一種益生菌發(fā)酵六味地黃組合物及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種益生菌發(fā)酵六味地黃組合物及其制備方法，將傳統(tǒng)六味地黃方劑中各味中藥粉碎成粉，經(jīng)水浸，添加果糖、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉和甜味劑，添加無機(jī)鹽，滅菌后經(jīng)多株益生菌分批連續(xù)發(fā)酵處理，添加益生元，得到益生菌發(fā)酵六味地黃組合物；該組合物可按照常規(guī)方法制成各種六味地黃制劑。本發(fā)明大大提高了原料有效成分的利用率，利用多株益生菌進(jìn)行分批連續(xù)發(fā)酵，使六味地黃的有效成分變?yōu)橐子诒荒c道吸收的活性物質(zhì)，提高了功效。實(shí)驗(yàn)顯示，本發(fā)明的組合物縮短了治療周期，降低了胃寒、腹?jié)M、便溏、食欲不振的副作用，減少了人體腸道負(fù)擔(dān)。
【專利說明】
一種益生菌發(fā)酵六味地黃組合物及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種益生菌發(fā)酵六味地黃組合物及其制備方法，屬于中醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 六味地黃丸最早源自"醫(yī)圣"張仲景的名著《傷寒雜病論》的"金匱腎氣丸"（即桂附 地黃丸）。至北宋，太醫(yī)丞錢乙認(rèn)為腎決定著人的生長發(fā)育，強(qiáng)調(diào)補(bǔ)瀉要同時(shí)進(jìn)行的理論。遂 從"金匱腎氣丸"入手，創(chuàng)制了滋補(bǔ)腎陰的名方一一六味地黃丸，由熟地、山茱萸、山藥、澤 瀉、丹皮、茯苓6味中藥組成。
[0003] 據(jù)統(tǒng)計(jì)，在各種文獻(xiàn)報(bào)道中，六味地黃丸治療的病癥涉及137種。最常見的是用于 治療亞健康狀態(tài)、提高免疫力、延緩衰老，所以很多人把它當(dāng)作保健藥品在長期服用。同時(shí)， 作為治療藥品，它在高血壓、糖尿病、更年期綜合征等疾病的治療和輔助治療中也取得了良 好的效果。
[0004] 2010版《中國藥典》所收錄的六味地黃制劑包括小蜜丸、大蜜丸、濃縮丸、膠囊、軟 膠囊、顆粒。隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，許多新工藝、新原料、新功效被用來對原六味地黃復(fù)方進(jìn) 行開發(fā)，如專利公開號(hào)為CN1970025(六味地黃湯的中藥生物制劑及制備方法）、CN1781529 (一種六味地黃多維素及其制備方法）、CN101507786( -種改善紅細(xì)胞變形性的復(fù)方中藥有 效部位及其制備方法）、CN105055769A(-種六味地黃丸的制備方法及應(yīng)用）等。藥典收錄的 制劑僅是對藥材最原始的加工處理，而新研發(fā)的制劑雖在藥效上有進(jìn)一步的提高，但藥效 依然無法與西藥相比，同時(shí)其服用周期長、口感差的缺陷依然存在。另外，六味地黃丸是偏 于補(bǔ)陰的藥，配方中陰柔的藥多一些，吃了后會(huì)妨礙消化功能，導(dǎo)致脾胃不振，給服用者帶 來一定的副作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為克服現(xiàn)有六味地黃制劑的不足，本發(fā)明利用現(xiàn)代生物技術(shù)，體外模擬人體腸道 環(huán)境，利用多種腸道益生菌共同發(fā)酵，對六味地黃方劑中的各種有效成分，進(jìn)行分解，使其 進(jìn)入人體后直接被吸收，減輕人體負(fù)擔(dān)，同時(shí)配以膳食纖維及益生元，調(diào)節(jié)人體腸道環(huán)境， 開發(fā)出原料利用率高、功效強(qiáng)、副作用小、口感好和附加值高的中藥組合物。
