一種食品級的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的制備方法
【專利摘要】一種殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體，它是一種脂質(zhì)體呈規(guī)則的球形、帶正電荷、粒徑在100～200nm之間的食品級的脂質(zhì)體；其制備方法主要是將β?谷甾醇、大豆卵磷脂和白藜蘆醇溶在無水乙醇中，通過磁力攪拌得到脂質(zhì)乙醇溶液，之后緩慢滴加到超純水中，通過攪拌除去無水乙醇，得到白藜蘆醇納米脂質(zhì)體；將殼聚糖溶解在冰醋酸或苯甲酸或乳酸溶液中，在磁力攪拌器的攪拌下，將白藜蘆醇納米脂質(zhì)體逐滴加到殼聚糖溶液中，混合溶液在室溫孵育2～5h，即得到殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體。本發(fā)明所用原料均為食品級，且反應(yīng)條件溫和、操作簡單、所制備的脂質(zhì)體形貌可控、可重復(fù)性高，生物相容性好，可生物降解并能有效地提高該功能因子的生物利用度。
【專利說明】
一種食品級的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種食品級納米脂質(zhì)體的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]白藜蘆醇(resveratrol，簡稱Res)是含有芪類結(jié)構(gòu)的非黃酮類多酚化合物，主要來源于葡萄、虎杖、決明子和花生等天然植物或果實中。研究表明，白藜蘆醇具有抗癌、抗動脈粥樣硬化、抗凝血、抗氧化、抗菌、免疫調(diào)節(jié)及神經(jīng)保護(hù)等多種藥理學(xué)作用，可廣泛地應(yīng)用于醫(yī)藥、保健品、食品、化妝品等領(lǐng)域。由于白藜蘆醇水溶性較差、在光和氧化劑的作用下容易被氧化降解，攝入體內(nèi)會被人體免疫系統(tǒng)清除，這些問題已經(jīng)成為白藜蘆醇進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用的瓶頸，在一定程度上限制了其生物利用度的發(fā)揮。
[0003]脂質(zhì)體由于具有生物相容性好、生物可降解性和無毒性等良好特性，已成為納米遞送系統(tǒng)中最受關(guān)注的熱點，并已開發(fā)出臨床應(yīng)用的藥物。且大量研究表明脂質(zhì)體作為功能因子載體，具有提高功能因子生物利用度、增強其穩(wěn)定性、延長功能因子在體內(nèi)的循環(huán)時間和實現(xiàn)緩釋等優(yōu)點。但傳統(tǒng)的脂質(zhì)體目前還存在靶向性低、易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕獲以及穩(wěn)定性差等缺點。通過對脂質(zhì)體的修飾可以賦予其更加優(yōu)越的功能，例如靶向性、控釋性和免疫逃避等。
[0004]傳統(tǒng)的白藜蘆醇脂質(zhì)體制備原料為磷脂和膽固醇，但高膽固醇會引發(fā)動脈粥樣硬化、冠心病等心血管疾病，隨著人們對健康食品的要求提高，低膽固醇食品的需求也不斷增大，傳統(tǒng)脂質(zhì)體在醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域中的應(yīng)用受到了很大限制。谷留醇(Sito)作為一種植物甾醇，具有與膽固醇相似的結(jié)構(gòu)，用它取代膽固醇作為脂質(zhì)體膜材可以促進(jìn)脂質(zhì)體在不同應(yīng)用領(lǐng)域尤其是在食品、醫(yī)藥以及功能性食品等領(lǐng)域的發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種反應(yīng)條件溫和、操作簡單、所制備的脂質(zhì)體形貌可控、穩(wěn)定性好、可生物降解的食品級的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的制備方法。本發(fā)明主要是以大豆卵磷脂和谷留醇為膜材，采用乙醇注入法制備白藜蘆醇納米脂質(zhì)體，之后將殼聚糖按特定比例修飾脂質(zhì)體，得到一種食品級的納米微囊結(jié)構(gòu)的白藜蘆醇脂質(zhì)體。
[0006]本發(fā)明的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體，它是一種脂質(zhì)體呈規(guī)則的球形，帶正電荷，粒徑在100?200nm之間的食品級的脂質(zhì)體。
[0007]上述白藜蘆醇脂質(zhì)體的制備方法如下:
[0008]⑴原料:白藜蘆醇、大豆卵磷脂、β-谷留醇、殼聚糖；
[0009](2)將β-谷甾醇、白藜蘆醇和大豆卵磷脂按0.1?0.3:0.02?0.1:1的質(zhì)量比混合，按每毫升無水乙醇中加入14?17.5mg上述三種物質(zhì)的混合物的比例，在磁力攪拌器上溶解于無水乙醇中，得到脂質(zhì)乙醇溶液；
