一種結晶酶解法制備的葵花盤提取物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種結晶酶解法制備的葵花盤提取物及其制備方法，葵花盤為純天然中藥或藥食同源材料，經科學提取制成抗痛風，治療高尿酸血癥，提高免疫力，降血糖血脂，保腎護肝，消腫抗炎止痛的功能性保健藥食同源保健品，能夠溶解尿酸石，降低血尿酸濃度，消腫抗炎，調整嘌呤和尿酸代謝，平衡體內酸堿，平衡體內激素的功效；產品安全、無副作用，具有顯著保健功效，可長期服用，具有很好的市場開發(fā)前景。
【專利說明】
-種結晶酶解法制備的葵花盤提取物及其制備方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于中藥領域，特別是設及一種懸浮結晶法和酶解法制備的葵花盤提取物 及其制備方法，W及用于制備預防和治療痛風的藥物的用途。
【背景技術】
[0002] 痛風是嚷嶺代謝素亂所致的一種代謝疾病，血尿酸濃度升高，尿酸鋼晶體沉積于 下肢骨關節(jié)、動脈、脊椎骨間隙組織而引起，表現(xiàn)為關節(jié)紅、腫、熱、痛，關節(jié)活動不利，嚴重 者呈關節(jié)崎形及功能障礙，且具有反復發(fā)作的特點。痛風的存在還可導致冠屯、病、糖尿病、 高血壓等疾病的惡化。在治療方面，西醫(yī)藥治療痛風，尚無根治的方法，秋水仙堿、非醬體類 抗炎藥、別嚷嶺醇等藥物雖可減輕癥狀，降低血尿酸，但其作用較單一，很難從根本上治療 痛風，且長期服用此類西藥對身體造成的傷害遠比治療效果多。而中醫(yī)藥治療痛風，副作用 少，易被患者接受，從而達到長期用藥，最終根治疾病的目的。但是，傳統(tǒng)的中醫(yī)藥治療痛風 方法還存在W下問題:對痛風病機的認識還缺乏共識，辨證分型較難統(tǒng)一；臨床報道較多， 因缺乏對照，影響了治療結果的可靠性;湯劑加減者多，固定劑型少，藥物作用機制缺乏動 物試驗的驗證。直到現(xiàn)在，尚未有很好的治療痛風藥物。
[0003] 葵花盤為除葵花子后向日葵盤，中醫(yī)理論認為：向日葵花盤，藥性甘、寒，歸肝經， 功用清熱平肝，止痛止血;主治高血壓病、頭痛頭暈、耳鳴、痛經、子宮出血、瘡疹。《河北中草 藥》曰："葵花盤清熱燥濕，舒氣散結。治頭痛、頭暈、風火牙痛，目赤云繫，頸前腹痛，外用于 蜂窩織炎"，具有明顯消炎、利尿、降壓的作用。
[0004] 在傳統(tǒng)應用中，通常是將除葵花子后葵花盤作為牲畜飼料喂養(yǎng)牲畜或作為燒材取 暖做飯，沒有發(fā)揮出其更大的經濟效益和醫(yī)療作用，造成資源浪費。隨著對葵花盤研發(fā)的逐 漸深入，出現(xiàn)了一些有關葵花盤活性成分提取的文獻。
[0005] 胡文彬等（"葵花盤片治療經典Ξ叉神經痛的初步療效觀察"，安徽醫(yī)藥，2013年， 第17卷，第5期，第828-830頁)探討了葵花盤片對71例Ξ叉神經痛患者的臨床療效，結果表 明，葵花盤片組和卡馬西平片組治療Ξ叉神經痛的總有效率差異無顯著性(P〉〇.05)，卡馬 西平片組治療Ξ叉神經痛的顯效率顯著高于葵花盤片組(P<〇.05)，但葵花盤片組治療Ξ叉 神經痛的不良反應明顯低于卡馬西平片組(P<〇.05)。
[0006] 中國專利申請CN201210466655.9利用向日葵采收過程中產生的廢棄物向日葵花 盤，通過粉碎、熱水浸泡和果膠酶進行酶解的方法獲得了向日葵多糖，并公開了所述的多糖 具有調節(jié)免疫功能，增強免疫效應的作用。
