一種具有保健功效的食品、保健品或藥物組合物及其制備方法和用圖
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種保健品或/和藥物組合物，它是由如下重量配比的原料藥制備而成的制劑：金釵石斛6?10份、瑪咖6?10份、佛手2?5份，本發(fā)明保健品或/和藥物組合物，配方精當(dāng)，可有效清除體內(nèi)自由基，具有良好的抗氧化、抗衰老、抗疲勞、補腎壯陽、提高免疫功能等作用，具有良好的保健、醫(yī)用價值。
【專利說明】
一種具有保健功效的食品、保健品或藥物組合物及其制備方 法和用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種保健品或/和藥物組合物及其制備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 石斛，為蘭科植物金欽石斛Dendrobium nobile Lindl ·、鼓植石斛Dendrobium chrysotoxum Lindl.或流蘇石斛Dendrobium fimbriatum Hook.的栽培品及其同屬植物近 似種的新鮮或干燥莖。【性味與歸經(jīng)】甘，微寒。歸胃、腎經(jīng)?！竟δ芘c主治】益胃生津，滋陰清 熱。用于熱病津傷，口干煩渴，胃陰不足，食少干嘔，病后虛熱不退，陰虛火旺，骨蒸勞熱，目 暗不明，筋骨痿軟。
[0003] 瑪咖來源于十字花科(Cruciferae)獨行菜屬(Lepidium)l年生或2年生栽培植物 或野生植物瑪咖(Lepidium meyenii Walp.)的干燥根和根莖?，斂г趪庥兄鴰浊甑拿?間藥用和食用歷史，2003年瑪咖成功引入我國云南麗江種植基地和新彊種植基地。其具有 提高生育能力、抗疲勞、改善性功能、抗氧化、抑制前列腺增生、緩解更年期綜合癥、增強免 疫力等多種功效，因此受到世界各國的廣泛關(guān)注。
[0004] 佛手(Citrus medica L.var.sarcodactylis Swingle)為蕓香科柑桔屬植物的干 燥成熟果實，又名"佛手香橡"、"蜜羅柑"、"福壽橘"，該屬全世界約有20余種，原產(chǎn)亞洲東南 部及南部，果實中主要含揮發(fā)油，主要用于理氣，化痰之藥用。佛手性溫，味辛，苦、酸。入肝、 脾、肺、經(jīng)?！侗静菥V目》載："煮酒飲，治痰氣咳嗽;煎湯，治心下氣痛。"《本草再新》曰："治氣 舒肝，和胃化痰，破積，治噎膈反胃，消癥瘕瘰疬。"《滇南本草》："補肝緩胃，止嘔吐，消胃寒 痰，治胃氣疼痛。"佛手含有檸檬油素、檸檬苦素、二甲氧基香豆精、三羥基二甲氧基黃酮、胡 蘿卜苷、β-谷留醇、對羥基苯丙烯酸、棕櫚酸、琥珀酸、檸檬油素二聚體、小量香葉木苷及橙 皮苷等生理活性成分。
[0005] 未見將三種藥物組合使用的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供了一種新的藥味較少，功效明確的保健品或/和藥物組合 物。
[0007] 本發(fā)明具有保健功效的的食品、保健品或藥物組合物，它是由如下重量配比的原 料藥制備而成的制劑:石斛6-10份、瑪咖6-10份、佛手2-5份。
[0008] 優(yōu)選地，所述具有保健功效的的食品、保健品或藥物組合物由如下重量配比的原 料藥制備而成的制劑:石斛10份、瑪咖10份、佛手5份。
[0009] 其中，所述的石斛為蘭科石斛屬植物金釵石斛Dendrobium nobile Lindl.的莖。
[0010] 所述具有保健功效的食品、保健品或藥物組合物由原料藥的藥粉、原料藥的水或 有機(jī)溶劑提取物為活性成分，加上藥學(xué)上常用的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。
[0011] 其中，所述有機(jī)溶劑為濃度為30%~70%的含水乙醇或30度-70度的糧食酒。
[0012]所述制劑為顆粒劑、膠囊劑、散劑、丸劑、片劑或酒劑。
[0013] 本發(fā)明還提供了前述食品、保健品或藥物組合物的制備方法，
[0014] (1)按照前述配比稱取原料藥；
[0015] ⑵將原料藥混合后，用酒提取，提取液經(jīng)沉淀、過濾，即得。
[0016] 其中，所述酒的濃度為30度-70度的糧食酒。
[0017] 糧食酒:是指以高粱、玉米、大米、懦米、大麥、小麥、小米、青稞等各種糧食為原料， 經(jīng)過糖化、發(fā)酵后，采用蒸餾方法釀制的白酒。
[0018] 其中，提取的方法為浸泡或滲濾提取。
[0019] 本發(fā)明還提供了前述食品、保健品或藥物組合物在制備抗衰老、抗疲勞、補腎壯 陽、提高免疫或抗氧化的食品、保健品或藥物組合物中的用途。
[0020] 本發(fā)明還提供了前述食品、保健品或藥物組合物在制備自由基清除劑的食品、保 健品或藥物組合物中的用途。
