香沒藥樹子抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥香沒藥樹子抗腫瘤有效提取物及其組合物的制備方法和其在腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝癌等惡性腫瘤的預(yù)防及治療上的用途。所述的提取物通過如下方法獲得：維吾爾藥香沒藥樹子經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100:4的石油醚：丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比100:8的石油醚：丙酮混合溶劑洗脫，石油醚：丙酮100:8混合溶劑洗脫液干燥后即得；或先用體積比100:10的石油醚：丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比0:100的石油醚：丙酮混合溶劑洗脫，石油醚：丙酮0:100混合溶劑洗脫液干燥后即得。
【專利說明】
香沒藥樹子抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和醫(yī)藥用 途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種維吾爾藥香沒藥樹子抗腫瘤提取物及其組 合物的制備方法以及其在制備預(yù)防及治療腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、 宮頸癌、肝癌等惡性腫瘤的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 本品為橄欖科植物，學(xué)名Myrrha。香沒藥樹子主要分布于索馬里和埃塞俄比亞等 干旱地區(qū)，分布較為局限?；瘜W(xué)成分：揮發(fā)油類及樹脂類化合物，但對樹膠類成分的研究以 及對其化學(xué)成分進(jìn)行藥理活性物質(zhì)篩選的研究較少，未見關(guān)于雜質(zhì)、水分灰分等純度質(zhì)量 標(biāo)準(zhǔn)的研究。
[0003] 香沒藥樹子具有活血祛瘀，消腫止痛，通經(jīng)生血等功效，主治淤血作痛，跌打損傷， 腸癰腹痛，皮膚諸癥。臨床主要用于前列腺癌、急慢性炎癥、血瘀腫痛等的治療，本發(fā)明在 深入地研究香沒藥樹子的抗癌活性時意外地發(fā)現(xiàn)，香沒藥樹子除了具有抗前列腺癌的功效 外，亦具有很好的腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、宮頸癌、肝癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌等惡性腫瘤 的預(yù)防及治療作用，可以應(yīng)用到多種癌癥的預(yù)防和治療上。
[0004] 但是，對其抗腫瘤的有效成分一直不清楚，本發(fā)明通過系統(tǒng)地篩選研究，發(fā)現(xiàn)了香 沒藥樹子的有效提取物具有顯著的抗腫瘤活性，可以應(yīng)用于腫瘤的預(yù)防和治療。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種香沒藥樹子提取物。
[0006] 本發(fā)明還提供了以香沒藥樹子提取物為主要活性成分的組合物。
[0007] 本發(fā)明同時提供了香沒藥樹子提取物及其組合物的制備和在制備抗腫瘤藥物中 的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0009] 維吾爾藥香沒藥樹子經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅 膠柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫（石油醚：乙酸乙酯，比例見表1)，各石油醚： 乙酸乙酯比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測試其抗腫瘤 活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100 :〇-1〇〇: 4,體積 比）洗脫，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:5-100:8,體積比）洗 脫，石油醚：乙酸乙酯=100:5-100:8洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性，即，抗腫瘤活 性的化合物，可以通過以上方法，得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該活性提取物 從未見文獻(xiàn)報道，其100:5-100:8洗脫液干燥產(chǎn)物的TLC分析表征如圖1。
[0010] 維吾爾藥香沒藥樹子經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅 膠柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫（石油醚：乙酸乙酯，比例見表1)，各石油醚： 乙酸乙酯比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測試其抗腫瘤 活性，意外地發(fā)現(xiàn)先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:10,體積比）洗 脫，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:12-0:100,體積比）洗脫，石 油醚：乙酸乙酯=100:12-0:100洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性，即，抗腫瘤活性的 化合物，可以通過以上方法，得到富集，從而與其他雜質(zhì)類成分分離開。該活性部位從未見 文獻(xiàn)報道，其100:12-0:100洗脫液干燥產(chǎn)物的TLC分析表征如圖2。
[0011] 具體，發(fā)現(xiàn)過程如下：
[0012] 1、維吾爾藥香沒藥樹子經(jīng)溶劑超聲提取物的制備
[0013] 取維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取 物乙酸乙酯樣品I. 2134g，拌樣硅膠I. 5g，空白硅膠10g，石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)。
[0014] 2、石油醚：乙酸乙酯混合溶劑梯度洗脫方法和結(jié)果
[0015] 取維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物 1.2134g，留樣0. 1568g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅膠柱色譜，拌樣硅膠1.5g， 空白硅膠l〇g，玻璃柱內(nèi)徑2. 0cm，石油醚：乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫（條件見表1)，柱體積 25ml，每個梯度洗脫200ml，得到，各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，石油醚： 乙酸乙酯梯度洗脫提取物，收率見表1，TLC分析結(jié)果見圖3。
