猴耳環(huán)提取物在制備抗多重耐藥銅綠假單胞菌藥物中的應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了猴耳環(huán)提取物在制備抗多重耐藥銅綠假單胞菌及該類抗生素增敏藥物中的應用。所述的猴耳環(huán)提取物由以下方法制備：猴耳環(huán)粗粉用水或乙醇水溶液提取，所得的提取液再用乙酸乙酯萃取，所得的萃取物即為目標產(chǎn)品。本發(fā)明首次公開猴耳環(huán)提取物在制備抗多重耐藥銅綠假單胞菌及該類抗生素增敏藥物中的應用?？勺鳛樘烊坏目咕幬锘蚩股卦雒魟?，應用于由銅綠假單胞菌引起的疾病治療。作為中藥提取物還具有低成本、副作用低等優(yōu)點。
【專利說明】
猴耳環(huán)提取物在制備抗多重耐藥銅綠假單胞菌藥物中的應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及猴耳環(huán)提取物在制備抗耐藥菌藥物中的新用途。
【背景技術】
[0002] 21世紀是多重耐藥菌的時代，抗生素臨床應用60年后，越來越多的院內(nèi)感染和多 重耐藥菌感染成為目前臨床抗菌治療的一大難題，1961年Jerons報告第1例臨床耐甲氧西 林金黃色葡萄球菌(MRSA)感染患者，目前MRSA感染已逐漸遍及全球;2011年中國細菌耐藥 性監(jiān)測臨床中主要耐藥菌的分布，大腸桿菌、肺炎克雷伯菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL)株 分別平均為50.7%、38.5%，其耐藥性的變迀和現(xiàn)狀備受關注。另外據(jù)我國衛(wèi)生部耐藥監(jiān)測 協(xié)作組2010年度報告，鮑曼不動桿菌和銅綠假單胞菌在醫(yī)院ICU分離的病原菌中居首位，鮑 曼不動桿菌對亞胺培南和美羅培南的耐藥率分別高達60.4%和61.4%。綜上所述，在MRSA、 產(chǎn)ESBL的各類細菌、多重耐藥的鮑曼不動桿菌和銅綠假單胞菌的臨床占有率逐年攀升，耐 藥率不斷攀高的壓力下，抗生素治療面臨著巨大的挑戰(zhàn)。為避免細菌耐藥現(xiàn)象的進一步惡 化，專家學者力圖發(fā)現(xiàn)新的抑制細菌生長以及治療細菌引起疾病的新方法。已有研究報道 證明中國傳統(tǒng)中藥如黃連、黃苳和連翹等對不同耐藥細菌有一定的抑制效果，進一步研究 中藥抑制耐藥菌生長的重點在于發(fā)現(xiàn)新的抑菌能力更強、耐藥抑菌譜更廣的中藥。
[0003] 猴耳環(huán)(Pithecellobium clypearia Benth)，學名圍誕樹，是含羞草科猴耳環(huán)屬 植物猴耳環(huán)的干燥幼枝和葉，其性味苦澀寒，功效清熱解毒、收濕斂瘡，是治療多種熱毒癥 候獨特的南方藥材
[0004] 目前有文獻公開猴耳環(huán)以及其提取物具有抗病毒作用。中國專利CN103385912A公 開了猴耳環(huán)的提取物具有抗MRSA作用及抗生素增敏作用，但該專利未提及該猴耳環(huán)提取物 對多重耐藥銅綠假單胞菌的抗菌作用及與抗生素聯(lián)用的增敏作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了猴耳環(huán)提取物在制備抗多重耐藥銅綠假單胞菌及該類抗生素增敏 藥物中的應用。
[0006] 猴耳環(huán)提取物對左氧氟沙星或亞胺培南或阿米卡星或頭孢他啶或頭孢哌酮五類 抗生素抗多重耐藥銅綠假單胞菌具有明顯的增敏作用。
[0007] 所述的猴耳環(huán)提取物可以是猴耳環(huán)水提取物或猴耳環(huán)乙醇提取物。可由以下方法 制備:猴耳環(huán)粗粉用水或乙醇水溶液提取，所得的提取液再用乙酸乙酯萃取，所得的萃取物 即為目標產(chǎn)品。
