一種美洲大蠊酶解物及其制備方法和應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種美洲大蠊酶解物及其制備方法和應(yīng)用，所述的美洲大蠊酶解物中的肽類(lèi)物質(zhì)含量高、無(wú)毒、色澤淺等優(yōu)點(diǎn)。所述的制備方法包括加入蛋白酶水解，除油脂，離心，醇沉，大孔樹(shù)脂吸附等步驟，本發(fā)明研究表明，所述的美洲大蠊酶解物還具有縮短創(chuàng)面修復(fù)時(shí)間、治療消化道潰瘍的效果顯著的有益效果。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
-種美洲大釀酶解物及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種美洲大賺酶解物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】 陽(yáng)002] 美洲大賺（Periplanetaamericana)為昆蟲(chóng)綱有翅亞綱董賺目董賺科大賺屬昆 蟲(chóng)，俗稱(chēng)"蜂卿"，其入藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其中把它列為中品，謂"味：咸、寒；治：血疲 證堅(jiān)寒熱、破積聚、喉咽閉、內(nèi)寒無(wú)子"。"蜂卿"為其俗名首見(jiàn)于《本草綱目拾遺》，也稱(chēng)其為 石姜、滑蟲(chóng)；各地方有其不同的稱(chēng)法，如：偷油婆、茶婆子、灶媽子等。董賺科度lattidae) 是一個(gè)龐大的昆蟲(chóng)家族，在地球上已生存了 3. 2億年，與恐龍屬同一時(shí)代出現(xiàn)的生物。無(wú)疑 它是世界上生命力最強(qiáng)、最古老、至今繁衍最成功的昆蟲(chóng)類(lèi)群之一。
[0003] 近幾年來(lái)隨著我國(guó)對(duì)傳統(tǒng)中醫(yī)藥資源研究開(kāi)發(fā)的重視，有些學(xué)者對(duì)運(yùn)一幾千年來(lái) 無(wú)法根絕的害蟲(chóng)進(jìn)行了應(yīng)用方面的研究，并取得了可喜的成就，發(fā)掘出了運(yùn)一傳統(tǒng)意義上 的害蟲(chóng)的正面價(jià)值。W美洲大賺醇提物純化制成的產(chǎn)品"康復(fù)新液"，在燒傷、燙傷等外傷創(chuàng) 面的良好療效，同時(shí)具有抗炎、消腫、加速病損組織修復(fù)、提高免疫力，故可W內(nèi)服用于治 療十二指腸潰瘍，胃潰瘍，肺結(jié)核。
[0004] 現(xiàn)代消化理論認(rèn)為，蛋白質(zhì)口服后不能被直接吸收進(jìn)入血液，只有經(jīng)過(guò)胃腸道轉(zhuǎn) 化成小分子膚才能被吸收，小分子膚主要指含2~15個(gè)氨基酸殘基的膚，其相對(duì)分子質(zhì)量 在3000 W下，具有可直接被消化道吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)速度快、耗能低和不易飽和等特點(diǎn)。而美洲大 賺醇提取物中主要成分除了游離氨基酸外，還有蛋白質(zhì)，多膚類(lèi)等大分子物質(zhì)，而蛋白質(zhì)運(yùn) 一類(lèi)大分子是不能被直接吸收進(jìn)入血液的，而是需要口服后經(jīng)過(guò)胃腸道的轉(zhuǎn)化才能起到相 應(yīng)的作用。因此，需要得到一種新的美洲大賺提取物，其包含的主要成分為可W直接被吸收 進(jìn)入血液的游離氨基酸、膚類(lèi)等小分子物質(zhì)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種美洲大賺酶解物。
[0006] 所述的美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含量高，能夠被直接吸收進(jìn)入血液，快速的作 用病患處。
[0007] 所述的美洲大賺酶解物為一種新的美洲大賺提取物。
[0008] 本發(fā)明的目的還在于提供所述美洲大賺酶解物的制備方法。
[0009] 本發(fā)明所述的美洲大賺酶解物的制備方法，它包括如下步驟：
[0010] (1)取美洲大賺干蟲(chóng)或鮮蟲(chóng)，粉碎后加入2~20倍原料藥重量的純水，混勻料液， 調(diào)解抑值； W11] 似向步驟（1)中所述的料液中加入原料藥重量的1%~10%的蛋白酶，水解后， 過(guò)濾，冷藏去油脂后離屯、；將離屯、后的上清液濃縮，向濃縮液中加入乙醇至所得溶液中乙醇 體積濃度為60 %~90 %，靜置，過(guò)濾，濾液回收乙醇，得回收乙醇后的濾液；
[0012] (3)取步驟（2)中得到的回收乙醇后的濾液，通過(guò)吸附樹(shù)脂柱，純水沖洗，收集流 出液至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性；然后流出液再通過(guò)聚酷胺柱，純水沖洗，并收集流出液至 流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性；
[0013] (4)將步驟（3)中得到的最終流出液濃縮、干燥，即得美洲大賺酶解物。
[0014] 其中，步驟（1)中所述的純水為原料藥的10~20倍。
[0015] 其中，步驟似中所述的蛋白酶為胃蛋白酶、膜蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、 膜凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶中一種或者一種W上的組合，其中蛋白酶加入量為原料藥的 3% ~10%。
[0016] 其中，步驟似所述的水解溫度為20~60°C。 陽(yáng)017] 其中，步驟（2)所述的水解時(shí)間為1~8小時(shí)，優(yōu)選的為3. 5~8小時(shí)。
[0018] 其中，步驟（2)所述離屯、的時(shí)間為15~60分鐘，速率為10000轉(zhuǎn)/分~28000轉(zhuǎn) /分。
[0019] 其中，步驟似所述加入乙醇的體積濃度為90%~96%。
[0020] 其中，步驟（2)所述靜置溫度為0~10°C，靜置時(shí)間為12~24小時(shí)。
[0021] 其中，步驟（3)所述吸附樹(shù)脂柱為極性、弱極性和非極性大孔樹(shù)脂。
[0022] 其中，步驟（3)所述聚酷胺柱中聚酷胺的粒度為100~200目。