[0016] 表 1
[0019] 3、抗腫瘤活性篩選方法和結(jié)果
[0020] 1)實(shí)驗(yàn)條件
[0021] a)細(xì)胞株信息
[0022] 大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞購于中國典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫
[0023] b)藥品及試劑
[0024] 樣品無菌條件下，DMSO溶解配置成母液濃度為100mg/mL，使用時用RPMI-1640培 養(yǎng)液稀釋至所需濃度（DMSO彡1%。）。
[0025] RPMI Medium 1640培養(yǎng)基干粉購于美國GIBCO公司。胎牛血清購于北京元亨圣馬 生物技術(shù)研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴鹽（MTT)。
[0026] c)儀器
[0027] CO2培養(yǎng)箱（SANYO,日本）
[0028] 垂直層流潔凈工作臺（上海上凈凈化設(shè)備有限公司）
[0029] 倒置生物顯微鏡（重慶光電儀器有限公司）
[0030] 低/高速臺式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）
[0031] 電子天平（奧豪斯儀器有限公司）
[0032] 酶標(biāo)儀（伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司）
[0033] 立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）
[0034] 鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）
[0035] PH 計（SART0RIUS，德國）
[0036] 2)實(shí)驗(yàn)方法和過程
[0037] 大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞以4000/孔的密度鋪于96孔板，每孔100ul，12h后使用。 各組分以DMSO溶解為lOOmg/mL儲存液，保存于-20°C待用。鋪板后12h，觀察細(xì)胞匯合率 約為40%，加藥，濃度均為100 μ g/mL，每個組分3個復(fù)孔。每板細(xì)胞設(shè)立二個對照組（培 養(yǎng)基+細(xì)胞；含〇. 1 % DMSO培養(yǎng)基+細(xì)胞），3個空白孔（只有培養(yǎng)基）。加入藥物24小 時后，加入20 μ 1四甲基偶氮唑鹽化學(xué)名為3-(4, 5-二甲基噻唑）-2, 5-二苯基四氮唑溴鹽 (3_(4, 5-dimethyl_2thiazolyl)-2, 5-diphenyl-tetrazolium bromide，ΜΤΤ)，繼續(xù)培養(yǎng) 4 小時。完全棄去上清液，加入100 μ I DMS0,混勻使MTT完全溶解，去氣泡。490nm測定OD 值。
[0038]
[0039] 3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0040] 表 2 [0041 ]
[0044] 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案為：維吾爾藥香沒藥樹子經(jīng)溶劑超聲提取，提 取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:4,體積比）洗脫，繼用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:8， 體積比）洗脫，石油醚：乙酸乙酯=100:8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，得到高活性提取 物，即為該抗腫瘤的提取物。該活性部位從未見文獻(xiàn)報道，其100:8洗脫液的TLC分析表征 如圖1。
[0045] 維吾爾藥香沒藥樹子經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅 膠柱，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:10,體積比）洗脫，繼用石 油醚-乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:12-0:100,體積比）洗脫，石油醚：乙酸 乙酯=100:12-0:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，得到高活性提取物，即為該抗腫瘤的 提取物。該活性部位從未見文獻(xiàn)報道，其〇: 100洗脫液的TLC分析表征如圖2。
[0046] 4、抗腫瘤有效提取物的提取方法研究
[0047] 1)提取溶劑的種類研究
[0048] 分別用甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑 等有機(jī)溶劑提取，并測試提取物的C6抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0049]表 3
[0051] 研究結(jié)果表明：提取用有機(jī)溶劑可以為甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、乙酸乙酯、甲 醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑。
[0052] 2)提取溶劑的用量研究
[0053] 分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍（重量/體積比）有機(jī)溶劑提取，并測試提取物 對C6細(xì)胞的抗腫瘤活性，結(jié)果如下：
[0054] 表 4
[0058] 提取物提取用有機(jī)溶劑用量為藥材重量的2-50倍（重量/體積比）。
[0059] 3)干燥方法的研究
[0060] 分別用真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干燥法等方法，對得到 的抗腫瘤活性提取物進(jìn)行干燥，以含水量、TLC、活性測試為指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)真空干燥法、冷凍干 燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干燥法適用于對C6細(xì)胞抗腫瘤活性提取物進(jìn)行干燥，其 中，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0061] 表 5
