一種可吸收抗菌止血微球、制備方法及其應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種可吸收抗菌止血微球及其可吸收抗菌止血微球的制備方法和應(yīng)用。可吸收抗菌止血微球包括羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠和溶菌酶，對(duì)大出血?jiǎng)?chuàng)面快速止血，防止創(chuàng)面細(xì)菌感染；生物相容性好，可降解吸收，促進(jìn)傷口愈合。本發(fā)明還公開(kāi)了上述復(fù)合抗菌可吸收止血微球在用于新西蘭兔肝臟半切除止血應(yīng)用的效果。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種可吸收抗菌止血微球、制備方法及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種可吸收抗菌止血微球及其可吸收抗菌止血微球的制備方法。
[0002] 發(fā)明背景 止血敷料在止血?jiǎng)┲蟹N類(lèi)最多，應(yīng)用最為廣泛。其中以干纖維蛋白敷料、沸石敷料、殼 聚糖類(lèi)敷料等特別具有代表性。
[0003] 干纖維蛋白敷料主要將纖維蛋白和凝血酶加入紗布中制成，改善標(biāo)準(zhǔn)紗布的止血 效果。止血機(jī)理是為凝血反應(yīng)提供外源性底物。材料成分可吸收，止血效果穩(wěn)定，但造價(jià)不 斐，價(jià)格在500-1000美元。成份來(lái)源、材料本身脆弱性、微生物滅活技術(shù)問(wèn)題和高昂的價(jià)格， 限制了該類(lèi)敷料的應(yīng)用。
[0004] 沸石敷料主要由內(nèi)含氧化硅、氧化鋁、氧化鎂、氧化鈉等礦物的分子篩粉末制成， 通過(guò)吸收創(chuàng)傷處水分從而提高局部凝血因子、血小板、紅細(xì)胞濃度從而促進(jìn)止血，代表性產(chǎn) 品是QuikClot。優(yōu)點(diǎn)是效果明顯、穩(wěn)定、價(jià)格低廉，缺點(diǎn)是不適合高壓止血，且發(fā)揮止血作用 時(shí)會(huì)放出熱量，從而造成組織灼傷。
[0005] 殼聚糖類(lèi)止血敷料目前在敷料市場(chǎng)占據(jù)主導(dǎo)地位，其產(chǎn)品止血效果好。其止血機(jī) 制是促進(jìn)血管收縮、激活血紅細(xì)胞中的凝血因子、促進(jìn)血小板聚集到受傷部位從而啟動(dòng)人 體凝血機(jī)制，其止血速度快于纖維蛋白膠。
[0006] 近年國(guó)內(nèi)外研制的止血?jiǎng)┗蛑寡罅虾芏?，其中也不乏含抗菌性能的止血敷料?但是大部分產(chǎn)品是利用材料進(jìn)行抗生素類(lèi)藥物的載藥復(fù)合或是復(fù)合抗菌作用的金，銀，碘 等抗菌粒子。然而，抗生素類(lèi)藥物的復(fù)合雖然可以減少口服或注射抗生素的用量，卻不可避 免抗生素長(zhǎng)久使用的耐藥性問(wèn)題;更重要的是以銀、碘等抗菌粒子復(fù)合的止血敷料，不可被 人體吸收和降解，僅限于體表皮膚的使用，不適合作為體內(nèi)使用的止血敷料，從而無(wú)法滿(mǎn)足 許多重要臨床手術(shù)和醫(yī)用急救的特殊止血處理。
[0007] 中國(guó)專(zhuān)利201410384076.9公開(kāi)了一種抗菌促愈合活性的復(fù)合止血粉及其制備方 法，涉及一種以埃洛石納米管負(fù)載溶菌酶并且復(fù)合了殼聚糖的止血粉劑材料。該種材料希 望利用埃洛石和殼聚糖發(fā)揮無(wú)機(jī)、有機(jī)材料各自?xún)?yōu)點(diǎn)起到止血?dú)⒕饔?，但正如其所述?洛石納米管作為無(wú)機(jī)材料，主要成分為氧化硅、氧化鋁以及少量其他金屬氧化物，該類(lèi)成分 在體內(nèi)很難被降解吸收，也不能被溶菌酶水解從而發(fā)揮協(xié)同作用，因此不宜作為止血粉劑 用于體內(nèi)止血。