[0023] 本發(fā)明的目的還在于提供所述美洲大賺酶解物在消化道潰瘍、創(chuàng)面修復(fù)中的應(yīng) 用。
[0024] 進(jìn)一步地，所述消化道潰瘍?yōu)槲笣儭?br>[00巧]進(jìn)一步地，所述創(chuàng)面為燒燙傷創(chuàng)面。
[00%] 本發(fā)明所述的美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分的重量百分比能達(dá)到50% W上，且具有 縮短創(chuàng)面愈合時(shí)間，無(wú)毒副作用，治療潰瘍效果好等優(yōu)點(diǎn)。
[0027] 通過(guò)本發(fā)明提供的制備方法能夠?qū)⒚乐薮筚嵵械拇蠓肿拥鞍踪|(zhì)在提取過(guò)程中直 接水解為能被吸收進(jìn)入血液的小分子膚，氨基酸等有效的小分子物質(zhì)，制備出的美洲大賺 酶解物具有色澤淺、腥臭味淡、患者順應(yīng)性高，藥效高且快速的優(yōu)點(diǎn)。利用本發(fā)明所述的制 備方法提高了美洲大賺提取物的產(chǎn)品品質(zhì)，制備的藥物能夠更易被病患接受，且藥效更好， 克服了現(xiàn)有美洲大賺提取物色澤深、腥臭味重W及口服后需要經(jīng)過(guò)胃腸道轉(zhuǎn)化才能被有效 吸收的缺陷。
[002引顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可W做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0029] W下通過(guò)實(shí)施例形式的【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō) 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于W下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 實(shí)施例1本發(fā)明美洲大賺酶解物的制備方法
[0031] 稱(chēng)取10kg美洲大賺鮮蟲(chóng)鮮料，用高速組織搗碎機(jī)處理成勻漿狀，再加入100升水， 混勻，用10%的氨氧化鋼調(diào)節(jié)抑值為7. 8,加入藥材重量4%的彈性蛋白酶，混勻，在20°C 的溫度下保持8小時(shí)，放入冷藏室冷藏16小時(shí)，用濾紙去除上層油脂后，在28000轉(zhuǎn)速下離 屯、15分鐘；上清液濃縮至相對(duì)密度為60°C時(shí)的1. 20,加入體積濃度為94%的乙醇至溶液 中乙醇體積濃度達(dá)60%，在10°C靜置12小時(shí)，過(guò)濾；濾液回收乙醇，加水至15升，過(guò)濾；濾 液通過(guò)型號(hào)為HPD300的大孔吸附樹(shù)脂柱，用純水沖洗樹(shù)脂柱，收集流出液直至流出液巧Ξ 酬反應(yīng)呈陰性，流出液再通過(guò)粒度為100目的聚酷胺柱，用純水沖洗聚酷胺柱，收集流出液 直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性，60°C減壓濃縮、干燥、粉碎，得0.71kg淺黃色粉末，即為美 洲大賺酶解物。
[0032] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含 量占61. 7% (重量百分比）。
[0033] 實(shí)施例2本發(fā)明美洲大賺酶解物的制備方法
[0034] 稱(chēng)取美洲大賺干蟲(chóng)化g，粉碎成粉末，加100升純水，混勻，用10 %的氨氧化鋼調(diào)節(jié) 抑值為8. 0,加入藥材重量3 %的膜蛋白酶，混勻，在45°C的溫度下保持3. 5小時(shí)，放入冷藏 室冷藏20小時(shí)，用濾紙去除上層油脂后，在15000轉(zhuǎn)速下離屯、50分鐘；上清液濃縮至相對(duì) 密度為60°C時(shí)的1. 15,加入體積濃度為95 %乙醇至溶液中乙醇體積濃度達(dá)75 %，在20°C 靜置24小時(shí)，過(guò)濾；濾液回收乙醇，加水至10升，過(guò)濾；濾液通過(guò)型號(hào)為HPD400的大孔吸 附樹(shù)脂柱，用純水沖洗樹(shù)脂柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性，流出液再通過(guò)粒 度為100目的聚酷胺柱，用純水沖洗聚酷胺柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性， 75°C減壓濃縮、干燥、粉碎，得1. 05kg淺黃色色粉末，即為美洲大賺酶解物。
[0035] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含 量占58. 1% (重量百分比）。
[0036] 實(shí)施例3本發(fā)明美洲大賺酶解物的制備方法
[0037] 稱(chēng)取美洲大賺干蟲(chóng)化g，粉碎成粉末，再加入70升水，混勻，用10%的氨氧化鋼調(diào) 節(jié)抑值為9. 0,加入藥材重量10%的膜凝乳蛋白酶，混勻，在40°C的溫度下保持5小時(shí)，放 入冷藏室冷藏24小時(shí)，用濾紙去除上層油脂后，在18000轉(zhuǎn)速下離屯、50分鐘；上清液濃縮 至相對(duì)密度為60°C時(shí)的1. 10，加入體積濃度為92%的乙醇至溶液中乙醇體積濃度達(dá)75%， 在5°C靜置24小時(shí)，過(guò)濾；濾液回收乙醇，加水至12升，過(guò)濾；濾液通過(guò)型號(hào)為X-5的大孔吸 附樹(shù)脂柱，用純水沖洗樹(shù)脂柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性，流出液再通過(guò)粒 度為200目的聚酷胺柱，用純水沖洗聚酷胺柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性， 70°C減壓濃縮、干燥、粉碎，得1. 05kg淺黃色粉末，即為美洲大賺酶解物。
[0038] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含 量占57. 5% (重量百分比）。
