SChiglautone A衍生物的組合物用于制備防治胰腺纖維化藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備預防或治療胰腺纖維化藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有預防或治療胰腺纖維化的作用，具有開發(fā)預防或治療胰腺纖維化藥物的價值。
【專利說明】
Sch i g I autone A衍生物的組合物用于制備防治胰腺纖維化 藥物
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術】
[0002] 胰腺纖維化是各種原因所致慢性胰腺炎的共同特征，同時也是與其伴隨的組織病 理學特點，表現(xiàn)為大量成纖維細胞增生和富含連接組織的細胞外基質。是多種原因導致胰 腺損傷修復的結果，近期發(fā)現(xiàn)胰腺星狀細胞和多種細胞因子與胰腺纖維化有關，胰腺纖維 化目前發(fā)病率愈來愈高，急需研發(fā)高效低毒的抗胰腺纖維化藥物。
[0003] 胰腺纖維化的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產物中 尋找化合物或先導化合物并進行結構修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最 有重要價值。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個201 1年發(fā)表（Fan-Yu Meng et al .， 2011.Schiglautone A,a New Tricyclic Triterpenoid with a Unique 6/7/9-Fused Skeleton from the Stems of Schisandra glaucescens.Organic Letters 13(2011) 1502-1505)的化合物，我們對化合物I進行了結構修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物 III和化合物IV，并用化合物ΠI和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗胰腺纖維化活性 進行了評價，其具有抗胰腺纖維化活性。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質量百分數(shù)分別為70%和30%。
[0006]
[0007] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[0008] 藥效學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗胰腺纖維化作用。本發(fā)明的藥學 上可接受的鹽具有同樣的藥效。
[0009] 以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1化合物Schiglautone A的制備
[0011] 化合物Schiglautone A(I)的制備方法參照Fan-Yu Meng等人發(fā)表的文獻(Fan-Yu Meng et al.,2011.Schiglautone A,a New Tricyclic Triterpenoid with a Unique 6/ 7/9-Fused Skeleton from the Stems of Schisandra glaucescens.Organic Letters 13(2011 )1502-1505)的方法。
[0012]
[0013] 實施例2Schiglautone A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I(502mg，1.00mmol)溶于15mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙烷(7.52(^，40.00111111〇1)和61^的50%氫氧化鈉溶液。混合物在35攝氏 度攪拌Shdh之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然后 對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶 劑得到產物粗品。產物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100:1. 〇，v/V)，收 集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(508mg，71 % )。
[0015] ΧΗ NMR(500MHz,DMS0-d6)5l3.40(s,lH),6.10(s,lH),5.63(s,lH),5.53(s,lH), 3.85(d,J = 11.2Hz,4H) ,3.52(d,J=10.8Hz,4H) ,2.96(s,lH) ,2.20(s,lH) ,2.16(s,2H), 2.00(s,lH),1.84(d,J=13.9Hz,4H),1.69(s,lH),1.58(dd,J = 22.2,8.5Hz,4H) ,1.51(s, lH),1.47(s,lH),1.26(dd,J=9.1,4.4Hz,4H),1.21(s,lH),1.08-0.98(m,4H),0.96-0.94 (m,9H),0.94-0.85(m,6H).
[0016] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S211.46(s),209.14(s),170.06(s),161.12(s),143.51 (s) ,132.01(s) ,127.77(s) ,85.96(s),82.40(s),70.19(s),69.10(s),57.14(s),52.73 (s),51.90(s),45.77(s),40.67(s),38.57(s),38.32(s),35.04(s),33.55(s),33.27(s), 29.85(s),28.98(s),26.71(s),25.50(s),24.05(s),22.31(s),21.06(s),20.56(s),20.00 (s),18.69(s),18.11(s),15.07(s).
[0017] HRMS(ESI)m/z[M-H]_calcd for C34H5iBr2〇6:715.2032；found 715.2027.
