紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)及其制備方法，所述的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)主要包括紫杉醇和Soluplus，為液態(tài)分散制劑形式或?yàn)閮龈芍苿┬问?；本發(fā)明以雙親性高分子材料Soluplus為載體，采用注入法制備載紫杉醇的自組裝聚合物納米粒，較溶液劑提高了細(xì)胞的攝取率并降低了毒副作用。
【專利說明】紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)及其制備方法 (-)技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種新型的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)及其制備方法。 (二)【背景技術(shù)】
[0002] 紫杉醇為紅豆杉樹皮中提取得到的一種廣譜高效抗癌藥物，主要用于卵巢癌、乳 腺癌、小細(xì)胞肺癌、前列腺癌、頭頸癌、食管癌、精原細(xì)胞瘤、復(fù)發(fā)非何金氏淋己瘤等的治療。 紫杉醇水中的溶解度極低（約0.化g/mU;及嚴(yán)重的毒副作用限制了其臨床應(yīng)用。為提高其 水溶性，主要的措施有：紫杉醇表面親水性化學(xué)修飾（Gund M,趾anna A,Dubash N,Damre A,Singh KS,Satyam A.Water-soluble prodrugs of paclitaxel containing self- immolative disulfide linkers.Bioorg Med Chem Lett. 2015,25(1): 122-127);制成適 宜的給藥系統(tǒng):如市售制劑紫杉醇注射液(Taxol?，泰素，6mg/ml)、注射用脂質(zhì)體(力拌素?)、 注射用紫杉醇（白蛋白結(jié)合型，Abraxane?)及注射用紫杉醇膠束（Genexol-PMB'）。其中紫杉醇 注射液為聚氧乙締藍(lán)麻油和乙醇(50:50，v/v)配制的增溶體系，濃度5mg/ml，但聚氧乙締藍(lán) 麻油毒性大，易導(dǎo)致過敏、溶血、腎毒性及神經(jīng)毒性等。注射用脂質(zhì)體（力撲素 g)為第一代脂 質(zhì)體，由大豆憐脂、膽固醇和Tween 80組成，同樣具有過敏等副作用。注射用紫杉醇聚合物 膠束(Genexi，l-PVr，）WPEG-PLA為載體，粒徑20~50nm的聚合物膠束，較紫杉醇注射液提高 了藥物在腫瘤部位的分布。注射用紫杉醇（白蛋白結(jié)合型KAbraxane?)為白蛋白穩(wěn)定的紫杉 醇納米混懸體系，平均粒徑約130nm，每支lOOmg，臨用前配制成5mg/ml混懸劑iv滴注，較紫 杉醇注射液降低了毒副作用，提高劑量，增強(qiáng)抗癌療效。此外，尚有PEG修飾紫杉醇、紫杉醇 長(zhǎng)循環(huán)、陽離子、主動(dòng)祀向脂質(zhì)體、環(huán)糊精包合物、微球等研究報(bào)導(dǎo)。
[0003] 聚乙締己內(nèi)酷胺-聚乙酸乙締醋-聚乙二醇接枝共聚物（商品名Soluplus)為N-乙 締基-ε-己內(nèi)酷胺-乙酸乙締醋-聚乙二醇（57 :30 :13)共聚而成，分子量為90，000~140， OOOg/mol，是BASF公司2009年研發(fā)上市的一種新型高分子材料。已有采用熱烙擠出法制備 口服環(huán)抱素超飽和聚合物膠束（化 H,Xia D,Zhu Q,Zhu C,Qien D,Gan Y.Supersa1:urated polymeric micelles for oral cyclosporine A delivery.Eur J Pharm Biopharm, 2013,85(3 Pt B) :1325-36),薄膜分散-FI27水化法制備口服搬皮素和大黃素聚合物膠束 (Dian L,Yu E,Chen X,Wen X,Zhang Z,Qin L,Wang Q,Li G,Wu C.Enhancing oral bioavailability of quercetin using novel soluplus polymeric micelies.化noscale Res Lett,2014,9(1) :2406.;典靈輝，于恩江，程紀(jì)倫，郭向華，黃紫 榮，張振聲.大黃素 Soluplus聚合物膠束的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià).中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20 (16): 15-18.)，將難溶性藥物Sapaci化bine與Soluplus配制成增溶的溶液劑可提高該藥的 抗癌療效，但該藥在Sol叫l(wèi)us中的藥物濃度極低，最大僅49.6μg/ml(Obata T,Suzuki Y, Ogawa NjKurimoto I,Yamamoto H,Furuno T,Sasaki T,Tanaka M.Improvement of the 曰ntitumor 曰ctivity of poorly soluble s曰p曰cit曰bine(CS-682)by usingS艦p虹s,疫曰s 曰 surfactant.Biol Pharm Bull.2014;37(5):802-7.)。 (Ξ)