[0063] 優(yōu)選地，香沒藥樹子抗腫瘤提取物的制備方法為：
[0064] 維吾爾藥香沒藥樹子經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅 膠柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:4,體積比）洗脫2-50倍柱 體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:8,體積比）洗脫2-50倍柱 體積。石油醚：乙酸乙酯100:8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該提取物。其中最優(yōu)為 先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:4,體積比）洗脫10倍柱體積，繼 用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。
[0065] 維吾爾藥香沒藥樹子經(jīng)溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的 柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:10,體積比）洗脫洗脫2-50倍柱 體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，0:100,體積比）洗脫洗脫2-50 倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:10洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥，即為該提取物。以上條 件最優(yōu)為先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:10,體積比）洗脫10倍 柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，0:100,體積比）洗脫15倍柱 體積。其中，
[0066] 1)提取物提取用溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水 混合溶劑、乙醇水混合溶劑，最優(yōu)條件為甲醇和95%乙醇。提取物提取用有機(jī)溶劑用量為藥 材重量的2-50倍（重量/體積比）。
[0067] 2)提取物干燥方法可以為真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風(fēng)干燥、離心干燥、旋蒸干 燥法等，最優(yōu)為真空干燥法、冷凍干燥法。
[0068] 5.香沒藥樹子抗腫瘤有效提取物（洗脫液為100:12-0:100時干燥獲得的提取 物）的抗腫瘤活性研究
[0069] 利用各種腫瘤細(xì)胞，如腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝 癌等惡性腫瘤細(xì)胞株，分別測試香沒藥樹子抗腫瘤提取物的抗腫瘤活性，IC50結(jié)果如下：
[0070] 表 6
[0073] 因此，我們發(fā)現(xiàn)，香沒藥樹子抗腫瘤提取物具備抗腫瘤活性，可望用于各種腫瘤如 腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝癌等惡性腫瘤細(xì)胞株的預(yù)防及治 療。
[0074] 6、香沒藥樹子抗腫瘤有效提取物的組合物及其制備方法研究
[0075] 1)固體分散體
[0076] 處方
[0078] 制備方法：
[0079] 稱取香沒藥樹子提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質(zhì) 量比分別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至香沒藥樹子提取物和載體完全溶 解，轉(zhuǎn)入旋蒸儀中除去有機(jī)溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得香沒藥樹子提取物PVP包合物。
[0080] 2)環(huán)糊精包合物
[0081] 處方：
[0082]
[0087] 制備方法：
[0088] 1.香沒藥樹子提取物淀粉分散體的制備，精密稱取香沒藥樹子提取物，加入適量 的十二烷基硫酸鈉，用70%的乙醇溶解加入等比例的可溶性淀粉混合均勻后，在70°C的溫 度下蒸干，粉碎，過100目篩；
[0089] 2.稱取處方量，香沒藥樹子提取物淀粉分散體，交聯(lián)聚維酮，預(yù)膠化淀粉，用70% 乙醇做濕潤劑，邊加入邊攪拌，制成濕顆粒過14目篩，室溫下放置15min后，60°C烘箱烘干 45min，16目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
[0090] 7、香沒藥樹子抗腫瘤有效提取物的檢測方法研究
[0091] 我們發(fā)現(xiàn)，可以用薄層色譜的方法，很好地檢測和標(biāo)示香沒藥樹子抗腫瘤有效提 取物的特征，見圖1，圖2。
[0092] 具體條件：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：丙酮（3:1:1)顯色方法： 香草醛-硫酸顯色。
【附圖說明】：
[0093] 圖1香沒藥樹子活性提取物的TLC色譜圖；
[0094] 圖2香沒藥樹子活性提取物的TLC色譜圖；
[0095] 圖3香沒藥樹子得到的化學(xué)組分的TLC色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0096] 以下實(shí)施例表示本發(fā)明的實(shí)用性，本發(fā)明不受此限制。
[0097] 實(shí)施例1 :
[0098] 維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:4,體積比）洗脫10倍柱體積。繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真 空干燥，即為該提取物。收率0.06%。
[0099] 實(shí)施例2 :
[0100] 維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:4,體積比）洗脫10倍柱體積。繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷 凍干燥，即為該提取物。收率0.041 %。
[0101] 實(shí)施例3:
[0102] 維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:4,體積比）洗脫10倍柱體積。繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，鼓 風(fēng)干燥，即為該提取物。收率0.033%。
[0103] 實(shí)施例4 :