[0007] 中國專利申請CN201510055248.2提供了一種提取率高、能耗低、操作簡便的葵花 盤總黃酬的提取方法，是W開花期向日葵花盤為提取原料，利用超臨界C02萃取方法進行總 黃酬的提取分離。通過該方法，總黃酬的提取率可達到1.93%，但是所述文獻沒有公開葵花 盤總黃酬的藥理活性和臨床應用。
[000引我國是向日葵的種植大國，葵花盤的資源豐富。為減少資源浪費，并獲得安全、有 效的葵花盤活性成分，需要對葵花盤活性成分的提取做更為深入的研究。

【發(fā)明內容】

[0009] 為了克服本技術領域中的資源浪費現(xiàn)狀，開發(fā)出更為安全、有效的葵花盤活性成 分，本發(fā)明提供了一種葵花盤提取物，其富含總黃酬、小分子膚和生物堿，具有降低血尿酸， 消除痛風產生的疼痛，溶解痛風石，抗炎消腫的功效，對痛風的預防和治療具有顯著的效 果，并且毒副作用較少，可長期服用。同時，用來制備本發(fā)明葵花盤提取物的方法操作簡便、 提取效率高、生產成本低，適合工業(yè)化大生產。
[0010] 本發(fā)明是通過W下的技術方案來實現(xiàn)的。
[OOW -方面，本發(fā)明提供了一種葵花盤提取物，包含總黃酬10-20%，小分子膚1-3%和生 物堿10-30%。優(yōu)選地，葵花盤提取物包含總黃酬16-20%，小分子膚2.4-3%和生物堿18-30%。
[0012] 在本發(fā)明的葵花盤提取物中，總黃酬、小分子膚和生物堿均為有效活性成分。其 中，葵花盤生物堿可W特異性結合尿酸形成葵花堿尿酸復合物，對痛風進行治療;能抑制嚷 嶺合成和嚷嶺代謝，減少體內尿酸含量而消除尿酸；同時抑制炎性細胞的趨化和減少炎癥 因子釋放，對于急性發(fā)作的痛風關節(jié)炎具有獨特的抗炎消腫效用。葵花盤里的黃酬是一種 很強的抗氧劑，可有效清除體內的氧自由基，阻止核酸的氧化，起到降低嚷嶺含量的作用； 可W降低血糖和甘油立醋，降低毛細血管脆性，增加通透性可W減輕腎臟細胞壓力，透過更 多尿酸。同時可W穩(wěn)定腎蛋白小管，有利于腎臟代謝尿酸。黃酬還可W抑制炎性生物酶的滲 出，用W止痛。小分子膚是將大分子的蛋白質利用特制酶分解成小分子的物質，由2到10個 氨基酸殘基分子組成，小分子膚可W經過腸道毛細血管直接吸收，轉運全身起效，可W控制 嚷嶺合成的PRPP酷胺轉移酶，從而抑制嚷嶺的合成抑制嚷嶺代謝。小分子膚可W干擾黃嚷 嶺氧化酶等嚷嶺轉化為尿酸的酶，從而控制體內尿酸含量。特別是對于遺傳性痛風患者，由 于基因缺失，缺乏嚷嶺代謝的酶，導致尿酸積累，小分子膚可W起到一定的缺失酶的作用。
[0013] 本發(fā)明的葵花盤提取物是采用破碎提取器破碎提取法提取、懸浮結晶法低溫冷凍 濃縮、酶解、超濾、低溫冷凍濃縮、干燥等工藝制成的。具體地，本發(fā)明的葵花盤提取物由包 括W下步驟的方法制備得到:稱取新鮮或冷凍去巧的葵花盤，粉碎成80-150目細粉，加5-10 質量倍的15-30%乙醇溶液，置于閃式提取器中進行破碎提取，提取時間為100-300S，提取電 壓為100-200V，然后利用懸浮結晶法低溫冷凍濃縮，濃縮液中加入0.003-0.005質量倍的復 合蛋白酶酶解3-化，并用中空纖維膜超濾，濾液冷凍結晶濃縮，加入適量賦形劑，噴霧干燥 即得。
[0014] 優(yōu)選地，用于提取葵花盤細粉的乙醇溶液濃度為18-20%，低溫冷凍溫度為一28 °C--40°C。所述的復合蛋白酶為胃蛋白酶和膜蛋白酶按質量比為1:(1.5-3.0)混合的混合 物。所述賦形劑選自例如葡萄糖、半乳糖和/或微晶纖維素。
[0015] 因此，本發(fā)明還提供了葵花盤提取物的制備方法，所述方法包括W下步驟:稱取新 鮮或冷凍去巧的葵花盤，粉碎成80-150目細粉，加5-10質量倍的15-30%乙醇溶液，置于閃式 提取器中進行破碎提取，提取時間為100-300S，提取電壓為100-200V，然后利用懸浮結晶法 低溫冷凍濃縮，濃縮液中加入0.003-0.005質量倍的復合蛋白酶酶解3-化，并用中空纖維膜 超濾，濾液冷凍結晶濃縮，加入適量賦形劑，噴霧干燥即得。
