一種豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑、制備方法及應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種疫苗保護(hù)劑及制備方法，具體涉及一種豬丹毒疫苗耐熱保護(hù)劑及制備方法。該耐熱保護(hù)劑由重量百分比為明膠3?5％、乳糖15?17％、酪蛋白5.5?7.7％，余量為水組成。本發(fā)明的活疫苗用耐熱凍干保護(hù)劑，與傳統(tǒng)疫苗相比具有穩(wěn)定性好、保存時(shí)間長(zhǎng)、保存條件低、活疫苗的活性損傷小、溶解性好、原料簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，更適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
-種豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑、制備方法及應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種活疫苗保護(hù)劑及制備方法，具體設(shè)及一種豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù) 劑及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 豬丹毒是豬的Ξ大傳染病之一，呈世界性分布，也是一種人畜共患病，其病原是豬 丹毒桿菌。目前我國(guó)現(xiàn)有的豬丹毒活疫苗，有單苗、二聯(lián)苗和Ξ聯(lián)苗，他們對(duì)預(yù)防豬丹毒病 起到了重要的作用。
[0003] 活疫苗根據(jù)生產(chǎn)工藝和保存條件不同，可分為常規(guī)保護(hù)劑活疫苗和耐熱保護(hù)劑活 疫苗。目前國(guó)內(nèi)大多數(shù)細(xì)菌活疫苗產(chǎn)品為常規(guī)保護(hù)劑活疫苗，其保護(hù)劑主要成分為薦糖、明 膠等，保護(hù)劑組方簡(jiǎn)單、配制簡(jiǎn)便。由于抗原對(duì)溫度敏感，如果在2~8°C條件下，保存期只有 3~9個(gè)月，所W多數(shù)疫苗需要在-15°CW下保存。
[0004] 常規(guī)保護(hù)劑制備的豬丹毒活疫苗2~8Γ保存，有效期為9個(gè)月，若保存12個(gè)月細(xì)菌 存活僅為60% ;-15°CW下保存，有效期為12個(gè)月。在疫苗生產(chǎn)、運(yùn)輸W及使用過(guò)程中，如果 冷鏈系統(tǒng)控制不當(dāng)，疫苗保存環(huán)境溫度升高，常常導(dǎo)致疫苗效力下降或失效，造成免疫失 敗。
[0005] 疫苗抗原的損耗主要發(fā)生于凍干過(guò)程中溫度快速變化階段，因而耐熱保護(hù)技術(shù)是 疫苗品質(zhì)穩(wěn)定的關(guān)鍵技術(shù)。對(duì)多品種疫苗的制造檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，不同品種的疫苗因細(xì)菌(或 抗原蛋白）的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)不同，適用于它的保護(hù)技術(shù)也不同。其中有耐熱保護(hù)劑配方的不同， 也有制備工藝的特別要求不同，沒(méi)有一種可W通用于各種疫苗的"萬(wàn)能"保護(hù)劑。如果采用 的耐熱保護(hù)技術(shù)不恰當(dāng)，盡管疫苗能在冷藏條件下保存，但運(yùn)項(xiàng)技術(shù)給疫苗品質(zhì)帶來(lái)的提 升作用就難W體現(xiàn)?，F(xiàn)實(shí)中也長(zhǎng)遇到部分采用了耐熱保護(hù)技術(shù)的產(chǎn)品，但仍然不得不加大 使用劑量才能實(shí)現(xiàn)有效免疫的情況。
[0006] 因此，疫苗耐熱保護(hù)劑配方的選擇及工藝技術(shù)的重要性已不言而喻，它不僅為疫 苗的冷鏈運(yùn)輸和膽藏提供了便利，更加關(guān)鍵的是大大提升了疫苗的效力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中豬丹毒活疫苗保存條件苛刻，有效期短的缺陷， 提供一種豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑及制備方法，從而使其保存條件更為溫和，有效期更長(zhǎng)， 滿(mǎn)足市場(chǎng)對(duì)該產(chǎn)品的需求。
