Wnt抑制劑在制備治療造血再生障礙性疾病藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開Wnt抑制劑ICG001在制備治療造血再生障礙性疾病藥物中的應(yīng)用。Wnt抑制劑ICG001通過抑制CBP介導(dǎo)的Wnt信號(hào)通路，從而抑制由SIRT6缺失而導(dǎo)致的過高Wnt信號(hào)的造血干細(xì)胞的耗竭。本發(fā)明揭露了ICG001可用于制備治療造血再生障礙性相關(guān)疾病的藥物，以及ICG001用于促進(jìn)SIRT6敲除造血干細(xì)胞再生的作用機(jī)制。
【專利說明】
Wnt抑制劑在制備治療造血再生障礙性疾病藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[00011本發(fā)明屬生物醫(yī)學(xué)類技術(shù)領(lǐng)域，涉及Wnt抑制劑ICG-001在制備治療造血再生障礙 性疾病藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 造血系統(tǒng)承擔(dān)著人體運(yùn)輸氧和營養(yǎng)物質(zhì)到各個(gè)組織細(xì)胞，同時(shí)將二氧化碳和代謝 產(chǎn)物運(yùn)出體外的功能，并成為機(jī)體發(fā)生損傷應(yīng)激以及對(duì)抗感染時(shí)，各級(jí)免疫體系的調(diào)度師， 是機(jī)體更新和再生速度最快的組織之一，在人類的骨髓中，每天約有萬億(約1012)計(jì)的新 細(xì)胞產(chǎn)生。造血系統(tǒng)是人體中具有最強(qiáng)再生能力的組織器官，然而在許多造血再生障礙性 疾病中，是由于某些基因功能缺陷而導(dǎo)致的造血干細(xì)胞功能下降而引起的造血再生障礙， 嚴(yán)重影響健康甚至生命。造血干細(xì)胞中的絕大部分細(xì)胞處于非分裂增殖狀態(tài)，即靜息期(G0 期）。而只有其中的一小部分具有活躍的增殖能力，并且直至走向終末分化。而這一靜息的 機(jī)能被認(rèn)為具有關(guān)鍵的生物學(xué)意義。研究表明，造血干細(xì)胞中這一小部分始終維持在靜息 期的細(xì)胞，能夠更好的抵抗輻射，細(xì)胞毒素，氧化應(yīng)激，因而可以終身存在，以滿足造血的需 求。然而在臨床和實(shí)驗(yàn)中，造血干細(xì)胞移植會(huì)由于一些細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的變化而導(dǎo)致造血 系統(tǒng)重建能力下降或造血干細(xì)胞的耗竭。因此，尋找有效的治療造血再生障礙性疾病藥物 成為臨床上骨髓再生障礙性病人的需要。
[0003] 造血干細(xì)胞穩(wěn)態(tài)調(diào)控是一個(gè)復(fù)雜的多分子參與過程，為了闡明這種復(fù)雜過程的調(diào) 節(jié)機(jī)制，科研人員常利用各種基因敲除小鼠模型來研究特定信號(hào)通路對(duì)造血干細(xì)胞自我更 新和分化的影響。Wnt信號(hào)通路在許多類型的干細(xì)胞中對(duì)細(xì)胞增殖起了關(guān)鍵作用，近年來的 研究證實(shí)Wnt還影響干細(xì)胞分化，及對(duì)造血干細(xì)胞的自我更新調(diào)控。
[0004] Wnt抑制劑ICG001 為小分子化合物，CAS number: 780757-88-2，分子量548 ? 63，化 學(xué)命名為（6S，9aS)-6-(4-hydroxybenzyl )-N-benzyl-8-(naphthalen_l-ylmethyl )_4，7-diox〇-hexahydr〇-2H-pyrazino [ 1,2-a]pyrimidine-l (6H)-carboxa mide，分子式為 C33H32N4〇4,化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：
U.
[0006]在本項(xiàng)專利中，
【申請(qǐng)人】首次發(fā)現(xiàn)ICG001在造血再生障礙性相關(guān)疾病中的應(yīng)用。具 體的，本專利發(fā)現(xiàn)ICG001在體內(nèi)可發(fā)揮抑制Wnt信號(hào)的作用，降低由Wnt信號(hào)過高而引起的 過度的細(xì)胞增殖和干細(xì)胞的耗竭。本項(xiàng)專利亦揭示了其用于造血再生障礙性相關(guān)疾病的作 用機(jī)制。ICG001在造血再生過程中抑制CBP蛋白的活性，降低Wnt信號(hào)防止過度增殖維持造 血干細(xì)胞穩(wěn)態(tài)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是針對(duì)上述問題，提出了Wnt抑制劑ICG001在制備治療造血再生障 礙性疾病藥物中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明以造血干細(xì)胞中SIRT6敲除小鼠為模型。
【申請(qǐng)人】發(fā)現(xiàn)化合物ICG001可以抑 制CPB蛋白的活性進(jìn)而抑制Wnt信號(hào)基因表達(dá)，并且抑制Wnt信號(hào)基因表達(dá)可促進(jìn)SIRT6敲除 小鼠造血干細(xì)胞的再生降低細(xì)胞的過度增殖。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)在體外給予Wnt抑制劑ICG001可 起相同的效果。以上結(jié)果揭示了 ICG001在促進(jìn)造血再生中的作用及機(jī)理。
[0009] ICG001的有效用量為3.2mg/kg，藥物配成溶劑，以腹腔注射方式給藥。
[0010] 本發(fā)明的有益效果是ICG001能夠促進(jìn)SIRT6敲除造血干細(xì)胞再生。ICG001可降低 SIRT6敲除造血干細(xì)胞的過度增殖。本發(fā)明揭露了 ICG001可用于制備治療造血再生障礙性 相關(guān)疾病的藥物，以及ICG001用于促進(jìn)SIRT6敲除造血干細(xì)胞再生的作用機(jī)制。