[0008] 本發(fā)明優(yōu)選按體積比計濃度為60%的乙醇水溶液作為提取溶劑所制得的猴耳環(huán) 提取物。
[0009] 本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明首次公開猴耳環(huán)提取物在制備抗多重耐藥銅綠假單胞 菌及該類抗生素增敏藥物中的應用。尤其可作為天然的抗菌藥物或抗生素增敏劑，應用于 由銅綠假單胞菌引起的疾病治療，本發(fā)明包括藥物包括人用藥物和其他動物用藥物。作為 中藥提取物還具有低成本、副作用低等優(yōu)點。
【具體實施方式】
[0010]本發(fā)明通過下述實施方案對猴耳環(huán)水或乙醇提取物的抗多重耐藥銅綠假單胞菌 的藥理作用進行篩選。
[0011] 以微量肉湯稀釋法測定猴耳環(huán)提取物對多重耐藥銅綠假單胞菌的最低抑菌濃度 (MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。
[0012] 菌株：多重耐藥銅綠假單胞菌(MDRPA，編號Pl-P20)20株;銅綠假單胞菌質控菌株 (PAE，ATCC27853)均由中山大學附屬第一醫(yī)院檢驗醫(yī)學部臨床微生物檢驗室提供，經(jīng)中山 大學附屬第一醫(yī)院臨床微生物檢驗室檢測確認其耐藥性。
[0013] MH肉湯培養(yǎng)基:MH肉湯干粉(英國OXOID LTD.)2.1g，定容至100ml，NA0H調(diào)節(jié)pH至 7.0，高壓滅菌，置4 °C冰箱備用。
[0014]方法:參照美國國立臨床試驗標準化委員會(NCCLS)推薦的微量肉湯稀釋法操作。 [0015]本發(fā)明通過下述方法對猴耳環(huán)提取物對左氧氟沙星、亞胺培南、阿米卡星、頭孢他 啶、頭孢哌酮抗多重耐藥銅綠假單胞菌的增敏作用進行考察。
[0016] 菌株：多重耐藥銅綠假單胞菌(MDRPA，編號Pl-P20)20株;銅綠假單胞菌質控菌株 (PAE，ATCC27853)均由中山大學附屬第一醫(yī)院檢驗醫(yī)學部臨床微生物檢驗室提供，經(jīng)中山 大學附屬第一醫(yī)院臨床微生物檢驗室檢測確認其耐藥性。
[0017] MH肉湯培養(yǎng)基:MH肉湯干粉(英國OXOID LTD.)2.1g，定容至100ml，NA0H調(diào)節(jié)pH至 7.0，高壓滅菌，置4 °C冰箱備用。
[0018] 方法:參照美國國立臨床試驗標準化委員會(NCCLS)推薦的棋盤稀釋法操作。以下 通過具體的實施例進一步說明本發(fā)明的技術方案。
[0019] 實施例1
[0020] 猴耳環(huán)提取物的制備方法
[0021 ] 猴耳環(huán)(Pithecellobium clypearia Benth)由廣州市花城制藥廠提供。取適量猴 耳環(huán)藥材打成粗粉，用水或乙醇回流2次，每次2小時，過濾;合并濾液，濃縮得浸膏（水或乙 醇提取物）。取浸膏用水混懸后，用乙酸乙酯萃取，萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液，濃縮得 乙酸乙酯萃取物。
[0022] 所述的乙醇提取物可由10-95 %乙醇回流制得。
[0023] 實施例2
[0024] 猴耳環(huán)水提取物抗多重耐藥銅綠假單胞菌的抑菌殺菌試驗及分別與左氧氟沙星、 亞胺培南、阿米卡星、頭孢他啶、頭孢哌酮聯(lián)合的增敏藥效考察。
[0025] 1.實驗方法
[0026] 1)最低抑菌濃度(MIC)的測定：
[0027] 猴耳環(huán)水提取物、左氧氟沙星（LVX)、亞胺培南（MP)、阿米卡星(AMK)、頭孢他啶 (CAZ)、頭孢哌酮(CFP)分別在MH肉湯培養(yǎng)基中進行一系列倍比稀釋，每孔50μ1，調(diào)節(jié)接種菌 為1.0 X IO6CFlVml，每孔50μ1菌液。35 °C培養(yǎng);24小時，無沉淀出現(xiàn)的最低抗菌藥物的濃度 為其最低抑菌濃度(MIC)。
