多西紫杉醇、小檗胺雙載藥殼聚糖納米粒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物制劑技術領域，具體涉及一種多西紫杉醇、小檗胺雙載藥殼聚糖納米粒及其制備方法。本發(fā)明所述納米粒是先將多西紫杉醇與煙酰胺制備成共晶，再與小檗胺同時包封于殼聚糖納米粒。本發(fā)明提供的口服納米粒是利用煙酰胺與主藥形成共晶，提高多西紫杉醇的水溶性；利用小檗胺的增敏作用，促進腫瘤細胞的凋亡；利用殼聚糖增加藥物體內滯留時間，降低藥物體內清除率；本發(fā)明將三者聯合應用，并制備成納米粒，口服后經胃腸道吸收，具有顯著提高紫杉醇的口服生物利用度的作用。本發(fā)明的制備納米粒方法簡單，生產成本低，易于規(guī)?；a。
【專利說明】
多西紫杉醇、小檗胺雙載藥殼聚糖納米粒及其制備方法
技術領域
[0001 ]本發(fā)明屬于藥物制劑技術領域，具體涉及一種多西紫杉醇、小檗胺雙載藥殼聚糖 納米粒及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 多西紫杉醇是第二代紫衫烷化合物，是最有效的廣譜抗癌藥物之一。目前，多西紫 杉醇上市劑型為注射劑Taxotere和Abraxane，由于多西紫杉醇水中溶解度極低，Taxotere 中含有吐溫-80作為助溶劑，臨床使用前又加入了大量的乙醇增溶，這使Taxotere存在嚴重 的毒性和致敏性。相比注射劑，口服制劑具有很多優(yōu)點，比如患者順應性強，不需要專門的 醫(yī)護人員注射給藥，患者用藥后降低注射給藥C max過大引起的毒副作用等，因此，多西紫杉 醇口服制劑具有更廣闊的應用前景。
[0003] 將多西紫杉醇制備成口服制劑需要克服諸多障礙，如多西紫杉醇溶解度很低(〈10 yg/mL)，吸收差，且多西紫杉醇是P-gp外排蛋白和CYP3A代謝酶的底物，已吸收入細胞的多 西紫杉醇也容易被P-gp外排蛋白識別或肝臟中的CYP3A代謝排出體外。根據生物藥劑學分 類系統(tǒng)對低溶解度類藥物的指導，可以采取下列方法提高多西紫杉醇的生物利用度：（1)制 成共晶提高水溶性；（2)采用納米技術增加藥物的表面積；（3)采用殼聚糖增加藥物在胃腸 道內的停滯時間。此外，利用小檗胺的增敏作用，促進腫瘤細胞的凋亡。
[0004] 共晶，即活性藥物成分與共晶形成物，以氫鍵或其他非共價鍵、并以固定的化學計 量比相連而結合在同一晶格中，從而形成共晶物。煙酰胺是一種水溶性的維生素 B，易被身 體吸收，能提供較多的氫鍵。
[0005] 小檗胺，是一種鈣調蛋白拮抗劑，可調控腫瘤細胞的鈣調蛋白，影響腫瘤細胞內游 離鈣離子濃度，從而對腫瘤細胞的增殖有一定的抑制作用;有研究報道小檗胺可以逆轉腫 瘤的多藥耐藥性，作用機理可能也與小檗胺調節(jié)細胞內鈣離子濃度和抑制耐藥基因的表達 有關;小檗胺還對腫瘤細胞具有明顯的增敏作用，顯著提高腫瘤細胞對抗癌藥物的敏感性。
[0006] 納米粒作為抗腫瘤藥物的載體，更是得到了藥學研究領域巨大的關注。目前已有 關于殼聚糖納米粒作為多西紫杉醇載體的研究報道，其在控制多西紫杉醇的釋放，降低毒 副作用，提高靶向性，提高藥物溶解度、穩(wěn)定性和生物利用度等方面都具有較大的優(yōu)勢和特 點。

【發(fā)明內容】

[0007] 針對現有技術中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種多西紫杉醇、小檗胺雙載藥殼 聚糖納米粒及其制備方法，特別是為了將多西紫杉醇的給藥途徑從注射給藥轉變?yōu)榭诜o 藥，提供一種多西紫杉醇小檗胺雙載藥殼聚糖納米粒及其制備方法。本發(fā)明提供的多西紫 杉醇、小檗胺雙載藥殼聚糖納米粒由殼聚糖、三聚磷酸鈉、多西紫杉醇-煙酰胺共晶和小檗 胺組成，其結構為多西紫杉醇-煙酰胺共晶和小檗胺兩種藥物包封于殼聚糖納米粒中，多西 紫杉醇與煙酰胺以共晶的形式包載于納米粒中。
