槐屬雙苷在制備防治慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種槐屬雙苷在制備防治慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。具體涉及槐屬雙苷在防治慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明采用中藥單體槐屬雙苷進(jìn)行了動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，所述槐屬雙苷對(duì)香煙煙霧暴露所致慢性阻塞性肺疾病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷姆喂δ苡斜Ｗo(hù)作用，對(duì)大鼠肺部病理變化有逆轉(zhuǎn)作用；香煙誘導(dǎo)的COPD大鼠血清、BALF中促炎因子IL?6，IL?8的表達(dá)有抑制作用,從而減輕氣道炎癥。本發(fā)明的槐屬雙苷可作為藥物活性成分，與藥物學(xué)上可接受的載體制備防治COPD的藥物組合物，為COPD的預(yù)防和治療提供臨床指導(dǎo)與依據(jù)，進(jìn)而減輕患者痛苦，改善生活質(zhì)量。
【專利說(shuō)明】
槐屬雙昔在制備防治慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其設(shè)及中藥有效成分槐屬雙巧的新的藥用用途，具 體設(shè)及槐屬雙巧在制備防治慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 慢性阻塞性肺疾?。ɑ痳onic Obshuctive PulmonaiT Disease，C0PD)是一種W 持續(xù)氣流受限為主要病理生理特征、慢性氣道炎癥反應(yīng)為主要病理改變的臨床常見(jiàn)病及多 發(fā)病。COro發(fā)病率高，吸煙是C0PD最主要的危險(xiǎn)因素，我國(guó)40歲W上人群的發(fā)病率達(dá)8.2%; C0PD死亡率高，其目前是世界上第四大死亡原因，W冊(cè)預(yù)測(cè)在2030年COP明尋成為全球第Ξ大 死亡原因。coro臨床癥狀主要表現(xiàn)為慢性咳嗽、咳疲、氣短或呼吸困難、喘息和胸悶，隨著疾 病的進(jìn)展還會(huì)發(fā)生全身性炎癥反應(yīng)等，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，其高發(fā)病率、高致殘率和 高病死率也給患者及社會(huì)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，開(kāi)展C0PD炎癥的干預(yù)和機(jī)制研究具 有重要的理論指導(dǎo)意義和實(shí)用價(jià)值。
[0003] 目前尚無(wú)防治C0PD炎癥的有效手段，C0PD臨床治療存在如下問(wèn)題：?jiǎn)渭兘錈熀?C0PD氣道慢性炎癥不會(huì)停止或逆轉(zhuǎn)，而是持續(xù)性發(fā)展;單純吸入糖皮質(zhì)激素（ICS)雖然能緩 解C0PD患者的癥狀，延緩肺功能下降速度，但達(dá)不到理想的抗炎效果，不能阻止或逆轉(zhuǎn)C0PD 的發(fā)展進(jìn)程;聯(lián)合治療（ICS/i3-AR激動(dòng)劑），雖可W部分改善肺功能，但不能降低死亡率。由 此可見(jiàn)，慢性氣道炎癥能否得到控制是治療C0PD的關(guān)鍵問(wèn)題。
[0004] 槐屬雙巧(Sophorabioside)是從豆科植物槐的成熟干燥果實(shí)槐角中提取分離的 一異黃酬巧類化合物，是槐角中主要的化學(xué)和藥效成分?，F(xiàn)己從槐角中分離得到的單體異 黃酬類化合物有槐角巧、槐屬雙巧、染料木素、染料木巧、尊尾巧、芒柄花巧等?，F(xiàn)代藥理研 究證實(shí):槐角巧具有一定的抗炎、抗過(guò)敏和抗腫瘤作用;染料木素具有類雌激素活性W及抗 炎、抗腫瘤和抗氧化作用。
[0005] 至今為止，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)有槐屬雙巧應(yīng)用于防治慢性阻塞性肺疾病的相關(guān)研究報(bào) 道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供一種槐屬雙巧在制備防治慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用，目的是提 供中藥有效成分槐屬雙巧的新的藥物用途。
[0007] 本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：槐屬雙巧在制備防治慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng) 用。