[0028] 2)最低殺菌濃度(MBC)的測定：
[0029] 采用平板涂布計數(shù)法，從1)項無菌生長的孔中吸取50ul菌懸液至血平板上，均勻 涂布，35 °C培養(yǎng)24小時，菌落計數(shù)，使最初的實驗活菌數(shù)減少99.9 %或以上所需要的最低抗 菌藥物的濃度為其最低殺菌濃度(MBC)。
[0030] 通過測定藥物的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)，并對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計得 出[(：5()、]\0(： 9()、冊(：5()、]\^(：9()，來評價藥物抗多重耐藥銅綠假單胞菌的作用。
[0031] 3)棋盤稀釋法：
[0032]棋盤稀釋法在96孔無菌培養(yǎng)板中進行，將猴耳環(huán)水提取物及左氧氟沙星(LVX)、亞 胺培南（MP)、阿米卡星(AMK)、頭孢他啶(CAZ)、頭孢哌酮(CFP)分別在MH肉湯培養(yǎng)基中倍比 稀釋成系列濃度，以兩藥各自1/4MIC到4MIC分別進行聯(lián)合，每孔A藥B藥各加25yL，調(diào)整菌懸 液的濃度為I .OX l〇6CFU/ml，每孔接種50yL菌液，35°C孵育24h后觀察A藥B藥聯(lián)合后對多重 耐藥銅綠假單胞菌的最低抑菌濃度(MIC)。 _3] fic指數(shù)的計算:孤====+譴，廳體部分抑菌 指數(shù)(FIC)來評價猴耳環(huán)水提取物與抗生素聯(lián)合抗菌的相互作用，F(xiàn)ICS0.5為協(xié)同作用， 0.5<FIC< 1為相加作用，1<FIC<2為無關作用，F(xiàn)IC>2為拮抗作用；并根據(jù)無菌生長孔找出 猴耳環(huán)水提取物和抗生素的最佳濃度配比，最終評價猴耳環(huán)水提取物增強抗生素效力的作 用。
[0034] 2.實驗結果
[0035]猴耳環(huán)水提取物及五種抗生素（左氧氟沙星、亞胺培南、阿米卡星、頭孢他啶、頭孢 哌酮)對多重耐藥銅綠假單胞菌的體外抑菌試驗結果見表1。
[0036] 猴耳環(huán)水提取物對多重耐藥銅綠假單胞菌的體外殺菌試驗結果見表2。
[0037] 經(jīng)過統(tǒng)計分析，猴耳環(huán)水提取物及五種抗生素對多重耐藥銅綠假單胞菌的體外抑 菌和殺菌的MIC50、MIC90見表3。
[0038]經(jīng)過統(tǒng)計分析，猴耳環(huán)提取物對多重耐藥銅綠假單胞菌的殺菌的MBC5Q、MBC9Q見表 4〇
[0039] 猴耳環(huán)水提取物與五種抗生素的聯(lián)合藥敏試驗的FIC值及FIC值的分布統(tǒng)計結果 見表5、表6〇
[0040] 猴耳環(huán)水提取物對五種抗生素的增敏作用及聯(lián)用后其MIC5Q、MIC9Q見表7-表12。
[0041] 表1猴耳環(huán)水提取物及五種抗生素對多重耐藥銅綠假單胞菌體外抑菌試驗結果






[0069] 猴耳環(huán)水提取物單用對多重耐藥銅綠假單胞菌的MIC50為800μg/ml，MIC90為1600 μg/ml，MBC50為1600μg/ml，MBC90為1600μg/ml;
[0070] 對20株多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)水提取物與頭孢他啶聯(lián)用的FIC均<2表明 兩藥無拮抗作用，其中有45%FIC值<0.5呈協(xié)同作用;對20株多重耐藥多重耐藥銅綠假單 胞菌，猴耳環(huán)水提取物在濃度彡單用MIC時，使頭孢他啶MIC50從單用的32μg/ml降至8μg/ ml，降低了75% ;MIC90從256μg/ml降至64μg/ml，降低75% ;