[0039] 實(shí)施例4本發(fā)明美洲大賺酶解物的制備方法 W40] 稱(chēng)取美洲大賺干蟲(chóng)化g，粉碎成粉末，加水80升，混勻，用10 %的氨氧化鋼調(diào)節(jié)pH 值為7. 5,加入藥材重量5%的中性蛋白酶，混勻，在60°C的溫度下保持4小時(shí)，放入冷藏室 冷藏24小時(shí)，用濾紙去除上層油脂后，在20000轉(zhuǎn)速下離屯、45分鐘；上清液濃縮至相對(duì)密 度為60°C時(shí)的1. 05,加入體積濃度為96%乙醇至溶液中乙醇體積濃度達(dá)90%，在4°C靜置 6小時(shí)，過(guò)濾；濾液回收乙醇，加水至5化過(guò)濾；濾液通過(guò)型號(hào)為AB-8的大孔吸附樹(shù)脂柱， 用純水沖洗樹(shù)脂柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性，流出液再通過(guò)粒度為100 目的聚酷胺柱，用純水沖洗聚酷胺柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性，70°C減壓 濃縮、干燥、粉碎，得0. 96kg淺黃色粉末，即為美洲大賺酶解物。
[0041]采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含 量占56. 9% (重量百分比）。
[0042] 實(shí)施例5本發(fā)明美洲大賺酶解物的制備方法
[0043] 稱(chēng)取美洲大賺干蟲(chóng)化g，粉碎成粉末，加水50升，混勻，用10 %的氨氧化鋼調(diào)節(jié)抑 值為7. 5,加入藥材重量4%的木瓜蛋白酶，混勻，在50°C的溫度下保持5小時(shí)，放入冷藏室 冷藏12小時(shí)，用濾紙去除上層油脂后，在24000轉(zhuǎn)速下離屯、30分鐘；上清液濃縮至相對(duì)密 度為60°C時(shí)的1. 10,加入體積濃度為93%的乙醇至含醇量達(dá)65%，在0°C靜置12小時(shí)，過(guò) 濾；濾液回收乙醇，加水至8升，過(guò)濾；濾液通過(guò)型號(hào)為HPD100的大孔吸附樹(shù)脂柱，用純水 沖洗樹(shù)脂柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性，流出液再通過(guò)粒度為200目的聚 酷胺柱，用純水沖洗聚酷胺柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性，65°C減壓濃縮、 干燥、粉碎，得1. 10kg淺黃色粉末，即為美洲大賺酶解物。
[0044] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含 量占53. 8% (重量百分比）。
[0045] 實(shí)施例6本發(fā)明美洲大賺酶解物的制備方法
[0046] 稱(chēng)取10kg美洲大賺鮮蟲(chóng)原料，用高速組織搗碎機(jī)處理成勻漿狀，再加入20升水， 用10%肥L溶液調(diào)節(jié)抑值為1. 0,加入藥材重量1 %的胃蛋白酶，混勻，在40°C的溫度下保 持4小時(shí)后，放入冷藏室冷藏24小時(shí)，用濾紙去除上層油脂后，在10000轉(zhuǎn)速/分下離屯、60 分鐘；上清液濃縮至相對(duì)密度為60°C時(shí)的1. 10,加入體積濃度為90%乙醇至溶液中乙醇體 積濃度達(dá)80%，在0°C靜置12小時(shí)，過(guò)濾；濾液回收乙醇，加水至5升，過(guò)濾；濾液通過(guò)型號(hào) 為化。1的大孔吸附樹(shù)脂柱，用純水沖洗樹(shù)脂柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性， 流出液再通過(guò)粒度為100目的聚酷胺柱，用純水沖洗聚酷胺柱，收集流出液直至流出液巧 Ξ酬反應(yīng)呈陰性，79°C減壓濃縮、干燥、粉碎，得0.56kg淺黃色粉末，即為美洲大賺酶解物。
[0047] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含 量占52. 3% (重量百分比）。
[0048] 實(shí)施例7本發(fā)明美洲大賺酶解物的制備方法
[0049] 稱(chēng)取美洲大賺干蟲(chóng)化g，粉碎成粉末，再加入60升水，混勻，用10%的氨氧化鋼調(diào) 節(jié)抑值為8. 0,加入藥材重量1 %的膜蛋白酶和3 %中性蛋白酶，混勻，在40°C的溫度下保 持4小時(shí)，放入冷藏室冷藏12小時(shí)，用濾紙去除上層油脂后，在26000轉(zhuǎn)速下離屯、35分鐘； 上清液濃縮至相對(duì)密度為60°C的1. 08,加入體積濃度為96 %的乙醇至溶液中乙醇體積濃 度達(dá)85%，在8°C靜置18小時(shí)，過(guò)濾；濾液回收乙醇，加水至8升，過(guò)濾；濾液通過(guò)型號(hào)為 NK-2的大孔吸附樹(shù)脂柱，用純水沖洗樹(shù)脂柱，收集流出液直至流出液巧立酬反應(yīng)呈陰性，流 出液再通過(guò)粒度為100目的聚酷胺柱，用純水沖洗聚酷胺柱，收集流出液直至流出液巧Ξ 酬反應(yīng)呈陰性，75°C減壓濃縮、干燥、粉碎，得1. 05kg淺黃色粉末，即為美洲大賺酶解物。
[0050] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含 量占60. 2% (重量百分比）。
[0051] 實(shí)施例8本發(fā)明美洲大賺酶解物的制備方法
[0052] 稱(chēng)取美洲大賺干蟲(chóng)化g，粉碎成粉末，加水50升，混勻，用10%的氨氧化鋼調(diào)節(jié)抑 值為7. 8,加入藥材重量2 %的中性蛋白酶、1. 5 %膜蛋白酶W及1 %木瓜蛋白酶，混勻，在 40°C的溫度下保持2小時(shí)，放入冷藏室冷藏24小時(shí)，用濾紙去除上層油脂后，在21000轉(zhuǎn)速 下離屯、30分鐘；上清液濃縮至相對(duì)密度為60°C時(shí)的1. 10,加入體積濃度為90%的乙醇至 溶液中乙醇體積濃度達(dá)80%，在4°C靜置16小時(shí)，過(guò)濾；濾液回收乙醇，加水至7升，離屯、； 上清液通過(guò)型號(hào)為HPD600的大孔吸附樹(shù)脂柱，用純水沖洗樹(shù)脂柱，收集流出液直至流出液 巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性，流出液再通過(guò)粒度為200目的聚酷胺柱，用純水沖洗聚酷胺柱，收集流 出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性，75°C減壓濃縮、干燥、粉碎，得1. 02kg淺黃色粉末，即 為美洲大賺酶解物。