[0008] 本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現的：
[0009] 第一方面，本發(fā)明提供一種多西紫杉醇、小檗胺雙載藥殼聚糖納米粒，包括如下質 量百分比的各原料組分： 殼聚糖 73. 5~79. 6%, 三聚磷酸鈉 19. 6~24. 9%，
[0010] 多西紫杉醇-煙酰胺共晶 0. 20~0/74%， 小檗胺 0.25~1.32%;
[0011] 優(yōu)選地，所述殼聚糖的分子量為50~lOOKDa，脫乙酰度大于95%。當殼聚糖的分子 量過小不利于納米粒的顆粒的形成和載藥，當分子量過大，其溶解能力變差，且納米粒的粒 徑增大。
[0012] 本發(fā)明提供的納米粒平均粒徑為150~300nm。
[0013] 第二方面，本發(fā)明提供一種所述多西紫杉醇、小檗胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備 方法，包括以下步驟：
[0014] 將殼聚糖、小檗胺溶解于醋酸溶液中，制備混合溶液I;
[0015] 將多西紫杉醇-煙酰胺共晶和三聚磷酸鈉溶解于水中，制備混合溶液Π ;
[0016] 將所述混合溶液Π 加入混合溶液I中混合，制備得多西紫杉醇、小檗胺雙載藥殼聚 糖納米粒。
[0017] 優(yōu)選地，所述醋酸溶液的質量濃度為0.5~1.5 %。當醋酸濃度低于0.5 %，不利于 殼聚糖的溶解;而過高的的醋酸濃度對動物具有較大的刺激性，且對殼聚糖的鏈狀結構也 有所影響。
[0018] 優(yōu)選地，所述混合溶液I中，殼聚糖濃度為0.5~1. Omg/mL，小檗胺濃度為3.3~8.3 yg/mL。當殼聚糖濃度低于0.5mg/mL時，載體材料過少，不利于納米顆粒的形成和載藥，當大 于1. Omg/mL時，納米粒粒徑則增大。
[0019] 優(yōu)選地，所述水為超純水。
[0020] 優(yōu)選地，所述混合溶液Π 中，多西紫杉醇-煙酰胺共晶（以多西紫杉醇計)濃度為10 ~30yg/mL、三聚磷酸鈉的濃度為1. Omg/mL的混合溶液。
[0021 ]優(yōu)選地，所述加入具體為滴加。
[0022]優(yōu)選地，所述混合的方式具體為攪拌;進一步地，所述攪拌的方式為磁力攪拌。 [0023]優(yōu)選地，所述滴加完畢后，還需繼續(xù)攪拌30min。
[0024] 優(yōu)選地，所述混合后所得混合物中的殼聚糖與三聚磷酸鈉的質量比為（3~4): 1。 當殼聚糖與三聚磷酸鈉的質量比小于4:1時，三聚磷酸鈉量相對不足，該體系的交聯成球能 力差;當大于3:1時，三聚磷酸鈉含量相對增大，納米粒容易發(fā)揮團聚而導致沉淀。
[0025] 優(yōu)選地，所述多西紫杉醇-煙酰胺共晶通過如下步驟制備：
[0026] 將多西紫杉醇、煙酰胺加入有機溶劑中，恒溫攪拌，得有機溶劑體系；
[0027] 冷卻所述有機溶劑體系，析出晶體，即為多西紫杉醇-煙酰胺共晶。
[0028]優(yōu)選地，所述多西紫杉醇與煙酰胺的投料摩爾比1:(1~20)。
[0029] 優(yōu)選地，每5mg多西紫杉醇匹配的有機溶劑用量為2.5~20mL。
[0030]優(yōu)選地，所述有機溶劑包括甲醇、乙醇。多西紫杉醇為脂溶性藥物，煙酰胺是水溶 性物質，而兩種物質在甲醇、乙醇均具有良好的溶解能力。