[0008] 因此，本發(fā)明希望通過(guò)研制一種復(fù)合抗菌止血?jiǎng)?，且止血?jiǎng)┛捎糜隗w內(nèi)并能快速 降解吸收。本發(fā)明采用一種羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠、溶菌酶為原料的復(fù)合抗菌止血 材料，利用溶菌酶的水解酶特點(diǎn)，既起到抗菌、止血作用同時(shí)在止血后的體液環(huán)境下，降解 羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉和明膠這些止血抗菌有效成分，利用羧甲基殼聚糖和海藻酸鈉均 為聚多糖可被水解的性質(zhì)，以及明膠為氨基酸肽鏈也可被水解的性質(zhì)，從而起到止血材料 在體內(nèi)可快速降解吸收的效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種理想的復(fù)合抗菌可吸收止血粉劑材料:包括羧甲 基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠和溶菌酶，對(duì)大出血?jiǎng)?chuàng)面快速止血，防止創(chuàng)面細(xì)菌感染;生物相容 性好，可降解吸收，促進(jìn)傷口愈合。
[0010] 優(yōu)選地，所述的羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠和溶菌酶的質(zhì)量比為：1~5:0.1~1: 0.005~0.05:0.005~0.1 〇
[0011] 進(jìn)一步優(yōu)選，所述的羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠和溶菌酶的質(zhì)量比為：1~5:0.1 ~I:0.005~0.05:0.01~0.02。
[0012] 特別優(yōu)選，所述的羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠和溶菌酶的質(zhì)量比為：1.5:0.5: 0.025:0.01~0.02。
[0013] 最優(yōu)選，所述的羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠和溶菌酶的質(zhì)量比為：1.5 :0.5: 0.025:0.01-0.02 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種復(fù)合溶菌酶止血微球的制備方法。
[0014] 本發(fā)明提供的各種復(fù)合抗菌止血微球，由如下方法制得： (1) 制備基質(zhì)溶液:稱(chēng)取一定質(zhì)量單位比的羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠(1~5:0.1~1: 0.005~0.05)，加入10~100倍的蒸餾水，在水浴中加熱至凝膠狀水溶液； (2) 混合:將制備的基質(zhì)溶液加入到含分散劑的乳化劑中，強(qiáng)力攪拌，分散劑與基質(zhì)溶 液的體積比或質(zhì)量比，ml/ml或g/g，為0.1~3.0: 1，乳化劑與基質(zhì)溶液的體積比或質(zhì)量比， ml/ml或g/g，為0.01~0.30: 1; (3) 乳化交聯(lián)共聚：加入交聯(lián)劑，交聯(lián)劑與基質(zhì)液的體積比或質(zhì)量比，ml/ml或g/g，為 0.05~1.0: 1;反應(yīng)時(shí)間為1~12小時(shí)，反應(yīng)完畢后，停止攪拌，出料； (4) 粗制:料液分層后，傾出油相，加入洗滌劑，反復(fù)洗滌;最后抽濾。
[0015] (5)干燥:將過(guò)濾后的微球粗樣中加入稀釋液，微球粗樣與稀釋液的質(zhì)量體積比或 質(zhì)量比，g/ml或g/g，為1:10~200。將濕樣通過(guò)離心噴霧干燥和真空干燥。
[0016] (6)共混:溶菌酶干粉與微球共混合，加入溶菌酶的質(zhì)量為/g，羧甲基殼聚糖、海藻 酸鈉、明膠和溶菌酶的質(zhì)量比為g/g: 1~5:0.1~1:0.005~0.05:0.005~0.1，密封包裝，無(wú)菌處 理。