[0021] 本發(fā)明保健品或/和藥物組合物，配方精當(dāng)，可有效清除體內(nèi)自由基，具有良好的 抗氧化、抗衰老、抗疲勞、補腎壯陽、提高免疫功能等作用，具有良好的保健、醫(yī)用價值。
[0022] 下面通過【具體實施方式】對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但是并不是對本發(fā)明的限 制，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述 基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
【具體實施方式】
[0023]糧食酒：由瀘州老窯集團(tuán)有限責(zé)任公司提供 [0024]實施例1本發(fā)明食品、保健品或者藥物組合物的制備
[0025]取金釵石斛(干品）10g、瑪咖(干品）10g、佛手(干品）5g，用1000g 50度糧食酒浸泡 20天，沉淀、過濾，棄去藥渣，得到濾液，即為保健酒成品。
[0026]實施例2本發(fā)明食品、保健品或者藥物組合物的制備
[0027]取金釵石斛(干品）6g、瑪咖(干品）6g、佛手(干品）2g，用100g 50度糧食酒滲漉，漉 速為lmL/min，合并漉液，加900g 50度糧食酒，混勻，沉淀、過濾，濾液即為保健酒成品。
[0028]實施例3本發(fā)明食品、保健品或者藥物組合物的制備
[0029]取金釵石斛(干品）10g、瑪咖(干品）10g、佛手(干品）5g，用1000g 30度糧食酒浸泡 20天，沉淀、過濾，棄去藥渣，得到濾液，即為保健酒成品。
[0030] 以下通過試驗例具體說明本發(fā)明的有益效果。
[0031] 試驗例1本發(fā)明組合物的抗衰老研究
[0032] 1 材料
[0033] 1.1受試品與試劑本發(fā)明組合物酒劑(實施例1制備的本發(fā)明組合物），棕色液體， 人體推薦日攝入量為60mL/60kg，BW;考馬斯亮蘭（批號20140324)、丙二醛（MDA，批號 20140427)、超氧化物歧化酶(S0D，批號20140426)、單胺氧化酶(ΜΑ0,批號20140428)檢測試 劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。
[0034] 1.2實驗動物清潔級昆明種小鼠，體18_22g，雌雄各半，由西南醫(yī)科大學(xué)實驗動物 中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(川）2013-17,使用許可證號SCXK(川）2013-065。
[0035] 1.3儀器756PC紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；XW-80A旋渦混勻 器(江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；恒溫水浴鍋(重慶實驗設(shè)備廠）
[0036] 2 方法
[0037] 2.1分組及造模將80只小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體質(zhì)量序隨機(jī)分為8組：空白對 照組(NS)、模型組(NS)、酒基對照組（15%乙醇）及本發(fā)明組合物酒劑10mL(成品）/kg(劑量 為250mg生藥/kg)、20mL(成品）/kg劑量組(劑量為500mg生藥/kg)、拆方制劑三個組(金釵石 斛500mg/kg，瑪咖500mg/kg，佛手500mg/kg)，臨用前用生理鹽水稀釋）。除空白對照組外，其 他各組均每天頸背部皮下注射5 % D-半乳糖生理鹽水溶液0.025mL/g，空白對照組每天頸背 部皮下注射等量的生理鹽水，連續(xù)注射42d。造模同時開始灌胃給藥，每日給藥1次，連續(xù)給 藥 42d。
[0038] 2.2避暗實驗記錄5min內(nèi)小鼠進(jìn)入暗室的電擊次數(shù)(錯誤次數(shù)），作為學(xué)習(xí)獲得成 績。24h后再次測驗，記錄第1次觸電潛伏期（即將小鼠放人明室開始計時，到第1次雙足觸電 時間）和5min內(nèi)小鼠進(jìn)入暗室的電擊次數(shù)，作為記憶保持成績。
[0039] 2.3脾臟指數(shù)的測定行為學(xué)測試結(jié)束后，將小鼠稱質(zhì)量，摘眼球取血后，脫臼處 死，取脾臟稱質(zhì)量，計算小鼠脾臟指數(shù)，即脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量(mg)/小鼠體質(zhì)量(10g)。
[0040] 2.4生化指標(biāo)的檢測各組小鼠于行為學(xué)測試完畢后，摘取小鼠眼球取血約lmL，取 血完畢后，脫臼處死小鼠，取小鼠肝組織。血液離心取血清、組織制成10%勻漿置于4°C冰箱 儲存?zhèn)溆谩OD、MDA、MA0含量測定按試劑盒說明書進(jìn)行。