[0031] 優(yōu)選地，所述恒溫攪拌的條件為:40~60°C、200~1500rpm、2~24h。
[0032] 優(yōu)選地，所述冷卻具體指冷卻至室溫。
[0033] 進一步優(yōu)選地，所述冷卻采用的設備為通風櫥中。
[0034] 優(yōu)選地，析出晶體后還需將所得晶體干燥。
[0035] 優(yōu)選地，所述干燥具體采用真空干燥。
[0036] 進一步地，所述真空干燥采用的裝置為真空干燥器。
[0037] 優(yōu)選地，所述干燥后還需對干燥晶體進行純化。
[0038] 進一步地，所述純化的方式具體為將所得晶體置于抽濾漏斗中，用超純水少量多 次洗滌，再將共晶物置于真空干燥器中干燥即得。
[0039] 優(yōu)選地，所述純化后的多西紫杉醇-煙酰胺共晶中二者的摩爾比是1:(1~2)。
[0040] 與現有技術相比，本發(fā)明具備如下有益效果：
[0041 ] (1)利用共晶技術，顯著提高藥物的水溶性；
[0042] (2)將多西紫杉醇和增敏劑小檗胺聯合用藥，促進腫瘤細胞的凋亡；
[0043] (3)將共晶、殼聚糖納米粒、多西紫杉醇和小檗胺聯用三者聯合應用，增加藥物吸 收，提高口服生物利用度，使用方便等優(yōu)點。
【附圖說明】
[0044]通過閱讀參照以下附圖對非限制性實施例所作的詳細描述，本發(fā)明的其它特征、 目的和優(yōu)點將會變得更明顯：
[0045]圖1為多西紫杉醇-煙酰胺共晶的XRD表征；
[0046]圖2為雙載藥納米粒的粒徑分布圖；
[0047]圖3為雙載藥納米粒的透射電鏡圖；
[0048]圖4為雙載藥納米粒體外釋放曲線；
[0049]圖5為雙載藥納米粒的細胞毒性圖；
[0050]圖6為雙載藥納米粒的體外小腸吸收曲線；
[00511圖7為雙載藥納米粒的藥動學曲線。
【具體實施方式】
[0052]下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。以下實施例將有助于本領域的技術 人員進一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應當指出的是，對本領域的普通技術 人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變化和改進。這些都屬于本發(fā)明 的保護范圍。
[0053] 實施例1
[0054]本實施例涉及一種多西紫杉醇-煙酰胺共晶的制備方法，包括如下步驟：
[0055] 將5mg多西紫杉醇與煙酰胺(投料摩爾比1:1)加入到2.5mL甲醇中，50°C以200rpm 的轉速攪拌2h。將此甲醇溶劑體系置于通風櫥中冷卻至室溫，使體系中的溶劑緩慢揮發(fā)析 出晶體，再置于真空干燥器中干燥即得。
[0056]本實施例中，多西紫杉醇-煙酰胺共晶的XRD表征如圖1所示，由圖1可知，多西紫杉 醇和煙酰胺都具有明顯的晶體衍射峰;物理混合物的圖譜中，多西紫杉醇的特征衍射峰比 較明顯，煙酰胺特征峰有所減弱，但沒有特征峰的消失;在共晶物的圖譜中，多西紫杉醇在 8°、17°、19°、20°左右的特征衍射峰完全消失，而9°左右的特征峰則明顯加強，煙酰胺在 15°、25°、28°的特征衍射峰完全消失;共晶物的圖譜與多西紫杉醇和煙酰胺物理混合物的 衍射圖譜完全不同，說明多西紫杉醇和煙酰胺之間可能構成了一種新的晶型。
[0057] 實施例2
[0058]本實施例涉及一種多西紫杉醇-煙酰胺共晶的制備方法，包括如下步驟：