[000引為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑所采用的技術(shù)方案是:一種豬 丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑，是由W下重量百分含量的組分組成：明膠2-6%、乳糖8-24%、酪蛋 白3.3-9.9%，余量為水。
[0009] 優(yōu)選為明膠4%、乳糖16%、酪蛋白6.6%，余量為水。
[0010] 所述的水為注射用水。
[0011] 本發(fā)明的目的還在于提供一種豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑的制備方法。
[0012] 本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑的制備方法所采用的技術(shù)方案是:一種豬丹毒活疫苗耐熱 保護(hù)劑的制備方法，將明膠、乳糖、酪蛋白溶于水后，攬拌直至各組分徹底溶解，116Γ條件 下，滅菌30分鐘，得到豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑。
[0013] 所述的水為注射用水。
[0014] 本發(fā)明的目的還在于提供一種采用耐熱保護(hù)劑的豬丹毒活疫苗。
[0015] 本發(fā)明的豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑活疫苗所采用的技術(shù)方案是:一種耐熱凍干保 護(hù)劑的豬丹毒活疫苗，在無(wú)菌條件下，將細(xì)菌耐熱保護(hù)劑加到細(xì)菌抗原中，按照1:1的重量 比均勻混合，搖勻后，將每一個(gè)疫苗瓶中分裝2.5ml懸浮液，然后進(jìn)行冷凍干燥，得到豬丹毒 活疫苗。
[0016] 其中所述，細(xì)菌耐熱保護(hù)劑是由W下重量百分含量的組分組成：：明膠2-6%、乳糖 8-24%、酪蛋白3.3-9.9%，，余量為水。
[0017]優(yōu)選為明膠4%、乳糖16%、酪蛋白6.6%，余量為水。
[0018] 所述細(xì)菌抗原為豬丹毒活菌(按《中華人民共和國(guó)獸醫(yī)用生物制品規(guī)程》二000版 制備獲得)。
[0019] 所述冷凍干燥的具體步驟為:將各疫苗瓶依次經(jīng)過(guò)W下凍干程序：
[0020] 1、預(yù)凍控制： 「00211
[0022] 2、冷井設(shè)置：
[0023] 捕水器制冷設(shè)定溫度設(shè)定-60°C ;
[0024] 預(yù)抽真空0. lAmBar，報(bào)警真空0.22mBa;r。
[0025] 3、一次干燥：
[0026]
[0029] 本發(fā)明的活疫苗用耐熱保護(hù)劑保存的豬丹毒活疫苗，與傳統(tǒng)疫苗相比，具有W下 優(yōu)點(diǎn)：
[0030] 1)、保存溫度較高，在2-8°C時(shí)保護(hù)性能相對(duì)穩(wěn)定，便于膽存、運(yùn)輸和使用；2)、保
[0031] 存時(shí)間長(zhǎng)，通常在2-8 Γ能保存24個(gè)月W上，并且疫苗在保存24個(gè)月后活菌數(shù)量仍 超過(guò)90% W上，而常規(guī)疫苗2-8°C保存12個(gè)月細(xì)菌存活僅為60%，本技術(shù)方案的豬丹毒活疫 苗效力檢驗(yàn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)；
[0032] 3)、耐熱保護(hù)劑減少了病毒在冷凍干燥過(guò)程中各種理化因素可能對(duì)制品活性的損 傷，活疫苗在保存時(shí)間內(nèi)的活性變化較小，對(duì)活疫苗起到了很好的保護(hù)作用；
[0033] 4)、耐熱保護(hù)劑組方中多采用低分子化合物乳糖，可提高微生物存活率，形成均一 懸液，起到水分緩解作用；高分子化合物酪蛋白，對(duì)微生物有保護(hù)作用，可促進(jìn)其升華形成 耐熱骨架阻斷熱傳導(dǎo)和熱福射;水解明膠可去掉雜質(zhì)蛋白、無(wú)抗原性、無(wú)過(guò)敏反應(yīng)、無(wú)熱源， 并且分子量小、均質(zhì)、易溶于水，可過(guò)濾除菌，共烙點(diǎn)為-12Γ，對(duì)微生物的保護(hù)作用高出普 通明膠10%W上；