[0104] 維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱 分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:4,體積比）洗脫10倍柱體積。繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙 酯，100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，離 心干燥，即為該提取物。收率〇. 026%。
[0105] 實(shí)施例5 :
[0106] 維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅 膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚： 乙酸乙酯，100:4,體積比）洗脫10倍柱體積。繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯100:8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶 劑，旋蒸干燥，即為該提取物。收率〇. 028%。
[0107] 實(shí)施例6 :
[0108] 維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:4,體積比）洗脫10倍柱體積。繼用石油醚：乙酸 乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯 100:8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物。收率0. 047%。
[0109] 實(shí)施例7 :
[0110] 維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提取 15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:4,體積比）洗脫10倍柱體積。繼用石油醚：乙酸 乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯 100:8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該提取物。收率0. 043%。
[0111] 實(shí)施例8:
[0112] 維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲提 取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），先用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:4,體積比）洗脫10倍柱體積。繼用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:8,體積比）洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯 100:8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物。收率0. 052%。
[0113] 實(shí)施例9:
[0114] 取維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:10,體積比）洗脫洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，0:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯0:100洗脫液經(jīng)回收有 機(jī)溶劑，真空干燥，即為該提取物。收率9. 7%。
[0115] 實(shí)施例10 :
[0116] 取維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL乙醇超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:10,體積比）洗脫洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，0:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯0:100洗脫液經(jīng)回收有 機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物。收率7. 43%。
[0117] 實(shí)施例11 :
[0118] 取維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL丙酮超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:10,體積比）洗脫洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，0:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯0:100洗脫液經(jīng)回收有 機(jī)溶劑，鼓風(fēng)干燥，即為該提取物。收率6. 53%。
[0119] 實(shí)施例12 :
[0120] 取維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL氯仿超聲提取15min，提取液濃縮后，用硅膠 柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸 乙酯，100:10,體積比）洗脫洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙 酸乙酯，0:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯0:100洗脫液經(jīng)回收有 機(jī)溶劑，離心干燥，即為該提取物。收率6. 27%。
[0121] 實(shí)施例13 :
[0122] 取維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL乙酸乙酯超聲提取15min，提取液濃縮后，用 硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚： 乙酸乙酯，100:10,體積比）洗脫洗脫10倍柱體積，繼用石油醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油 醚：乙酸乙酯，0:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚：乙酸乙酯0:100洗脫液經(jīng)回 收有機(jī)溶劑，旋蒸干燥，即為該提取物。收率6. 79%。
[0123] 實(shí)施例14:
[0124] 取維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL甲醇水混合溶劑（甲醇：水=1:1)超聲提 取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:10,體積比）洗脫洗脫10倍柱體積，繼用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，0:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚：乙 酸乙酯0:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物。收率7. 97%。
[0125] 實(shí)施例15 :
[0126] 取維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=1:1)超聲提 取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚：乙 酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:10,體積比）洗脫洗脫10倍柱體積，繼用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，0:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油醚：乙 酸乙酯0:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，真空干燥，即為該提取物。收率7. 61 %。
[0127] 實(shí)施例16 :
[0128] 取維吾爾藥香沒藥樹子20g，經(jīng)100mL乙醇水混合溶劑（乙醇：水=90:10)超聲 提取15min，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱（2. Ocm內(nèi)徑小柱），用石油醚： 乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，100:10,體積比）洗脫洗脫10倍柱體積，繼用石油 醚：乙酸乙酯混合溶劑（石油醚：乙酸乙酯，0:100,體積比）洗脫洗脫15倍柱體積。石油 醚：乙酸乙酯0:100洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，冷凍干燥，即為該提取物。收率8. 44%。
[0129] 實(shí)施例17 :固體分散體
[0130] 稱取香沒藥樹子提取物和載體聚乙烯吡咯烷酮（PVP)按比例、1:2、1:4、1:6的質(zhì) 量比分別放入燒杯中，加入無水乙醇，磁力攪拌器攪拌至香沒藥樹子提取物和載體完全溶 解，轉(zhuǎn)入旋蒸儀中除去有機(jī)溶劑，干燥，粉碎過80目篩，即得香沒藥樹子提取物PVP包合物。 實(shí)施例18 :環(huán)糊精包合物
[0131] 將β -環(huán)糊精與1-5倍水研勻，加香沒藥樹子提取物（水難溶性的應(yīng)先溶于少量 有機(jī)溶劑中）充分研磨至成糊狀物，低溫干燥即得。
[0132] 實(shí)施例19 :分散片
[0133] 1.稱取干燥的香沒藥樹子提取物，加入適量的十二烷基硫酸鈉，使用70%的乙醇 充分溶解，加入水溶性淀粉與香沒藥樹子提取物（I : 1)，攪拌混合均勻，在70°C下干燥，粉 碎，過100目篩，得香沒藥樹子提取物分散體。
[0134] 2.精密稱取處方量，香沒藥樹子提取物分散體，交聯(lián)聚維酮，可壓性淀粉，用70% 乙醇做濕潤劑，邊加入邊攪拌，14目篩制成濕顆粒，室溫下放置15min后，70°C烘箱烘干 45min，16目篩整粒，加入滑石粉和微分硅膠，混合均勻后，壓片。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種維吾爾藥香沒藥樹子提取物，其特征為，維吾爾藥香沒藥樹子經(jīng)溶劑超聲提取， 提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比100:0-100:4的石油醚：乙酸 乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100:5-100:8的石油醚-乙酸乙酯混合溶劑洗脫，石油醚： 乙酸乙酯100:5-100:8洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥即為該提取物；或先用體積比100:10 的石油醚：乙酸乙酯混合溶劑洗脫，繼用體積比100:12-0:100的石油醚-乙酸乙酯混合溶 劑洗脫，石油醚：乙酸乙酯100:12-0:100的洗脫液經(jīng)回收有機(jī)溶劑，干燥即得。2. 如權(quán)利要求1所述的一種維吾爾藥香沒藥樹子提取物，其特征為，所述的提取用有 機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑，優(yōu)選甲醇 或95%乙醇，提取用有機(jī)溶劑用量為藥材重量的2-50倍(重量/體積比)。3. 如權(quán)利要求1所述維的維吾爾藥香沒藥樹子提取物，其特征為，洗脫液的用量為 2-50倍柱體積。4. 如權(quán)利要求1所述的維吾爾藥香沒藥樹子提取物，其特征為，先用體積比100:4的石 油醚：丙酮洗脫10倍柱體積，繼用體積比100:8的石油醚：丙酮洗脫15倍柱體積。5. 如權(quán)利要求1所述的維吾爾藥香沒藥樹子提取物，其特征為，先用體積比100:10的 石油醚：丙酮洗脫20倍柱體積，繼用體積比0:100的石油醚：丙酮洗脫25倍柱體積。6. -種藥物組合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的香沒藥樹子提取 物和藥學(xué)上可接受的載體。7. -種藥物制劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的香沒藥樹子提取物 或權(quán)利要求6所述的藥物組合物。8. 如權(quán)利要求7所述的藥物制劑，其特征在于，所述的制劑為固體分散體、環(huán)糊精包合 物、分散片。9. 權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述提取物或權(quán)利要求6所述的組合物或權(quán)利要求7所述 的藥物制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的腫瘤為腦膠質(zhì)瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結(jié)腸 癌、胰腺癌、宮頸癌或肝癌。10. 如權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的維吾爾藥香沒藥樹子提取物，其特征在于，用TLC 法檢測，其色譜條件為：GF254硅膠板，展開系統(tǒng)：石油醚：乙酸乙酯：乙酸乙酯（3:1:1)顯色 方法：香草醛-硫酸顯色。
【文檔編號】G01N30/90GK105982941SQ201510079838
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年2月15日
【發(fā)明人】王金輝, 黃健, 劉曉雪
【申請人】沈陽藥科大學(xué)