[0041] 2.5統(tǒng)計學(xué)處理計量資料用以(無士8)表示，采用3?5513.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素 方差分析及組間兩兩比較。
[0042] 3 結(jié)果
[0043] 3.1本發(fā)明組合物酒劑對避暗實驗的影響見表1。與模型組相比，本發(fā)明組合物酒 劑組能降低衰老模型小鼠避暗的錯誤次數(shù)(P〈〇.05)，改善其學(xué)習(xí)及記憶能力，具有明顯促 智作用。本發(fā)明組合物與單味藥材在同等劑量下的對比試驗表明，金釵石斛、瑪咖、佛手亦 能不同程度降低衰老模型小鼠避暗的錯誤次數(shù)，但作用均不及本發(fā)明組合物大劑量組(P〈 0.01或Ρ〈0·05)。
[0044] 表1本發(fā)明組合物酒劑對避暗實驗的影響（J土S, η=10)
[0045]
[0046] 注：與空白對照組比較，*P<0 · 05，#P<0 · 01;與模型組比較，v P<0,05, w P<W)1; 與組合物大劑量組比較;。P<0.05，°°p<0.01。
[0047] 3.2本發(fā)明組合物酒劑對衰老小鼠脾臟指數(shù)的影響見表2。與模型組相比，本發(fā)明 組合物酒劑組能升高衰老模型小鼠的脾臟指數(shù)，說明本發(fā)明組合物酒劑在一定程度上可增 加免疫器官的質(zhì)量，具有免疫增強作用。本發(fā)明組合物與單味藥材在同等劑量下的對比試 驗表明，金釵石斛、瑪咖、佛手亦能不同程度升高衰老模型小鼠的脾臟指數(shù)，但作用均不及 本發(fā)明組合物大劑量組(P〈〇.〇l或P〈〇.〇5)。
[0048] 表2本發(fā)明組合物酒劑對衰老小鼠脾臟指數(shù)的影響（.? 士S，n=10)
[0049]
[0050] 注：與空白對照組比較，*P<0 · 05，林P<0 · 01;與模型組比較，νΡ<0.05, Ρ<0·01; 與組合物大劑量組比較;。P<0.05，°°P<0.01。
[0051 ] 3.3對衰老小鼠血清中SOD、MDA、MA0含量的影響見表3。與模型組相比，本發(fā)明組 合物酒劑組均能升高衰老模型小鼠血清中S0D水平，降低MDA、MA0含量(P〈0.05或0.01)。本 發(fā)明組合物與單味藥材在同等劑量下的對比試驗表明，金釵石斛、瑪咖、佛手亦能不同程度 升高衰老模型小鼠血清中S0D水平，降低MDA、MA0含量，但作用均不及本發(fā)明組合物大劑量 組(Ρ〈0·01或Ρ〈0·05)
[0052 ] 表3本發(fā)明組合物酒劑對血清中SOD、MDA及肝臟中MAO含量的影響(f ±:S, 11=10)
[0053]
[0054] 注：與空白對照組比較，*Ρ<0·05,林Ρ<0·01;與模型組比較，''w P<0.01; 與組合物大劑量組比較;。P<0.05，°°P<0.01。
[0055] 4 討論
[0056] 腎虛衰老可能與機(jī)體抗氧化活性降低、自由基清除能力減退及機(jī)體免疫系統(tǒng)功能 失調(diào)有關(guān)。補腎藥物延緩衰老的作用機(jī)制之一，在于提高機(jī)體抗氧化活性，增強機(jī)體清除自 由基的能力。結(jié)果表明，本發(fā)明組合物酒劑能降低衰老小鼠避暗的錯誤次數(shù)，升高血清中 S0D含量，降低血清中MDA及肝臟中ΜΑ0含量，有一定的抗衰老作用，其機(jī)理可能與其提高抗 氧化酶活性、清除自由基有關(guān)。本發(fā)明組合物與單味藥材在同等劑量下的對比試驗表明，金 釵石斛、瑪咖、佛手亦能不同程度降低衰老小鼠避暗的錯誤次數(shù)，升高血清中S0D含量，降低 血清中MDA及肝臟中ΜΑ0含量，但作用均不及本發(fā)明組合物大劑量組(P〈0.01或P〈0.05)。
[0057] 實驗結(jié)果說明，本發(fā)明藥物組合物可以降低衰老小鼠避暗的錯誤次數(shù)，升高血清 中S0D含量，降低血清中MDA及肝臟中ΜΑ0含量，具有抗衰老的作用，且與單味藥材在同等劑 量下相比，效果顯著提高，說明本發(fā)明三種組分在本發(fā)明特別配比下發(fā)揮了協(xié)同增效的作 用。
[0058] 試驗例2本發(fā)明組合物的抗疲勞研究
[0059] 1 材料
[0060] 1.1受試品本發(fā)明組合物酒劑(實施例1制備的本發(fā)明組合物），棕色液體，人體推 薦日攝入量為60mL/60kg，BW;
[0061 ] 1.2實驗動物清潔級雄性昆明種小鼠，體質(zhì)量20± 2g，由由西南醫(yī)科大學(xué)實驗動 物中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK (川）2013-17，使用許可證號
[0062] SCXK(川）2013-065。
[0063] 1.3試劑糖原檢測試劑盒、全血乳酸檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究 所。血清尿素氮(BUN)含量用全自動血液生化測定儀測定。