[0016] 優(yōu)選地，在本發(fā)明的制備方法中，用于提取葵花盤細粉的乙醇溶液濃度為18- 20%，低溫冷凍溫度為一28°C--40°C。所述的復合蛋白酶為胃蛋白酶和膜蛋白酶按質量比 為1:(1.5-3.0)混合的混合物。所述賦形劑選自例如葡萄糖、半乳糖和/或微晶纖維素。
[0017] 本發(fā)明的葵花盤提取物作為活性成分可被廣泛應用于藥品和/或保健品中。因此， 進一步地，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的葵花盤提取物和任選的藥學上 可接受的載體。所述的藥物組合物可W為片劑、膠囊劑、滴丸劑、顆粒劑、散劑、微丸、溶液 劑、糖漿劑、乳劑或注射劑。例如，對于口服制劑，用法用量為口服1-2次/日，10-20g /次。適 應癥為痛風、嚷嶺代謝素亂、血尿酸高等疾病的預防和治療。
[0018] 本發(fā)明的葵花盤提取物可通過多方面作用發(fā)揮其療效，對動物急性痛風性關節(jié)炎 模型有抗炎作用，對化學或熱刺激的疼痛有鎮(zhèn)痛作用，可降低正常及高尿酸血癥動物的血 尿酸，對動物的急、亞急性炎癥早、后期均有抗炎作用。其治療的機理是，通過小分子膚調節(jié) 體內嚷嶺和尿酸代謝途徑，阻斷尿酸的代謝酶，同時黃酬類化合物具有鎮(zhèn)痛消炎，增加腎小 管代謝尿酸的作用，葵花盤生物堿可W中和尿酸，消除尿酸，起到降低體內尿酸作用。經過 口服，尿酸病人2小時內95%病人可W達到降尿酸作用，連續(xù)服用本發(fā)明1個月，75%病人尿酸 水平恢復正常，無毒副作用。
[0019] 因此，本發(fā)明還提供了所述的葵花盤提取物或包含該葵花盤提取物的藥物組合物 在制備預防和治療痛風的藥物中的用途。
[0020] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，積極效果在于： 葵花盤為純天然中藥或藥食同源的材料，經科學提取后具有預防或治療痛風，高尿酸 血癥，W及消腫抗炎止痛的功能，并且可進一步制備成藥物或保健品； 本發(fā)明的產品安全、無副作用，具有顯著功效，可長期服用，具有很好的市場開發(fā)前景； 本發(fā)明葵花盤提取物的制備方法操作簡便、提取效率高、生產成本低，適合工業(yè)化大生 產。
[0021]
【具體實施方式】： 為使本發(fā)明更加容易理解，下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。運些實施例只用 于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0022] 實施例1: 葵花盤提取物的制備方法:稱取新鮮或冷凍去巧葵花盤10kg，將葵花盤粉碎成80目細 粉，加5質量倍的20%乙醇溶液，置于閃式破碎提取器(荷澤杰普儀器有限公司）中破碎提取， 提取時間100s，提取電壓150V，然后利懸浮結晶法低溫冷凍濃縮，低溫冷凍溫度為一28°C， 濃縮液中加入0.004質量倍的復合蛋白酶（胃蛋白酶和膜蛋白酶W質量比1:2混合)酶解解 3h，并用中空纖維膜超濾，濾液冷凍結晶濃縮，加入葡萄糖0.化g，噴霧干燥，分裝，包裝。