[0034] 5)、保護(hù)劑配方選用相對(duì)靈活，避免配方成分多或復(fù)雜的弊端，且制備條件溫和操 作簡(jiǎn)便，更加適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0035] 除非另有定義，本發(fā)明使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)的含義與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域 普通技術(shù)人員通常理解的含義相同。通常，本發(fā)明使用的命名是本領(lǐng)域公知的或常用的，若 未特別指明，本發(fā)明實(shí)施例中所用的材料均可市售獲得。為了使本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題、 技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，W下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0036] 實(shí)施例1:豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑的制備
[0037] 準(zhǔn)確稱(chēng)取明膠40g、酪蛋白66g、乳糖160克，加入適量的注射用水?dāng)埌柚敝翉氐兹?解，加注射用水至1L;116°C條件下滅菌30分鐘，冷卻，得到豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑。
[0038] 實(shí)施例2:豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑的制備
[0039] 準(zhǔn)確稱(chēng)取明膠20g、酪蛋白33g、乳糖80克，加入適量的注射用水?dāng)埌柚敝翉氐兹?解，加注射用水至1L;116°C條件下滅菌30分鐘，冷卻，得到豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑。
[0040] 實(shí)施例3:豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑的制備
[0041] 準(zhǔn)確稱(chēng)取明膠60g、酪蛋白99g、乳糖240克，加入適量的注射用水?dāng)埌柚敝翉氐兹?解，加注射用水至1L;116°C條件下滅菌30分鐘，冷卻，得到豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑。
[0042] 實(shí)施例4:豬丹毒活疫苗的制備
[0043] 在無(wú)菌條件下，將實(shí)施例1中制備得到的豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑加到豬丹毒活 疫苗中，按照1:1的重量比均勻混合，搖勻后，將每一個(gè)疫苗瓶中分裝2.5ml懸浮液，然后進(jìn) 行如下冷凍干燥操作步驟：
[0044] 1)預(yù)凍控制：設(shè)定溫度2°C，設(shè)定時(shí)間Imin，持續(xù)時(shí)間lOmin;設(shè)定溫度-45°C，設(shè)定 時(shí)間Imin，持續(xù)時(shí)間120min;
[0045] 2)冷井設(shè)置：捕水器制冷設(shè)定溫度設(shè)定-6(TC，預(yù)抽真空O.HmBar，報(bào)警真空 0.22mBar；
[0046] 3)-次干燥：設(shè)定溫度-25°C，設(shè)定時(shí)間90min，持續(xù)時(shí)間120min，控制真空 0. lAmBar;設(shè)定溫度-10°C，設(shè)定時(shí)間150min，持續(xù)時(shí)間900min，控制真空0. HmBar;設(shè)定溫 度5°C，設(shè)定時(shí)間120min，持續(xù)時(shí)間60min，控制真空0. lAmBar;
[0047] 4)解析干燥：設(shè)定溫度25 °C，設(shè)定時(shí)間20min，持續(xù)時(shí)間120min，控制真空 0. lAmBar;設(shè)定溫度25°C，設(shè)定時(shí)間30min，持續(xù)時(shí)間Omin，控制真空OmBar;
[004引制備得到豬丹毒活疫苗。