[0071] 猴耳環(huán)水提取物與頭孢哌酮聯(lián)用對20株多重耐藥銅綠假單胞菌FIC均<2表明兩 藥兩藥無拮抗作用，其中35%FIC值<0.5呈協(xié)同作用;對20株多重耐藥多重耐藥銅綠假單 胞菌，猴耳環(huán)水提取物在濃度彡單用MIC時，使頭孢哌酮MIC50從單用的64μg/ml降至0.5yg/ ml，降低了99.2% ;MIC90從512μg/ml降至256μg/ml，降低50% ;
[0072] 猴耳環(huán)水提取物與阿米卡星聯(lián)用FIC均<2表明兩藥沒有拮抗作用，其中35%FIC <0.5呈協(xié)同作用;對20株多重耐藥多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)水提取物在濃度 < 單用 MIC時，使阿米卡星MIC50從單用的lμg/ml降至0.0625μg/ml，降低了93.75% ;MIC90從32yg/ ml 降至2μg/ml，降低93.75% ;
[0073] 猴耳環(huán)水提取物與亞胺培南聯(lián)用后FIC均<2表明兩藥沒有拮抗作用，其中40% FICS0.5呈協(xié)同作用;對20株多重耐藥多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)水提取物在濃度< 單用MIC時，使亞胺培南MIC50從單用的32μg/ml降至2μg/ml，降低了93·75% ;MIC90從64yg/ ml降至 16μg/ml，降低75% ;
[0074] 猴耳環(huán)水提取物與左氧氟沙星聯(lián)用抗20株多重耐藥銅綠假單胞菌，F(xiàn)IC均<2表明 兩藥無拮抗作用，其中15%FIC值<0.5表明兩藥有一定程度的協(xié)同作用;對20株多重耐藥 多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)水提取物在濃度 < 單用MIC時，使左氧氟沙星MIC50從單用 的4μg/ml降至lμg/ml，降低了75% ;MIC90從32μg/ml降至8μg/ml，降低75%。
[0075] 實施例3
[0076] 猴耳環(huán)10%乙醇提取物抗多重耐藥銅綠假單胞菌的抑菌殺菌試驗及分別與左氧 氟沙星、亞胺培南、阿米卡星、頭孢他啶、頭孢哌酮聯(lián)合的增敏藥效考察。
[0077] 1.實驗方法:按本發(fā)明實施例2項下方法測定并評價。
[0078] 2.實驗結果：
[0079]猴耳環(huán)10%乙醇提取物及五種抗生素（左氧氟沙星、亞胺培南、阿米卡星、頭孢他 啶、頭孢哌酮)對多重耐藥銅綠假單胞菌的體外抑菌試驗結果見表13。
[0080] 猴耳環(huán)10%乙醇提取物對多重耐藥銅綠假單胞菌的體外殺菌試驗結果見表14。
[0081] 經(jīng)過統(tǒng)計分析，猴耳環(huán)10%乙醇提取物及五種抗生素對多重耐藥銅綠假單胞菌的 體外抑菌和殺菌的MIC50、MIC90見表15。
[0082]經(jīng)過統(tǒng)計分析，猴耳環(huán)提取物對多重耐藥銅綠假單胞菌的殺菌的MBC5Q、MBC9Q見表 16。
[0083]猴耳環(huán)10%乙醇提取物與五種抗生素的聯(lián)合藥敏試驗的FIC值及FIC值的分布統(tǒng) 計結果見表17、表18。
[0084] 猴耳環(huán)10%乙醇提取物對五種抗生素的增敏作用及聯(lián)用后其MIC5Q、MIC 9Q見表19- 表24。
[0085]表13猴耳環(huán)10%乙醇提取物及五抗生素對多重耐藥銅綠假單胞菌體外抑菌試驗 結果