[000引本發(fā)明所述的中藥單體槐屬雙巧具有下述式(I)的化學(xué)結(jié)構(gòu)：
[0009]
[0010]所述的槐屬雙巧能抑制促炎因子比-6,比-8的表達(dá)。
[0011] 所述的槐屬雙巧能改善慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的肺功能。
[0012] 所述的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜑橄銦煙熿F暴露所致的慢性阻塞性肺疾病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>[0013] 本發(fā)明用于制備治療慢性阻塞性肺疾病的藥物時(shí)，其口服或非口服給藥均是安全 的。在口服情況下，其可W是任何常規(guī)形式給藥，如散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、滴丸、 軟膠囊、漂浮劑、口服液、懸浮液、糖漿、口腔含片、噴霧劑或氣霧劑等；當(dāng)該藥物非口服給藥 時(shí)，可采用任何常規(guī)形式，如栓劑、注射劑:靜脈注射、肌肉注射、軟膏劑、吸入劑等。
[0014] 本發(fā)明制備治療慢性阻塞性肺疾病的藥物時(shí)是與固體或液體的賦形劑一起構(gòu)成 的，運(yùn)里使用的固體或液體賦形劑在本領(lǐng)域是眾所周知的，下面舉幾個(gè)具體例子，固體制劑 的賦形劑有乳糖、淀粉、漿糊精、碳酸巧、合成或天然硫酸侶、氯化儀、硬脂酸儀，碳酸氨鋼、 干燥酵母等;液體制劑的賦形劑有水、甘油、丙二醇、單糖漿、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨 糖醇等;軟膏劑的賦形劑可W使用脂油，含水羊毛脂、凡±林、甘油、蜂蠟、木臘、液體石蠟、 樹(shù)脂、高級(jí)蠟等組合成的疏水劑或親水劑。
[0015] 本發(fā)明結(jié)合W往相關(guān)研究基礎(chǔ)，進(jìn)行C0PD大鼠模型實(shí)驗(yàn)，因長(zhǎng)期吸煙是最常見(jiàn)的 人類C0PD致病因素，故采用香煙煙霧暴露所致C0PD大鼠模型，并用槐屬雙巧對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn) 行干預(yù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：1.灌胃給與10、20、40mg/kg的槐屬雙巧對(duì)香煙煙霧暴露所致C0PD大 鼠的肺功能有保護(hù)作用;2.槐屬雙巧在體內(nèi)對(duì)香煙煙霧暴露所致C0PD模型大鼠的炎癥細(xì)胞 的浸潤(rùn)、促炎細(xì)胞因子的表達(dá)有抑制作用；3.槐屬雙巧的上述作用與抑制小鼠血清和BALF 中促炎因子IL-6和IL-8的表達(dá)有關(guān)，從而減輕氣到炎癥。
[0016] 本發(fā)明可制成防治慢性阻塞性肺疾病的藥物組合物，其包括作為活性成分的槐屬 雙巧，W及藥物學(xué)上可接受的載體，為C0PD的預(yù)防和治療提供臨床指導(dǎo)與依據(jù)，進(jìn)而減輕患 者痛苦，提高身體健康，改善生活質(zhì)量。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 實(shí)施例1:本發(fā)明所設(shè)及化合物槐屬雙巧的制備方法如下：
[0018] 取槐的成熟干燥果實(shí)槐角5.0kg，粉碎過(guò)篩，加70%乙醇(v/v)在50-60°C下浸提， 每次3小時(shí)，提取3次，加壓回收溶劑，濃縮得醇提浸膏約2.0kg，將浸膏混懸于適量水中，依 次加1.5倍體積的石油酸、氯仿、乙酸乙醋、正下醇萃取各3次，得到正下醇層。取120g正下醇 層部分，加1倍硅膠炒樣后加于硅膠柱上，W氯仿-甲醇(20:1-1:1)梯度洗脫，收集氯仿-甲 醇（8:1-1:1)的洗脫液，回收至干，甲醇水重結(jié)晶，得槐屬雙巧12.6g。白色粉末（甲醇），鹽 酸-儀粉反應(yīng)呈陰性，硫酸反應(yīng)呈亮黃色，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，不溶于石油酸，不易溶于氯 仿、乙酸乙醋、丙酬，易溶于甲醇、乙醇?；睂匐p巧的核磁數(shù)據(jù)如下：
[0019] iHNMR(500MHz，DMS0-d6)S:12.91(lH，s，5-OH)、10.94(lH，s，7-OH)、8.36(lH，s，2- H)、7.44(2H，dJ = 8.5Hz，2/-H and 6/-H)、7.05(2H，d，J = 8.5Hz，3/-H and5/-H)、6.41 (lH，brs，8-H)、6.24(lH，brs，6-H)、5.13(lH，brs，r '-H)、5.06(lH，d，J = 5.2Hz，r-H)、 3.16-3.82(m,other sugar p;rotons)、1.20(3H,d,J = 3.7Hz,6'''-H).