[0049] 將實(shí)施例2-3中制備得到的豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑按照實(shí)施例4所述方法，同樣 制備得到豬丹毒活疫苗。
[0050] 實(shí)施例5:成品檢驗(yàn)
[0051] 按照上述實(shí)施例1、2、3及實(shí)施例4所述方法分別制備得到豬丹毒活疫苗，其批號(hào)依 次為120702、120703、120804。將^批豬丹毒活疫苗分別于制備完畢保存前及2-8°(：條件保 存30個(gè)月后對(duì)性狀、純粹檢驗(yàn)、鑒別檢驗(yàn)、活菌計(jì)數(shù)、安全檢驗(yàn)、效力檢驗(yàn)、剩余水分測(cè)定、真 空度測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。
[0052] 各項(xiàng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：
[0053] 1、性狀檢驗(yàn):應(yīng)為淡褐色海綿狀疏松團(tuán)塊，易與瓶壁脫離，加稀釋液后迅速溶解；
[0054] 2、純粹檢驗(yàn):按《中國(guó)獸藥典》規(guī)定的方法進(jìn)行檢驗(yàn)；
[0055] 3、鑒別檢驗(yàn):用明膠培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，應(yīng)呈線(xiàn)狀生長(zhǎng)；
[0056] 4、活菌計(jì)數(shù)：按瓶簽注明頭份，用含10%牛血清的馬下瓊脂平板做活菌計(jì)數(shù)（按 《中國(guó)獸藥典》規(guī)定的方法進(jìn)行），結(jié)果為每頭份疫苗含活菌應(yīng)不低于7.0X108'^FU;
[0057] 5、安全檢驗(yàn):按瓶簽注明頭份，將疫苗用20%侶膠生理鹽水稀釋?zhuān)は伦⑸潴w重20 ~2?小白鼠10只，每只2頭份，觀察14日，檢驗(yàn)小鼠均全部健活；
[005引6、效力檢驗(yàn):按瓶簽注明頭份用20%侶膠生理鹽水稀釋成1ml含1/10使用劑量，皮 下注射體重16~1地小白鼠 10只，每只0.2ml (含1 /50使用劑量）。14日后連同條件相同的對(duì) 照小白鼠 6只，其中3只對(duì)照小白鼠和免疫小白鼠各皮下注射1000MLD的豬丹毒桿菌菌液，另 3只對(duì)照小白鼠各皮下注射1MLD的豬丹毒桿菌菌液。觀察10日，注射1000MLD的對(duì)照小白鼠 全部死亡，注射1MLD的對(duì)照小鼠至少死亡2只，免疫小白鼠至少保護(hù)8只；
[0059] 7、剩余水分測(cè)定:按《中國(guó)獸藥典》規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果為應(yīng)不超過(guò)4.0%;
[0060] 8、真空度測(cè)定：按《中國(guó)獸藥典》規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)定結(jié)果3批制品均應(yīng)出現(xiàn)白色 或粉色或紫色輝光。
[0061] 檢測(cè)結(jié)果如下表：
[0062]
[0063] 實(shí)施例6:豬丹毒活疫苗保存期實(shí)驗(yàn)
[0064] 按照上述實(shí)施例1、2、3及實(shí)施例4所述方法分別制備得到豬丹毒活疫苗，其批號(hào)依 次為120702、120703、120804。將Ξ批豬丹毒活疫苗分別保存于2-8°C條件下0天、6個(gè)月、12 個(gè)月、18個(gè)月、24個(gè)月、30個(gè)月后檢測(cè)其活菌計(jì)數(shù)。
[0(?日]檢測(cè)結(jié)果如下：
[0066]
[0068] 實(shí)施例7 :豬丹毒活疫苗保存期實(shí)驗(yàn)
[0069] 按照上述實(shí)施例1、2、3及實(shí)施例4所述方法分別制備得到豬丹毒活疫苗，其批號(hào)依 次為120702、120703、120804。將Ξ批豬丹毒活疫苗分別保存于37°C條件下ο天、7天、10天、 15天后檢測(cè)其活菌計(jì)數(shù)。
[0070] 檢測(cè)結(jié)果如下：
[0071]