[0006] 本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種益生菌發(fā)酵六味地黃組合物，所述的組合物為傳 統(tǒng)六味地黃方劑中各味中藥粉碎成粉，經(jīng)水浸，添加果糖、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉 和甜味劑，添加無機(jī)鹽，滅菌后經(jīng)多株益生菌分批連續(xù)發(fā)酵處理，添加益生元，得到益生菌 發(fā)酵六味地黃組合物。
[0007] 所述的各味中藥為熟地黃120份、酒萸肉60份、牡丹皮45份、山藥60份、茯苓45份、 澤瀉45份。
[0008] 所述果糖的加入量為重量g/體積ml比0.1~1.5%，葡萄糖的加入量為重量g/體積ml 比0.1~1.5%，蛋白胨的加入量為重量g/體積ml比0.05~1%，酵母膏的加入量為重量g/體積ml 比0.01~0.2%，酵母粉的加入量為重量g/體積ml比0.01~0.1%。
[0009] 所述的甜味劑為重量g/體積ml百分比為3%的塔格糖和重量g/體積ml百分比為 0.005%的三氯蔗糖。
[0010] 所述的無機(jī)鹽為K2HP〇4.3H20 0? lg/100ml、KH2P〇4 0? lg/100ml、FeS〇4.7H20 5.0mg/100ml、ZnS〇4.7H2〇 4.4mg/100ml、MgS〇4.7H20 25mg/100ml。
[0011] 所述的益生菌為腸膜明串珠菌、雙歧桿菌和乳桿菌。
[0012] 所述的腸膜明串珠菌選自腸膜明串珠菌右旋葡聚糖亞種或腸膜明串珠菌乳脂亞 種;雙歧桿菌選自兩歧雙歧桿菌、短雙歧桿菌、青春雙歧桿菌或嬰兒雙歧桿菌;所述的乳桿 菌選自嗜酸乳桿菌、德氏乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、羅伊氏乳桿菌或植物乳桿菌。
[0013] 所述的益生元為聚葡萄糖和低聚果糖漿。
[0014] 所述聚葡萄糖的加入量為重量g/體積ml比2~6%;所述低聚果糖漿含量規(guī)格為G 55L，加入量為重量g/體積ml比0 ? 1~0 ? 7%。
[0015] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種益生菌發(fā)酵六味地黃組合物的制備方法，包括以 下步驟： (1)粉碎:按傳統(tǒng)六味地黃方劑中各味中藥的組份量抓取，粉碎混合，細(xì)度在60~80目。
[0016] (2)提取:取步驟（1)中混合后的藥粉，加入蒸餾水浸泡60分鐘，向浸泡液中添加果 糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉，添加無機(jī)鹽，添加甜味劑，調(diào)節(jié)pH值6.5~7.0,密封后115°C滅 菌60分鐘，得到無菌六味地黃提取物。
[0017] (3)接種、發(fā)酵：當(dāng)無菌六味地黃提取物溫度降至35-40°C時(shí)，接種預(yù)培養(yǎng)的體積百 分比為1%~4%的一種腸膜明串珠菌菌液，37°C培養(yǎng)，當(dāng)pH值降至5.5~6.5時(shí)，添加無菌葡萄 糖，接種預(yù)培養(yǎng)的體積百分比為1%~4%的一種雙歧桿菌菌液，37 °C培養(yǎng)5~10小時(shí)，再次接種 預(yù)培養(yǎng)的體積百分比為1%~4%的一種乳桿菌菌液，繼續(xù)發(fā)酵20~48小時(shí)；當(dāng)pH值降至4.0~4.1 時(shí)，降低發(fā)酵溫度至20~30°C，繼續(xù)發(fā)酵至pH值降至3.6~3.8，結(jié)束發(fā)酵，即得六味地黃組合 物發(fā)酵液。
[0018] (4)調(diào)配、滅活：將步驟（3)得到的六味地黃組合物發(fā)酵液過管式離心機(jī)過濾、離 心，得離心液;離心液中添加益生元，攪勻溶解，定容至每l〇〇ml含生藥材量為9g;121°C滅菌 30分鐘，得益生菌發(fā)酵六味地黃組合物。