[0023] 實施例2: 葵花盤提取物的制備方法:稱取新鮮或冷凍去巧葵花盤20kg，將葵花盤粉碎成100目 細粉，加8質量倍的20%乙醇溶液，置于閃式破碎提取器(荷澤杰普儀器有限公司）破碎提取， 提取時間200s，提取電壓100V，然后利用懸浮結晶法低溫冷凍濃縮，低溫冷凍溫度為一40 °C，濃縮液加入0.003質量倍的復合蛋白酶（胃蛋白酶和膜蛋白酶W質量比1:1.5混合)酶酶 解，酶解地，并用中空纖維膜超濾，濾液冷凍結晶濃縮，加入半乳糖1kg，噴霧干燥，分裝，包 裝。
[0024] 實施例3 葵花盤提取物的制備方法:稱取新鮮或冷凍去巧葵花盤30kg,將葵花盤粉碎成150目 細粉，加10質量倍的20%乙醇溶液，置于閃式破碎提取器(荷澤杰普儀器有限公司）破碎提 取，提取時間300s，提取電壓200V，然后利懸浮結晶法低溫冷凍濃縮，低溫冷凍溫度為一30 °C，濃縮液加入0.0048質量倍的復合蛋白酶（胃蛋白酶和膜蛋白酶W質量比1:2.8混合)酶 解解，酶解化，并用中空纖維膜超濾，濾液冷凍結晶濃縮，加入微晶纖維素0 .化g，噴霧干 燥，分裝，包裝。
[0025] 實施例4 片劑的制備:稱取實施例1的葵花盤提取物100kg，加入淀粉25kg、微晶纖維素10kg和麥 芽糊精化g，混合均勻，用40%乙醇溶液制軟材，過25目篩制粒，干燥，過20目篩整粒，加入適 量硬脂酸儀，混合均勻，壓片，即得。
[00%] 實施例5 膠囊劑的制備:稱取實施例2的葵花盤提取物150kg，加入微晶纖維素30kg和乳糖12kg， 混合均勻，用2.0%徑丙甲基纖維素溶液制軟材，過40目篩制粒，干燥，過30目篩整粒，加入適 量膠體二氧化娃，混合均勻，填充至膠囊殼內，即得。
[0027] 實施例6 薄膜包衣片的制備:稱取實施例1的葵花盤提取物100kg，加入淀粉25kg、微晶纖維素 12kg和簇甲基淀粉鋼8kg，混合均勻，用30%乙醇溶液制軟材，過20目篩制粒，干燥，過20目篩 整粒，加入適量硬脂酸儀，混合均勻，壓片，即得片忍;將徑丙基甲基纖維素2.5kg溶解于適 量乙醇溶液中，并對片忍噴霧包衣，干燥，即得薄膜包衣片。
[002引試驗例1:藥理性實驗 一、試驗材料 1.動物:昆明種小鼠，體重(20g ± 2g)，由吉林大學臨床動物研究中屯、提供。
[0029] 2.給藥樣品：空白對照組(蒸饋水），本發(fā)明組(實施例1、2、3制備得到的葵花盤提 取物）。
[0030] 二、試驗方法 1. 鎮(zhèn)痛實驗:取雄性小鼠40只，隨機分為空白對照組，本發(fā)明組(實施例1、實施例2、實 施例）。按lOOmg kg-i給藥，1次一天，空白對照組給予等量蒸饋水。連續(xù)給藥5天，于末次給藥 1小時后，每組各取10只小鼠腹腔注射0.7%醋酸0.1ml · ，記錄各組小鼠20min內扭體次 數。結果見表1。
[0031] 表1.對醋酸所致小鼠扭體反應的影響
與空白對照組比較，沖<0.05，*沖<0.01 2. 小鼠足腫脹實驗:取雄性小鼠40只，隨機分為空白對照組，本發(fā)明組(實施例1、實施 例2、實施例）。按lOOmg kg-1給藥，1次一天，空白對照組給予等量蒸饋水。連續(xù)給藥5天，于 末次給藥1小時后，每鼠左后趾皮下注射5%MSU0.08ml，化后頸椎脫白處死小鼠，沿裸關節(jié)上 0.5cm處剪下左右后足，稱重，W左右后足質量之差作為炎癥腫脹度。結果見表2。
[0032] 表2對MSU所致小鼠足腫脹的影響
3.小鼠血尿酸(UA)、黃嚷嶺氧化酶(X0D)及尿素氮(BUN):取雄性小鼠100只，隨機分為 正常組、模型組、本發(fā)明組(實施例1、實施例2、實施例3)，每組20只。除正常組外，每組均W 酵母30g · kg-1灌胃，連續(xù)一周。從第3天開始本發(fā)明組灌胃，按lOOmg · kg-1給藥，連續(xù)給藥 5d。小鼠摘除眼球法取血，分離血清，在波長690皿、530皿和640皿處測定UA、X0D和BUN值。結 果見表3。