[0059] 將5mg多西紫杉醇與煙酰胺(投料摩爾比1:10)加入到5mL甲醇中，60°C以500rpm的 轉速攪拌2h。將此甲醇溶劑體系置于通風櫥中冷卻至室溫，使體系中的溶劑緩慢揮發(fā)析出 晶體，再置于真空干燥器中干燥即得。
[0060]本實施例中，多西紫杉醇-煙酰胺共晶在水中的溶解度為31yg/mL。
[0061 ] 實施例3
[0062]本實施例涉及一種多西紫杉醇-煙酰胺共晶的制備方法，包括如下步驟：
[0063] 將5mg多西紫杉醇與煙酰胺(投料摩爾比1:20)加入到20mL乙醇中，40°C以1500rpm 的轉速攪拌24h。將此乙醇溶劑體系置于通風櫥中冷卻至室溫，使體系中的溶劑緩慢揮發(fā)析 出晶體，再置于真空干燥器中干燥即得。該實施例中的多西紫杉醇-煙酰胺共晶形成率為 97.6%〇
[0064] 實施例4
[0065] 本實施例涉及一種多西紫杉醇-煙酰胺共晶純化的方法，包括如下步驟：
[0066] 將多西紫杉醇-煙酰胺共晶置于抽濾漏斗中，用超純水少量多次洗滌，再將共晶物 置于真空干燥器中干燥即得。
[0067] 實施例5
[0068] 本實施例涉及一種多西紫杉醇、小檗胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，包括如 下步驟： 殼聚糖 73.5%， 三聚磷酸鈉 24.5%，
[0069] 多西紫杉醇-煙酰胺共晶 0. 25%， 小檗胺 1.2:3%。
[0070] 將分子量為50KDa殼聚糖和小檗胺溶解于0.5%醋酸溶液中，制備殼聚糖濃度為 0.5mg/mL，小檗胺濃度為8.3yg/mL的混合溶液(相I);
[0071] 多西紫杉醇-煙酰胺共晶（多西紫杉醇和煙酰胺摩爾比1:1)和三聚磷酸鈉溶解于 超純水中，制備成多西紫杉醇-煙酰胺共晶（以多西紫杉醇計)濃度為30yg/mL，三聚磷酸鈉 的濃度為1.〇mg/mL的混合溶液(相Π );
[0072] 在磁力攪拌條件下，將一定體積的相Π 緩慢恒速滴加至相I中，使殼聚糖與三聚磷 酸鈉的質量比為3:1，繼續(xù)攪拌30min。
[0073] 本實施例中，納米的粒徑分布如圖2所示，粒徑為215nm，PDI為0.171。
[0074] 實施例6
[0075] 本實施例涉及一種多西紫杉醇、小檗胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，包括如 下步驟： 殼聚糖 74.6%:， 三聚磷酸鈉 24.娜，
[0076] 多西紫杉醇-煙醜胺共晶. 0.· 25%, 小檗胺 0.25%。
[0077]將分子量為50KDa殼聚糖、小檗胺溶解于1.0%醋酸溶液中，制備殼聚糖濃度為 1 .Omg/mL，小檗胺濃度為3.3yg/mL的混合溶液(相I);
[0078] 多西紫杉醇-煙酰胺共晶（多西紫杉醇和煙酰胺摩爾比1:2)和三聚磷酸鈉溶解于 超純水中，制備成多西紫杉醇-煙酰胺共晶（以多西紫杉醇計)濃度為l〇yg/mL，三聚磷酸鈉 的濃度為1.Omg/mL的混合溶液(相Π );
[0079] 在磁力攪拌條件下，將一定體積的相Π 緩慢恒速滴加至相I中，使殼聚糖與三聚磷 酸鈉的質量比為3:1，繼續(xù)攪拌30min。
[0080] 本實施例中，納米粒的透射電鏡圖如圖3所示，納米粒呈圓形，分布均勻，微觀形態(tài) 較好。
[0081 ] 實施例7
[0082] 本實施例涉及一種多西紫杉醇、小檗胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，包括如 下步驟： 殼聚糖 7B. 5%, 三聚磷酸鈉 19. 6%，
[0083] 多西紫杉醇-煙酰胺共晶 0. 59%， 小檗胺 1.31%?