[0019] 針對本發(fā)明，可按照已知的常規(guī)方法，將所述的益生菌發(fā)酵六味地黃組合物，添加 一種或多種具有相同、相似或不同生物學(xué)活性，并對基本活性成分表現(xiàn)有輔助或協(xié)同作用， 但彼此又互不拮抗的天然或合成的其他功能成份或其混合物，制成適于口服的合劑、乳劑、 丸劑、散劑、膠囊、片劑或顆粒劑等六味地黃制劑。
[0020] 本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)： 1、本發(fā)明對六味地黃方劑中各中藥組份粉碎后進(jìn)行密閉高壓、高溫提取，減少有效成 分的揮發(fā)，大大增加了原料有效成分的提取率。
[0021] 2、本發(fā)明將六味地黃藥粉提取液直接作為益生菌發(fā)酵培養(yǎng)基，帶原料渣進(jìn)行發(fā) 酵，提高了六味地黃藥粉的利用率，優(yōu)化了工藝流程。
[0022] 3、本發(fā)明模擬人體腸道環(huán)境，利用多株益生菌進(jìn)行分批連續(xù)發(fā)酵，使六味地黃的 有效成分變?yōu)橐子诒荒c道吸收的活性物質(zhì)，提高了功效，縮短了服用周期，降低了胃寒、腹 滿、便溏、食欲不振的副作用，減少了人體腸道負(fù)擔(dān)。
[0023] 4、本發(fā)明利用六味地黃各中藥成分為益生菌生長提供充足的營養(yǎng)，益生菌亦使六 味地黃方劑的效用得到提高，為六味地黃方劑產(chǎn)品開發(fā)及推廣，提供了新思路，同時(shí)也為益 生菌產(chǎn)品提供了開發(fā)方向。
[0024] 5、本組合物所加甜味劑為塔格糖，其甜度為蔗糖的92%，熱量為蔗糖的1/3,既滿足 了甜度的要求，又符合現(xiàn)代人對飲品低熱量的需求。
[0025] 6、本組合物中加入不被人體吸收的水溶性膳食纖維聚葡萄糖和低聚果糖，口感酸 甜適口，狀態(tài)穩(wěn)定，可極大地改善人體腸道環(huán)境。
[0026] 7、本組合物未添加任何防腐劑，經(jīng)高溫滅菌、無菌灌裝，保質(zhì)期長，綠色安全、飲用 方便。
【具體實(shí)施方式】
[0027]以下通過【具體實(shí)施方式】的描述對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但這并非是對本發(fā)明的限 制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進(jìn)，但是只要不脫離本 發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，實(shí)施例中所述物料，均符合相應(yīng)國家標(biāo)準(zhǔn)。
[0028]實(shí)施例1:益生菌發(fā)酵六味地黃組合物A的制備 具體制備方法如下： (1)粉碎:按傳統(tǒng)六味地黃方劑中各味中藥的組份量抓取，方劑中各味中藥的重量為： 熟地黃120g、酒萸肉60g、牡丹皮45g、山藥60g、茯苓45g、澤瀉45g，粉碎混合，細(xì)度為80目。 [0029] (2)提取:?。?)中混合后的藥粉，加入10倍蒸餾水浸泡60分鐘，向浸泡液中添加果 糖0.6%(重量g/體積ml)、蛋白胨0.3%(重量g/體積ml)、酵母膏0.1%(重量g/體積ml)、酵母粉 0 ? 06%(重量g/體積ml)、無機(jī)鹽(K2HPO4.3H20 0 ? lg/100ml、KH2P〇4 0 ? lg/100ml、FeS〇4.7H20 5 ? Omg/lOOml、ZnS〇4.7H20 4 ? 4mg/100ml、MgS〇4.7H20 25mg/100ml)、塔格糖3 ? 0%(重量g/體 積ml)及三氯蔗糖0.005%(重量g/體積ml)。調(diào)節(jié)pH值7.0，密封后115°C滅菌60分鐘，得到無 菌六味地黃提取物。