[0064] 2 方法
[0065] 2.1動物分組與給藥:將210只小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體質(zhì)量序隨機(jī)分為7組:空 白對照組(NS)、酒基對照組（15%乙醇)及本發(fā)明組合物酒劑10mL(成品）/kg(劑量為250mg 生藥/kg)、20mL(成品）/kg劑量組（劑量為500mg生藥/kg)、拆方制劑三個組（金釵石斛 500mg/kg,瑪咖500mg/kg，佛手500mg/kg)。每組30只，灌胃給藥，每日給藥1次，連續(xù)給藥 21d〇
[0066] 2.2指標(biāo)測定：
[0067] 2.2.1稱量體重實驗開始及結(jié)束時稱量小鼠體重，并做記錄。
[0068] 2.2.2力竭游泳實驗?zāi)┐喂辔?0min后根據(jù)體重，負(fù)荷體重5 %的鉛絲，放入50cm X 40cm X 40cm水箱游泳，水溫30 4± 2°C。參照MCARDLE推薦力竭實驗的判斷標(biāo)準(zhǔn)，記錄游泳 開始時間至力竭的時問作為小鼠游泳時間。
[0069] 2.2.3運動后小鼠血清尿素氮、肝糖原、肌糖原、全血乳酸測定灌胃給藥15d后，在 末次給藥后30min，以無負(fù)重或負(fù)重游泳后，采取相應(yīng)的標(biāo)本，測定各自相應(yīng)的指標(biāo)。
[0070] 2.3統(tǒng)計學(xué)處理計量資料用以（7土3)表示，采用3?5513.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素 方差分析及組間兩兩比較。
[0071 ] 3 結(jié)果
[0072] 3.1對小鼠體重的影響本發(fā)明組合物酒劑，各劑量組小鼠活潑，皮毛光滑，未見不 良的反應(yīng)。與對照組相比，本發(fā)明組合物酒劑各劑量組小鼠實驗開始體重及結(jié)束時體重?zé)o 顯著性差異(P>〇.05)，表明本發(fā)明組合物酒劑對小鼠體重增長未見明顯的影響。
[0073] 3.2對小鼠力竭游泳時間的影響各組按設(shè)計劑量灌胃給藥14d后，進(jìn)行力竭游泳 實驗，結(jié)果見表1。本發(fā)明組合物酒劑組小鼠力竭游泳時間顯著延長，非常顯著地高于空白 對照組小鼠（P〈〇.〇l)。
[0074] 表1本發(fā)明組合物酒劑對小鼠力竭游泳時間的影響(Y 土S，11=30)
[0075]
[0076] 注：與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01 ;與組合物大劑量組比較，° P< 0·05，°Ρ<0·01〇
[0077] 3.3對小鼠運動前后全血乳酸的影響各實驗組按劑量灌胃給藥14d后，末次給藥 后30min后再負(fù)重游泳30min，分別眼眶采血檢測全血乳酸，結(jié)果見表2。運動前，各組小鼠血 乳酸水平無顯著差異(P>〇.05);運動后，本發(fā)明組合物酒劑各劑量組的血乳酸水平顯著低 于對照組(P〈〇.01)，與陽性對照組無顯著性差異，提示本發(fā)明組合物酒劑對運動后小鼠血 乳酸的升高有抑制作用。
[0078] 表2本發(fā)明組合物酒劑對小鼠力竭游泳時間的影響（I'_±S，11=30)
[0079]
[0080] 注：與空白對照組比較，*P<0 · 05，林P<0 · 01 ;與組合物大劑量組比較，° P< 0·05，°Ρ<0·01〇
[0081] 3.4對小鼠運動后血清尿素氮、肝糖原、肌糖原的影響本發(fā)明組合物酒劑對運動 后小鼠血清尿素氮、肝糖原和肌糖原影響的結(jié)果見表3。與對照組相比，本發(fā)明組合物酒劑 各組小鼠運動后血清尿素氮顯著降低(Ρ〈〇.01);運動后本發(fā)明組合物酒劑組小鼠肝糖原含 量明顯高于陰性對照組(Ρ〈〇.05或Ρ〈0.01)，肌糖原與對照組也有非常顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(Ρ 〈0.05或Ρ>0.01)。結(jié)果顯示本發(fā)明組合物酒劑能明顯地降低小鼠運動后血清尿素氮，并且 增加肝糖原和肌糖原的含量。
[0082] 表2本發(fā)明組合物酒劑對小鼠血清尿素氮、肝糖原和肌糖原的影響（Y±S、ll=30)
[0083]
[0084] 注：與空白對照組比較，*P<0 · 05，林P<0 · 01 ;與組合物大劑量組比較，° P< 0·05，°Ρ<0·01〇
[0085] 4 小結(jié)
[0086] 根據(jù)保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法，若一項或一項以上的耐力運動實驗如 負(fù)重游泳和爬桿，以及2項或2項以上的生化指標(biāo)如血乳酸、血清尿素氮、肝/肌糖原等為陽 性，即可判定受試物具有抗疲勞活性。因此，在本實驗條件下，本發(fā)明組合物酒劑有明顯的 抗疲勞作用。本發(fā)明組合物與單味藥材在同等劑量下的對比試驗表明，金釵石斛、瑪咖、佛 手亦有不同程度的抗疲勞作用，但作用均不及本發(fā)明組合物大劑量組(P〈〇.01或P〈〇.05)。