[0033] 表3.對酵母膏致高尿酸血癥小鼠血清UA、X0D及腳N的影響
與正常組比較沖<0.05，*沖<0.01;與模型組比較沖<0.05，*沖<0.01 n=20 Ξ、試驗結果 痛風是體內嚷嶺代謝障礙、尿酸過多或者腎臟排泄尿酸減少，導致尿酸鹽在組織沉積 所致疾病。尿酸鋼晶體會引起足部，關節(jié)，軟組織炎癥和疼痛。由表1-3的試驗結果可W看 出，本發(fā)明的葵花盤提取物能明顯減輕化學物質產生的疼痛和腫疼，表明具有鎮(zhèn)痛消腫作 用。另外，本發(fā)明的葵花盤提取物還能顯著抑制黃嚷嶺氧化酶活性，減少尿酸的生成，明顯 降低血中尿素氮，改善腎功能。
【主權項】
1. 一種葵花盤提取物，其特征在于包含總黃酮、小分子肽和生物堿。2. 如權利要求1所述的葵花盤提取物，其特征在于包含總黃酮10-20%，小分子肽1-3%， 生物堿10-30%;優(yōu)選地，葵花盤提取物包含總黃酮16-20%，小分子肽2.4-3%，生物堿18-30%。3. 如權利要求1或2所述的葵花盤提取物，其特征在于由包括以下步驟的方法制備得 到:稱取新鮮或冷凍去籽的葵花盤，粉碎成80-150目細粉，加5-10質量倍的15-30%乙醇溶 液，置于閃式提取器中進行破碎提取，提取時間為100-300S，提取電壓為100-200V，然后利 用懸浮結晶法低溫冷凍濃縮，濃縮液中加入〇. 003-0.005質量倍的復合蛋白酶酶解3-5h，并 用中空纖維膜超濾，濾液冷凍結晶濃縮，加入適量賦形劑，噴霧干燥即得。4. 如權利要求3所述的葵花盤提取物，其特征在于用于提取葵花盤細粉的乙醇溶液濃 度為18-20 %，低溫冷凍溫度為一 28 °C --40 °C。5. 如權利要求3所述的葵花盤提取物，其特征在于所述的復合蛋白酶為胃蛋白酶和胰 蛋白酶按質量比為1:(1.5-3.0)混合的混合物;所述賦形劑選自例如葡萄糖、半乳糖和/或 微晶纖維素。6. -種藥物組合物，其特征在于包含如權利要求1-5之一所述的葵花盤提取物和任選 的藥學上可接受的載體。7. 如權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于為片劑、膠囊劑、滴丸劑、顆粒劑、散劑、 微丸、溶液劑、糖漿劑、乳劑或注射劑。8. 如權利要求1-5之一所述的葵花盤提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟:稱 取新鮮或冷凍去籽的葵花盤，粉碎成80-150目細粉，加5-10質量倍的15-30%乙醇溶液，置于 閃式提取器中進行破碎提取，提取時間為100-300s，提取電壓為100-200V，然后利用懸浮結 晶法低溫冷凍濃縮，濃縮液中加入0.003-0.005質量倍的復合蛋白酶酶解3-5h，并用中空纖 維膜超濾，濾液冷凍結晶濃縮，加入適量賦形劑，噴霧干燥即得。9. 如權利要求8所述的葵花盤提取物的制備方法，其特征在于乙醇溶液濃度為18-20%，低溫冷凍溫度為一 28°C_ - 40°C;復合蛋白酶為胃蛋白酶和胰蛋白酶按質量比為1: (1.5-3.0)混合的混合物;所述賦形劑選自例如葡萄糖、半乳糖和/或微晶纖維素。10. 如權利要求1-5之一所述的葵花盤提取物或如權利要求6或7所述的藥物組合物在 制備預防和治療痛風的藥物中的用途。
【文檔編號】A61P19/06GK105878322SQ201610294538
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年5月6日
【發(fā)明人】不公告發(fā)明人
【申請人】洮南市金塔生物科技有限公司