[0017] 進(jìn)一步優(yōu)選，所述的羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠和溶菌酶的質(zhì)量比為g/g:l~5: 0.1-1:0.005-0.05:0.01-0.02〇
[0018] 特別優(yōu)選，所述的羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠和溶菌酶的質(zhì)量比為g/g: 1.5: 0.5:0.025:0.01~0.02。
[0019] 最優(yōu)選，所述的羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠和溶菌酶的質(zhì)量比為g/g: 1.5:0.5: 0.025:0.01~0.02。
[0020] 上述本發(fā)明提供的復(fù)合抗菌可吸收止血微球所用的分散劑優(yōu)選如下:不僅限于液 體石蠟、大豆油、乙酸乙酯、乙醇、蓖麻油、甘油酯脂肪酸等，可以單獨(dú)或混合適用于本發(fā)明。
[0021] 上述本發(fā)明提供的復(fù)合抗菌可吸收止血微球所用的乳化劑優(yōu)選如下:不僅限于司 班系列和吐溫系列等，可以單獨(dú)或混合適用于本發(fā)明。
[0022] 上述本發(fā)明提供的復(fù)合抗菌可吸收止血微球所用的交聯(lián)劑優(yōu)選如下:不僅限于甲 醛、環(huán)氧氯丙烷、氯化鈣、戊二醛、三氯氧磷、三偏磷酸鈉等，可以單獨(dú)或混合適用于本發(fā)明。 [0023]上述本發(fā)明的復(fù)合抗菌可吸收止血微球，所述的洗滌劑優(yōu)選為蒸餾水、乙酸乙酯、 乙醇、丙酮、甲醇和石油醚中的一種以上。
[0024]上述本發(fā)明的復(fù)合抗菌可吸收止血微球，所述的稀釋劑優(yōu)選為蒸餾水、乙酸乙酯、 乙醇、丙酮、甲醇和石油醚等，可以單獨(dú)或混合適用于本發(fā)明。
[0025] 上述步驟(5)中微球干燥完成后，體積平均粒徑5-100 μπι。
[0026] 上述步驟(6)中共混通過(guò)鼓風(fēng)氣流共混。
[0027] 本發(fā)明還公開(kāi)了上述復(fù)合抗菌可吸收止血微球在用于新西蘭兔肝臟半切除止血 應(yīng)用的效果。
[0028]本發(fā)明的作用機(jī)理為:可吸收抗菌止血微球是一種干燥、無(wú)菌、具有微米和納米孔 徑、球狀的微粒，添加易降解的溶菌酶作為抗菌成分，具有極強(qiáng)的吸水性能，通過(guò)濃縮血液 的固形成分，提高血小板聚集、粘附，從而激活血小板發(fā)揮凝血作用，并激發(fā)纖維蛋白原形 成蛋白纖維，加快了蛋白網(wǎng)形成止血塞的過(guò)程和穩(wěn)定性。體外降解實(shí)驗(yàn)表明，材料的降解迅 速，在24小時(shí)內(nèi)即完成降解。材料的抑菌實(shí)驗(yàn)表明，材料的抑菌效果明顯;進(jìn)行的動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 表明，其止血迅速。
[0029] 本發(fā)明可吸收抗菌止血微球具有以下有益效果：1.止血時(shí)間短:一般1-2分鐘完成 止血;2.利用溶菌酶水解酶的特點(diǎn)，羧甲基殼聚糖和海藻酸鈉以及明膠可被水解的性質(zhì)，止 血材料降解速度快;3.有效抑菌，防止傷口感染;4.使用方便:將止血粉噴灑于創(chuàng)面出血處 即可;5.易儲(chǔ)存，保存時(shí)間長(zhǎng)。因此，復(fù)合抗菌可吸收止血微球?qū)⑹且环N理想的外科止血?jiǎng)?br>【具體實(shí)施方式】
[0030] 實(shí)施例1 1、基質(zhì)溶液制備:將1.5 g海藻酸鈉、0.5 g羧甲基殼聚糖和0.025 g明膠加入到100 ml 水中溶解，制成基質(zhì)溶液；2、物料混合：250 ml液體石蠟與18 ml吐溫80混合，加入基質(zhì)溶 液，以及2% w/w氯化媽10 ml，并伴以快速攪拌，以進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)制得微球。3、精制:料液分 層后，傾出上層油相，棄去，向下層液體中加入無(wú)水乙醇500ml，攪拌，去上清，重復(fù)洗滌2~3 次。抽濾，加入30 ml蒸餾水稀釋進(jìn)行噴霧干燥，獲得5~60 μπι左右的微球。在微球中加入溶 菌酶0.01 g，鼓風(fēng)氣流共混，真空干燥、無(wú)菌處理后密封包裝。