[0020] i3CNMR(125MHz，DMS0-d6)S:154.48(C-2)，124.26(C-3)，180.04(C-4)，161.98(C- 5) ,99.10(C-6), 164.54(07)，93.78(C-8), 157.62(C-9), 104.40(010)，121.90(C-r), 130.18(C-2'，6'），115.62(C-3'，5'），157.01(C-4'），98.14(C-r)，76.34(C-2")，77.44(C- 3" )，69.82 (C-r )，76.87 (C-5" )，60.56 (C-6")，100.43(C-r'），70.53(C-2"'），70.46(C- 3"'），71.90(C-4"'），68.28(C-5"'），18.07(C-護(hù)'）.
[0021]
[0022] 實(shí)施例2:本發(fā)明所設(shè)及化合物槐屬雙巧片劑的制備:取15克槐屬雙巧，加入淀粉 75g，混合均勻，噴入70 %乙醇為潤(rùn)濕劑，制成軟材；過(guò)20目篩網(wǎng)，得濕顆粒；60°C干燥，每 30min翻動(dòng)一遍，水分控制在1 %-3%。加入硬脂酸儀粉末，混勻，壓制成1000片。
[0023] 實(shí)施例3 :本發(fā)明所設(shè)及化合物槐屬雙巧膠囊劑的制備:將原輔料均過(guò)五號(hào)篩，W 利于混合完全、均勻，稱取槐屬雙巧50g，淀粉250g，混合均勻，裝膠囊1000粒
[0024] 下邊通過(guò)W下藥效學(xué)試驗(yàn)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的中藥有效成分槐屬雙巧的用途。
[0025] 試驗(yàn)例1:槐屬雙巧對(duì)慢性阻塞性肺疾病(C0PD)模型大鼠肺部病理變化的逆轉(zhuǎn)作 用。
[0026] 用氣管注射脂多糖化PS)及熏煙聯(lián)合造模方法制備C0PD大鼠模型:第1、14天大鼠 腹腔注射戊己比妥鋼（l%，40mg/kg)，使麻醉，固定，頭低位，暴露聲口，快速插入18號(hào)靜脈 套管針氣管，拔出針忍，用注射器Is內(nèi)注入0.2mL脂多糖生理鹽水溶液(200ygAiL)，然后將 大鼠直立左右旋轉(zhuǎn)，使脂多糖均勻分布兩肺。第2-28天(第14天除外)將大鼠分組置入自制 密閉造模箱內(nèi)，每日上午，給予大鼠香煙煙熏30min，每次5支香煙。
[0027] 造模成功后，50只大鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組、模型組及槐屬雙巧低、中、高劑 量組（10、20、40111肖/1^)。正常對(duì)照組、模型組分別灌胃給與純凈水（10血/1^)，槐屬雙巧各劑 量組分別灌胃給于槐屬雙巧，連續(xù)給藥14天。蘇木素-伊紅化E)染色觀察肺組織病理學(xué)改 變。
[0028] 結(jié)果:正常組:大鼠支氣管粘膜上皮結(jié)構(gòu)完整，支氣管纖毛排列整齊，肺泡結(jié)構(gòu)完 整，氣管及各級(jí)支氣管僅見(jiàn)散在的杯狀細(xì)胞，未見(jiàn)腺體增生及明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn);模型組:大 鼠支氣管肺組織有慢性阻塞性肺疾病的病理改變，支氣管纖毛上皮部分脫落，纖毛粘連倒 伏、變性，支氣管管腔內(nèi)有中度滲出物，氣管黏膜下層、肌層可見(jiàn)大量嗜酸性細(xì)胞、淋己細(xì)胞 浸潤(rùn);槐屬雙巧組低、中、高劑量組:支氣管纖毛輕度粘連倒伏、變性，支氣管平滑肌厚度輕 度增加，氣管黏膜下層、肌層可見(jiàn)少量嗜酸性細(xì)胞，隨著劑量的增加，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)逐漸減 輕，與正常組相比，低劑量組仍具有慢性支氣管炎、阻塞性肺氣腫的病理特點(diǎn)，而高劑量組 的病理變化不明顯，非常接近于正常組。