[0072] 實(shí)施例5-7實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：本發(fā)明的保護(hù)劑所制備的豬丹毒活疫苗，在放在2-8°C 可保存24個(gè)月W上。并且經(jīng)過(guò)安全、效力等試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，選用耐熱保護(hù)劑配方制成的凍干疫苗 在2-8°C條件下放置24個(gè)月，其中分別于第12、18、24和30個(gè)月檢測(cè)疫苗的活菌數(shù)量，發(fā)現(xiàn)疫 苗在保存24個(gè)月后活菌數(shù)量仍超過(guò)原來(lái)的90% W上，安全檢驗(yàn)和效力檢驗(yàn)均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 要求。應(yīng)當(dāng)說(shuō)明的是，雖然本發(fā)明W較佳實(shí)施例掲露如上，然其并非用W限定本發(fā)明，任何 熟習(xí)此項(xiàng)技藝者，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等， 均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑，其特征在于由以下重量百分含量的組分組成：明膠 2-6 %、乳糖8-24 %、酪蛋白3.3-9.9 %，余量為水。2. 如權(quán)利要求1所述的保護(hù)劑，其特征在于由以下重量百分含量的組分組成：明膠4%、 乳糖16%、酪蛋白6.6%，余量為水。3. 如權(quán)利要求1或2所述的保護(hù)劑，其特征在于所述的水為注射用水。4. 一種豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑的制備方法，其特征在于將明膠、乳糖、酪蛋白溶于水 后，攪拌直至各組分徹底溶解，116°C條件下，滅菌30分鐘，得到豬丹毒活疫苗耐熱保護(hù)劑。5. 如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于明膠、乳糖、酪蛋各組分的重量百分比為明膠 2-6%、乳糖8-24%、酪蛋白3.3-9.9%，水為注射用水。6. 如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于明膠、乳糖、酪蛋各組分的重量百分比為明膠 4 %、乳糖16 %、酪蛋白6.6 %，水為注射用水。7. -種采用耐熱保護(hù)劑的豬丹毒活疫苗，其特征在于在無(wú)菌條件下，將細(xì)菌耐熱保護(hù) 劑加到豬丹毒活疫苗里，按照1:1的重量比均勻混合搖勻，然后進(jìn)行冷凍干燥，得到豬丹毒 活疫苗。8. 如權(quán)利要求7所述的豬丹毒活疫苗，其特征在于所述的冷凍干燥依次經(jīng)歷預(yù)凍控制、 冷井設(shè)置、一次干燥及解析干燥四個(gè)步驟，其中 1) 預(yù)凍控制：設(shè)定溫度2°C，設(shè)定時(shí)間lmin，持續(xù)時(shí)間lOmin;設(shè)定溫度-45°C，設(shè)定時(shí)間 lmin，持續(xù)時(shí)間120min; 2) 冷井設(shè)置:捕水器制冷設(shè)定溫度設(shè)定_60°C，預(yù)抽真空0.14mBar，報(bào)警真空0.22mBar; 3) -次干燥:設(shè)定溫度-25°C，設(shè)定時(shí)間90min，持續(xù)時(shí)間120min，控制真空0.14mBar;設(shè) 定溫度-10°C，設(shè)定時(shí)間150min，持續(xù)時(shí)間900min，控制真空0.14mBar;設(shè)定溫度5°C，設(shè)定時(shí) 間12 Om i η，持續(xù)時(shí)間6 Om i η，控制真空0.14mBar; 4) 解析干燥:設(shè)定溫度25°C，設(shè)定時(shí)間20min，持續(xù)時(shí)間120min，控制真空0.14mBar;設(shè) 定溫度25°C，設(shè)定時(shí)間30min，持續(xù)時(shí)間Omin，控制真空OmBar。
【文檔編號(hào)】A61K47/42GK105999288SQ201610573467
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年7月20日
【發(fā)明人】肖華春, 王成業(yè), 魏磊, 汪鑫鑫, 李玉梅, 王棟, 尚雅軻, 李瑞潔, 馬艷茹, 虞慎義, 王志豪, 范龍祥, 許冬, 張路, 張肖玲
【申請(qǐng)人】安徽東方帝維生物制品股份有限公司