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明旨在WSoluplus為載體，提供一種注入法，制備新型的紫杉醇自組裝聚合 物納米粒給藥系統(tǒng)，用于癌癥的治療。與市售注射劑相比，本發(fā)明給藥系統(tǒng)中不含有聚氧乙 締藍(lán)麻油。與已有的研究不同的是，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)Soluplus形成的載體為自組裝聚合物納米 粒，且制備方法為注入法，與現(xiàn)有報(bào)道的Soluplus聚合物膠束方法不同。
[0005] 本發(fā)明所提供的新型紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)，包載穩(wěn)定性良好，可 直接W液態(tài)分散制劑或凍干粉針制劑形式，促進(jìn)了細(xì)胞對(duì)紫杉醇的攝取，并降低了紫杉醇 毒副作用。
[0006] 本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0007] -種紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)，主要包括紫杉醇和Soluplus ;基于所 述的紫杉醇和Soluplus，所述紫杉醇的重量百分?jǐn)?shù)為0.1 %~15%，所述Soluplus的重量百 分?jǐn)?shù)為99.9 %~85 %;
[000引優(yōu)選的，基于所述的紫杉醇和Soluplus,所述紫杉醇的重量百分?jǐn)?shù)為1 %~ 12.5%，所述Soluplus的重量百分?jǐn)?shù)為99%~82.5% ;
[0009] 更加優(yōu)選的，基于所述的紫杉醇和Sol叫l(wèi)us，所述紫杉醇的重量百分?jǐn)?shù)為5%~ 10%，所述Soluplus的重量百分?jǐn)?shù)為95%~90% ;
[0010] 本發(fā)明所述的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)為液態(tài)分散制劑形式或?yàn)閮?干制劑形式。
[0011] 具體的，當(dāng)所述紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)為液態(tài)分散制劑形式時(shí)，由 紫杉醇、Soluplus、水相組成;基于所述的紫杉醇和Soluplus,所述紫杉醇的重量百分?jǐn)?shù)為 0.1 %~15 %，所述Soluplus的重量百分?jǐn)?shù)為99.9 %~85 %，所述水相的體積量為5~ 200mL/g Soluplus；
[0012] 優(yōu)選的，基于所述的紫杉醇和Soluplus,所述紫杉醇的重量百分?jǐn)?shù)為1 %~ 12.5%，所述Soluplus的重量百分?jǐn)?shù)為99%~82.5% ;
[0013] 更加優(yōu)選的，基于所述的紫杉醇和Sol叫l(wèi)us，所述紫杉醇的重量百分?jǐn)?shù)為5%~ 10%，所述Soluplus的重量百分?jǐn)?shù)為95%~90% ;
[0014]優(yōu)選所述水相的體積量為10~1 OOmL/g Soluplus;更加優(yōu)選所述水相的體積量為 15~50mL/g Soluplus。
[0015] 所述的水相由抑調(diào)節(jié)劑溶于水中配制而成，或者不含抑調(diào)節(jié)劑，直接為水;所述的 水為純水、注射用水或滅菌注射用水，優(yōu)選滅菌注射用水;所述水相的抑值為3.0~9.0,優(yōu) 選4.0~7.6;
[0016] 所述的抑調(diào)節(jié)劑為憐酸二氨鋼、憐酸二氨鐘、憐酸氨二鋼、憐酸氨二鐘、氨氧化鋼、 鹽酸、巧樣酸、酒石酸中的至少一種，優(yōu)選憐酸二氨鋼、氨氧化鋼或鹽酸。
[0017] 本發(fā)明還提供了液態(tài)分散制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)的制 備方法，所述的制備方法為：
[0018] 將紫杉醇和Soluplus溶于有機(jī)溶劑中，得到混合液，攬拌下，將所得混合液注入水 相中，之后除去有機(jī)溶劑，無菌過濾，即得液態(tài)分散制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒 給藥系統(tǒng)；