[0053] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含 量占57. 3% (重量百分比）。
[0054] 實(shí)施例9本發(fā)明美洲大賺酶解物的制備方法
[0055] 稱(chēng)取美洲大賺干蟲(chóng)化g，粉碎成粉末，再加入10升水，混勻，用10%的氨氧化鋼調(diào) 節(jié)抑值為8.0,加入藥材重量1%的膜凝乳蛋白酶、1.5%中性蛋白酶化及1%木瓜蛋白酶， 混勻，在50°C的溫度下保持3小時(shí)，放入冷藏室冷藏20小時(shí)，用濾紙去除上層油脂后，在 12000轉(zhuǎn)速下離屯、60分鐘；上清液濃縮至相對(duì)密度為60°C時(shí)的1. 15,加入體積濃度為95% 的乙醇至含溶液中乙醇體積濃度達(dá)70%，在8°C靜置12小時(shí)，過(guò)濾；濾液回收乙醇，加水至 12升，過(guò)濾；濾液通過(guò)型號(hào)為D3520的大孔吸附樹(shù)脂柱，用純水沖洗樹(shù)脂柱，收集流出液直 至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性，流出液再通過(guò)粒度為200目的聚酷胺柱，用純水沖洗聚酷胺 柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性，75°C減壓濃縮、干燥、粉碎，得1. 15kg淺黃 色粉末，即為美洲大賺酶解物。
[0056] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含 量占55. 1% (重量百分比）。 陽(yáng)057] 參比實(shí)施例1美洲大賺酶解物
[0058] 稱(chēng)取美洲大賺10kg，粉碎，加入80%的乙醇回流提取3次，每次分別加入乙醇的量 為原藥材的8倍、6倍、6倍，過(guò)濾，濾液于70°C減壓回收乙醇，回收50°C時(shí)相對(duì)密度為1. 05， 濃縮液于〇°C冷藏48小時(shí)，將上層油脂用濾紙吸去，將下層液于高速冷凍離屯、機(jī)里離屯、，溫 度為l〇°C，轉(zhuǎn)速2000化/min,離屯、30分鐘，得到的上清液在75°C減壓濃縮、干燥、粉碎，即得 4. 76kg美洲大賺醇提取物。
[0059] 取上述美洲大賺醇提取物，加純水配成含有5 %的美洲大賺醇提取物溶液，加 10%的氨氧化鋼調(diào)節(jié)溶液的抑為7. 0,再加入8400U/mg的木瓜蛋白酶，在55°C條件下進(jìn)行 水解3小時(shí)，將水解后的藥液過(guò)濾，濃縮干燥，即得美洲大賺酶解物2. 17kg。
[0060] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含 量占41.0% (重量百分比）。
[0061] 參比實(shí)施例2美洲大賺醇提物
[0062] 稱(chēng)取美洲大賺10kg，粉碎，加入80%的乙醇回流提取3次，每次分別加入乙醇的量 為原藥材的8倍、6倍、6倍，過(guò)濾，濾液于70°C減壓回收乙醇，回收50°C時(shí)相對(duì)密度為1. 05， 濃縮液于〇°C冷藏48小時(shí)，將上層油脂用濾紙吸去，將下層液于高速冷凍離屯、機(jī)里離屯、，溫 度為10°C，轉(zhuǎn)速200(K)r/min，離屯、30分鐘。離屯、后上清液于75°C減壓濃縮、干燥、粉碎，即 為美洲大賺提取物3. 23kg，即為美洲大賺醇提物。
[0063] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺醇提物中膚類(lèi)成分含 量占17. 7% (重量百分比）。 W64] 參比實(shí)施例3美洲大賺醇提物 W65] 稱(chēng)取美洲大賺10kg，粉碎，加入80%的乙醇回流提取3次，每次分別加入乙醇的量 為原藥材的8倍、6倍、6倍，過(guò)濾，濾液于70°C減壓回收乙醇，回收50°C時(shí)相對(duì)密度為1. 05， 濃縮液于〇°C冷藏48小時(shí)，將上層油脂用濾紙吸去，將下層液于高速冷凍離屯、機(jī)里離屯、，溫 度為10°C，轉(zhuǎn)速200(K)r/min，離屯、30分鐘；濾液通過(guò)HPD400型大孔吸附樹(shù)脂柱，用純水沖 洗樹(shù)脂柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性；流出液通過(guò)粒度為100目的聚酷胺 柱，用純水沖洗樹(shù)脂柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性；所得的流出液65°C減 壓濃縮、干燥，粉碎，得淺黃色美洲大賺提取物1. 07kg，即得美洲大賺醇提物。
[0066] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺醇提物中膚類(lèi)成分含 量占28. 9% (重量百分比）。 陽(yáng)067] 參比實(shí)施例4美洲大賺水提物
[0068] 稱(chēng)取美洲大賺干蟲(chóng)10kg，粉碎，加水，浸泡1. 5小時(shí)后，水煎煮3次，每次加水量為 原藥材的8倍、6倍、6倍，每次煎煮時(shí)間分別為2. 5小時(shí)，1. 5小時(shí)，1. 5小時(shí)，合并立次煎液， 過(guò)濾，濾液冷藏靜置24小時(shí)后去除上層油脂，下層液在18000轉(zhuǎn)速下離屯、30分鐘；上清液 濃縮至相對(duì)密度為65°C時(shí)的1. 12,加入體積濃度為95 %的乙醇至含溶液中乙醇體積濃度 達(dá)85 %，在5 °C靜置12小時(shí)，過(guò)濾；濾液75 °C減壓濃縮、干燥、粉碎，得3. 01kg深褐色粉末， 即為美洲大賺水提物。
[0069] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺水提物中膚類(lèi)成分含 量占13. 9% (重量百分比）。
[0070] 參比實(shí)施例5美洲大賺水提物