[0090]表15猴耳環(huán)10%乙醇提取物及五種抗生素對多重耐藥銅綠假單胞菌的體外抑菌 的MIC5Q、MIC9Q統(tǒng)計結果




[0113] 猴耳環(huán)10%乙醇提取物單用對多重耐藥銅綠假單胞菌的[050為80(^8/1111，11090 為1600μg/ml，MBC50為1600μg/ml，MBC90為1600μg/ml;
[0114] 對20株多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)10%乙醇提取物與頭孢他啶聯(lián)用的FIC均 <2表明兩藥無拮抗作用，其中有35%FIC值<0.5呈協(xié)同作用;對20株多重耐藥多重耐藥銅 綠假單胞菌，猴耳環(huán)10%乙醇提取物的在濃度 < 單用MIC時，使頭孢他啶MIC50從單用的32μ g/ml降至 16μg/ml，降低了50% ;MIC90從256μg/ml降至64μg/ml，降低75% ;
[0115] 猴耳環(huán)10%乙醇提取物與頭孢哌酮聯(lián)用對20株多重耐藥銅綠假單胞菌FIC均<2 表明兩藥兩藥無拮抗作用，其中35%FIC值<0.5呈協(xié)同作用；對20株多重耐藥多重耐藥銅 綠假單胞菌，猴耳環(huán)10%乙醇提取物在濃度彡單用MIC時，使頭孢哌酮MIC50從單用的64yg/ ml降至4μg/ml，降低了93.75% ;MIC90從512μg/ml降至256μg/ml，降低50% ;
[0116] 猴耳環(huán)10%乙醇提取物與阿米卡星聯(lián)用FIC均<2表明兩藥沒有拮抗作用，其中 30%FIC<0.5呈協(xié)同作用；對20株多重耐藥多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)10%乙醇提取 物在濃度彡單用MIC時，使阿米卡星MIC50從單用的lμg/ml降至0.0625μg/ml，降低了 93.75% ;MIC90從32μg/ml降至4μg/ml，降低87.5% ;
[0117]猴耳環(huán)10%乙醇提取物與亞胺培南聯(lián)用后FIC均<2表明兩藥沒有拮抗作用，其中 50%FIC<0.5呈協(xié)同作用；對20株多重耐藥多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)10%乙醇提取 物的乙酸乙酯萃取物在濃度彡單用MIC時，使亞胺培南MIC50從單用的32μg/ml降至2μg/ml， 降低了 93.75%;]\〇090從64以8/1111降至16以8/1111，降低75%;
[0118] 猴耳環(huán)10%乙醇提取物與左氧氟沙星聯(lián)用抗20株多重耐藥銅綠假單胞菌，F(xiàn)IC均 <2表明兩藥無拮抗作用，其中15%FIC值<0.5表明兩藥有一定程度的協(xié)同作用;對20株多 重耐藥多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)15%乙醇提取物在濃度 < 單用MIC時，使左氧氟沙星 10〇50從單用的4以8/1111降至叫8/1111，降低了75%;]\0090從32以8/1111降至4以8/1111，降低87.5%。
[0119] 實施例4
[0120]猴耳環(huán)60%乙醇提取物抗多重耐藥銅綠假單胞菌的抑菌殺菌試驗及分別與左氧 氟沙星、亞胺培南、阿米卡星、頭孢他啶、頭孢哌酮聯(lián)合的增敏藥效考察。
[0121 ] 1.實驗方法:按本發(fā)明實施例2項下方法測定并評價。
[0122] 2.實驗結果：
[0123] 猴耳環(huán)60%乙醇提取物及五種抗生素（左氧氟沙星、亞胺培南、阿米卡星、頭孢他 啶、頭孢哌酮)對多重耐藥銅綠假單胞菌的體外抑菌試驗結果見表25。
