一種桑葉提取物的制備方法及其質(zhì)量控制方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種桑葉提取物的制備方法及其制備控制方法，制備方法包括步驟：桑葉切絲，加水煎煮提取2次，合并兩煎濾液，過(guò)篩網(wǎng)濾過(guò)，取初濾液過(guò)孔徑為0.01~0.02微米的微孔濾膜，取精濾液過(guò)孔徑為0.0001~0.001微米的反滲透膜濃縮到含固率為15~18%，取濃縮初液在60℃以下真空減壓濃縮到相對(duì)密度為1.10～1.13的浸膏，將浸膏進(jìn)行噴霧干燥，即得。其質(zhì)量控制方法采用高效液相色譜法測(cè)定桑葉提取物中蘆丁的含量。本發(fā)明的制備方法可避免因水洗桑葉藥材和高溫濃縮引起的蘆丁含量損失，桑葉中蘆丁得到很好的提取和保留，且可以很好去除細(xì)菌等微生物，保證了微生物符合國(guó)家保健食品原料規(guī)定；且質(zhì)量控制方法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可作為桑葉提取物蘆丁含量測(cè)定方法。
【專利說(shuō)明】
_種桑葉提取物的制備方法及其質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種桑葉提取物的制備方法及其質(zhì)量控制方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 桑葉是一種常見(jiàn)的中草藥，含有蘆丁等黃酮類成分，中國(guó)藥典以蘆丁為含量測(cè)定 指標(biāo)成以檢驗(yàn)控制桑葉藥材的質(zhì)量?，F(xiàn)有的桑葉提取物的提取方法是將桑葉經(jīng)水洗后再投 料煎煮提取，提取液經(jīng)高溫濃縮即得。而在實(shí)驗(yàn)室和大生產(chǎn)實(shí)踐發(fā)現(xiàn)桑葉的這種提取方法 所得到的提取物中蘆丁的含量較低，原因可能有以下幾方面：（1)投料提取前桑葉經(jīng)水洗， 水洗的過(guò)程可能會(huì)造成部分蘆丁損失；（2)提取液在高溫濃縮過(guò)程中（濃縮溫度高于60°C)， 蘆丁含量會(huì)下降，并隨著濃縮溫度升高和濃縮時(shí)間延長(zhǎng)，提取液中蘆丁含量呈顯著下降趨 勢(shì)。如果桑葉藥材不經(jīng)過(guò)水洗直接投料，終產(chǎn)品提取物中微生物不合格機(jī)率將會(huì)上升，原因 是大生產(chǎn)的提取罐的加熱方式為夾層蒸汽加熱，如果罐體較大，罐中間的藥材藥液很難加 熱煮沸，沒(méi)有清洗過(guò)的藥材本身就有較多的微生物，導(dǎo)致提取液中微生物沒(méi)有被殺滅，從而 使提取物微生物指標(biāo)不合格。
[0003] 另外，中國(guó)藥典2015版一部桑葉【含量測(cè)定】項(xiàng)下測(cè)定蘆丁含量，其供試品溶液的 制備方法是采用純甲醇加熱回流提取兩次，提取液需濃縮再溶解定容，操作繁瑣，操作時(shí)間 比較長(zhǎng)，重現(xiàn)性較差。中國(guó)藥典2015版一部槐花【含量測(cè)定】項(xiàng)下測(cè)定蘆丁含量，其供試品溶 液的制備方法是采用純甲醇超聲提取30分鐘，操作相對(duì)簡(jiǎn)單，但提取溶劑中含水量低可能 不利于蘆丁轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致含量結(jié)果偏低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種桑葉提取物的制 備方法，改方法可避免因水洗桑葉藥材和高溫濃縮引起的蘆丁含量損失，同時(shí)保證微生物 符合國(guó)家保健食品原料規(guī)定。
[0005] 本發(fā)明的另一目的在于提供由上述制備方法得到的桑葉提取物的質(zhì)量控制方法。
[0006] 本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)： 一種桑葉提取物的制備方法，包括如下步驟： (1) 桑葉切絲，加水煎煮提取2次，第一次加10~13倍重量的水，煮沸，煎煮提取1.0~1.5 小時(shí)，第二次加8~10倍重量的水，煮沸，煎煮提取1.0~1.5小時(shí)，合并兩煎濾液，過(guò)350目篩網(wǎng) 濾過(guò)，得初濾液； (2) 取初濾液過(guò)孔徑為0.01~0.02微米的微孔濾膜，得精濾液； (3) 取精濾液過(guò)孔徑為0.0001~0.001微米的反滲透膜濃縮到含固率為15~18%，得濃縮 初液； (4)取濃縮初液，在60°C以下真空減壓濃縮到相對(duì)密度為1.10~1.13的浸膏，將浸膏 進(jìn)行噴霧干燥，即得桑葉提取物。