【附圖說明】
[0011]圖1為SIRT6基因敲除可增加Wnt信號(hào)通路基因表達(dá)；
[0012] 圖2為ICG001在SIRT6基因敲除小鼠體內(nèi)抑制Wnt信號(hào)通路基因表達(dá)；
[0013] 圖3為ICG001處理可以提高SIRT6基因敲除造血干細(xì)胞的外周血重建能力和造血 干細(xì)胞的重建能力；
[0014]圖4為在體外培養(yǎng)的條件下ICG001抑制SIRT6基因敲除造血干細(xì)胞的Wnt信號(hào)通路 基因表達(dá)；
[0015]圖5為ICG001體外培養(yǎng)處理可以提高SIRT6基因敲除造血干細(xì)胞的外周血重建能 力和造血干細(xì)胞的重建能力；
[0016] 圖6為本發(fā)明機(jī)理流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，而非限定本發(fā)明。
[0018] 本發(fā)明使用的SIRT6基因敲除（SIRT6AM)小鼠和清潔級(jí)C57BL/6小鼠飼養(yǎng)于杭州 師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心清潔級(jí)動(dòng)物房，實(shí)驗(yàn)時(shí)小鼠為6-8周齡。在整個(gè)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)過程中，所 有操作均遵守國家及杭州師范大學(xué)倫理委員會(huì)制定的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用條例》。ICG001購自美 國LC Laboratories;二甲基亞諷（Dimethyl sulfoxide，DMS0)，5_溴脫氧尿啼啶核苷（5-Bromo-2-deoxyUridine，BRDU)等從美國Sigma-Aldrich公司購買;本發(fā)明中所使用的所有 抗體，除特別說明，均購自美國Ce 11 Si gna 1 ing Techno 1 〇gy公司。所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果均是由獨(dú) 立的三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)得到，采用不配對(duì)的t檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)，均用士 SEM表示。P值〈0.05為顯著性 差異標(biāo)準(zhǔn)(*〈〇.〇5，**〈0.01)。
[0019] 實(shí)施例一:Wnt抑制劑ICG001可促進(jìn)SIRT6基因敲除造血干細(xì)胞的再生
[0020]分離提取SIRT6基因敲除和同窩對(duì)照野生型小鼠的造血干細(xì)胞，檢測(cè)并分析比較 兩組間基因表達(dá)差異和SIRT6缺失對(duì)造血干細(xì)胞移植能力的影響。結(jié)果表明，SIRT6基因敲 除小鼠的HSC可顯著增加Wnt信號(hào)通路基因表達(dá)（圖1)。體內(nèi)給藥3次后，ICG001在SIRT6基因 敲除小鼠體內(nèi)顯著抑制Wnt信號(hào)通路基因表達(dá)（圖2)。通過骨髓移植實(shí)驗(yàn)，比較ICG001處理 組，可以發(fā)現(xiàn)ICG001顯著提高SIRT6基因敲除造血干細(xì)胞的外周血重建能力和造血干細(xì)胞 的重建能力（圖3)。在體外培養(yǎng)的條件下ICG001也抑制SIRT6基因敲除造血干細(xì)胞的Wnt信 號(hào)通路基因表達(dá)（圖4)<JCG001體外培養(yǎng)處理可以提高SIRT6基因敲除造血干細(xì)胞的外周血 重建能力和造血干細(xì)胞的重建能力（圖5)。
[0021] 以上結(jié)果表明，Wnt抑制劑ICG001可以促進(jìn)SIRT6基因敲除造血干細(xì)胞的再生。如 圖6所示，Wnt抑制劑ICG001可以防治SIRT6基因敲除造血系統(tǒng)的骨髓衰竭和治療由SIRT6基 因敲除引起的造血再生障礙性相關(guān)疾病。
[0022] 上述實(shí)施例并非是對(duì)于本發(fā)明的限制，本發(fā)明并非僅限于上述實(shí)施例，只要符合 本發(fā)明要求，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. Wnt抑制劑在制備治療SIRT6敲除引起的造血再生障礙性疾病藥物中的應(yīng)用，其中 Wnt抑制劑為抑制乙酰化轉(zhuǎn)移酶CBP活性的Wnt抑制劑ICGOO1。2. 如權(quán)利要求1所述的Wnt抑制劑在制備治療造血再生障礙性疾病藥物中的應(yīng)用，其特 征在于所述的Wnt抑制劑ICG001為小分子化合物，CASnumber 780757-88-2，分子量548.63， 化學(xué)命名為（6S，9aS )-6-( 4-hydroxybenzyl )_N_benzy 1_8_( naphthalen-1-y lme thy 1) _4， 7-dioxo_hexahydr〇-2H-pyrazino[ 1，2-a]pyrimidine_l (6H)_carboxami de，分子式為 C33H32N4O4,化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：3. 如權(quán)利要求1所述的Wnt抑制劑在制備治療造血再生障礙性疾病藥物中的應(yīng)用，其特 征在于乙?；窩BP為Wnt信號(hào)通路的靶點(diǎn)，Wnt抑制劑ICG001通過直接抑制Wnt信號(hào)通路防 止細(xì)胞過度增殖。
【文檔編號(hào)】A61K38/07GK105854018SQ201610183285
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年3月28日
【發(fā)明人】鞠振宇, 汪虎
【申請(qǐng)人】杭州師范大學(xué)