[0124] 猴耳環(huán)60%乙醇提取物對多重耐藥銅綠假單胞菌的體外殺菌試驗結果見表26。
[0125] 經(jīng)過統(tǒng)計分析，猴耳環(huán)60%乙醇提取物及五種抗生素對多重耐藥銅綠假單胞菌的 體外抑菌和殺菌的MIC50、MIC90見表27。
[0126] 經(jīng)過統(tǒng)計分析，猴耳環(huán)提取物對多重耐藥銅綠假單胞菌的殺菌的MBC5Q、MBC9Q見表 28 〇
[0127] 猴耳環(huán)60%乙醇提取物與五種抗生素的聯(lián)合藥敏試驗的FIC值及FIC值的分布統(tǒng) 計結果見表29、表30。
[0128] 猴耳環(huán)60%乙醇提取物對五種抗生素的增敏作用及聯(lián)用后其MIC5Q、MIC 9Q見表31-表36 〇
[0129] 表25猴耳環(huán)60%乙醇提取物及五種抗生素對多重耐藥銅綠假單胞菌體外抑菌試 驗結果
[0134] 表27猴耳環(huán)60%乙醇提取物及五種抗生素對多重耐藥銅綠假單胞菌的體外抑菌 的MIC5Q、MIC9Q統(tǒng)計結果
[0140]表30猴耳環(huán)60 %乙醇提取物與五種抗生素的聯(lián)合藥敏試驗FIC值的分布統(tǒng)計結果
[0145] 表32猴耳環(huán)60%乙醇提取物對頭孢哌酮的增敏作用及聯(lián)用后的MIC


[0157] 猴耳環(huán)60%乙醇提取物單用對多重耐藥銅綠假單胞菌的MIC50為400μg/ml，MIC90 為800μg/ml，MBC50為1600μg/ml，MBC90為1600μg/ml;
[0158] 對20株多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)60%乙醇提取物與頭孢他啶聯(lián)用的FIC均 <2表明兩藥無拮抗作用，其中有40%FIC值<0.5呈協(xié)同作用;對20株多重耐藥多重耐藥銅 綠假單胞菌，猴耳環(huán)60%乙醇提取物在濃度 < 單用MIC時，使頭孢他啶MIC50從單用的32yg/ ml降至8μg/ml，降低了75% ;MIC90從256μg/ml降至64μg/ml，降低75% ;
[0159] 猴耳環(huán)60%乙醇提取物與頭孢哌酮聯(lián)用對20株多重耐藥銅綠假單胞菌FIC均<2 表明兩藥兩藥無拮抗作用，其中20%FIC值<0.5呈協(xié)同作用；對20株多重耐藥多重耐藥銅 綠假單胞菌，猴耳環(huán)60%乙醇提取物在濃度 < 單用MIC時，使頭孢哌酮MIC50從單用的64yg/ ml降至4μg/ml，降低了93.75% ;MIC90從512μg/ml降至256μg/ml，降低50% ;
[0160] 猴耳環(huán)60%乙醇提取物與阿米卡星聯(lián)用FIC均<2表明兩藥沒有拮抗作用，其中 20%FIC<0.5呈協(xié)同作用；對20株多重耐藥多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)60%乙醇提取 物在濃度彡單用MIC時，使阿米卡星MIC50從單用的lμg/ml降至0.0625μg/ml，降低了 93.75% ;MIC90從32μg/ml降至2μg/ml，降低93.75% ;
[0161] 猴耳環(huán)60%乙醇提取物與亞胺培南聯(lián)用后FIC均<2表明兩藥沒有拮抗作用，其中 15%FIC<0.5呈協(xié)同作用；對20株多重耐藥多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)60%乙醇提取 物在濃度彡單用MIC時，使亞胺培南MIC50從單用的32μg/ml降至2μg/ml，降低了93.75% ; MIC90從64μg/ml降至 16μg/ml，降低75% ;