[0007] 優(yōu)選的，步驟(2)中，微孔濾膜的控制參數(shù)為:Pl彡1.8MPa，P2彡1.75MPa，濾液溫 度彡45°C，壓差控制在0.05~O.IMPa。
[0008] 優(yōu)選的，步驟(3)中，反滲透膜的控制參數(shù)為:Pl彡1.8MPa，P2彡1.75MPa，濾液溫度 彡45°C，壓差控制在0.05~O.lMPa。
[0009] 優(yōu)選的，步驟(4)中，噴霧干燥的條件為:控制進(jìn)風(fēng)溫度175~185°C，出風(fēng)溫度85~ 95。。。
[0010]本發(fā)明還提供一種由上述制備方法得到的桑葉提取物的質(zhì)量控制方法，采用高效 液相色譜法，包括如下步驟： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠充劑；以甲醇為流動(dòng)相A，以 0.5 %磷酸溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)為358nm，理論板數(shù)按 蘆丁峰計(jì)算應(yīng)不低于5000;
對(duì)照品溶液的制備取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱定，用甲醇制成每1ml含0.1 mg的溶液， 即得； 供試品溶液的制備取桑葉提取物〇.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入質(zhì)量濃 度為50-70%的甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30-60分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減 失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得； 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1〇μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即 得。
[0011] 優(yōu)選的，供試品溶液的制備具體為:取桑葉提取物〇. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶 中，精密加入質(zhì)量濃度為70%的甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用 甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得。
[0012] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下有益效果： (1) 將桑葉直接投料提取，提取液經(jīng)過(guò)微孔濾膜過(guò)濾和反滲透膜濃縮，可避免因水洗桑 葉藥材和高溫濃縮引起的蘆丁含量損失，桑葉中蘆丁得到很好的提取和保留，且可以很好 去除細(xì)菌等微生物，保證了微生物符合國(guó)家保健食品原料規(guī)定； (2) 本發(fā)明的質(zhì)量控制方法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可作為桑葉提取物蘆丁含量測(cè)定方 法。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 下面通過(guò)【具體實(shí)施方式】來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，以下實(shí)施例為本發(fā)明具體的實(shí)施方 式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受下述實(shí)施例的限制。
[0014] 實(shí)施例1:桑葉提取物的制備 (1) 桑葉切絲，加水煎煮提取2次，第一次加13倍重量的水，煮沸，煎煮提取1.5小時(shí)，第 二次加8倍重量的水，煮沸，煎煮提取1小時(shí)，合并兩煎濾液，過(guò)350目篩網(wǎng)濾過(guò)，得初濾液； (2) 取初濾液，過(guò)孔徑為0.02微米的微孔濾膜，得精濾液;微孔濾膜的控制參數(shù)為:PK 1.8MPa，P2彡1.75MPa，濾液溫度彡45°C，壓差控制在0.05~O.IMPa; (3) 取精濾液過(guò)孔徑為0.0005微米的反滲透膜濃縮到含固率為16%，得濃縮初液;反滲 透膜膜的控制參數(shù)為：P1彡1.8MPa，P2彡1.75MPa，濾液溫度彡45°C，壓差控制在0.05~ O.IMPa； (4) 取濃縮初液，在60°C以下真空減壓濃縮到相對(duì)密度為1.11的浸膏，將浸膏進(jìn)行噴霧 干燥，即得桑葉提取物;噴霧干燥的條件為:控制進(jìn)風(fēng)溫度175~185°C，出風(fēng)溫度85~95°C。