[0084]將分子量為50KDa殼聚糖和小檗胺溶解于1.5%醋酸溶液中，制備殼聚糖濃度為 0.5mg/mL，小檗胺濃度為8.3yg/mL的混合溶液(相I);
[0085] 多西紫杉醇-煙酰胺共晶（多西紫杉醇和煙酰胺摩爾比1:1.6)和三聚磷酸鈉溶解 于超純水中，制備成多西紫杉醇-煙酰胺共晶（以多西紫杉醇計)濃度為30yg/mL，三聚磷酸 鈉的濃度為1.Omg/mL的混合溶液(相Π );
[0086] 在磁力攪拌條件下，將一定體積的相Π 緩慢恒速滴加至相I中，使殼聚糖與三聚磷 酸鈉的質量比為4:1，繼續(xù)攪拌30min;
[0087] 本實施例中，納米粒的體外釋放曲線如圖4所示，細胞毒性如圖5所示，體外小腸吸 收曲線如圖6所示。圖4所示，多西紫杉醇原藥體外釋放較慢，12h累計釋放量為37%，雙載藥 納米粒中多西紫杉醇釋放量為66%，小檗胺累計釋放量為78%。圖5所示，雙載藥納米粒對 MCF-7腫瘤細胞的細胞毒性高于多西紫杉醇原藥和單載藥納米粒，說明多西紫杉醇和小檗 胺聯用，能夠增強對腫瘤細胞的毒性的作用。圖6所示，雙載藥納米粒能夠增加藥物的吸收， 降低藥物的外排作用；殼聚糖納米粒、多西紫杉醇和煙酰胺共晶、多西紫杉醇和小檗胺聯 用，這三者均具有增加吸收減低外排的作用。
[0088] 實施例8
[0089] 本實施例涉及一種多西紫杉醇小檗胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，包括如下 步驟： 殼聚糖 79,6%，： 三聚磷酸鈉 19. 9%，
[0090] 多西紫杉醇-煙酰胺_晶 20%， 小檗胺 0.27%。
[0091] 將分子量為lOOKDa殼聚糖和小檗胺溶解于1.0%醋酸溶液中，制備殼聚糖濃度為 1 .Omg/mL，小檗胺濃度為3.3yg/mL的混合溶液(相I);
[0092] 多西紫杉醇-煙酰胺共晶（多西紫杉醇和煙酰胺摩爾比1:1.6)和三聚磷酸鈉溶解 于超純水中，制備成多西紫杉醇-煙酰胺共晶（以多西紫杉醇計)濃度為l〇yg/mL，三聚磷酸 鈉的濃度為1.Omg/mL的混合溶液(相Π );
[0093] 在磁力攪拌條件下，將一定體積的相Π 緩慢恒速滴加至相I中，使殼聚糖與三聚磷 酸鈉的質量比為4:1，繼續(xù)攪拌30min。
[0094] 本實施例中，納米粒的粒徑為300nm。納米粒的藥動學曲線如圖7所示，相對于多西 紫杉醇原藥，生物利用度提高了 45倍。
[0095] 對比例1
[0096]本對比例是實施例9的對比例，不同之處僅在于，對比例采用200KDa的殼聚糖。結 果表明，殼聚糖不能完全溶解于1%醋酸溶液，有少量的不溶物。
[0097] 對比例2
[0098] 本實施例涉及一種單載藥納米粒（多西紫杉醇納米粒）的制備方法，包括如下步 驟：
[0099] 將分子量為50KDa殼聚糖溶解于1.0%醋酸溶液中，制備殼聚糖濃度為0.5mg/mL (相 I);
[0100]將多西紫杉醇-煙酰胺共晶（多西紫杉醇和煙酰胺摩爾比1:1.5)和三聚磷酸鈉溶 解于超純水中，制備成多西紫杉醇-煙酰胺共晶（以多西紫杉醇計)濃度為30yg/mL，三聚磷 酸鈉的濃度為1.0mg/mL的混合溶液(相Π );
[0101]在磁力攪拌條件下，將一定體積的相Π 緩慢恒速滴加至相I中，使殼聚糖與三聚磷 酸鈉的質量比為3:1，繼續(xù)攪拌30min。
[0102] 本實施例制備的納米粒的粒徑分布為150nm，包封率為78.1%，載藥量為0.74%。
[0103] 本對比例與實施例的效果對比見圖4、圖5、圖6、圖7。
[0104]綜上所述，本發(fā)明利用共晶技術，顯著提高藥物的水溶性;利用殼聚糖增加藥物體 內滯留時間，降低藥物體內清除率;將多西紫杉醇和增敏劑小檗胺聯合用藥，促進腫瘤細胞 的凋亡;本發(fā)明將三者聯合應用，實現了增加藥物吸收、提高生物利用度，使用方便等諸多 顯著的技術進步。