[0071] 稱(chēng)取美洲大賺干蟲(chóng)10kg，粉碎，加水，浸泡1. 5小時(shí)后，水煎煮3次，每次加水量為 原藥材的8倍、6倍、6倍，每次煎煮時(shí)間分別為2. 5小時(shí)，1. 5小時(shí)，1. 5小時(shí)，合并立次煎 液，過(guò)濾，濾液冷藏靜置24小時(shí)后去除上層油脂，下層液在18000轉(zhuǎn)速下離屯、30分鐘；上清 液濃縮至相對(duì)密度為65°C時(shí)的1. 12,加入體積濃度為95%的乙醇至含溶液中乙醇體積濃 度達(dá)85%，在5°C靜置12小時(shí)，過(guò)濾；濾液回收乙醇，加水至10升，過(guò)濾；濾液通過(guò)型號(hào)為 HPD300的大孔吸附樹(shù)脂柱，用純水沖洗樹(shù)脂柱，收集流出液直至流出液巧Ξ酬反應(yīng)呈陰性， 流出液再通過(guò)粒度為100目的聚酷胺柱，用純水沖洗聚酷胺柱，收集流出液直至流出液巧 Ξ酬反應(yīng)呈陰性，75°C減壓濃縮、干燥、粉碎，得1. 52kg淺褐色粉末，即為美洲大賺水提物。
[0072] 采用凱氏定氮法結(jié)合氨基酸分析儀，最終測(cè)得上述美洲大賺水提物中膚類(lèi)成分含 量占27. 6% (重量百分比）。 陽(yáng)073] 綜上，實(shí)施例1~實(shí)施例9和參比實(shí)施例1~5所用提取方法最終得到的美洲大 賺提取物中膚類(lèi)成分含量比較如表1 :
[0074]

陽(yáng)075] 由表1中的各實(shí)施例制備的美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含量得到：使用蛋白酶對(duì) 美洲大賺進(jìn)行水解，得到的美洲大賺酶解物中的膚類(lèi)成分含量明顯高于使用普通提取方法 得到的美洲大賺醇提物和水提物中的膚類(lèi)成分含量。
[0076] 其中參比實(shí)施例1與實(shí)施例的酶解工藝的區(qū)別在于：參比實(shí)施例1是將蛋白酶作 用于已經(jīng)制備好的美洲大賺醇提物，而實(shí)施例中的蛋白酶是直接作用于美洲大賺；由表1 中的數(shù)據(jù)可W看出實(shí)施例1制備的美洲大賺酶解物中的膚類(lèi)含量明顯高于參比實(shí)施例1制 備的美洲大賺酶解物。
[0077] 表1中數(shù)據(jù)還可W得到使用本發(fā)明所述的制備方法制備的蛋白美洲大賺酶解物 中的膚類(lèi)成分含量可W高達(dá)50 % W上，具有良好的市場(chǎng)價(jià)值。
[0078] 從表1中的數(shù)據(jù)還能得出，同為在木瓜蛋白酶作用下制備的美洲大賺酶解物，實(shí) 施例5得到的美洲大賺酶解物中的膚類(lèi)含量為53. 8%，而參比實(shí)施例1所述的方法制備的 美洲大賺酶解物中的膚類(lèi)含量為41. 0%，由此說(shuō)明本發(fā)明所述的制備方法制備的美洲大賺 酶解物中的膚類(lèi)含量高。
[0079] W下將通過(guò)實(shí)驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明所述的美洲大賺酶解物的有益效果進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō) 明：
[0080] 實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明所述美洲大賺酶解物對(duì)小鼠的急性毒性及半數(shù)致死劑量
[0081] 一、實(shí)驗(yàn)材料
[0082] 1.實(shí)驗(yàn)藥物：實(shí)施例1和參比實(shí)施例5制備的美洲大賺酶解物。 陽(yáng)〇8引 2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：
[0084] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠，SPF級(jí)（立級(jí)）合格動(dòng)物。 陽(yáng)0財(cái) 3.實(shí)驗(yàn)試劑
[0086] 氯化鋼注射液（0. 9% )，其它試劑均為市售，分析純。
[0087] Ξ、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
[0088] 預(yù)試驗(yàn)：取體重18~22g小鼠70只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分成7組，每組10只， 自由飲水，禁食6小時(shí)后，其中3組按0.41111/10邑體重分別1邑70%、56%、45%實(shí)施例1制 備的美洲大賺酶解物液體，另外3組按0. 4ml/10g體重分別ig 70%、56%、45%參比實(shí)施 例5制備的美洲大賺水提物液體，對(duì)照組ig等體積生理鹽水，觀察小鼠給藥后毒性反應(yīng)及 死亡情況，觀察7天，每天一次，結(jié)果見(jiàn)表2 :
[0089] 表2毒性結(jié)果
[0090]
[0091] 由表1中的數(shù)據(jù)可W看出，在同體積同濃度的美洲大賺提取物灌胃小鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié) 果比較中得到：參比實(shí)施例5的總體的死亡率比實(shí)施例1總體死亡率高，初步說(shuō)明參比實(shí)施 例5制備的美洲大賺水提物的毒性比實(shí)施例1制備的美洲大賺酶解物的毒性大。
[0092] W下將根據(jù)表1所述死亡情況，進(jìn)行實(shí)施例1和參比實(shí)施例5制備的美洲大賺酶 解物和美洲大賺水提物對(duì)小鼠半數(shù)致死劑量（LDJ測(cè)定。
[0093] 1. 1對(duì)小鼠的半數(shù)致死劑量（LDJ測(cè)定：
[0094] 1. 1. 1試驗(yàn)方法 陽(yáng)0巧]取體重在20~2?之間的小鼠60只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分成6組，每組10只， 禁食不禁水化，各組分別ig實(shí)施例1制備的美洲大賺酶解物30. 4g/kg、27. 4g/kg、24. 6g/ kg、22. 2g/kg、19. 9g/kg、0g/kg(NS 0. 4ml/10gb. w.)，按不同濃度同體積給藥，0. 4ml/10g ig，觀察14天，每天一次，記錄逐日的小鼠毒性反應(yīng)及死亡數(shù)，死亡動(dòng)物即時(shí)尸體解剖，肉 眼觀察各主要臟器，取屯、、肝、脾、肺、腎、胃等主要臟器，10%甲醒固定，病理切片檢查。存活 動(dòng)物至實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死，取主要臟器病理檢查。
[0096] 同上述試驗(yàn)方法對(duì)參比實(shí)施例5制備的美洲大賺水提物進(jìn)行小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn) 處理，觀察17天，做好相應(yīng)記錄。