[0031] 實(shí)施例2 1、基質(zhì)溶液制備:將1.5 g海藻酸鈉、0.5 g羧甲基殼聚糖和0.025 g明膠加入到100 ml 水中溶解，制成基質(zhì)溶液;2、物料混合:100 g脂肪酸與18 ml吐溫80混合，加入基質(zhì)溶液，以 及2% w/w氯化鈣10 ml，并伴以快速攪拌，以進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)制得微球。3、精制:料液分層后， 傾出上層油相，棄去，向下層液體中加入無(wú)水乙醇500ml，攪拌，去上清，重復(fù)洗滌2~3次。抽 濾，加入30 ml蒸餾水稀釋進(jìn)行噴霧干燥，獲得5~60 μπι左右的微球，真空干燥、無(wú)菌處理后 密封包裝(無(wú)溶菌酶，空白對(duì)照組）。
[0032] 實(shí)施例3 1、基質(zhì)溶液制備:將1.5 g海藻酸鈉、0.5 g羧甲基殼聚糖和0.025 g明膠加入到100 ml 水中溶解，制成基質(zhì)溶液;2、物料混合:200 ml蓖麻油與18 ml吐溫80混合，加入基質(zhì)溶液， 以及2% w/w氯化媽10 ml，并伴以快速攪拌，以進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)制得微球。3、精制:料液分層 后，傾出上層油相，棄去，向下層液體中加入無(wú)水乙醇500ml，攪拌，去上清，重復(fù)洗滌2~3 次。抽濾，加入50 ml的5%乙醇稀釋進(jìn)行噴霧干燥，獲得5~60 μπι左右的微球。在微球中加入 溶菌酶O. Ol g，鼓風(fēng)氣流共混，真空干燥、無(wú)菌處理后密封包裝。
[0033] 實(shí)施例4 1、基質(zhì)溶液制備:將1.5 g海藻酸鈉、0.5 g羧甲基殼聚糖和0.025 g明膠加入到100 ml 水中溶解，制成基質(zhì)溶液；2、物料混合：250 ml液體石蠟與18 ml吐溫80混合，加入基質(zhì)溶 液，以及2% w/w氯化媽10 ml，并伴以快速攪拌，以進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)制得微球。3、精制:料液分 層后，傾出上層油相，棄去，向下層液體中加入無(wú)水乙醇500ml，攪拌，去上清，重復(fù)洗滌2~3 次。抽濾，加入30 ml蒸餾水稀釋進(jìn)行噴霧干燥，獲得5~60 μπι左右的微球。在微球中加入溶 菌酶0.02 g，鼓風(fēng)氣流共混，真空干燥、無(wú)菌處理后密封包裝。
[0034] 實(shí)施例5 1、基質(zhì)溶液制備:將1.5 g海藻酸鈉、0.5 g羧甲基殼聚糖和0.025 g明膠加入到100 ml 水中溶解，制成基質(zhì)溶液；2、物料混合：250 ml液體石蠟與18 ml吐溫80混合，加入基質(zhì)溶 液，以及2% w/w氯化媽10 ml，并伴以快速攪拌，以進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)制得微球。3、精制:料液分 層后，傾出上層油相，棄去，向下層液體中加入無(wú)水乙醇500ml，攪拌，去上清，重復(fù)洗滌2~3 次。抽濾，加入50 ml的5%乙醇稀釋進(jìn)行噴霧干燥，獲得5~60 μπι左右的微球。在微球中加入 溶菌酶0.02 g，鼓風(fēng)氣流共混，真空干燥、無(wú)菌處理后密封包裝。
[0035] 實(shí)施例6 1、基質(zhì)溶液制備:將1.5 g海藻酸鈉、0.5 g羧甲基殼聚糖和0.025 g明膠加入到100 ml 水中溶解，制成基質(zhì)溶液；2、物料混合：250 ml液體石蠟與18 ml吐溫80混合，加入基質(zhì)溶 液，以及2% w/w氯化媽10 ml，并伴以快速攪拌，以進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)制得微球。3、精制:料液分 層后，傾出上層油相，棄去，向下層液體中加入無(wú)水乙醇500ml，攪拌，去上清，重復(fù)洗滌2~3 次。抽濾，加入30 ml蒸餾水稀釋進(jìn)行噴霧干燥，獲得5~60 μπι左右的微球。在微球中加入溶 菌酶0.005 g，鼓風(fēng)氣流共混，真空干燥、無(wú)菌處理后密封包裝。