[0030] (3)接種、發(fā)酵：當(dāng)無菌六味地黃提取物溫度降至35-40°C時(shí)，接種預(yù)培養(yǎng)的體積百 分比為2%的腸膜明串珠菌右旋葡聚糖亞種（CICC 22179)菌液，37°C培養(yǎng)，當(dāng)pH值降至5.5 時(shí)，添加無菌葡萄糖0.6%(重量g/體積ml)，接種預(yù)培養(yǎng)的體積百分比為1%的短雙歧桿菌(AS 1.2213)菌液，37°C培養(yǎng)6小時(shí)，再次接種預(yù)培養(yǎng)的體積百分比為1%的植物乳桿菌(AS 1.19) 菌液，繼續(xù)發(fā)酵30小時(shí)。當(dāng)pH值降至4.0時(shí)，降低發(fā)酵溫度至25°C，繼續(xù)發(fā)酵至pH值降至3.8， 結(jié)束發(fā)酵，即得六味地黃組合物發(fā)酵液。
[0031] (4)調(diào)配、滅活:將(3)中六味地黃組合物發(fā)酵液過管式離心機(jī)過濾、離心，得離心 液;離心液中添加聚葡萄糖4%(重量g/體積ml)、低聚果糖漿(G 55L)0.6%(重量g/體積ml)， 攪勻溶解，定容(每l〇〇ml含生藥材量為9g);121°C滅菌30分鐘，得益生菌發(fā)酵六味地黃組合 物，于無菌條件下灌裝(規(guī)格為l〇〇ml/瓶）。
[0032]實(shí)施例2:益生菌發(fā)酵六味地黃組合物B的制備 具體制備方法如下： (1)粉碎:按傳統(tǒng)六味地黃方劑中各味中藥的組份量抓取，方劑中各味中藥的重量為： 熟地黃120g、酒萸肉60g、牡丹皮45g、山藥60g、茯苓45g、澤瀉45g，粉碎混合，細(xì)度為70目。 [0033] (2)提取:取（1)中混合后的藥粉，加入10倍蒸餾水浸泡60分鐘，向浸泡液中添加果 糖0.5%(重量g/體積ml)、蛋白胨0.2%(重量g/體積ml)、酵母膏0.1%(重量g/體積ml)、酵母粉 0 ? 06%(重量g/體積ml)、無機(jī)鹽(K2HPO4.3H20 0 ? lg/100ml、KH2P〇4 0 ? lg/100ml、FeS〇4.7H20 5 ? Omg/lOOml、ZnS〇4.7H20 4 ? 4mg/100ml、MgS〇4.7H20 25mg/100ml)、塔格糖3 ? 0%(重量g/體 積ml)及三氯蔗糖0.005%(重量g/體積ml )，調(diào)節(jié)pH值6.8，密封后115°C滅菌60分鐘，得到無 菌六味地黃提取物。
[0034] (3)接種、發(fā)酵：當(dāng)無菌六味地黃提取物溫度降至35_40°C時(shí)，接種預(yù)培養(yǎng)的體積百 分比為4%的腸膜明串珠菌右旋葡聚糖亞種（CICC 22179)菌液，37°C培養(yǎng)，當(dāng)pH值降至5.5 時(shí)，添加無菌葡萄糖0.5%(重量g/體積ml)，接種預(yù)培養(yǎng)的體積百分比為1%的兩歧雙歧桿菌 (正常人體分離，經(jīng)中國科學(xué)院微生物研究所鑒定)菌液，37°C培養(yǎng)8小時(shí)，再次接種預(yù)培養(yǎng) 的體積百分比為1%的德氏乳桿菌(AS 1.1480)菌液，繼續(xù)發(fā)酵35小時(shí)。當(dāng)pH值降至4.0時(shí)，降 低發(fā)酵溫度至28°C，繼續(xù)發(fā)酵至pH值降至3.7,結(jié)束發(fā)酵，即得六味地黃組合物發(fā)酵液。
[0035] (4)調(diào)配、滅活:將(3)中六味地黃組合物發(fā)酵液過管式離心機(jī)過濾、離心，得離心 液;離心液中添加聚葡萄糖5%(重量g/體積ml)、低聚果糖漿(G 55L)0.5%(重量g/體積ml)， 攪勻溶解，定容(每l〇〇ml含生藥材量為9g);121°C滅菌30分鐘，得益生菌發(fā)酵六味地黃組合 物，于無菌條件下灌裝(規(guī)格為l〇〇ml/瓶）。