[0015] 實(shí)施例2:桑葉提取物的制備 (1) 桑葉切絲，加水煎煮提取2次，第一次加12倍重量的水，煮沸，煎煮提取1.0小時(shí)，第 二次加9倍重量的水，煮沸，煎煮提取1.5小時(shí)，合并兩煎濾液，過(guò)350目篩網(wǎng)濾過(guò)，得初濾液； (2) 取初濾液，過(guò)孔徑為0.01微米的微孔濾膜，得精濾液;微孔濾膜的控制參數(shù)為:PK 1.8MPa，P2彡1.75MPa，濾液溫度彡45°C，壓差控制在0.05~O.IMPa; (3) 取精濾液過(guò)孔徑為0.001微米的反滲透膜濃縮到含固率為15%，得濃縮初液;反滲透 膜膜的控制參數(shù)為:Pl彡1 · 8MPa，P2彡1 · 75MPa，濾液溫度彡45°C，壓差控制在0 · 05~0 · IMPa; (4) 取濃縮初液，在60°C以下真空減壓濃縮到相對(duì)密度為1.10的浸膏，將浸膏進(jìn)行噴霧 干燥，即得桑葉提取物;噴霧干燥的條件為:控制進(jìn)風(fēng)溫度175~185°C，出風(fēng)溫度85~95°C。
[0016] 實(shí)施例3:桑葉提取物的制備 (1) 桑葉切絲，加水煎煮提取2次，第一次加10倍重量的水，煮沸，煎煮提取1.2小時(shí)，第 二次加10倍重量的水，煮沸，煎煮提取1.2小時(shí)，合并兩煎濾液，過(guò)350目篩網(wǎng)濾過(guò)，得初濾 液； (2) 取初濾液，過(guò)孔徑為0.02微米的微孔濾膜，得精濾液;微孔濾膜的控制參數(shù)為:PK 1.8MPa，P2彡1.75MPa，濾液溫度彡45°C，壓差控制在0.05~O.IMPa; (3) 取精濾液過(guò)孔徑為0.0001微米的反滲透膜濃縮到含固率為18%，得濃縮初液;反滲 透膜膜的控制參數(shù)為：P1彡1.8MPa，P2彡1.75MPa，濾液溫度彡45°C，壓差控制在0.05~ O.IMPa； (4) 取濃縮初液，在60°C以下真空減壓濃縮到相對(duì)密度為1.13的浸膏，將浸膏進(jìn)行噴霧 干燥，即得桑葉提取物;噴霧干燥的條件為:控制進(jìn)風(fēng)溫度175~185°C，出風(fēng)溫度85~95°C。
[0017] 對(duì)比例1: (1)桑葉切絲，加水煎煮提取2次，第一次加13倍重量的水，煮沸，煎煮提取1.5小時(shí)，第 二次加8倍重量的水，煮沸，煎煮提取1小時(shí)，過(guò)350目篩網(wǎng)濾過(guò)，得初濾液； (2)取初濾液，在60°C以下真空減壓濃縮到相對(duì)密度為1.11的浸膏，將浸膏進(jìn)行噴霧 干燥，得桑葉提取物;噴霧干燥的條件為:控制進(jìn)風(fēng)溫度175~185°C，出風(fēng)溫度85~95°C。
[0018] 對(duì)比例2: (1)桑葉切絲，加水煎煮提取2次，第一次加13倍重量的水，煮沸，煎煮提取1.5小時(shí)，第 二次加8倍重量的水，煮沸，煎煮提取1小時(shí)，過(guò)350目篩網(wǎng)濾過(guò)，得初濾液； (2)取初濾液，在60°C以下真空減壓濃縮到相對(duì)密度為1.11的浸膏，升高溫度到95°C 保溫10分鐘，噴霧干燥，得桑葉提取物;噴霧干燥的條件為:控制進(jìn)風(fēng)溫度175~185°C，出風(fēng) 溫度85~95 °C。
[0019] 按中國(guó)藥典微生物限度測(cè)定方法分別測(cè)定實(shí)施例1-3所得桑葉提取物及對(duì)比例1-2所得桑葉提取物中的微生物，結(jié)果見(jiàn)表1: 表1不同桑葉提取物制備方法微生物檢查結(jié)果
由表1結(jié)果可知，本發(fā)明采用采用微孔濾膜過(guò)濾和反滲透膜濃縮，可以很好去除細(xì)菌等 微生物，所得桑葉提取物的微生物結(jié)果合格。而對(duì)比例1中因濃縮溫度比較低且濃縮清膏沒(méi) 有進(jìn)行高溫滅菌處理，霉菌酵母菌超標(biāo)，對(duì)比例2因濃縮清膏通過(guò)升高溫度到95°C保溫10分 鐘，微生物合格。
[0020] 桑葉提取物的質(zhì)量控制方法： 采用高效液相色譜法，包括如下步驟： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠充劑；以甲醇為流動(dòng)相A，以 0.5 %磷酸溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)為358nm;理論板數(shù)按 蘆丁峰計(jì)算應(yīng)不低于5000;
