一種預(yù)防和治療氣道炎癥的微藻組合物及其制劑和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供一種預(yù)防和治療氣道炎癥的微藻組合物及其制劑和應(yīng)用，包括質(zhì)量比為10:1~1:10的A組分和B組分；所述A組分為螺旋藻及其變種和誘變變種，B組分為單孢藻及其變種和誘變變種。本發(fā)明可應(yīng)用在制備預(yù)防和治療氣道炎癥性疾病藥物中，特別是支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、急性肺損傷和急性呼吸衰竭綜合癥藥物中。
【專利說明】
一種預(yù)防和治療氣道炎癥的微藻組合物及其制劑和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬醫(yī)療健康領(lǐng)域，具體涉及一種預(yù)防和治療氣道炎癥的微藻組合物及其制劑和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]哮喘是一種嚴(yán)重危害人類健康的慢性呼吸道疾病，其患病率在全球范圍內(nèi)呈上升趨勢，全球約有3億患者哮喘患者，平均患病率在4.5%左右，預(yù)計到2025年，全球哮喘患者總?cè)藬?shù)將達(dá)到4億。我國約有2千萬哮喘病人，平均患病率在0.5%_1%，而在有些地區(qū)，兒童中哮喘患病率己高達(dá)4.52%。全球哮喘的死亡率總體也在升高，美國哮喘病死率已達(dá)到5.3%。哮喘所帶來沉重負(fù)擔(dān)己引起世界衛(wèi)生組織和各國政府的重視。
[0003]氣道炎癥是哮喘發(fā)病的關(guān)鍵因素，也是哮喘防治的重要靶點。臨床治療哮喘的藥物包括糖皮質(zhì)激素、β2_受體激動劑、白三烯調(diào)節(jié)劑、茶堿、抗膽堿藥物、抗IgE治療等，其中糖皮質(zhì)激素是最有效的控制氣道炎癥的藥物，也是目前臨床治療哮喘的首選，通過不同給藥途徑和給藥劑量發(fā)揮控制或緩解哮喘的作用。但長期或大量使用可以引起骨質(zhì)疏松癥、高血壓、糖尿病、下丘腦一垂體一腎上腺軸的抑制、肥胖癥、白內(nèi)障、青光眼、皮膚菲薄導(dǎo)致皮紋和淤斑、肌無力等。尋找更加安全而有效的抑制氣道炎癥藥物具有顯著的社會意義和臨床價值。
[0004]微藻作為自然界中天然產(chǎn)物的寶庫，含有豐富的各類活性物質(zhì)和次生代謝產(chǎn)物，然而針對這些種類和形式多樣的微藻活性物質(zhì)的藥理作用的深入研究尚不多見。通過文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)，具有抗炎作用的藻種多達(dá)數(shù)十種，本實驗室經(jīng)前期經(jīng)篩選，選擇了螺旋藻和單孢藻為候選藻種，完成了探索性研究，研究結(jié)果表明:在卵清蛋白(OVA)所致小鼠過敏性哮喘的氣道炎癥模型中，聯(lián)合使用螺旋藻和單胞藻可降低致敏動物抗原攻擊后肺組織炎癥病理學(xué)分級評分、抑制肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞數(shù)量、調(diào)節(jié)肺泡灌洗液中細(xì)胞因子和趨化因子含量、減少血清中OVA特異性IgE含量;在LPS所致小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW 264.7炎性反應(yīng)模型中，聯(lián)合使用螺旋藻和單胞藻的脂類提取物可降低胞培養(yǎng)液中炎性因子TNF-α和IL-6含量、抑制細(xì)胞NFkB促炎癥通路的活化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了一種預(yù)防和治療氣道炎性疾病的微藻組合，將微藻作為天然藥物的來源，為氣道炎性疾病(如:支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、急性肺損傷和急性呼吸衰竭綜合癥等)的治療和預(yù)防提供新的技術(shù)策略。
[0006]本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案來實現(xiàn)的:
一種預(yù)防和治療氣道炎癥的微藻組合物，包括質(zhì)量比為10:1?1:10的A組分和B組分;所述A組分為螺旋藻及其變種和誘變變種，B組分為單孢藻及其變種和誘變變種。