[0018]
[0019] 買施例3Schiglautone A的0-(1Η-四氮唑基）乙基佑生物（III)的合成 [0020] 將化合物II(358mg，0.5mmo 1)溶于15mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmo 1)，碘化鉀（84mg，0 · 5mmo 1)和1H-四氮唑（140 lmg，20mmo 1)，混合物加熱回流5h。反應 結束后將反應液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機相。依次用水和飽和 食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。因 為互變異構作用，在反應條件下會生成1H-四氮唑基和2H-四氮唑基兩種取代產物。產物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1，v/v)，收集淡黃色集中洗脫帶，再將 淡黃色洗脫帶濃縮，用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100:0.5，v/v)，依次收集 兩個淡黃色的洗脫帶，濃縮前1個洗脫帶即得到化合物III的淡黃色固體(79.8mg，23%)。
[0021] ΧΗ NMR(500MHz,DMS0-d6)5l6.29(s,lH),9.99(s,lH),9.93(s,lH),6.25(s,lH), 5.76(s,lH),5.40(s,lH),4.57(s,1H),4.38(s,1H),4.32(s,1H),4.21(s,1H),3.96(d,J= 11.9Hz,4H),3.33(s,lH),2.55(s,lH),2.51(s,2H),2.39(s,lH),l.98(s,3H),1.82-1.76 (m,3H),1.73(s,lH),1.65(d,J=6.5Hz,2H),l.60(s,lH),1.53(s,1H),1.47-1.37(m,4H), 1.30(s,lH),1.19(s,lH),1.10(t,J=12.5Hz,3H),1.08(t,J=12.5Hz,9H),1.03(s,3H), 0.86(s,3H).
[0022] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S211.72(s),209.42(s),170.36(s),161.38(s),145.37 (s),143.80(s),132.29(s),128.04(s),86.25(s),82.68(s),66.14(s),65.60(s),57.33 (s),52.91(s),52.08(s),46.81(s),45.95(s),40.84(s),38.76(s),38.50(s),35.21(s), 33.74(s),30.01(s),29.16(s),26.91(s),25.66(s),24.23(s),22.51(s),21.22(s),20.74 (s),20.20(s),18.85(s),18.29(s),15.27(s).
[0023] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C36H55N8〇6:695.4245;found:695.4248〇
[0024]
[0025] 實施例4Schiglautone A的0-(苯并咪唑基）乙基衍生物的合成
[0026] 將化合物II(358mg，0.5mmo 1)溶于15mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmol)，鵬化鉀(84mg，0 · 5mmol)和苯并咪唑（1180mg，lOmmol)，混合物加熱回流6h。反應 結束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產物粗品。產物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.5，v/v)，收集棕色集中洗脫帶，濃縮 即得到化合物IV的棕色固體（169.9mg，43 % )。
[0027] ΧΗ NMR(500MHz,DMS0-d6)5l3.32(s,lH) ,8.38(s,2H) ,7.66(d,J = 25.0Hz,4H), 7.39(s,2H),7.32(s,2H),6.25(s,1H),5.64(d,J=18.7Hz,2H),4.34(s,1H),4.28(s,lH), 4.18(d,J=13.7Hz,2H),4.04(s,2H),3.99(s,2H),3.13(s,1H),2.65(s,2H),2.26(s,1H), 2.17(s,lH) ,2.06(s,lH),l.98(s,3H) ,1.87(d,J= 16.4Hz,2H) ,1.66(dd,J = 8.0,6.6Hz, 4H),1.62(s,lH),1.49(s,lH),1.41(dd J=19.6,10.4Hz,2H),1.37(d,2H),1.20-l.ll(m, 4H) ,1.07(d,J = 20.0Hz,6H),103(d,J = 20.0Hz,3H),1.01(d,J = 20.0Hz,3H) ,0.95(d,J = 20.0Hz,3H).
[0028] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)δ211·30(s),208·98(s),169·90(s),160·96(s),146·28 (s),143.34(s),139.64(s),133.48(s),131.85(s),127.61(s),123.92(s),123.35(s), 118.55(s),110.85(s),85.79(s),82.26(s),67.74(s),67.20(s),57.00(s),52.56(s), 51.73(s),45.63(s),44.94(s),40.49(s),38.42(s),38.17(s),34.86(s),33.40(s),29.68 (s),28.81(s),26.57(s),25.33(s),23.88(s),22.17(s),20.89(s),20.39(s),19.86(s), 18.52(s),17.87(s),14.93(s).
