 李敏杰, 杜勤, 岑澔, 桂敏, 申曉娟, M.胡德, J.肖爾滕, J.F.雷布胡恩
【申請人】捷通國際有限公司