[0007]作為優(yōu)選項:所述A組分與B組分的質(zhì)量比為1:1。
[0008]作為優(yōu)選項:所述A組分中螺旋藻包括節(jié)旋藻屬和螺旋藻屬。
[0009]作為優(yōu)選項:所述節(jié)旋藻屬包括短節(jié)旋藻、簡氏節(jié)旋藻、極大節(jié)旋藻、透明節(jié)旋藻、鈍頂節(jié)旋藻、小型旋狀節(jié)旋藻、旋狀節(jié)旋藻和微小節(jié)旋藻。
[0010]作為優(yōu)選項:所述螺旋藻屬包括巨大螺旋藻、戈氏螺旋藻、強(qiáng)氏螺旋藻、盤旋螺旋藻、疏松螺旋藻、寬松螺旋藻、巨形螺旋藻、極大螺旋藻、孟氏螺旋藻、諾氏螺旋藻、似顫螺旋藻、鈍頂螺旋藻、似旋螺旋藻、鹽澤螺旋藻、細(xì)致螺旋藻、小型螺旋藻、微小螺旋藻、薩氏螺旋藻、泥澤螺旋藻和紫色螺旋藻。
[0011]作為優(yōu)選項:所述B組分中單孢藻可替換為微擬球藻、新月菱形藻或三角褐指藻。
[0012]本發(fā)明還提供包含上述微藻組合物的制劑，包含A組分和B組分的藻粉以及藥學(xué)上可接受的輔料或包含A組分和B組分的脂提物以及藥學(xué)上可接受的輔料;所述脂提物的用量按藻粉當(dāng)量計算。
[0013]作為優(yōu)選項:制劑劑型為口服或外用制劑。
[0014]本發(fā)明制劑在制備預(yù)防和治療氣道炎癥性疾病藥物中的應(yīng)用，特別是支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、急性肺損傷和急性呼吸衰竭綜合癥藥物中的應(yīng)用。
[0015]本發(fā)明的有益技術(shù)效果:研究結(jié)果表明，聯(lián)合使用螺旋藻和單胞藻具有顯著的抑制氣道炎癥的作用。具體表現(xiàn)為:在卵清蛋白(OVA)所致小鼠過敏性哮喘的氣道炎癥模型中，聯(lián)合使用螺旋藻和單胞藻可降低致敏動物抗原攻擊后肺組織炎癥病理學(xué)分級評分、抑制肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞數(shù)量、調(diào)節(jié)肺泡灌洗液中細(xì)胞因子和趨化因子含量、減少血清中OVA特異性IgE含量;在LPS所致小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW 264.7炎性反應(yīng)模型中，聯(lián)合使用螺旋藻和單胞藻的脂類提取物可降低胞培養(yǎng)液中炎性因子TNF-α和IL-6含量、抑制細(xì)胞NFkB促炎癥通路的活化。
【附圖說明】
[0016]圖1:微藻脂提物對OVA誘導(dǎo)的肺組織炎癥病理學(xué)分級評分的影響；
圖2:微藻脂提物對OVA誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞浸潤的影響；
圖3:微藻脂提物對OVA誘導(dǎo)的肺泡灌洗液中Thl和Th2細(xì)胞因子含量的影響；
圖4:微藻脂提物對血清中OVA特異性IgE含量的影響；
圖5:微藻脂提物對細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-a和IL-6含量的影響；
圖6:微藻脂提物對細(xì)胞NFkB通路的影響。
【具體實施方式】
[0017]實施例1:
取極大節(jié)旋藻和單孢藻，按質(zhì)量比為10:1進(jìn)行配比，按常規(guī)制劑方法制備成口服液。
[0018]實施例2:
取鈍頂節(jié)旋藻和微擬球藻，按質(zhì)量比為5:1進(jìn)行配比，根據(jù)常規(guī)制劑方法制備成散劑。
[0019]實施例3:
取極大螺旋藻和新月菱形藻，按質(zhì)量比為2:1進(jìn)行配比，根據(jù)常規(guī)制劑方法制備成丸劑。
[0020]實施例4:
取鈍頂螺旋藻和單孢藻，按質(zhì)量比為I: I進(jìn)行配比，根據(jù)常規(guī)制劑方法制備成丹劑。
[0021]實施例5:
取鈍頂螺旋藻和三角褐指藻，按質(zhì)量比為I: 2進(jìn)行配比，根據(jù)常規(guī)制劑方法制備成片劑。
[0022]實施例6:
取鈍頂螺旋藻和單孢藻，按質(zhì)量比為1:5進(jìn)行配比，根據(jù)常規(guī)制劑方法制備成硬膠囊劑。
[0023]實施例7:
取鈍頂螺旋藻和單孢藻，按質(zhì)量比為1:10進(jìn)行配比，根據(jù)常規(guī)制劑方法制備成軟膠囊劑。
[0024]實施例8:
取鈍頂螺旋藻變種和單孢藻變種，按質(zhì)量比為1:1進(jìn)行配比，根據(jù)常規(guī)制劑方法制備成顆粒劑。
[0025]實施例9:
取鈍頂螺旋藻誘變變種和單孢藻誘變變種，按質(zhì)量比為I: I進(jìn)行配比，根據(jù)常規(guī)制劑方法制備成顆粒劑。
[0026]實施例10:
取鈍頂螺旋藻和單孢藻，按質(zhì)量比為10:1進(jìn)行配比，10倍(v/w)量無水乙醇，70°C提取2次，每次I小時。合并提取液，回收乙醇，50°C低壓干燥12小時，得到提取物;將上述提取物按照常規(guī)制劑方法制備成洗劑。
[0027]實施例11:
取極大節(jié)旋藻和微擬球藻，按質(zhì)量比為1:1進(jìn)行配比，10倍(v/w)量無水乙醇，70°C提取2次，每次I小時。合并提取液，回收乙醇，50°C低壓干燥12小時，得到提取物;將上述提取物按照常規(guī)制劑方法制備成膏劑。
[0028]實施例12:
取極大螺旋藻和三角褐指藻，按質(zhì)量比為1:10進(jìn)行配比，10倍(v/w)量無水乙醇，70°C提取2次，每次I小時。合并提取液，回收乙醇，50°C低壓干燥12小時，得到提取物;將上述提取物按照常規(guī)制劑方法制備成搽劑。
[0029]藥理學(xué)實驗
一、動物實驗證實微藻脂提物拮抗OVA所致氣道炎癥的藥理作用(原料為實施例10或11或12中提取物)
將雌性Babl/c小鼠隨機(jī)分為空白對照組、卵清蛋白(OVA)對照組、微藻脂提物小、中、大劑量組和地塞米松陽性對照組，連續(xù)處理12周，觀察微藻脂提物對OVA所致氣道炎癥的抑制作用。結(jié)果如下:
(I)微藻脂提物抑制了 OVA誘導(dǎo)的氣道炎癥
如圖1所示，正常組肺組織HE切片中，氣道管腔光滑、黏膜無水腫，僅有少量炎性細(xì)胞浸潤;模型組肺組織HE切片中，氣道壁增厚、黏膜皺璧增多，管腔狹窄，肺泡壁水腫充血、大量炎癥細(xì)胞浸潤。陽性對照組和微藻脂提物大劑量組切片中，壁炎性細(xì)胞浸潤程度明顯減輕。根據(jù)“致敏動物抗原攻擊后肺組織炎癥病理學(xué)分級評分標(biāo)準(zhǔn)”，觀察小鼠肺組織分級評分。與空白對照組相比，模型組小鼠肺組織炎癥評分顯著提高(P〈0.01);微藻脂提物小、中、高劑量組和地塞米松治療組顯著地降低了炎癥評分(P〈0.01，P〈0.05)。
[0030](2)微藻脂提物抑制了 OVA誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞浸潤
如圖2所示，與空白對照組相比，OVA模型組小鼠肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞含量明顯升高(P〈0.01)。與OVA模型組對照組相比，微藻脂提物可劑量依賴性降低炎癥細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目(P〈0.01)，微藻脂提物大劑量組可降低中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞(P〈0.01, P〈0.05)。
[0031](3)微藻脂提物可調(diào)節(jié)小鼠哮喘模型肺泡灌洗液中Thl和Th2細(xì)胞因子含量
如圖3所示，與空白對照組相比，OVA模型組小鼠肺泡灌洗液中IL-4、IL-5和IFN- γ含量顯著升高(Ρ<0.01);與OVA模型組相比，微藻脂提物劑量依賴性地顯著降低了患哮喘小鼠肺泡灌洗液中的 IL-4、IL-5 含量(ρ<0.01，ρ<0.05)，升高 11^-10、正^丫含量(？<0.01)。
[0032](4)微藻脂提物降低了血清中OVA特異性免疫球蛋白E含量
如圖4所示，結(jié)果(3)表明微藻脂提物可以顯著調(diào)節(jié)OVA誘導(dǎo)的小鼠主要的Thl和Th2應(yīng)答。為了進(jìn)一步確定微藻脂提物對體內(nèi)OVA特異性Th2應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用，我們采用酶聯(lián)免疫吸附實驗的方法進(jìn)行檢查，檢測的目標(biāo)是血清中的OVA特異性免疫球蛋白E的含量。最終發(fā)現(xiàn)，微藻脂提物在不改變總IgE的前提下可顯著地抑制了 OVA特異性IgE的含量。
[0033]二、細(xì)胞試驗證實微藻脂提物可改善LPS所致細(xì)胞炎性反應(yīng)(原料為實施例10或11或12中提取物)。