[0019] 所述水相的體積用量WSoluplus的質(zhì)量計(jì)為5~200mL/g (優(yōu)選10~100血/g，更優(yōu) 選15~50mL/g)，所述有機(jī)溶劑的體積用量W紫杉醇的質(zhì)量計(jì)為0.014~ImL/mg (優(yōu)選0.02 ~0.1 mL/mg，更優(yōu)選0.03~0.05mL/mg)。
[0020] 所述的制備方法通常在0~30°C下操作均可，所述的有機(jī)溶劑為：乙醇、甲醇、丙 酬、乙酸乙醋、二甲基甲酯胺、二甲基乙酷胺、二甲基亞諷、二氯甲燒、下醇、戊醇中的一種或 兩種W上任意比例的混合溶劑，優(yōu)選乙醇或丙酬。
[0021] 所述除去有機(jī)溶劑的方法可W為本領(lǐng)域常規(guī)的減壓抽真空法、超濾法、透析法等。 通常，若有機(jī)溶劑為二氯甲燒或乙酸乙醋，推薦減壓抽真空法，真空度0~〇.〇5MPa;若有機(jī) 溶劑為與水互溶的有機(jī)溶劑(如:丙酬、乙醇、甲醇、二甲基甲酯胺、二甲基乙酷胺、二甲基亞 諷、下醇或戊醇），推薦超濾法，超濾膜孔徑10~50kD。
[0022] 所述的無菌過濾、冷凍干燥均為本領(lǐng)域常用的常規(guī)操作方法。
[0023] 在所得液態(tài)分散制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)中加入凍干保 護(hù)劑并冷凍干燥，即得凍干制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)；
[0024] 所述凍干保護(hù)劑的質(zhì)量用量W所述液態(tài)分散制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納 米粒給藥系統(tǒng)的體積計(jì)為5~250mg/ml，優(yōu)選10~150mg/ml，更優(yōu)選50~lOOmg/ml;
[0025] 所述的凍干保護(hù)劑為葡萄糖、果糖、乳糖、薦糖、殼聚糖、海藻糖、甘露醇中的一種 或兩種W上任意比例的混合物，優(yōu)選甘露醇。
[0026] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明W雙親性高分子材料Soluplus 為載體，采用注入法制備載紫杉醇的自組裝聚合物納米粒，較溶液劑提高了細(xì)胞的攝取率 并降低了毒副作用。 (四）
【附圖說明】
[0027] 圖1為實(shí)施例1中巧在Soluplus分散液中的發(fā)射光譜；
[0028] 圖2為實(shí)施例2中紫杉醇-Soluplus自組裝納米粒TEM圖；
[0029] 圖3為實(shí)施例4中紫杉醇-Soluplus自組裝納米粒與溶液劑的細(xì)胞毒比較(與細(xì)胞 作用72h);
[0030] 圖4為實(shí)施例5中紫杉醇-Soluplus自組裝納米粒與溶液劑的細(xì)胞攝取比較。 (五)
【具體實(shí)施方式】
[0031] 下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不 限于此。
[0032] 實(shí)施例1: Soluplus自組裝納米粒的結(jié)構(gòu)確證
[0033] 巧是一種介質(zhì)微極性巧光探針，屬于稠環(huán)芳控類，室溫下，當(dāng)巧的濃度小于10- Sfliol/L時(shí)，巧溶液在335nm處激發(fā)后，分別在373、379、384、394及48化111出現(xiàn)5個(gè)巧光發(fā)射電 子振動(dòng)峰。第一個(gè)電子振動(dòng)峰373nm與第Ξ個(gè)電子振動(dòng)峰384nm的巧光強(qiáng)度之比Ii/l3與巧分 子所處環(huán)境的極性呈很強(qiáng)的相關(guān)性。Il/l3愈小，對(duì)應(yīng)環(huán)境的極性愈小，即疏水性愈強(qiáng)。通常 認(rèn)為，Il/l3比值的轉(zhuǎn)折點(diǎn)即為臨界膠束濃度。
[0034] 精密稱取巧19.62mg，加無水乙醇溶解，并稀釋至10ml量瓶，配制成含巧1.962mg/ ml溶液。精密量取該液0.25ml，加乙醇稀釋至50ml量瓶，配制成含巧9.81μg/ml溶液。精密量 取該液100μΙ，置于干凈干燥的試管中，揮干。分別加入含Soluplus 0、10、50、100、150、200、 300、500、1000、5000、10000μg/ml的分散液，37 °C避光恒溫振蕩12h。于F-4600巧光分光光度 計(jì)，固定激發(fā)波長(zhǎng)335皿，激發(fā)狹縫5皿，發(fā)射狹縫2.5皿，掃描速率240皿/min，350~500皿掃 描，記錄發(fā)射光譜圖，并計(jì)算1373/1384。
[00巧]從圖1可見，隨著Soluplus濃度的增大巧的巧光強(qiáng)度逐漸增大，說明Soluplus對(duì)巧 有增溶作用，但I(xiàn)373/I38込比沒有出現(xiàn)降低的現(xiàn)象。
[0036]