[0029] 試驗(yàn)例2:槐屬雙巧對(duì)慢性阻塞性肺疾病(C0PD)模型大鼠肺功能的影響。
[0030] 雄性Wister大鼠，體重120-150g。實(shí)驗(yàn)第1、14天采用水合氯醒麻醉大鼠后，手術(shù)暴 露氣管，滴入LPS(lg/L，200化），次日將大鼠置于煙室中，點(diǎn)煙熏，每日1次，每次30min，共28 天。造模成功后，大鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組、模型組及槐屬雙巧低、中、高劑量組（10、 20、40mg/kg)。正常對(duì)照組、模型組分別灌胃給與純凈水（10血/kg),槐屬雙巧各劑量組分別 灌胃給于槐屬雙巧，連續(xù)給藥14天。
[0031] 肺功能測(cè)定:大鼠麻醉，切開(kāi)頸部皮膚，純性分離皮下組織暴露氣管，在氣管軟骨 間環(huán)行剪開(kāi)一小切口，插入氣管插管并扎緊，仰邸，頭低位，置于小動(dòng)物肺功能測(cè)定儀密閉 體積描記箱內(nèi)。氣管插管一端與動(dòng)物呼吸機(jī)相連。描記一段平靜呼吸后檢測(cè)用力肺活量 (FVC)、0.3s用力呼氣容積(陽(yáng)Vq.3)、陽(yáng)VQ.3/FVC、最大呼氣峰值流速(陽(yáng)FR)。
[0032] 結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠肺功能參數(shù)FVC、FEVq.3、FEV().3/FVCJEFW9 顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<〇.05或P<0.01)，表明大鼠存在氣流阻塞，說(shuō)明造模成 功。與模型組比較，槐屬雙巧低、中、高劑量組肺功能參數(shù)FVC、陽(yáng)V0.3、FEV0.3/FVC、陽(yáng)FR均顯 著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<〇. 05或P<0.01)，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0033] 表1槐屬雙巧對(duì)C0PD模型大鼠肺功能的影響(η = 10，X ± SD)
[0034]
[0035] A與正常對(duì)照組比較，ρ〈〇. 0日;ΔΔ與正常對(duì)照組比較，ρ〈〇. 01
[0036] *與模型組比較，Ρ<0.05 ;**與模型組比較，Ρ<0.01
[0037] 結(jié)論:槐屬雙巧可改善C0PD模型大鼠的肺功能。
[003引試驗(yàn)例3:觀察槐屬雙巧對(duì)慢性阻塞性肺疾病(C0PD)模型大鼠血清中促炎因子IL- 6和IL-8表達(dá)的影響。
[0039] 造模及給藥方法同試驗(yàn)例1。
[0040] 給藥后，腹主動(dòng)脈取血，300化/min離屯、lOmin，吸取上清液待查，部分血清置于-20 °C待測(cè)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)化LISA)檢測(cè)血清白細(xì)胞介素水平；白細(xì)胞介素（化-6JL-8)檢 測(cè)試劑盒由美國(guó)R&D公司提供(批號(hào)2012011202、2011120407)。
[0041 ] 結(jié)果:模型組IL-6、化-8表達(dá)水平較正常組明顯升高(P<0.01);槐屬雙巧低、中、高 劑量組IL-6、比-8表達(dá)水平較模型組顯著降低(P<0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。
[0042] 表2槐屬雙巧對(duì)COPD模型大鼠血清中比-6和比-8表達(dá)的影響（n = 10，X±SD)
[0043]
[0044] A與正常對(duì)照組比較，p〈〇. 0日;ΔΔ與正常對(duì)照組比較，p〈〇. 01
[0045] *與模型組比較，P<0.05
[0046] 結(jié)論:槐屬雙巧對(duì)香煙誘導(dǎo)的COPD大鼠血清中促炎因子IL-6和IL-8的表達(dá)均有抑 制作用。