[0036] 實(shí)施例3:益生菌發(fā)酵六味地黃組合物C的制備 具體制備方法如下： (1)粉碎:按傳統(tǒng)六味地黃方劑中各味中藥的組份量抓取，方劑中各味中藥的重量為： 熟地黃120g、酒萸肉60g、牡丹皮45g、山藥60g、茯苓45g、澤瀉45g，粉碎混合，細(xì)度為60目。 [0037] (2)提取:取（1)中混合后的藥粉，加入10倍蒸餾水浸泡60分鐘，向浸泡液中添加果 糖0.4%(重量g/體積ml)、蛋白胨0.3%(重量g/體積ml)、酵母膏0.08%(重量g/體積ml)、酵母 粉0 ? 04%(重量g/體積ml)、無機(jī)鹽（K2HPO4.3H20 0 ? lg/100ml、KH2P〇4 0 ? lg/100ml、FeS〇4. 7H20 5.Omg/lOOml、ZnS〇4.7H20 4.4mg/100ml、MgS〇4.7H20 25mg/100ml)、塔格糖3.0%(重量 g/體積ml)及三氯蔗糖0.005%(重量g/體積ml)，調(diào)節(jié)pH值6.5，密封后115°C滅菌60分鐘，得 到無菌六味地黃提取物。
[0038] (3)接種、發(fā)酵：當(dāng)無菌六味地黃提取物溫度降至35_40°C時(shí)，接種預(yù)培養(yǎng)的體積百 分比為3%的腸膜明串珠菌乳脂亞種(CICC 22181)菌液，37°C培養(yǎng)，當(dāng)pH值降至5.8時(shí)，添加 無菌葡萄糖0.4%(重量g/體積ml )，接種預(yù)培養(yǎng)的體積百分比為2%的青春雙歧桿菌（AS 1.219 0 )菌液，3 7 °C培養(yǎng)10小時(shí)，再次接種預(yù)培養(yǎng)的體積百分比為2 %的嗜酸乳桿菌（A S 1.1854)菌液，繼續(xù)發(fā)酵28小時(shí)。當(dāng)pH值降至4.1時(shí)，降低發(fā)酵溫度至25°C，繼續(xù)發(fā)酵至pH值 降至3.8，結(jié)束發(fā)酵，即得六味地黃組合物發(fā)酵液。
[0039] (4)調(diào)配、滅活:將(3)中六味地黃組合物發(fā)酵液過管式離心機(jī)過濾、離心，得離心 液;離心液中添加聚葡萄糖4%(重量g/體積ml)、低聚果糖漿(G 55L)0.5%(重量g/體積ml)， 攪勻溶解，定容(每l〇〇ml含生藥材量為9g);121°C滅菌30分鐘，得益生菌發(fā)酵六味地黃組合 物，于無菌條件下灌裝(規(guī)格為l〇〇ml/瓶）。
[0040] 實(shí)驗(yàn)例： 本實(shí)驗(yàn)例旨在通過觀察腎陰虛病人服本發(fā)酵組合物后的臨床癥狀變化，以確定本發(fā)酵 組合物的療效，并通過與相同濃度未發(fā)酵的湯劑及市售六味地黃濃縮丸的療效進(jìn)行對比， 來驗(yàn)證本發(fā)酵組合物具有增效、減副的作用。
[0041 ] 1臨床資料及觀察方法 1.1病例 病例來源于濟(jì)南三株酵本草醫(yī)院，診斷按中醫(yī)臨床診療術(shù)語證候部分國家標(biāo)準(zhǔn)，符合 腎陰虛(熱)證者，150例，男75例，女75例，年齡20~70歲，平均年齡50歲。
[0042] 1.2 分組 分為三大組:服用本發(fā)明發(fā)酵組合物組（以下簡稱發(fā)酵組A、B、C)，服用相同濃度未發(fā)酵 組（以下簡稱未發(fā)酵組），服用市售六味地黃濃縮丸組（以下簡稱對照組）；各組間的人數(shù)、男 女比例、平均年齡、病種、病程、病情、病期、癥狀基本一致，每組30人。
[0043] 1.3服用劑量及方法 發(fā)酵組(A、B、C):早、晚各服50ml;未發(fā)酵組:早、晚各服50ml;對照組：一次8丸，一日3 次。服用周期為四周。
[0044] 1.4觀察指標(biāo)及療效判定 腎陰虛指標(biāo):腰膝酸軟而痛，頭暈口干，耳鳴或聾，五心煩熱，少寐遺精。
[0045] 副作用指標(biāo)：胃寒，腹?jié)M，便溏，食欲不振;服藥4周進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)。