[0037] 當(dāng)濃度為5mg/ml時(shí)即可有肉眼可見的淡藍(lán)色乳光，通過激光粒度測(cè)定儀測(cè)得 Soluplus濃度0.01~80mg/ml的范圍，平均粒徑56nm±5nm。
[0038] 實(shí)施例2:紫杉醇-Soluplus自組裝納米粒的制備
[0039]
[0040] 將紫杉醇和Soluplus溶于無水乙醇中，磁力攬拌下，注入注射用水中，攬拌均勻。
[0041] 分別測(cè)定自組裝納米粒的粒徑、包封率和稀釋穩(wěn)定性。結(jié)果顯示自組裝納米粒平 均粒徑均為95nm左右，較空白納米粒略增大；包封率均在99 % W上；當(dāng)Soluplus濃度從 20mg/ml稀釋至0.4mg/ml時(shí)，幾乎沒有藥物泄漏;但繼續(xù)稀釋，逐漸有藥物泄漏，至0.04mg/ ml時(shí)泄漏率約35 %。
[0042] 實(shí)施例3:紫杉醇-Soluplus自組裝納米粒凍干劑的制備
[0043]
[0044]
[0045] 制備:將紫杉醇和Soluplus溶于無水乙醇中，磁力攬拌下，注入注射用水中，攬拌 均勻；再經(jīng)超濾膜Biomax 30kD超濾，按納米混懸劑:新鮮注射用水（1:50)比例超濾除去無 水乙醇;再加入凍干保護(hù)劑甘露醇、薦糖或乳糖，凍干保護(hù)劑的質(zhì)量用量分別為注射用水質(zhì) 量的5%、10%和15%;冷凍干燥，即得紫杉醇-Soluplus自組裝納米粒凍干劑。
[0046] 結(jié)果：W甘露醇為凍干保護(hù)劑，外觀完整，無塌陷。其他凍干保護(hù)劑外觀存在不同 程度的缺陷;但對(duì)再分散和包封率均幾乎沒有影響。甘露醇用量增大，凍干粉再分散后的粒 徑略有增大。故凍干保護(hù)劑W5%甘露醇為優(yōu)。
[0047]實(shí)施例4:紫杉醇-Soluplus自組裝納米粒與溶液劑的體外細(xì)胞毒比較 [004引 MCF-7乳腺癌細(xì)胞或A549肺癌細(xì)胞，濃度1 X 105個(gè)/mL接種到96孔板，每孔10化L， 37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜，至細(xì)胞貼壁，吸除培養(yǎng)液。每孔加10化L用含血清培養(yǎng)液稀釋的紫 杉醇溶液和紫杉醇自組裝納米粒及相應(yīng)濃度的空白載體，紫杉醇濃度分別為0.1、1.2、5.9、 11.8和23.50μΜ，每濃度設(shè)復(fù)孔3個(gè)，同時(shí)設(shè)空白孔(含培養(yǎng)基和MTT但不含細(xì)胞），對(duì)照孔(含 培養(yǎng)基、ΜΤΤ和細(xì)胞但不含藥）。于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，分別向每孔中加入0.5 %的ΜΤΤ溶液20μ L，37°C培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h，小屯、吸除培養(yǎng)液，每孔中加 DMS0 20化L，水平振搖lOmin，酶標(biāo) 儀570nm和630nm測(cè)定吸光度，計(jì)算細(xì)胞存活率。
[0049] 從圖3可見，與紫杉醇溶液組的溶劑化emo地oreEL相比，空白Soluplus自組裝納米 粒不含任何表面活性劑，在紫杉醇濃度為0.1~23.5μΜ范圍，與MCF-7或A549細(xì)胞共培養(yǎng) 72h，細(xì)胞存活率均在90% W上，說明其幾乎沒有毒副作用。與紫杉醇溶液相比，紫杉醇- Soluplus自組裝納米粒降低了游離藥物的毒副作用，提高了使用的安全性。
[0050] 實(shí)施例4:紫杉醇-Soluplus自組裝納米粒與溶液劑的體外細(xì)胞攝取比較
[0051 ] MCF-7乳腺癌細(xì)胞或A549肺癌細(xì)胞，濃度2X 105個(gè)細(xì)胞接種于12孔板中，每孔ImL， 置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，吸出培養(yǎng)液，每孔加入濃度58μΜ的紫杉醇- So luplus自組裝納米?；蛉芤簞㊣mL，分別培養(yǎng)1、2、4、化，除去培養(yǎng)液，用4 °C的PBS溶液沖 洗Ξ次，除去細(xì)胞表面吸附藥物和納米粒。收集細(xì)胞，加入2%的SDS溶液l(K)yL，震蕩5min， 充分破壞細(xì)胞，加入0.5mL乙醇提取紫杉醇，10000巧m離屯、5min，取上清液，HPLC法測(cè)定，平 行操作3份，計(jì)算細(xì)胞攝取量。