對(duì)照品溶液的制備取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱定，用甲醇制成每1ml含0.1 mg的溶液， 即得； 供試品溶液的制備取桑葉提取物〇.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入質(zhì)量濃 度為70%的甲醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率25kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重 量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得； 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1〇μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即 得。
[0021] 本發(fā)明的桑葉提取物是將桑葉經(jīng)過(guò)水提取處理，桑葉中的蘆丁等化學(xué)成分已游離 于葉子組織之外，且槐花及桑葉藥材的水分一般都在10%左右，而桑葉提取物的水分則在4% 左右，因此提取的方法以及提取溶劑的選擇可能會(huì)影響蘆丁的轉(zhuǎn)移率，因此，供試品溶液的 制備是關(guān)鍵技術(shù)。
[0022] 本發(fā)明供試品溶液的制備采用如下方法進(jìn)行比較： 采用實(shí)施例1-3和對(duì)比例1-2所得的桑葉提取物制備供試品溶液，并采用同一色譜條件 進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定：以十八烷基硅烷鍵合硅膠充劑；以甲醇為流動(dòng)相A，以0.5%磷酸溶 液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)為358nm;理論板數(shù)按蘆丁峰計(jì)算應(yīng) 不低于5000;
具體方法如表2所示，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3: 衷2測(cè)宙Φ葉搵取物中蘆T含量的供試品制備方法比較
表3不同供試品制備方法測(cè)定桑葉提取物中蘆丁的含量結(jié)果
由表3中結(jié)果可知，采用本發(fā)明供試品制備方法測(cè)定的蘆丁含量與藥典桑葉測(cè)定方法 的蘆丁含量無(wú)明顯差異，而用藥典槐花測(cè)定方法測(cè)定的結(jié)果偏低。其原因可能是藥典測(cè)定 桑葉的蘆丁含量時(shí)，由于桑葉未經(jīng)過(guò)提取處理，桑葉中的蘆丁等化學(xué)成分被包裹在致密的 葉子細(xì)胞組織中，比較難提取出來(lái)，所以要進(jìn)行加熱回流2次才能保證蘆丁被全部提取，但 其操作繁瑣。而本發(fā)明測(cè)定的是桑葉提取物中蘆丁的含量，蘆丁等化學(xué)成分已游離于葉子 組織之外，更容易溶于甲醇等溶劑，所以用超聲法即可將蘆丁提取，操作方法明顯較藥典簡(jiǎn) 單。由于槐花及桑葉藥材的水分一般都在10%左右，而本發(fā)明桑葉提取物的水分則在4%左 右，如果用純甲醇提取，提取溶劑含水量低可能不利于蘆丁轉(zhuǎn)移，因此，采用藥典槐花測(cè)定 方法測(cè)定蘆丁含量結(jié)果偏低。
[0023] 另外，由表3結(jié)果還可以看出，本發(fā)明采用微孔濾膜過(guò)濾和反滲透膜濃縮，可避免 因水洗桑葉藥材和高溫濃縮引起的蘆丁含量損失，桑葉中蘆丁得到很好的提取和保留，相 比于對(duì)比例，本發(fā)明實(shí)施例的蘆丁含量平均提高40%以上。對(duì)比例2因濃縮清膏經(jīng)過(guò)升高溫 度到95 °C保溫10分鐘處理，微生物達(dá)到合格，但蘆丁含量比對(duì)比例1下降30%。
[0024] 另外，本發(fā)明同時(shí)對(duì)質(zhì)量控制方法中供試品制備的甲醇濃度進(jìn)行了考察，其考察結(jié)果 如下表4所示： 表4本發(fā)明供試品制備過(guò)程中的甲醇濃度考察結(jié)果