[0097] 1. 1. 2試驗(yàn)結(jié)果
[0098] 1. 1. 2. 1實(shí)施例1制備的美洲大賺酶解物：
[0099] (1)給予一次大劑量（30. 4g/kg) ig小鼠后，小鼠出現(xiàn)的癥狀反應(yīng)為：大多小鼠活 動(dòng)減少，俯邸，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲緩，皮膚體溫略有下降，部分動(dòng)物翻正反射消失，呼吸頻率 減慢，幅度變?nèi)?，直至呼吸停止，?~8小時(shí)內(nèi)死亡情況見(jiàn)表3,存活動(dòng)物上述癥狀反應(yīng)在 10~14小時(shí)內(nèi)逐漸消失，恢復(fù)正常狀態(tài)，活動(dòng)、飲食、飲水均恢復(fù)至正常，直至存活14天未 見(jiàn)異常情況出現(xiàn)。
[0100] 似死亡小鼠尸檢情況：經(jīng)尸體解剖，觀察肉眼觀察各主要臟器，僅胃腸內(nèi)有大量 清稀液體，其余各臟器均未見(jiàn)肉眼可見(jiàn)異常病變，取屯、、肝、脾、肺、腎、胃等主要臟器10%甲 醒固定，病理切片檢查后，發(fā)現(xiàn)毒性作用器官主要在胃，胃的損傷主要體現(xiàn)在胃黏膜開(kāi)始脫 落，未見(jiàn)出血癥狀。 陽(yáng)101] 做給藥后恢復(fù)14天小鼠的解剖結(jié)果：屯、、肝、脾、肺、腎和胃幾個(gè)臟器未見(jiàn)明顯病 變。由此說(shuō)明實(shí)施例1制備的美洲大賺酶解物造成的小鼠屯、、肝、脾、肺、腎、胃等主要臟器 的損傷有自愈的可能。 陽(yáng)102] 1. 1. 2. 2參比實(shí)施例5制備的美洲大賺水提物： 陽(yáng)103] (1)給予一次大劑量（30. 4g/kg)ig小鼠后，小鼠出現(xiàn)的癥狀反應(yīng)為：大多小鼠 活動(dòng)減少，俯邸，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲緩，部分動(dòng)物皮膚溫度下降，翻正反射消失，呼吸頻率減 慢，幅度變?nèi)?，直至呼吸停止，?~5小時(shí)內(nèi)死亡情況見(jiàn)表3,存活動(dòng)物上述癥狀反應(yīng)在 18~24小時(shí)內(nèi)逐漸消失，恢復(fù)正常狀態(tài)，活動(dòng)、飲食、飲水均恢復(fù)至正常，直至存活17天未 見(jiàn)異常情況出現(xiàn)。
[0104] 似死亡小鼠尸檢情況：經(jīng)尸體解剖，觀察肉眼觀察各主要臟器，胃腸內(nèi)有大量清 稀液體，其余各臟器均未見(jiàn)肉眼可見(jiàn)異常病變，取屯、、肝、脾、肺、腎、胃等主要臟器10%甲 醒固定，病理切片檢查后，發(fā)現(xiàn)毒性作用器官主要在胃，胃的損傷主要體現(xiàn)在胃黏膜壞死脫 落，且有出血癥狀。
[0105] 0)給藥后恢復(fù)17天小鼠的解剖結(jié)果：屯、、肝、脾、肺、腎和胃幾個(gè)臟器未見(jiàn)明顯病 變。 陽(yáng)106] 1. 1. 2. 3實(shí)施例1和參比實(shí)施例5所述的藥物對(duì)小鼠的LDw測(cè)定結(jié)果如表3和表 4 陽(yáng)107] 表3實(shí)施例1制備的美洲大賺酶解物對(duì)小鼠的LDg。 陽(yáng)10引
陽(yáng)109] 根據(jù)表3中的數(shù)據(jù)按照寇氏法最終計(jì)算得到的本發(fā)明實(shí)施例1所述的美洲大賺酶 解物對(duì)小鼠的〇)5。=28.7邑/1^山〇5。的95%可信區(qū)間：27.0邑/1^~30.3邑/1^。
[0110] 表4參比實(shí)施例5制備的美洲大賺水提物對(duì)小鼠的LDw 陽(yáng) 111]
[0112] 根據(jù)表4中的數(shù)據(jù)按照寇氏法最終計(jì)算得到的本發(fā)明參比實(shí)施5所述的美洲大賺 水提物對(duì)小鼠的LDs〇= 25. Og/kg ;LD 5。的95%可信區(qū)間：23. 4g/kg~26. 6g/kg。綜上，水 提法來(lái)制備美洲大賺提取物，得到的提取物對(duì)小鼠的半數(shù)致死量LDw(參比實(shí)施例5)小于 使用酶解法制備的美洲大賺提取物對(duì)小鼠的半數(shù)致死量LDw(實(shí)施例1)，由此說(shuō)明本發(fā)明 所述的美洲大賺酶解物在無(wú)毒性藥物范圍內(nèi)，安全可靠。
[0113] 實(shí)驗(yàn)例2創(chuàng)面修復(fù)試驗(yàn) 陽(yáng)114] 1對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性燙傷的影響 陽(yáng)11引分組：
[0116] 取體重18~22g小鼠80只，雌雄各半，按性別與體重隨機(jī)分為8組，分別為NS對(duì) 照組，濕潤(rùn)燒傷膏對(duì)照組，給藥組1~6 (實(shí)施例1~4所述的美洲大賺酶解物和參比實(shí)施 例2~5制備的美洲大賺提取物）。
[0117] 試驗(yàn)方法：
[0118] 將小鼠置于固定器內(nèi)，小鼠右后足巧部位置于預(yù)先調(diào)至55°C恒溫水浴中15秒，此 后每隔半小時(shí)各組小鼠分別于右足巧部涂相對(duì)應(yīng)的藥物1次，共給藥3次，4. 5小時(shí)后將小 鼠脫頸椎處死，于同一部位剪下兩足巧部，用精密扭力天平稱(chēng)重，W每鼠右足重減去左足重 量為腫脹度，將對(duì)照組和給藥組的腫脹程度進(jìn)行比較和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果見(jiàn)表5。
[0119] 表5提取物對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性燙傷的影響傳±甜) 陽(yáng) 120]
陽(yáng)121] 注：*:P<0. 05與濕潤(rùn)燒傷膏組比較；**:P<0. 01與對(duì)照組比較
[0122] 結(jié)果顯示，本發(fā)明所述實(shí)施例1-4制備的美洲大賺酶解物對(duì)熱水燙傷致小鼠足巧 的腫脹度有不同程度的降低，數(shù)據(jù)顯示實(shí)施例1-4與濕潤(rùn)燒傷膏組比較P<0. 05,具有顯著 的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而參比實(shí)施例2-5與濕潤(rùn)燒傷膏組比較不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)而說(shuō)明本發(fā) 明所述的美洲大賺酶解物對(duì)燙傷具有良好的保護(hù)和治療作用。 陽(yáng)123] 2對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性燒傷的影響