[0036] 實(shí)施例7 1、基質(zhì)溶液制備:將1.5 g海藻酸鈉、0.5 g羧甲基殼聚糖和0.025 g明膠加入到100 ml 水中溶解，制成基質(zhì)溶液；2、物料混合：250 ml液體石蠟與18 ml吐溫80混合，加入基質(zhì)溶 液，以及2% w/w氯化媽10 ml，并伴以快速攪拌，以進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)制得微球。3、精制:料液分 層后，傾出上層油相，棄去，向下層液體中加入無(wú)水乙醇500ml，攪拌，去上清，重復(fù)洗滌2~3 次。抽濾，加入50 ml的5%乙醇稀釋進(jìn)行噴霧干燥，獲得5~60 μπι左右的微球。在微球中加入 溶菌酶0.005 g，鼓風(fēng)氣流共混，真空干燥、無(wú)菌處理后密封包裝。
[0037] 實(shí)施例8 1、基質(zhì)溶液制備:將1.5 g海藻酸鈉、0.5 g羧甲基殼聚糖和0.025 g明膠加入到100 ml 水中溶解，制成基質(zhì)溶液；2、物料混合：250 ml液體石蠟與18 ml吐溫80混合，加入基質(zhì)溶 液，以及2% w/w氯化媽10 ml，并伴以快速攪拌，以進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)制得微球。3、精制:料液分 層后，傾出上層油相，棄去，向下層液體中加入無(wú)水乙醇500ml，攪拌，去上清，重復(fù)洗滌2~3 次。抽濾，加入50 ml的5%乙醇稀釋進(jìn)行噴霧干燥，獲得5~60 μπι左右的微球。在微球中加入 溶菌酶0.03 g，鼓風(fēng)氣流共混，真空干燥、無(wú)菌處理后密封包裝。
[0038] 實(shí)施例9 1、基質(zhì)溶液制備:將1.5 g海藻酸鈉、0.5 g羧甲基殼聚糖和0.025 g明膠加入到100 ml 水中溶解，制成基質(zhì)溶液；2、物料混合：250 ml液體石蠟與18 ml吐溫80混合，加入基質(zhì)溶 液，以及2% w/w氯化媽IO ml，并伴以快速攪拌，以進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)制得微球。3、精制:料液分 層后，傾出上層油相，棄去，向下層液體中加入無(wú)水乙醇500ml，攪拌，去上清，重復(fù)洗滌2~3 次。抽濾，加入30 ml蒸餾水稀釋進(jìn)行噴霧干燥，獲得5~60 μπι左右的微球。在微球中加入溶 菌酶0.1 g，鼓風(fēng)氣流共混，真空干燥、無(wú)菌處理后密封包裝。
[0039] 實(shí)施例10 1、基質(zhì)溶液制備:將1.5 g海藻酸鈉、0.5 g羧甲基殼聚糖和0.025 g明膠加入到100 ml 水中溶解，制成基質(zhì)溶液；2、物料混合：250 ml液體石蠟與18 ml吐溫80混合，加入基質(zhì)溶 液，以及2% w/w氯化媽10 ml，并伴以快速攪拌，以進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)制得微球。3、精制:料液分 層后，傾出上層油相，棄去，向下層液體中加入無(wú)水乙醇500ml，攪拌，去上清，重復(fù)洗滌2~3 次。抽濾，加入50 ml的5%乙醇稀釋進(jìn)行噴霧干燥，獲得5~60 μπι左右的微球。在微球中加入 溶菌酶0.1 g，鼓風(fēng)氣流共混，真空干燥、無(wú)菌處理后密封包裝。
[0040] 測(cè)試?yán)?1)吸水倍率和降解分析 對(duì)實(shí)施例1-5的產(chǎn)品進(jìn)行吸水倍率檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示。