通過(guò)上述表4可以看出，本發(fā)明通過(guò)對(duì)樣品制備過(guò)程中的甲醇濃度進(jìn)行考察，對(duì)本發(fā)明 的供試品制備方法進(jìn)行了優(yōu)化，優(yōu)選質(zhì)量濃度為50-70%的甲醇作為本發(fā)明供試品制備的提 取溶劑，更優(yōu)選質(zhì)量濃度為70%的甲醇。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種桑葉提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟： (1)桑葉切絲，加水煎煮提取2次，第一次加10~13倍重量的水，煮沸，煎煮提取1.0~1.5 小時(shí)，第二次加8~10倍重量的水，煮沸，煎煮提取1.0~1.5小時(shí)，合并兩煎濾液，過(guò)350目篩網(wǎng) 濾過(guò)，得初濾液； (2 )取初濾液過(guò)孔徑為0.01~0.02微米的微孔濾膜，得精濾液； (3)取精濾液過(guò)孔徑為0.0001~0.001微米的反滲透膜濃縮到含固率為15~18%，得濃縮 初液； (4)取濃縮初液，在60°C以下真空減壓濃縮到相對(duì)密度為1.10~1.13的浸膏，將浸膏 進(jìn)行噴霧干燥，即得桑葉提取物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑葉提取物的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，微孔濾膜的 控制參數(shù)為:P1彡1.8MPa，P2彡1.75MPa，濾液溫度彡45°C，壓差控制在0.05~0.1 MPa。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑葉提取物的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，反滲透膜的 控制參數(shù)為:P1彡1.8MPa，P2彡1.75MPa，濾液溫度彡45°C，壓差控制在0.05~0.1 MPa。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑葉提取物的制備方法，其特征在于，步驟(4)中，噴霧干燥的 條件為:控制進(jìn)風(fēng)溫度175~185°C，出風(fēng)溫度85~95°C。5. 如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的制備方法得到的桑葉提取物的質(zhì)量控制方法，其特征 在于，采用高效液相色譜法，包括如下步驟： 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠充劑；以甲醇為流動(dòng)相A，以 0.5 %磷酸溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)為358nm，理論板數(shù)按 蘆丁峰計(jì)算應(yīng)不低于5000;對(duì)照品溶液的制備取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱定，用甲醇制成每lml含O.lmg的溶液， 即得； 供試品溶液的制備取桑葉提取物〇.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入質(zhì)量濃 度為50-70%的甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30-60分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減 失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得； 測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1〇μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即 得。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的桑葉提取物的質(zhì)量控制方法，其特征在于，供試品溶液的制備 具體為：取桑葉提取物〇.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入質(zhì)量濃度為70%的甲醇 50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)， 即得。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK105943621SQ201610378895
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年6月1日
【發(fā)明人】羅艷萍, 程學(xué)仁, 張風(fēng), 張冬林
【申請(qǐng)人】廣東方制藥有限公司, 廣東一方制藥有限公司