[0010](3)按脂質(zhì)乙醇溶液與超純水的體積比為1:2?4的比例，利用磁力攪拌器對脂質(zhì)乙醇溶液與超純水進(jìn)行緩慢攪拌，將步驟(2)得到的脂質(zhì)乙醇溶液逐滴滴入35?55°C的超純水中，得到白藜蘆醇脂質(zhì)體懸液；
[0011 ] (4)將步驟(3)的白藜蘆醇脂質(zhì)體懸液攪拌I?3h，去除無水乙醇，得到白藜蘆醇納米脂質(zhì)體溶液，4°C保存?zhèn)溆茫?br>[0012](5)按每毫升0.1?0.3M的冰醋酸或苯甲酸或乳酸加入0.0005?0.002g殼聚糖的比例，使殼聚糖在冰醋酸或苯甲酸或乳酸溶液中溶解，得到殼聚糖溶液；
[0013](6)按步驟(5)的殼聚糖溶液與步驟(4)的白藜蘆醇納米脂質(zhì)體溶液的體積比為1:
0.5?2.5的比例，在磁力攪拌器的攪拌下，將白藜蘆醇納米脂質(zhì)體逐滴加到殼聚糖溶液中，混合溶液在室溫孵育2?5h，得到殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體。
[0014]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點:
[0015]1、解決了白藜蘆醇溶解度低和穩(wěn)定性差的問題，大大增加了其溶解度和在體內(nèi)的循環(huán)時間，提高了白藜蘆醇的生物利用度。
[0016]2、選用的原料來源廣泛、生物相容性好，產(chǎn)品可用于食品、保健品以及藥物等領(lǐng)域。
[0017]3、制備的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體穩(wěn)定性好、可控制功能因子的釋放且具有緩釋的功能。
[0018]4、反應(yīng)條件溫和、操作簡單、所制備的脂質(zhì)體形貌可控、可重復(fù)性高。
【附圖說明】
[0019]圖1是本發(fā)明實施例1制得的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體透射電鏡圖；
[0020]圖2是本發(fā)明實施例1制得的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的粒徑分布圖；
[0021]圖3是本發(fā)明實施例1制得的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的電位圖；
[0022]圖4是本發(fā)明實施例2制得的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體透射電鏡圖；
[0023]圖5是本發(fā)明實施例2制得的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的粒徑分布圖；
[0024]圖6是本發(fā)明實施例2制得的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的電位圖；
[0025]圖7是本發(fā)明實施例3制得的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體透射電鏡圖；
[0026]圖8是本發(fā)明實施例3制得的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的粒徑分布圖；
[0027]圖9是本發(fā)明實施例3制得的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的電位圖。
【具體實施方式】
[0028]實施例1
[0029]取β-谷甾醇(購自上海源葉生物科技有限公司)5mg、白藜蘆醇(購自南京澤朗生物科技有限公司)lmg、大豆卵磷脂(購自沈陽天峰生物制藥有限公司)50mg，通過磁力攪拌器攪拌，溶解在4mL無水乙醇中，即得到均一的脂質(zhì)乙醇溶液。將脂質(zhì)乙醇溶液勻速緩慢逐滴滴入到35°C的SmL超純水中，在整個滴加過程中使用磁力攪拌器緩慢攪拌，之后繼續(xù)攪拌Ih除去無水乙醇，得到白藜蘆醇脂質(zhì)體溶液，4°C保存?zhèn)溆茫?br>[0030]將0.005g殼聚糖溶解在1ml濃度為0.1M的冰醋酸溶液中，得到殼聚糖溶液;按殼聚糖溶液與白藜蘆醇納米脂質(zhì)體溶液的體積比為1:0.5,在磁力攪拌器的攪拌下，將白藜蘆醇納米脂質(zhì)體逐滴加到殼聚糖溶液中，混合溶液在室溫孵育2h，即得到殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體；[0031 ]應(yīng)用透射電子顯微鏡對殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體進(jìn)行形貌表征，如圖1所示，納米脂質(zhì)體呈規(guī)則的球形。利用激光粒度儀檢測殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的粒徑分布以及帶電荷狀態(tài)，如圖2和圖3所示，從圖中可以看出納米脂質(zhì)體粒徑在100?200nm之間，且?guī)д姾伞?br>[0032]實施例2