[0124]分組： 陽(yáng)12引取體重18~22g小鼠80只，雌雄各半，將中間挖空2cmX2cm的石棉紙置于小鼠 背上，用微量移液器吸取lOOuL無(wú)水乙醇滴于20mg棉球上，置于暴露處，點(diǎn)火燃燒造成II度 燒傷模型。按性別與燒傷面積隨機(jī)分為8組，分別為NS對(duì)照組，濕潤(rùn)燒傷膏對(duì)照組，給藥組 1~6 (實(shí)施例1~4和參比實(shí)施例2~5制備的美洲大賺提取物）。
[0126] 實(shí)驗(yàn)方法： 陽(yáng)127] 各組分別涂藥，連續(xù)涂20d，每天2次，換藥前將創(chuàng)面清洗干凈。觀測(cè)小鼠燒傷面積 和愈合情況，給藥6天與13天，分別用數(shù)碼相機(jī)拍照，用IPP5. 1圖像分析軟件包測(cè)量各組 動(dòng)物燒傷面積。將所測(cè)結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表6。 陽(yáng)1測(cè)表6提取物對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性燒傷的影響+S貨 陽(yáng) 129]
陽(yáng)130] 注：*:P<0. 05與濕潤(rùn)燒傷膏組比較；**:P<0. 05與對(duì)照組比較 陽(yáng)131] 結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，給藥4天、給藥10天，實(shí)施例1-4制備的美洲大賺酶解 物對(duì)小鼠的創(chuàng)面結(jié)挪面積有一定的減少，且與濕潤(rùn)燒傷膏組相比具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， P<〇. 05,實(shí)施例1-4制備的美洲大賺酶解物還能使創(chuàng)面愈合時(shí)間大大的縮短。與對(duì)照組相 比，參比實(shí)施例2-5制備的美洲大賺提取物（美洲大賺醇提物和美洲大賺水提物）對(duì)小鼠 的創(chuàng)面結(jié)挪面積也有一定的減少，但是與濕潤(rùn)燒傷膏相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所W，本實(shí)驗(yàn)例 表4中的結(jié)果說(shuō)明本發(fā)明所述的美洲大賺酶解物對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性燒傷有明顯的治療作用，且 效果顯著。 陽(yáng)132] 實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明所述的美洲大賺酶解物對(duì)乙醇致小鼠潰瘍的影響 陽(yáng)133] 1、實(shí)驗(yàn)材料
[0134] (1)受試藥物及分組
[0135] 實(shí)驗(yàn)分為隨機(jī)分為8個(gè)組，每組動(dòng)物10只，每組小鼠按照0. 05g/ml/20g體重給 藥，具體分組情況如下： 陽(yáng)136] 空白對(duì)照組：純水；
[0137] 陽(yáng)性藥物組：達(dá)喜（侶碳酸儀片），生產(chǎn)企業(yè)：拜耳醫(yī)藥保健有限公司；
[013引治療組1:實(shí)施例1所述的美洲大賺酶解物；
[0139] 治療組2 :實(shí)施例5所述的美洲大賺酶解物；
[0140] 治療組3 :參比實(shí)施例1所述的美洲大賺酶解物；
[0141] 治療組4 :參比實(shí)施例3所述的美洲大賺醇提物；
[0142] 治療組5 :參比實(shí)施例5所述的美洲大賺水提物； 陽(yáng)143] 0)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 陽(yáng)144] 小鼠80只，KM種，SPF級(jí)，體重20~24g，雌雄各半，由成都達(dá)碩生物科技有限公 司提供
[0145] 2、實(shí)驗(yàn)方法 陽(yáng)146] 2. 1藥液的制備
[0147] 將上述受試藥物，分別制成濃度為0. 05g/ml的藥液；
[0148] 2. 2對(duì)胃潰瘍粘膜的保護(hù)功能評(píng)價(jià)方法
[0149] 2. 2. 1無(wú)水乙醇致小鼠胃粘膜損傷模型試驗(yàn)
[0150] 將各組小鼠常規(guī)飼養(yǎng)3天后，按1ml/只進(jìn)行灌胃給藥，每天給藥一次，連續(xù)10天， 動(dòng)物每3~4天稱(chēng)重一次，根據(jù)體重調(diào)整給藥體積。 陽(yáng)151 ] 第9天給藥后禁食2地，自由飲水，末次給藥后比，所有動(dòng)物均ig無(wú)水乙醇0. 2ml/ 只，1小時(shí)后處死動(dòng)物，結(jié)扎幽口，1%甲醒固定，再結(jié)責(zé)口，將胃剪下，放入10%甲醒溶液中 浸泡1小時(shí)。沿胃大彎剖開(kāi)胃，肉眼可見(jiàn)潰瘍發(fā)生在胃竇部。將胃竇部剪下，采用數(shù)碼相機(jī) 拍照記錄，將數(shù)碼照片用Image-Pro Plus 6.0軟件處理，記錄潰瘍區(qū)域面積和整個(gè)胃竇部 面積，計(jì)算各小鼠的潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率。 陽(yáng)152] 潰瘍指數(shù)（％)=潰瘍區(qū)域面積/胃竇部面積X 100。
[0153] 潰瘍抑制率（％) = (空白對(duì)照組潰瘍指數(shù)-各給藥組潰瘍指數(shù)）/空白對(duì)照組潰 瘍指數(shù)X 100。 陽(yáng)154] 2. 2. 2統(tǒng)計(jì)方法
[0K5] 數(shù)據(jù)采用^ ±S;表示，用SPSS 20. 0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，進(jìn)行完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的方差 分析和多重比較的統(tǒng)計(jì)分析，滿足正態(tài)性和方差齊性采用Dunett檢驗(yàn)， 陽(yáng)156] 否則采用Tamhane' S T2檢驗(yàn)。 陽(yáng)157] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0158] (1)對(duì)小鼠體重的影響