[0087] 實驗結(jié)果說明，本發(fā)明藥物組合物可以延長小鼠力竭游泳時間、降低小鼠血清尿 素氮、肝糖原和肌糖原，具有抗疲勞的作用，且與單味藥材在同等劑量下相比，效果顯著提 高，說明本發(fā)明三種組分在本發(fā)明特別配比下發(fā)揮了協(xié)同增效的作用。
[0088] 試驗例3本發(fā)明組合物的補腎壯陽作用
[0089]《黃帝內(nèi)經(jīng)》云："男子五八腎氣衰，發(fā)墮齒槁…..，意思是說男人到40歲時，開始出 現(xiàn)腎氣衰退，表現(xiàn)為頭發(fā)脫落掉，牙齒枯槁等癥狀。男人腎虛，多以腎陽虛為主。腎陽虛會導(dǎo) 致一系列問題，如精力不濟(jì)、易疲勞、健忘、反應(yīng)遲鈍、性功能減低等，影響其工作和生活質(zhì) 量。"本發(fā)明組合物酒劑"是經(jīng)現(xiàn)代工藝研制而成的保健食品。本研究通過觀察正常大鼠交 配能力和正常大鼠陰莖勃起，驗證其補腎壯陽功效;通過計數(shù)正常大鼠附睪精子存活率和 精子密度，檢測其生精作用。
[0090] 1材料與儀器
[0091] 1.1受試物與試劑本發(fā)明組合物酒劑(實施例1制備的本發(fā)明組合物），棕色液體， 人體推薦日攝入量為60mL/60kg，BW;戊巴比妥鈉（sodium，pentobarbital )，北京化學(xué)試劑 公司生產(chǎn)，批號140919;黃體酮注射液(progesterone injection)，天津金耀氨基酸有限公 司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H12020534，批號1408181，規(guī)格：lml: 10mg;苯甲酸雌二醇注射液，天津金 耀氨基酸有限公司生產(chǎn)，批號1407061，規(guī)格：1ml: lmg;注射用青霉素鈉，華北制藥股份有限 公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H13020657,批號F1402107。
[0092] 1.2動物SD大鼠，由西南醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(川） 2013-17,使用許可證號SCXK(川）2013-065。實驗前在實驗觀察室溫度16~26°C，相對濕度 40%~70%，照明12h/l2h明暗交替，實驗前適應(yīng)觀察3d，取健康動物進(jìn)入實驗。
[0093] 2 方法
[0094] 2.1對正常雄性大鼠交配能力的影響SD大鼠70只，雄性，體重（180 ± 10)g，按體質(zhì) 量序隨機(jī)分為7組：空白對照組(NS)、酒基對照組（15%乙醇）及本發(fā)明組合物酒劑10mL(成 品）/kg(劑量為250mg生藥/kg)、20mL(成品）/kg劑量組(劑量為500mg生藥/kg)、拆方制劑三 個組(金釵石斛500mg/kg,瑪咖500mg/kg，佛手500mg/kg)，均為組合物大劑量組所含組分的 等劑量)。灌胃給藥，每日給藥1次，連續(xù)給藥21d。
[0095] 2.1.1雌性大鼠的準(zhǔn)備取70只雌性大鼠，體質(zhì)量（180±10)g，腹腔注射3%戊巴比 妥鈉溶液，0.14ml/100g麻醉，行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)，術(shù)后連續(xù)3d肌肉注射青霉素2萬U/kg，術(shù) 后2W分組實驗。實驗前48h皮下注射苯甲酸雌二醇20只，交配前4h皮下注射黃體酮500只。 [0096] 2.1.2交配實驗觀察方法將雄性大鼠單獨放人籠中使其適應(yīng)環(huán)境5min，然后放人 1只雌鼠，開始記錄下列數(shù)據(jù):①自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的時間(捕捉潛伏期）；② 20min內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠或爬背的動作次數(shù)(捕捉次數(shù)）；③雄鼠自爬背成功后出現(xiàn)舔陰莖的 時間(射精潛伏期）；④20min內(nèi)雄鼠捕捉雌鼠或爬背成功后出現(xiàn)舔陰莖的次數(shù)(射精次數(shù)）。 [0097] 2.2對大鼠陰莖勃起功能的影響給藥第21d，末次給藥后lh，將4mA電流強度刺激 大鼠陰莖頭部。記錄刺激開始至陰莖勃起時間（勃起潛伏期)和陰莖勃起持續(xù)時間。