[0052]從圖4可見，各時(shí)間點(diǎn)測(cè)得MCF-7細(xì)胞和A549細(xì)胞對(duì)納米粒的攝取量均高于溶液 組。A549細(xì)胞攝取紫杉醇-Soluplus自組裝納米粒在化至4h范圍，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，攝取量 逐漸增大，但化下降，可能攝取的紫杉醇因細(xì)胞毒作用導(dǎo)致部分細(xì)胞調(diào)亡所致。MCF-7細(xì)胞 攝取紫杉醇-So 1 up 1US自組裝納米粒則在化至化范圍，隨時(shí)間的延長(zhǎng)，攝取量逐漸增大。說 明Soluplus納米粒自組裝納米促進(jìn)了細(xì)胞對(duì)紫杉醇的攝取。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的紫杉醇自組裝聚合 物納米粒給藥系統(tǒng)主要包括紫杉醇和3〇11^)1118;基于所述的紫杉醇和3〇11^)1118，所述紫杉 醇的重量百分?jǐn)?shù)為〇. 1 %~15%，所述SoIupIus的重量百分?jǐn)?shù)為99.9%~85%。2. 如權(quán)利要求1所述的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的紫杉 醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)為液態(tài)分散制劑形式或?yàn)閮龈芍苿┬问健?. -種液態(tài)分散制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)，其特征在于，由紫 杉醇、SoIupIus、水相組成；基于所述的紫杉醇和SoIuplus，所述紫杉醇的重量百分?jǐn)?shù)為 0.1 %~15 %，所述Soluplus的重量百分?jǐn)?shù)為99.9 %~85 %，所述水相的體積量為5~ 200mL/g So I up I u s;所述的水相由pH調(diào)節(jié)劑溶于水中配制而成，或者不含pH調(diào)節(jié)劑，直接為 水;所述的水為純水、注射用水或滅菌注射用水;所述水相的pH值為3.0~9.0。4. 如權(quán)利要求3所述的液態(tài)分散制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)，其 特征在于，所述的pH調(diào)節(jié)劑為磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、氫氧化 鈉、鹽酸、檸檬酸、酒石酸中的至少一種。5. 如權(quán)利要求3所述的液態(tài)分散制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)的制 備方法，其特征在于，所述的制備方法為： 將紫杉醇和Soluplus溶于有機(jī)溶劑中，得到混合液，攪拌下，將所得混合液注入水相 中，之后除去有機(jī)溶劑，無菌過濾，即得液態(tài)分散制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給 藥系統(tǒng)； 所述水相的體積用量以So Iup Ius的質(zhì)量計(jì)為5~200mL/g，所述有機(jī)溶劑的體積用量以 紫杉醇的質(zhì)量計(jì)為0.014~lmL/mg。6. 如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑為：乙醇、甲醇、丙酮、乙 酸乙酯、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二甲基亞砜、二氯甲烷、丁醇、戊醇中的一種或兩種 以上任意比例的混合溶劑。7. -種凍干制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)，其特征在于，所述凍干 制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)由權(quán)利要求3所述液態(tài)分散制劑形式的紫 杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)加入凍干保護(hù)劑后冷凍干燥制得。8. 如權(quán)利要求7所述的凍干制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)，其特征 在于，所述凍干保護(hù)劑的質(zhì)量用量以所述液態(tài)分散制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒 給藥系統(tǒng)的體積計(jì)為5~250mg/ml。9. 如權(quán)利要求7所述的凍干制劑形式的紫杉醇自組裝聚合物納米粒給藥系統(tǒng)，其特征 在于，所述的凍干保護(hù)劑為葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、殼聚糖、海藻糖、甘露醇中的一種或兩 種以上任意比例的混合物。
【文檔編號(hào)】A61K47/34GK105878187SQ201610247223
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年4月19日
【發(fā)明人】熊素彬, 陳芳, 尹小東
【申請(qǐng)人】浙江工業(yè)大學(xué)