[0159] 各組小鼠連續(xù)給藥10天，對(duì)小鼠體重的影響，結(jié)果見(jiàn)表7。 陽(yáng)160] 表7對(duì)小鼠體重的影響（丈± S，g3
[0161]
陽(yáng)16引 由表7可知，陽(yáng)性藥物組和治療組與空白對(duì)照組比較，在各時(shí)間點(diǎn)對(duì)小鼠體重的 影響無(wú)顯著性差異，P〉〇. 05。 陽(yáng)163] 似對(duì)無(wú)水乙醇致小鼠胃潰瘍的影響，結(jié)果見(jiàn)表8。 陽(yáng)164] 表8乙醇致小鼠胃潰瘍的影響（丈+S) 陽(yáng)1化]
[0166] 注：與空白對(duì)照組比較，*表示P<0. 05, **表示P<0. 01 ;與陽(yáng)性藥物組比較，#表 示 P<0.05 陽(yáng)167] 由表8中的結(jié)果得知：實(shí)施例1和實(shí)施例5制備的美洲大賺酶解物對(duì)乙醇致小鼠 的胃潰瘍的抑制率分別為73. 64 %、63. 06 %，是整個(gè)實(shí)驗(yàn)中抑制率最高的兩組；與空白對(duì) 照組比較均具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<〇. 01，與陽(yáng)性藥物組（達(dá)喜）比較也均具有明顯的統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義，P<〇.〇5。 陽(yáng)168] 治療組2 (實(shí)施例5)與治療組3 (參比實(shí)施例1)相比較，實(shí)施例5制備的美洲大 賺酶解物對(duì)乙醇致小鼠的胃潰瘍的抑制率明顯高于參比實(shí)施例1制備的美洲大賺酶解物 對(duì)乙醇致小鼠的胃潰瘍的抑制率，說(shuō)明實(shí)施例5制備的美洲大賺酶解物具有顯著的進(jìn)步。
[0169] 由實(shí)驗(yàn)例3中的結(jié)果得到，本發(fā)明所述的美洲大賺酶解物具有很好的保護(hù)胃黏膜 的功能。
[0170] 綜上所述，本發(fā)明所述的美洲大賺酶解物中膚類(lèi)成分含量高，色澤淺、腥臭味淡， 毒性低，且能夠在縮短創(chuàng)面愈合時(shí)間、在治療燒燙傷W及潰瘍具有顯著療效。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種美洲大蠊酶解物，其特征在于，它是由蛋白酶處理美洲大蠊蟲(chóng)體后得到的。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的美洲大蠊酶解物，其特征在于，所述的蛋白酶為胃蛋白酶、胰 蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶中一種或者一種以上的組合。3. 權(quán)利要求1-2中所述的一種美洲大蠊酶解物的制備方法，其特征在于，它包括如下 步驟： (1) 取美洲大蠊干蟲(chóng)或鮮蟲(chóng)，粉碎后加入2~20倍原料藥重量的純水，混勻料液，調(diào)解 pH值； (2) 向步驟（1)中所述的料液中加入原料藥重量的1%~10%的蛋白酶，在20~60°C 溫度下水解后，過(guò)濾，冷藏去油脂后離心；將離心后的上清液濃縮，向濃縮液中加入乙醇至 所得溶液中乙醇體積濃度為60%~90%，在0~KTC，靜置12~24小時(shí)后，過(guò)濾，濾液回收 乙醇，得回收乙醇后的濾液； (3) 取步驟（2)中得到的回收乙醇后的濾液，通過(guò)吸附樹(shù)脂柱，純水沖洗，收集流出液至 流出液茚三酮反應(yīng)呈陰性；然后流出液再通過(guò)粒度為100~200目的聚酰胺柱，純水沖洗， 并收集流出液至流出液茚三酮反應(yīng)呈陰性； (4) 將步驟（3)中得到的最終流出液濃縮、干燥，即得美洲大蠊酶解物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種美洲大蠊酶解物的制備方法，其特征在于，步驟（1)中所 述的純水為原料藥的10~20倍。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種美洲大蠊酶解物的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述 的蛋白酶加入量為原料藥的3%~10%。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種美洲大蠊酶解物的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述 的水解時(shí)間為1~8小時(shí)，優(yōu)選的為3. 5~8小時(shí)。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種美洲大蠊酶解物的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述 離心的時(shí)間為15~60分鐘，速率為10000轉(zhuǎn)/分~28000轉(zhuǎn)/分。8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種美洲大蠊酶解物的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述 加入乙醇的體積濃度為90%~96%。9. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種美洲大蠊酶解物的制備方法，其特征在于，步驟（3)所述 吸附樹(shù)脂柱為極性、弱極性和非極性大孔樹(shù)脂。10. 權(quán)利要求1~12所述的美洲大蠊酶解物在消化道潰瘍、創(chuàng)面修復(fù)中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P17/02GK105878287SQ201510375515
【公開(kāi)日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2015年6月30日
【發(fā)明人】陳光健
【申請(qǐng)人】陳光健