[0162] 猴耳環(huán)60%乙醇提取物與左氧氟沙星聯(lián)用抗20株多重耐藥銅綠假單胞菌，有4株 FIC大于2呈拮抗作用，其中10%FIC值<0.5表明兩藥有一定程度的協(xié)同作用;對20株多重 耐藥多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)60%乙醇提取物在濃度<單用MIC時，使左氧氟沙星 MIC50 從單用的 4μg/ml 降至 lμg/ml，降低了 75%;MIC90 從 32μg/ml 降至 8μg/ml，降低 75%。
[0163] 實施例5
[0164] 猴耳環(huán)95%乙醇提取物抗多重耐藥銅綠假單胞菌的抑菌殺菌試驗及分別與左氧 氟沙星、亞胺培南、阿米卡星、頭孢他啶、頭孢哌酮聯(lián)合的增敏藥效考察。
[0165] 1.實驗方法:按本發(fā)明實施例2項下測定并評價。
[0166] 2.實驗結果：
[0167] 猴耳環(huán)95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及五種抗生素(左氧氟沙星、亞胺培南、 阿米卡星、頭孢他啶、頭孢哌酮)對多重耐藥銅綠假單胞菌的體外抑菌試驗結果見表13。
[0168] 猴耳環(huán)95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物對多重耐藥銅綠假單胞菌的體外殺菌 試驗結果見表14。
[0169] 經(jīng)過統(tǒng)計分析，猴耳環(huán)95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物及五種抗生素對多重耐 藥銅綠假單胞菌的體外抑菌和殺菌的MIC50、MIC90見表15。
[0170] 經(jīng)過統(tǒng)計分析，猴耳環(huán)提取物對多重耐藥銅綠假單胞菌的殺菌的MBC5Q、MBC9Q見表 16。
[0171]猴耳環(huán)95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物與五種抗生素的聯(lián)合藥敏試驗的FIC值 及FIC值的分布統(tǒng)計結果見表17、表18。
[0172]猴耳環(huán)95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物對五種抗生素的增敏作用及聯(lián)用后其 MIC5q、MIC9〇 見表 19-表 24。
[0173]表37猴耳環(huán)95%乙醇提取物及五種抗生素對多重耐藥銅綠假單胞菌體外抑菌試 驗結果
[0178]表39猴耳環(huán)95%乙醇提取物及五種抗生素對多重耐藥銅綠假單胞菌的體外抑菌 的MIC5Q、MIC9Q統(tǒng)計結果
[0184]表42猴耳環(huán)95%乙醇提取物與五種抗生素的聯(lián)合藥敏試驗FIC值的分布統(tǒng)計結果
[0189] 表44猴耳環(huán)95%乙醇提取物對頭孢哌酮的增敏作用及聯(lián)用后的MIC


[0201] 猴耳環(huán)95%乙醇提取物單用對多重耐藥銅綠假單胞菌的[050為80(^8/1111，11090 為800μg/ml，MBC50為1600μg/ml，MBC90為1600μg/ml;
[0202] 對20株多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)95%乙醇提取物與頭孢他啶聯(lián)用的FIC均 <2表明兩藥無拮抗作用，其中有25%FIC值<0.5呈協(xié)同作用;對20株多重耐藥多重耐藥銅 綠假單胞菌，猴耳環(huán)95%乙醇提取在濃度彡單用MIC時，使頭孢他啶MIC50從單用的32μg/ml 降至 16μg/ml，降低了50% ;MIC90從256μg/ml降至 128μg/ml，降低50% ;