[0033]取β-谷甾醇(購自上海源葉生物科技有限公司)10mg、白藜蘆醇(購自南京澤朗生物科技有限公司)3mg、大豆卵磷脂(購自沈陽天峰生物制藥有限公司)50mg，通過磁力攪拌器攪拌，溶解在4mL無水乙醇中，即得到均一的脂質(zhì)乙醇溶液。將脂質(zhì)乙醇溶液勻速緩慢逐滴滴入到45°C的12mL超純水中，在整個滴加過程中使用磁力攪拌器緩慢攪拌，之后繼續(xù)攪拌2h除去無水乙醇，得到白藜蘆醇脂質(zhì)體溶液，4°C保存?zhèn)溆茫?br>[0034]將0.0lg殼聚糖溶解在1ml濃度為0.2M的苯甲酸溶液中，得到殼聚糖溶液;按殼聚糖溶液與白藜蘆醇納米脂質(zhì)體溶液的體積比為I: 1.5，在磁力攪拌器的攪拌下，將白藜蘆醇納米脂質(zhì)體逐滴加到殼聚糖溶液中，混合溶液在室溫孵育3h，即得到殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體；
[0035]應(yīng)用透射電子顯微鏡對殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體進(jìn)行形貌表征，如圖4所示，納米脂質(zhì)體呈規(guī)則的球形。利用激光粒度儀檢測殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的粒徑分布以及帶電荷狀態(tài)，如圖5和圖6所示，從圖中可以看出納米脂質(zhì)體粒徑在100?200nm之間，且?guī)д姾伞?br>[0036]實施例3
[0037]取β-谷甾醇(購自上海源葉生物科技有限公司)15mg、白藜蘆醇(購自南京澤朗生物科技有限公司)5mg、大豆卵磷脂(購自沈陽天峰生物制藥有限公司)50mg，通過磁力攪拌器攪拌，溶解在4mL無水乙醇中，即得到均一的脂質(zhì)乙醇溶液。將脂質(zhì)乙醇溶液勻速緩慢逐滴滴入到55 °C的16mL超純水中，在整個滴加過程中使用磁力攪拌器緩慢攪拌，之后繼續(xù)攪拌3h除去無水乙醇，得到白藜蘆醇脂質(zhì)體溶液，4°C保存?zhèn)溆茫?br>[0038]將0.02g殼聚糖溶解在1ml濃度為0.3M的乳酸溶液中，得到殼聚糖溶液;按殼聚糖溶液與白藜蘆醇納米脂質(zhì)體溶液的體積比為I:2.5,在磁力攪拌器的攪拌下，將白藜蘆醇納米脂質(zhì)體逐滴加到殼聚糖溶液中，混合溶液在室溫孵育5h，即得到殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體；
[0039]應(yīng)用透射電子顯微鏡對殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體進(jìn)行形貌表征，如圖7所示，納米脂質(zhì)體呈規(guī)則的球形。利用激光粒度儀檢測殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的粒徑分布以及帶電荷狀態(tài)，如圖8和圖9所示，從圖中可以看出納米脂質(zhì)體粒徑在100?200nm之間，且?guī)д姾伞?br>【主權(quán)項】
1.一種殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體，其特征在于:它是一種脂質(zhì)體呈規(guī)則的球形、帶正電荷、粒徑在10?200nm之間的食品級的脂質(zhì)體。2.權(quán)利要求1的殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于: (1)原料:白藜蘆醇、大豆卵磷脂、谷留醇、殼聚糖； (2)將β-谷甾醇、白藜蘆醇和大豆卵磷脂按0.1?0.3:0.02?0.1:1的質(zhì)量比混合，按每毫升無水乙醇中加入14?17.5mg上述三種物質(zhì)的混合物的比例，在磁力攪拌器上溶解于無水乙醇中，得到脂質(zhì)乙醇溶液； (3)按脂質(zhì)乙醇溶液與超純水的體積比為1:2?4的比例，利用磁力攪拌器對脂質(zhì)乙醇溶液與超純水進(jìn)行緩慢攪拌，將步驟(2)得到的脂質(zhì)乙醇溶液逐滴滴入35?55°C的超純水中，得到白藜蘆醇脂質(zhì)體懸液； (4)將步驟(3)的白藜蘆醇脂質(zhì)體懸液攪拌I?3h，去除無水乙醇，得到白藜蘆醇納米脂質(zhì)體溶液，4°C保存?zhèn)溆茫? (5)按每毫升濃度為0.1?0.3M的冰醋酸或苯甲酸或乳酸加入0.0005?0.002g殼聚糖的比例，使殼聚糖在冰醋酸或苯甲酸或乳酸溶液中溶解，得到殼聚糖溶液； (6)按步驟(5)的殼聚糖溶液與步驟(4)的白藜蘆醇納米脂質(zhì)體溶液的體積比為1:0.5?2.5的比例，在磁力攪拌器的攪拌下，將白藜蘆醇納米脂質(zhì)體逐滴加到殼聚糖溶液中，混合溶液在室溫孵育2?5h，得到殼聚糖修飾的白藜蘆醇脂質(zhì)體。
【文檔編號】A61P7/02GK105997876SQ201610329383
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月18日
【發(fā)明人】高大威, 王美麗, 李磊, 邢姍姍
【申請人】燕山大學(xué)