[0047] 試驗(yàn)例4:觀察槐屬雙巧對(duì)慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠支氣管肺泡灌洗液 (BAL巧中促炎因子IL-6和IL-8表達(dá)的影響。
[004引造模及給藥方法同試驗(yàn)例1。
[0049] 大鼠麻醉，仰邸固定，處死、開(kāi)胸腔，去屯、臟，用冰冷NS沖洗肺部1 -2次，吸干。用動(dòng) 脈錯(cuò)夾住右肺口，分離頸部氣管，于近氣管分叉處開(kāi)T行切口，插管至左支氣管下端分叉處， 用手術(shù)縫線結(jié)扎氣管插管處，結(jié)扎兩處。用注射器吸取預(yù)熱至37°C或室溫的生理鹽水2ml， 通過(guò)導(dǎo)管W較小的壓力將鹽水緩慢注入肺內(nèi)，可見(jiàn)左肺逐漸變得膨隆、蒼白，立即緩慢回抽 灌洗液，再將所得液體緩緩注回肺內(nèi)，如此反復(fù)抽注2次，得BALF液。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 化LISA)檢測(cè)血清白細(xì)胞介素水平；白細(xì)胞介素（化-6、化-8)檢測(cè)試劑盒由美國(guó)R&D公司提 供(批號(hào) 2012011202、2011120407)。
[(K)加]結(jié)果:模型組IL-6、化-8表達(dá)水平較正常組明顯升高(P<0.01);槐屬雙巧低、中、高 劑量組IL-6、比-8表達(dá)水平較模型組顯著降低(P<0.05)。
[0051 ] 結(jié)論:槐屬雙巧對(duì)香煙誘導(dǎo)的COPD大鼠 BALF中促炎因子化-6、化-8的表達(dá)均有抑 制作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 槐屬雙苷在制備防治慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用，所述的槐屬雙苷具有如下化 學(xué)結(jié)構(gòu)：2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的槐屬雙苷在制備防治慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用，其特 征在于所述的槐屬雙苷能抑制促炎因子IL-6，IL-8的表達(dá)。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的槐屬雙苷在制備防治慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用，其特 征在于所述的槐屬雙苷能改善慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的肺功能。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的槐屬雙苷在制備防治慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用，其特 征在于所述的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜑橄銦煙熿F暴露所致的慢性阻塞性肺疾病實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?. 根據(jù)權(quán)利要求2-4所述的槐屬雙苷在制備防治慢性阻塞性肺疾病藥物中的應(yīng)用，其 特征在于:能制備成防治慢性阻塞性肺疾病的口服藥物制劑或非腸道藥物制劑。
【文檔編號(hào)】A61P11/00GK105998043SQ201610511745
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年7月1日
【發(fā)明人】張慶賀, 盧丹
【申請(qǐng)人】吉林大學(xué)