[0041] 稱(chēng)取0.01 g樣品分別加入多個(gè)離心管中，稱(chēng)取空管重量(Wo,單位g)，加入I ml PBS混勻在37度下，待止血粉溶脹每10 min后離心去上清留沉淀，瀝干后稱(chēng)總重（W1, W2. .. .Wn，單位g)，直至材料完全溶脹，重量不再發(fā)生明顯變化，即時(shí)停止。
[0042]對(duì)實(shí)施例6-10按照實(shí)施例1-5相同的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行吸水率測(cè)試，由于實(shí)施例6-7中溶菌 酶的加入量較少，其吸水率相對(duì)維持在較高的水平，分別為9110和9200,實(shí)施例8中制備止 血微球的吸水倍率為5950，相應(yīng)地實(shí)施例9-10中加入的溶菌酶量較多，其吸水率明顯下降， 分別為2800和3180。
[0043]在完成吸水倍率實(shí)驗(yàn)后，立即進(jìn)行降解實(shí)驗(yàn)。我們記錄隨著時(shí)間延長(zhǎng)吸收倍率的 變化，我們以每30 min后離心去上清留沉淀，瀝干后稱(chēng)總重（W'^W'2....W'n，單位g)，直至 材料完全降解或?qū)嶒?yàn)超過(guò)48小時(shí)。
[0044]從吸水倍率和降解時(shí)間實(shí)驗(yàn)可以看出，當(dāng)溶菌酶加入的質(zhì)量在0.Olg和0.02g時(shí)， 本發(fā)明的微球的在止血時(shí)其吸水倍率和降解效果均可以維持在較為理想的效果，實(shí)施例9-10中溶菌酶用量較大時(shí)表現(xiàn)出降解速度過(guò)快相應(yīng)地表現(xiàn)出的吸水效果不夠理想。
[0045])抑菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè) 目的通過(guò)微量肉湯濃度梯度稀釋法檢測(cè)評(píng)價(jià)可吸收抗菌止血微球抗菌活性。
[0046]方法在已滅菌的96孔板中加入100 μL MH肉湯培養(yǎng)基，然后在第1孔中加入100 μL溶菌酶溶液，從第2孔至第10孔加入不同梯度濃度的復(fù)合微球溶液，第11孔不加藥作為對(duì) 照，第12孔只加培養(yǎng)基做為對(duì)照。將培養(yǎng)過(guò)夜的菌液用滅過(guò)菌的生理鹽水制備成濃度相當(dāng) 于0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)的菌懸液，經(jīng)MHB 1:1000稀釋后，向96孔板每孔加入100 μL。加蓋，37°C 恒溫培養(yǎng)箱中，靜置培養(yǎng)18 h。每種微球設(shè)置三個(gè)平行實(shí)驗(yàn)。置于分光光度計(jì)中測(cè)量OD6〇〇 吸收值，以無(wú)菌對(duì)照組的OD值為參照，測(cè)定抗菌蛋白的最低抑菌濃度。結(jié)果如下表2: 表2可吸收抗菌止血微球抗菌活性(濃度單位為μg/ml)
3)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè) 目的通過(guò)觀察、評(píng)價(jià)可吸收抗菌止血微球?qū)π挛魈m兔肝臟局部切除后的創(chuàng)面止血效 果。
[0047] 方法新西蘭兔12只，體重2.5~3.0 kg，隨機(jī)分為空白對(duì)照組和給藥組，每組6只（3 早/好)，戊巴比妥注射耳緣靜脈麻醉，腹部消毒，于肋弓下沿腹中線作一縱行切口，沿腹中 線剪開(kāi)腹肌，逐層進(jìn)入腹腔，暴露肝臟中葉，用無(wú)菌紗布將肝中葉表面液體吸干，用手術(shù)刀 片在肝中葉切一半肝臟，創(chuàng)面血液迅速外滲且出血活躍著為模型成功;立即將0.50 g止血 材料噴灑創(chuàng)面并開(kāi)始計(jì)時(shí)，覆蓋無(wú)菌紗布，然后每隔30 s觀察創(chuàng)面出血情況，直至出血停止 或出血超過(guò)10 min，以去除紗布不出血為止血。記錄止血時(shí)間和出血量，出血量為覆蓋創(chuàng)面 無(wú)菌紗布前后重量差，并觀察止血材料與創(chuàng)面的粘合情況。