[0098] 2.3對正常雄性大鼠精子的影響給藥第21d，取大鼠左側(cè)附睪，在附睪尾縱向劃一 個小口，置于3ml RPMI-1640培養(yǎng)基(含10%左右的動物血清）內(nèi)孵育15min，制備精子懸液。 取少量精子懸液用培養(yǎng)基稀釋5倍，加到血球計數(shù)板上，在27~300c條件下用高倍鏡隨機(jī)觀 察200個精子的活動狀態(tài)(活動的精子:活動良好、呈直線或曲線游動;不活動的精子:活動 遲緩，原地打轉(zhuǎn)或不活動），并統(tǒng)計精子存活率(活動的精子數(shù)X100%/200)。精子懸液用培 養(yǎng)基稀釋50倍，血球計數(shù)板計數(shù)。
[0099] 2.4統(tǒng)計學(xué)處理計量資料用以（無士3)表示，采用3?5513.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素 方差分析及組間兩兩比較。
[0100] 3實驗結(jié)果
[0101] 3.1對正常雄性大鼠交配能力的影響本發(fā)明組合物酒劑明顯縮短大鼠捕捉潛伏 期和射精潛伏期，提高捕捉次數(shù)和射精次數(shù)，與空白對照組比較(P〈〇.05)，提示本發(fā)明組合 物酒劑可有效提高正常大鼠交配能力。結(jié)果詳見表1。
[0102] 表1本發(fā)明組合物酒劑對正常大鼠交配能力影響（〒土S, 11=10)
[0103]
[0104] 注：與空白對照組比較，*P<0.05，林P<0.01;與組合物大劑量組比較，?！?P< 0.01ο
[0105] 3.2對大鼠陰莖勃起功能的影響本發(fā)明組合物酒劑明顯縮短大鼠勃起潛伏期，延 長勃起持續(xù)時間，與空白對照組比較(P〈〇.05)，顯示本發(fā)明組合物酒劑可增強大鼠陰莖勃 起功能。結(jié)果詳見表2。
[0106] 表2本發(fā)明組合物酒劑對大鼠陰莖勃起功能的影響(無土S，11=10)
[0107]
[0108] 注:與空白對照組比較，*P<0.05;與組合物大劑量組比較，° ° P<0.01。
[0109] 3.3對正常雄性大鼠精子的影響本發(fā)明組合物酒劑可顯著增加附睪精子數(shù)(P〈 〇. 05)，提高精子存活率(P〈0.01)，說明本發(fā)明組合物酒劑具有生精作用。
[0110] 結(jié)果詳見表3。
[0111] 表3本發(fā)明組合物酒劑對正常雄性大鼠精子的影響（〒土S,n=10)
[0112]
[0113] 注:與空白對照組比較，*P<0.05;與組合物大劑量組比較，。P<0.05，°°P<0.01。
[0114] 4 小結(jié)
[0115] 本研究表明：本發(fā)明組合物酒劑明顯縮短大鼠捕捉潛伏期和射精潛伏期，提高捕 捉次數(shù)和射精次數(shù)，顯著減少大鼠勃起潛伏期，延長勃起持續(xù)時間；可顯著增加附睪精子 數(shù)，提高精子存活率，具有補腎壯陽生精的作用。本發(fā)明組合物與單味藥材在同等劑量下的 對比試驗表明，各味藥單用的效果均不及本發(fā)明組合物大劑量組(P〈〇.01或P〈〇.05)。
[0116] 實驗結(jié)果說明，本發(fā)明藥物組合物具有補腎壯陽、生精的作用，且與單味藥材在同 等劑量下相比，效果顯著提高，說明本發(fā)明三種組分在本發(fā)明特別配比下發(fā)揮了協(xié)同增效 的作用。
[0117] 試驗例4本發(fā)明組合物的免疫調(diào)節(jié)作用
[0118] 本研究通過計算脾指數(shù)與胸腺指數(shù)、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實驗，三硝基氯 苯(PC)誘導(dǎo)遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)試驗和血清溶血素測定，分別觀察本發(fā)明組合物酒劑對小鼠免 疫器官重量、腹腔巨噬細(xì)胞功能、細(xì)胞免疫功能和體液免疫功能的影響。
[0119] 1 材料
[0120] 1.1受試物及試劑本發(fā)明組合物酒劑(實施例1制備的本發(fā)明組合物），棕色液體， 人體推薦日攝入量為60mL/60kg，BW。瑞氏染液，弘慈醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)，批號 20140324。雞紅細(xì)胞(SRBC)，瀘州衛(wèi)生防疫站提供。
[0121] 1.2動物昆明種小白鼠，18~22g;豚鼠，雌雄兼用，體重300~350g。均由西南醫(yī)科 大學(xué)實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(川）2013-17，使用許可證號SCXK(川）2013-065。給藥前后，動物分籠以全價顆粒飼養(yǎng)，自由飲水。室溫:22~24°C，濕度:65~80 °C。
[0122] 2 方法