[0105]以上對本發(fā)明的具體實施例進行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述 特定實施方式，本領域技術人員可以在權利要求的范圍內做出各種變化或修改，這并不影 響本發(fā)明的實質內容。在不沖突的情況下，本申請的實施例和實施例中的特征可以任意相 互組合。
【主權項】
1. 一種多西紫杉醇、小築胺雙載藥殼聚糖納米粒，其特征在于，包括如下質量百分比的 各原料組分： 殼聚糖 73. 5~79. 6%， H聚磯酸鋼 19. 6~24. 9%， 多西紫杉醇-煙醜胺共晶 化20~0. 74%， 小裴胺 0.巧~L 32%。2. -種根據權利要求1所述的多西紫杉醇、小築胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，其 特征在于，包括W下步驟： 將殼聚糖、小築胺溶解于醋酸溶液中，制備混合溶液I; 將多西紫杉醇-煙酷胺共晶和S聚憐酸鋼溶解于水中，制備混合溶液n; 將所述混合溶液n加入混合溶液I中混合，制備得多西紫杉醇、小築胺雙載藥殼聚糖納 米粒。3. 根據權利要求2所述的多西紫杉醇、小築胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，其特征 在于，所述混合溶液忡，殼聚糖濃度為0.5~1. Omg/mL，小築胺濃度為3.3~8.3iig/mL。4. 根據權利要求2所述的多西紫杉醇、小築胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，其特征 在于，所述混合溶液n中，多西紫杉醇-煙酷胺共晶的濃度為10~30yg/mL、S聚憐酸鋼的濃 度為 l.Omg/mL。5. 根據權利要求2所述的多西紫杉醇、小築胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，其特征 在于，所述加入具體為滴加;所述混合的方式具體為攬拌。6. 根據權利要求2所述的多西紫杉醇、小築胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，其特征 在于，所述混合后所得混合物中的殼聚糖與=聚憐酸鋼的質量比為(3~4): 1。7. 根據權利要求2所述的多西紫杉醇、小築胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，其特征 在于，所述多西紫杉醇-煙酷胺共晶通過如下步驟制備： 將多西紫杉醇、煙酷胺加入有機溶劑中，恒溫攬拌，得有機溶劑體系； 冷卻所述有機溶劑體系，析出晶體，即為多西紫杉醇-煙酷胺共晶。8. 根據權利要求7所述的多西紫杉醇、小築胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，其特征 在于，所述多西紫杉醇與煙酷胺的投料摩爾比1:(1~20);每5mg多西紫杉醇匹配的有機溶 劑用量為2.5~20mL。9. 根據權利要求7或8所述的多西紫杉醇、小築胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，其 特征在于，所述有機溶劑為甲醇或乙醇。10. 根據權利要求7所述的多西紫杉醇、小築胺雙載藥殼聚糖納米粒的制備方法，其特 征在于，所述t旦溫攬拌的條件為:40~60 °C、200~1500巧m、2~24h。
【文檔編號】A61K47/02GK106031726SQ201610153954
【公開日】2016年10月19日
【申請日】2016年3月17日
【發(fā)明人】沈琦, 李靜, 吳健, 張君
【申請人】上海交通大學