[0046]療效判定:治愈，腎陰虛癥狀有80%消失，20%基本消失；明顯好轉(zhuǎn)，腎陰虛癥狀四項(xiàng) 以上好轉(zhuǎn)或2項(xiàng)以上消失;好轉(zhuǎn)，腎陰虛癥狀有2項(xiàng)以上好轉(zhuǎn);無效，上述觀察指標(biāo)無明顯改 善。分別于2周、4周進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)。
[0047] 結(jié)果 2.1本發(fā)明發(fā)酵組合物對腎陰虛病人臨床治療效果 由表1觀察統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知:腎陰虛病人服藥2周時(shí)，發(fā)酵組A、B、C治愈的人數(shù)明顯高于對 照組和未發(fā)酵組，且所有病人癥狀均好轉(zhuǎn);服藥4周時(shí)，發(fā)酵組A、B、C治愈的人數(shù)均為20人以 上，未發(fā)酵組治愈的人數(shù)亦有10人，而對照組僅有3人。上述結(jié)果表明本發(fā)酵組合物治療效 果優(yōu)于市售六味地黃濃縮丸，治療周期亦較短。
[0048] 表1各組對腎陰虛病人臨床療效觀察結(jié)果
2.2本發(fā)明發(fā)酵組合物的副作用臨床觀察 由表2觀察統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:對照組及未發(fā)酵組服藥4周，大量患者出現(xiàn)了胃寒、腹?jié)M、便 溏、食欲不振中的一種或以上的副作用，而服用發(fā)酵組A、B、C的患者均未觀察到上述副作用 的表現(xiàn)。說明本發(fā)明的發(fā)酵組合物與傳統(tǒng)方劑相比，可減輕或消除藥物的副作用。
[0049]表2腎陰虛病人服藥4周副作用臨床觀察結(jié)果
通過上述實(shí)驗(yàn)表明益生菌發(fā)酵六味地黃組合物與傳統(tǒng)六味地黃制劑相比，在療效上具 有巨大優(yōu)勢，縮短了服用周期，降低了方劑的副作用，同時(shí)通過添加益生元來調(diào)節(jié)人體腸道 菌群環(huán)境，改善口感及制劑的穩(wěn)定性，勢必對傳統(tǒng)中藥的發(fā)展起到推波助瀾的作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種益生菌發(fā)酵六味地黃組合物，其特征在于，將六味地黃方劑中各味中藥粉碎成 粉，經(jīng)水浸，添加果糖、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、酵母粉和甜味劑，添加無機(jī)鹽，滅菌后經(jīng)多 株益生菌分批連續(xù)發(fā)酵處理，添加益生元，即制得益生菌發(fā)酵六味地黃組合物； 所述的六味地黃方劑為熟地黃120重量份、酒萸肉60重量份、牡丹皮45重量份、山藥60 重量份、茯苓45重量份、澤瀉45重量份，粉碎細(xì)度為60-80目； 所述的益生菌為腸膜明串珠菌、雙歧桿菌和乳桿菌。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌發(fā)酵六味地黃組合物，其特征在于，所述果糖的加入量 為重量g/體積ml比0.1~1.5%;所述葡萄糖的加入量為重量g/體積ml比0.1~1.5%。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌發(fā)酵六味地黃組合物，其特征在于，所述蛋白胨的加入 量為重量g/體積ml比0.05~1%;所述酵母膏的加入量為重量g/體積ml比0.01~0.2%;所述酵 母粉的加入量為重量g/體積ml比0.01~0.1%。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌發(fā)酵六味地黃組合物，其特征在于，所述的甜味劑為重 量g/體積ml百分比3%的塔格糖和重量g/體積ml百分比為0.005%的三氯蔗糖。