[0034]將小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW264.7分為空白對照組、LPS對照組、微藻脂提物小、中、大劑量組，觀察LPS刺激下，微藻脂提物對細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果如下:
(I)微藻脂提物降低胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6含量
如圖5所示，與空白對照組相比，LPS模型組細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-a和IL-6含量顯著升高(P<0.01)；與LPS模型組相比，微藻脂提物中、高劑量組降低細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-a (p < 0.0I)，微藻脂提物高劑量組降低細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-6含量(p<0.01)。
[0035](2)微藻脂提物抑制細(xì)胞NFkB通路活化
如圖6所示，與空白對照組相比，LPS模型組ρ-ΙΚΚ表達(dá)顯著升高(p<0.01)，IkB表達(dá)顯著降低(p<0.01);與LPS模型組相比，微藻脂提物高劑量組顯著降低ρ-ΙΚΚ表達(dá)(p<0.01)，微藻脂提物高劑量組顯著升高IkB表達(dá)(p<0.01)。
[0036]
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1.一種預(yù)防和治療氣道炎癥的微藻組合物，其特征在于:包括質(zhì)量比為10:1?1:10的A組分和B組分;所述A組分為螺旋藻及其變種和誘變變種，B組分為單孢藻及其變種和誘變變種。2.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防和治療氣道炎癥的微藻組合物，其特征在于:所述A組分與B組分的質(zhì)量比為1:1。3.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防和治療氣道炎癥的微藻組合物，其特征在于:所述A組分中螺旋藻包括節(jié)旋藻屬和螺旋藻屬。4.如權(quán)利要求3所述的預(yù)防和治療氣道炎癥的微藻組合物，其特征在于:所述節(jié)旋藻屬包括短節(jié)旋藻、簡氏節(jié)旋藻、極大節(jié)旋藻、透明節(jié)旋藻、鈍頂節(jié)旋藻、小型旋狀節(jié)旋藻、旋狀節(jié)旋藻和微小節(jié)旋藻。5.如權(quán)利要求3所述的預(yù)防和治療氣道炎癥的微藻組合物，其特征在于:所述螺旋藻屬包括巨大螺旋藻、戈氏螺旋藻、強(qiáng)氏螺旋藻、盤旋螺旋藻、疏松螺旋藻、寬松螺旋藻、巨形螺旋藻、極大螺旋藻、孟氏螺旋藻、諾氏螺旋藻、似顫螺旋藻、鈍頂螺旋藻、似旋螺旋藻、鹽澤螺旋藻、細(xì)致螺旋藻、小型螺旋藻、微小螺旋藻、薩氏螺旋藻、泥澤螺旋藻和紫色螺旋藻。6.如權(quán)利要求1所述的預(yù)防和治療氣道炎癥的微藻組合物，其特征在于:所述B組分中單孢藻可替換為微擬球藻、新月菱形藻或三角褐指藻。7.—種包含權(quán)利要求1所述微藻組合物的制劑，其特征在于:包含A組分和B組分的藻粉以及藥學(xué)上可接受的輔料或包含A組分和B組分的脂提物以及藥學(xué)上可接受的輔料;所述脂提物的用量按藻粉當(dāng)量計算。8.如權(quán)利要求7所述微藻組合物的制劑，其特征在于:所述制劑劑型為口服或外用制劑。9.如權(quán)利要求1所述的微藻組合物在制備預(yù)防和治療氣道炎癥性疾病藥物中的應(yīng)用。10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于:所述氣道炎癥性疾病為支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、急性肺損傷和急性呼吸衰竭綜合癥。
【文檔編號】A61K36/05GK105998086SQ201610458777
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月22日
【發(fā)明人】熊婕, 劉琪, 張泊遙, 潘帆, 潘一帆, 明媚, 鄧中洋, 吳紅艷, 盧凡
【申請人】湖北工業(yè)大學(xué)