[0048] 結(jié)果與空白對(duì)照組比較，用藥組新西蘭兔止血時(shí)間明顯縮短，且差異具有統(tǒng)計(jì)意 義(p〈〇. 05)，具有良好止血效果。
[0049] 表2可吸收抗菌止血微球在新西蘭兔肝臟半切除模型上的止血試驗(yàn)(itf，n=6)
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種可吸收抗菌止血微球，包括羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠和溶菌酶。2. 如權(quán)利要求1所述的可吸收抗菌止血微球，其特征在于，所述的羧甲基殼聚糖、海藻 酸鈉、明膠和溶菌酶的質(zhì)量比為：1~5:0 · 1~1:0 · 005~0 · 05:0 · 005~0 · 1。3. 如權(quán)利要求2所述的可吸收抗菌止血微球，所述的羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、明膠和 溶菌酶的質(zhì)量比為：1~5:0 · 1~1:0 · 005~0 · 05:0 · 01~0 · 02。4. 如權(quán)利要求3所述的可吸收抗菌止血微球，其特征在于，所述微球的平均粒徑5-100μ m〇5. -種可吸收抗菌止血微球的制備方法，其特征在于具體包括如下步驟： (1) 制備基質(zhì)溶液:稱(chēng)取質(zhì)量比為1~5:0.1~1:0.005~0.05的羧甲基殼聚糖、海藻酸鈉、 明膠，加入10-100倍的蒸餾水，在水浴中加熱至凝膠狀水溶液； (2) 混合:將制備的基質(zhì)溶液加入到含分散劑的乳化劑中，強(qiáng)力攪拌，分散劑與基質(zhì)溶 液的體積比或質(zhì)量比，ml/ml或g/g為0.1~3.0: 1，乳化劑與基質(zhì)溶液的體積比或質(zhì)量比ml/ ml或g/g，為0.01~0.30: 1; (3) 乳化交聯(lián)共聚：加入交聯(lián)劑，交聯(lián)劑與基質(zhì)液的體積比或質(zhì)量比，ml/ml或g/g為 0.05~1.0: 1;反應(yīng)時(shí)間為1~12小時(shí)，反應(yīng)完畢后，停止攪拌，出料； (4) 粗制:料液分層后，傾出油相，加入洗滌劑，反復(fù)洗滌;最后抽濾； (5) 干燥:將過(guò)濾后的微球粗樣中加入稀釋液，微球粗樣與稀釋液的質(zhì)量體積比或質(zhì)量 比，g/ml或g/g，為1:10~200，將濕樣通過(guò)離心噴霧干燥和真空干燥； (6) 共混:溶菌酶干粉與微球共混合，加入溶菌酶的質(zhì)量為g/g，羧甲基殼聚糖、海藻酸 鈉、明膠和溶菌酶的質(zhì)量比為:1~5:0.1~1:0.005~0.05:0.005~0.1;密封包裝，無(wú)菌處理。6. 如權(quán)利要求5所述的可吸收抗菌止血微球的制備方法，其特征在于，羧甲基殼聚糖、 海藻酸鈉、明膠和溶菌酶的質(zhì)量比為:1.5:0.5:0.025:0.02。7. 如權(quán)利要求5所述的可吸收抗菌止血微球的制備方法，其特征在于，步驟(5)中所述 稀釋液為蒸餾水或5%的乙醇溶液。8. 如權(quán)利要求5-7所述的可吸收抗菌止血微球的制備方法，其特征在于，步驟(5)中干 燥后獲得的所述微球的平均粒徑為5-100μπι。9. 如權(quán)利要求5-7所述的可吸收抗菌止血微球的制備方法，其特征在于，步驟(6)中的 共混合方式為通過(guò)鼓風(fēng)氣流共混。10. 如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的可吸收抗菌止血微球在制備止血材料中應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61L24/04GK105963766SQ201610526892
【公開(kāi)日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年7月6日
【發(fā)明人】金甲, 楊玉民, 葉飛
【申請(qǐng)人】浙江理工大學(xué), 浙江三創(chuàng)生物科技有限公司