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌發(fā)酵六味地黃組合物，其特征在于，所述的無機(jī)鹽為 Κ2ΗΡ〇4·3Η20 0. lg/100mUKH2P〇4 0 . lg/100mKFeS04 · 7H20 5 . Omg/lOOmK ZnS04 · 7H20 4·4mg/100ml、MgS〇4.7H20 25mg/100ml。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌發(fā)酵六味地黃組合物，其特征在于，所述的腸膜明串珠 菌選自腸膜明串珠菌右旋葡聚糖亞種或腸膜明串珠菌乳脂亞種;所述的雙歧桿菌選自兩歧 雙歧桿菌、短雙歧桿菌、青春雙歧桿菌或嬰兒雙歧桿菌;所述的乳桿菌選自嗜酸乳桿菌、德 氏乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、羅伊氏乳桿菌或植物乳桿菌。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌發(fā)酵六味地黃組合物，其特征在于，所述的益生元為重 量g/體積ml比2~6%的聚葡萄糖和重量g/體積ml比0.1~0.7%、含量規(guī)格為G 55L的低聚果糖 漿。8. 權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的益生菌發(fā)酵六味地黃組合物的制備方法，其特征在于，制 備步驟如下： (1) 粉碎:將六味地黃方劑中各味中藥按量抓取，粉碎混合，細(xì)度在60~80目； (2) 提取:取步驟（1)中混合后的藥粉，加入蒸餾水浸泡60分鐘，向浸泡液中添加果糖、 蛋白胨、酵母膏、酵母粉，添加無機(jī)鹽，添加甜味劑，調(diào)節(jié)pH值6.5~7.0，密封后115 °C滅菌60 分鐘，得到無菌六味地黃提取物； (3) 接種、發(fā)酵：當(dāng)無菌六味地黃提取物溫度降至35-40°C時(shí)，接種預(yù)培養(yǎng)的體積百分比 為1%~4%的一種腸膜明串珠菌菌液，37°C培養(yǎng)，當(dāng)pH值降至5.5~6.5時(shí)，添加無菌葡萄糖，接 種預(yù)培養(yǎng)的體積百分比為1%~4%的一種雙歧桿菌菌液，37 °C培養(yǎng)5~10小時(shí)，再次接種預(yù)培養(yǎng) 的體積百分比為1%~4%的一種乳桿菌菌液，繼續(xù)發(fā)酵20~48小時(shí)；當(dāng)pH值降至4.0~4.1時(shí)，降 低發(fā)酵溫度至20~30°C，繼續(xù)發(fā)酵至pH值降至3.6~3.8，結(jié)束發(fā)酵，即得六味地黃組合物發(fā)酵 液； (4) 調(diào)配、滅活:將步驟(3)中六味地黃組合物發(fā)酵液過管式離心機(jī)過濾、離心，得離心 液;離心液中添加益生元，攪勻溶解，定容至每l〇〇ml含生藥材量為9g; 121°C滅菌30分鐘，得 益生菌發(fā)酵六味地黃組合物。9. 權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的益生菌發(fā)酵六味地黃組合物在制備六味地黃制劑中的應(yīng) 用。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，按照已知的常規(guī)方法，將所述的益生菌發(fā) 酵六味地黃組合物，添加一種或多種具有相同、相似或不同生物學(xué)活性，并對基本活性成分 表現(xiàn)有輔助或協(xié)同作用，但彼此又互不拮抗的天然或合成的其他功能成份或其混合物，制 成適于口服的合劑、乳劑、丸劑、散劑、膠囊、片劑或顆粒劑。
【文檔編號(hào)】A61P39/06GK105853667SQ201610330043
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年5月18日
【發(fā)明人】吳炳新, 陸繼臣, 褚新紅, 甄宗武, 孫筱林
【申請人】三株福爾制藥有限公司