[0029] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for C48H63N4〇6:791.4748;found:791.4744。
[0030]
[0031 ]實施例5組合物抗胰腺纖維化活性 [0032] 1 材料
[0033] 1 · 1動物Wistar大鼠，雄性，體重180_200g。
[0034] 1.2組合物劑量:0.911^/1^。
[0035] 組合物的制備：將研磨之后過200目網的70mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網的30mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物， 使用時用水溶解這l〇〇mg的組合物即得到組合物的溶液。
[0036] 2實驗方法
[0037] 2.1造模方法:Wistar大鼠以腹腔注射dl-乙硫氨酸250mg/天，連續(xù)2個月，可出現(xiàn) 胰臟腺細胞減少，間質內脂肪及結締組織的增生。
[0038] 2.2分組及給藥方法
[0039]模型大鼠隨機分為模型組，組合物0.9mg/kg組、化合物III 0.9mg/kg組和化合物 IV 0.9mg/kg組，另設空白對照組。給藥組于造模開始后給藥，口服連續(xù)30天;60天時解剖動 物。
[0040] 2.3檢測指標
[00411 2.3.1實驗結束時取胰臟稱重。
[0042] 2.3.2胰臟羥脯氨酸含量測定取10011^樣本在水中勻漿，110°(：1(^!1(：1中水解20小 時。HC1用氮氣揮發(fā)，水解產物用雙蒸水溶解后過濾。取0.5ml液體與3ml枸櫞酸磷酸緩沖液 (0.15M枸櫞酸加0.6M磷酸氫二鈉)和0.5ml溶于9M磷酸的1M過碘酸混合。加1.75ml提取緩 沖液（5份甲苯：5份2-甲基-1-丙醇：2份1-丙醇），震蕩30min，離心。組織相（0.6ml)與 Ehrlich，s試劑混合放置15min。在565nm測定吸收度，用4-輕-1-脯氨酸制作標準曲線計算 濃度，含量以ug/g組織表示。
[0043] 2.3.3組織學檢查胰臟組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，染色后鏡檢。對纖維 化情況評分(0-3分）。
[0044] 3 結果
[0045] 3.1組合物對大鼠胰臟臟器系數(shù)的影響
[0046] 實驗結束時，將大鼠處死、解剖，稱量體重和胰臟重并計算其與體重的比值(胰臟 臟器系數(shù)），結果見表1。組合物對胰臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較有顯著性差異?；?物III和化合物IV對胰臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較無顯著性差異。
[0047] 表 1
[0048]
[0049] *表示p〈0.05,與模型組比較
[0050] 3.2胰臟羥脯氨酸含量測定
[0051] 實驗結束時，對各組大鼠進行肺部羥脯氨酸含量測定，結果如表2。組合物對羥脯 氨酸含量的影響，與模型組比較有顯著性差異。化合物III和化合物IV對羥脯氨酸含量的影 響，與模型組比較無顯著性差異。
[0052] 表 2
[0053]
[0054]
[0055] *表示ρ〈0·05,與模型組比較
[0056] 3.3組織學檢查
[0057]實驗結束時，將大鼠處死、解剖;標本常規(guī)包埋、固定、HE染色，鏡檢。
[0058]結果:模型組第60天可見胰導管周圍嚴重炎癥反應;嗜中粒細胞核淋巴細胞浸潤， 間質水腫，出血以及偶見胰泡細胞壞死;胰泡細胞消失位置及胰泡間出現(xiàn)纖維化。
[0059] 組合物可減少炎癥反應和纖維化。評分結果見表3。組合物對評分的影響，與模型 組比較有顯著性差異。
[0060] 表 3
[0061]
[0062] *表示p〈0.05,與模型組比較;空白對照組的炎癥細胞浸潤和纖維化評分都為0.
[0063] 結論:本發(fā)明通過組合物對大鼠胰腺纖維化的影響，證實了組合物具有抗胰腺纖 維化的作用。因此，組合物可作為活性成分用于制備抗胰腺纖維化的藥物。而化合物III和 化合物IV無此活性，不能用于制備抗胰腺纖維化的藥物。
[0064] 實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0065] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0066] 實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0067] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質量百分數(shù)分別為70%和30%，2. 如權利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質量百分數(shù)分別為70%和30%充分混合。3. -種如權利要求1所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應用。4. 如權利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應用，其特征為:所述組合物 逆轉胰腺纖維化所引起的胰臟臟器系數(shù)下降。5. 如權利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應用，其特征為:所述組合物 逆轉胰腺纖維化所引起的羥脯氨酸含量升高。6. 如權利要求3所述的組合物在治療胰腺纖維化藥物中的應用，其特征為:所述組合物 逆轉胰腺纖維化所引起的炎癥細胞浸潤升高。
【文檔編號】A61K31/41GK106038553SQ201610417036
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月13日
【發(fā)明人】陸賢
【申請人】南京廣康協(xié)生物醫(yī)藥技術有限公司