[0123] 2.1對免疫器官重量的影響將70只小鼠隨機(jī)分為7組，每組10只，分別為空白對照 組、酒基對照組及本發(fā)明組合物酒劑低、高劑量組、拆方制劑三個組(金釵石斛500mg/kg，瑪 咖500mg/kg，佛手500mg/kg)，均為組合物大劑量組所含組分的等劑量）。各組動物經(jīng)灌胃給 藥。本發(fā)明組合物酒劑低、高劑量組分別按10mL(成品）/Kg、20mL(成品）/Kg的劑量給予受試 物，空白組和灑基對照組分別給予與高劑量組等容積的生理鹽水和15%的乙醇。小鼠連續(xù) 灌胃30d，每日1次，末次給藥后lh，小鼠摘眼球放血處死，取脾臟和胸腺，去盡筋膜，用濾紙 吸干臟器表面血污，稱重，計算脾（胸腺）指數(shù)。脾（胸腺）指數(shù)=脾（胸腺）重量(mg)/體重 (g)〇
[0124] 2.2小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實驗取小鼠70只，分組同上。試驗前一天給 小鼠腹腔注射2 %糖原水溶液1. OmL，使巨噬細(xì)胞從腹膜血管滲到腹腔。第10天給藥后2h，每 組小鼠均腹腔注射2%雞紅細(xì)胞液lml。輕柔腹部。30min后脫頸椎處死小鼠。死亡后立即剖 開腹腔，用滴管吸出腹腔液滴加在載玻片上，每片約〇. 2ml。將載玻片放入37°C溫箱中孵育 30min，生理鹽水沖去附著的細(xì)胞，用瑞氏染液染色，水沖洗晾干。顯微鏡下觀察小鼠腹腔巨 噬細(xì)胞的吞噬情況，并計算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。吞噬百分率=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì) 胞數(shù)/巨噬細(xì)胞總數(shù)X 100% ;吞噬指數(shù)=巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的總數(shù)/巨噬細(xì)胞總數(shù)。
[0125] 2.4三硝基氯苯(PC)誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)
[0126] 2.4.1給藥與致敏:取小鼠70只，分組同上。小鼠連續(xù)灌胃30d，每日1次。第二十二 天用剃毛刀片將各鼠腹部去毛，范圍約3X3cm2。用微量進(jìn)樣器取1%PC無水乙醇溶液100μ L，均勻涂抹在剃毛區(qū)致敏，并用吹風(fēng)機(jī)吹干。
[0127] 2.4.2攻擊與測試:致敏第七天，將1 %PC橄欖油溶液30yL均勻涂抹于每鼠右耳(兩 面)進(jìn)行攻擊?？乖?4h后，將小鼠脫白處死，沿耳廓基線剪下左右耳殼，用打孔器于同 一部位分別取下直徑8_的耳片，并稱重以左右耳片重量之差/左耳重作為腫脹度。
[0128] 2.5血清溶血素形成的實驗取小鼠70只，體重19~21g，雌性，分組和給藥方法同 2.1，給藥3d后腹腔注射5 %雞紅細(xì)胞0.5mL/只致敏。免疫7d，摘眼球取血并分離血清。按文 獻(xiàn)[3]方法取稀釋100倍血清lmL加5%雞紅細(xì)胞、10%補體0.5mL混勻，置37°C恒溫水浴箱溫 浴30Min，取出放在冰水冷卻，離心，取上清液，測A540，以半數(shù)溶血值HC 5Q(HC5Q =樣品A值/ 半數(shù)溶血A值X樣品稀釋倍數(shù))表示溶血素水平。
[0129] 2.6統(tǒng)計學(xué)分析計量資料用以（^±8)表示，采用3?5513.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素 方差分析及組間兩兩比較。
[0130] 3 結(jié)果
[0131] 3.1本發(fā)明組合物酒劑對小鼠免疫器官重量的影響與空白對照組比較，酒基對照 組本發(fā)明組合物酒劑10mL(成品）/Kg組動物脾臟、胸腺臟器系數(shù)未見顯著性差異。本發(fā)明組 合物酒劑20mL(成品）/Kg組均能顯著提高小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)，與空白對照組比較P< 0.05,結(jié)果見表1。
[0132] 表1本發(fā)明組合物酒劑對小鼠免疫器官的影響(i±:S)(n = 10)
[0133]
[0134] 注:與空白對照組比較，*P<0.05;與組合物大劑量組比較，。P<0.05，°°P<0.01。
[0135] 2.2對小鼠巨噬細(xì)胞功能的影響本發(fā)明組合物酒劑1 OmL(成品）/Kg、20mL(成品）/ Kg組均能顯著提高小鼠的吞噬百分率及吞噬指數(shù)，與空白對照組比較P<0.05或P<0.01， 結(jié)果見表2。
[0136] 表2本發(fā)明組合物酒劑對小鼠巨噬細(xì)胞功能的影響（7 土S> (η = 10)
[0137]
[0138] 注:與空白對照組比較，*Ρ<0.05;與組合物大劑量組比較，。Ρ<0.05，°°Ρ<0.01。