[0203] 猴耳環(huán)95%乙醇提取物與頭孢哌酮聯(lián)用對20株多重耐藥銅綠假單胞菌FIC均<2 表明兩藥兩藥無拮抗作用，其中40%FIC值<0.5呈協(xié)同作用；對20株多重耐藥多重耐藥銅 綠假單胞菌，猴耳環(huán)95%乙醇提取物在濃度 < 單用MIC時，使頭孢哌酮MIC50從單用的64yg/ ml 降至 4μg/ml，降低了 93.75%;]\〇090從512以8/1111降至128以8/1111，降低75% ;
[0204]猴耳環(huán)95%乙醇提取物與阿米卡星聯(lián)用FIC均<2表明兩藥沒有拮抗作用，其中 40%FIC<0.5呈協(xié)同作用；對20株多重耐藥多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)95%乙醇提取 物在濃度彡單用MIC時，使阿米卡星MIC50從單用的lμg/ml降至0.12μg/ml，降低了87.5% ; 1〇〇90從32以8/1111降至4以8/1111，降低87.5%;
[0205]猴耳環(huán)95%乙醇提取物與亞胺培南聯(lián)用后FIC均<2表明兩藥沒有拮抗作用，其中 40%FIC<0.5呈協(xié)同作用；對20株多重耐藥多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)95%乙醇提取 物在濃度彡單用MIC時，使亞胺培南MIC50從單用的32μg/ml降至4μg/ml，降低了 75%;MIC90 從64μg/ml降至 16μg/ml，降低75% ;
[0206]猴耳環(huán)95%乙醇提取物與左氧氟沙星聯(lián)用抗20株多重耐藥銅綠假單胞菌，F(xiàn)IC均 <2表明兩藥無拮抗作用，其中10%FIC值<0.5表明兩藥有一定程度的協(xié)同作用;對20株多 重耐藥多重耐藥銅綠假單胞菌，猴耳環(huán)15%乙醇提取物在濃度 < 單用MIC時，使左氧氟沙星 10〇50從單用的4以8/1111降至叫8/1111，降低了75%;]\0090從32以8/1111降至4以8/1111，降低87.5%。
【主權項】
1. 猴耳環(huán)提取物在制備抗多重耐藥銅綠假單胞菌藥物中的應用。2. 猴耳環(huán)提取物在制備抗生素抗多重耐藥銅綠假單胞菌增敏藥物中的應用。3. 如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述的抗生素是左氧氟沙星或亞胺培南或阿 米卡星或頭孢他啶或頭孢哌酮。4. 如權利要求1或2或3所述的應用，其特征在于，所述的猴耳環(huán)提取物是猴耳環(huán)水提取 物或猴耳環(huán)乙醇提取物。5. 如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述的猴耳環(huán)水提取物水或猴耳環(huán)乙醇提取 物由以下方法制備:猴耳環(huán)粗粉用水或乙醇水溶液提取，所得的提取液再用乙酸乙酯萃取， 所得的萃取物即為目標產(chǎn)品。6. 如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述的乙醇水溶液是按體積比計濃度為 10%-95%的乙醇水溶液。7. 如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述的乙醇水溶液是按體積比計濃度為60 % 的乙醇水溶液。
【文檔編號】A61K36/48GK105963339SQ201610308716
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月10日
【發(fā)明人】王永剛, 劉翀, 周倩, 李沛波, 蘇薇薇, 彭維
【申請人】中山大學