[0139] 3.3本發(fā)明組合物酒劑對小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)的影響結(jié)果見表3。與空白對照組 比較，本發(fā)明組合物酒劑高劑量組可顯著降低小鼠耳廓腫脹度，Ρ<〇.01。
[0140] 表3本發(fā)明組合物酒劑對小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)的影響(.〒士S)(n = l〇)
[0141]
[0142] 注:與空白對照組比較，*P<0.05;與組合物大劑量組比較，。P<0.05，°°P<0.01。
[0143] 3.4對小鼠血清溶血素形成的影響結(jié)果顯示，本發(fā)明組合物酒劑10mL(成品）/Kg/ 20mL(成品）/Kg、40mL(成品）/Kg組均能明顯促進(jìn)小鼠溶血素抗體形成，與空白對照組比較， ?<0.05或？<0.01，結(jié)果見表4。
[0144] 表4本發(fā)明組合物酒劑對小鼠血清溶血素形成的影響(I土S)(n = 10)
[0145]
[0146] 注:與空白對照組比較，*P<0.05;與組合物大劑量組比較，。P<0.05，° ° P<0.01。
[0147] 4 小結(jié)
[0148] 在本實驗條件下，本發(fā)明組合物酒劑能顯著升高脾指數(shù)與胸腺指數(shù)，提高巨噬細(xì) 胞吞噬功能，降低小鼠耳廓腫脹度，升高血清溶血素含量。因此，本發(fā)明組合物酒劑對小鼠 的免疫功能具有顯有的調(diào)節(jié)作用。本發(fā)明組合物與單味藥材在同等劑量下的對比試驗表 明，各味藥單用的效果均不及本發(fā)明組合物大劑量組(P〈〇.01或P〈〇.05)。
[0149] 實驗結(jié)果說明，本發(fā)明藥物組合物具有調(diào)節(jié)免疫功能，且與單味藥材在同等劑量 下相比，效果顯著提高，說明本發(fā)明三種組分在本發(fā)明特別配比下發(fā)揮了協(xié)同增效的作用。
[0150] 綜上，本發(fā)明藥物組合物可有效清除體內(nèi)自由基，具有良好的抗氧化、抗衰老、抗 疲勞、補腎壯陽、提高免疫功能等作用，具有良好的保健、醫(yī)用價值，應(yīng)用前景良好。
【主權(quán)項】
1. 一種具有保健功效的食品、保健品或藥物組合物，其特征在于:它是由如下重量配比 的原料藥制備而成的制劑： 石斛6-10份、瑪咖6-10份、佛手2-5份。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的食品、保健品或藥物組合物，其特征在于：它是由如下重量配 比的原料藥制備而成的制劑： 石斛10份、瑪咖10份、佛手5份。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的食品、保健品或藥物組合物，其特征在于:所述石斛為蘭科 石斛屬植物金釵石斛Dendrobium nobile Lindl.的莖。4. 根據(jù)權(quán)利要求1~3任意一項所述的食品、保健品或藥物組合物，其特征在于:它是由 原料藥的藥粉、原料藥的水或有機(jī)溶劑提取物為活性成分，加上藥學(xué)上常用的輔料或輔助 性成分制備而成的制劑。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的食品、保健品或藥物組合物，其特征在于:所述有機(jī)溶劑為濃 度為30 %~70 %的含水乙醇或30度-70度的糧食酒。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一項所述的食品、保健品或藥物組合物，其特征在于:所述制 劑為顆粒劑、膠囊劑、散劑、丸劑、片劑或酒劑。7. 權(quán)利要求1-6任意一項所述食品、保健品或藥物組合物的制備方法，其特征在于： (1) 按照權(quán)利要求1或2所述配比稱取原料藥； (2) 將原料藥混合后，用酒提取，提取液經(jīng)沉淀、過濾，即得。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于:所述酒的濃度為30度-70度的糧食酒； 和/或，提取的方法為浸泡或滲濾提取。9. 權(quán)利要求1-6任意一項所述食品、保健品或藥物組合物在制備抗衰老、抗疲勞、補腎 壯陽、提高免疫或抗氧化的食品、保健品或藥物組合物中的用途。10. 權(quán)利要求1-6任意一項所述食品、保健品或藥物組合物在制備自由基清除劑的食 品、保健品或藥物組合物中的用途。
【文檔編號】A61P39/00GK105902834SQ201610405516
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年6月8日
【發(fā)明人】孫琴, 稅丕先, 傅秀娟, 黃群蓮, 李華云, 李芹
【申請人】西南醫(yī)科大學(xué)