一種含小分子靶向藥物吉非替尼的藥物組合物及其在制備抗腫瘤藥物中的應用
【專利摘要】一種含小分子靶向藥物吉非替尼的藥物組合物及其在制備抗腫瘤藥物中的應用。本發(fā)明提供一種藥物組合物，其特征在于包含以下活性成分：熊果酸與吉非替尼。當物質的量比為10?20:1?25熊果酸與吉非替尼聯(lián)用時，可以起到協(xié)調抗癌細胞的增殖。通過將表皮生長因子受體酪氨酸激酶(EGFR?TK)抑制劑吉非替尼與高效低毒的抗腫瘤天然產物熊果酸進行聯(lián)合用藥，可以起到靶向抑制腫瘤細胞，提起到協(xié)調抗癌細胞的增殖的療效，從而降低藥物的毒副作用，最終提高治療癌癥的效果，可應用于制備抗腫瘤的藥物領域。
【專利說明】
一種含小分子靶向藥物吉非替尼的藥物組合物及其在制備抗 腫瘤藥物中的應用
技術領域
[0001 ]本發(fā)明屬于抗腫瘤藥物領域，具體地，本發(fā)明涉及一種具有抗癌活性的藥物組合 物。
【背景技術】
[0002] 熊果酸即3β_羥基-熊果-12-稀_28_酸（30-hydroxy-urs-12-en-28-〇ic acid，簡 稱UA)，又名烏索酸、屬于a-香樹脂醇（a-amyrin)型五環(huán)三萜類化合物，其相對分子量為 456.68,分子式為C 3QH4803,結果如式I所示，是自然界中分布較廣的天然活性化合物，主要以 游離或糖苷的形式存在其廣泛分布于枇杷葉、熊果、山楂、白花蛇舌草等多種天然植物中， 也是許多傳統(tǒng)中藥的主要活性成分之一，具有廣泛的藥理作用，如抗癌、保肝、抗炎、抗病 毒、抗氧化等其中以抗癌活性最為顯著，不僅對多種致癌物有抵抗作用，而且對多種腫瘤細 胞在體內、外均有抑制作用。因其副作用小，毒性低，顯示出較大的臨床應用潛力。近年來國 內外對UA的抗腫瘤研究日趨深入，并發(fā)現(xiàn)其在腫瘤預防、治療以及防止晚期復發(fā)轉移等方 面有著獨特的優(yōu)勢及潛在的應用前景。專利N201510097801.9公開了一種含有熊果酸和環(huán) 磷酰胺的藥物組合物，所述組合物既可以增強單組分的抗腫瘤藥效，也能降低其對正常組 織的毒性，從而提高腫瘤治療的效果，在腫瘤治療領域具有很大的應用前景。專利 N03150714.X公開了熊果酸對人肝癌細胞、人乳腺癌細胞、人淋巴瘤細胞、人成淋巴細胞白 血病和人急性成淋巴細胞白血病、人急性早幼粒白血病及人慢性髓性白血病都有細胞毒效 應。
[0003] 吉非替尼(化學名:N-(3_氯-4-氟苯基)-7_甲氧基-6-(3-嗎啉丙氧基）喹唑啉-4-胺），英文名:Gifitinid，結構如式Π 所示，吉非替尼是一種有效的表皮生長因子受體酪氨 酸激酶選擇性抑制劑，國外已批準用于治療局部晚期或轉移性的非小細胞肺癌（non-small-cell lung cancer ，NSCLC)。 吉非替尼為難溶性藥物 ，其在水溶液中的溶解性呈 pH 依 賴性，即在pH越低的水溶液中溶解度越大，在pH值7左右的水中幾乎不溶;吉非替尼對部分 EGFR存在突變的患者具有一定的治療作用，但是應用吉非替尼1年后大部分NSCLC患者產生 耐藥，病情發(fā)生明顯進展，隨后研究發(fā)現(xiàn)耐藥的主要原因是由于部分患者產生新的突變而 對吉非替尼產生耐藥，因此即使使用吉非替尼(酪氨酸激酶抑制劑)治療仍然不能提高非小 細胞肺癌患者的五年總生存期。目前針對這種繼發(fā)耐藥性的患者無有效的治療方案，各自 方法均處于實驗階段。專利N201210566665.X公開了一種含有吉非替尼的片劑，它其能持 續(xù)、平穩(wěn)釋放有效成分、對既往接受過化學治療的局部晚期肺癌或轉移性非小細胞肺癌達 到良好的治療效果。
[0004] 本發(fā)明以不同癌細胞系作為研究對象，通過熊果酸和吉非替尼進行聯(lián)合用藥，對 不同癌細胞系進行體外抗癌活性測試，結果表明，熊果酸和吉非替尼的聯(lián)合使用對癌細胞 特別是非小細胞肺癌的具有顯著的抑制作用。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的就是提供一種藥物組合物，通過將表皮生長因子受體酪氨酸激酶 (EGFR-TK)抑制劑吉非替尼與高效低毒的抗腫瘤天然產物熊果酸進行聯(lián)合用藥，研究發(fā)現(xiàn)， 由于吉非替尼和熊果酸這兩類藥物作用機制的不同，兩者聯(lián)用可以提高療效，增強吉非替 尼對原發(fā)及繼發(fā)耐藥的NSCLC的療效，從而降低藥物的毒副作用，最終提高治療癌癥的效 果，可應用于制備抗腫瘤的藥物領域。
[0006] -種具有抗癌活性的藥物組合物及其在制備抗腫瘤藥物中的應用。其特征在于該 藥物組合物包含物質的量比為10-20:1-25的熊果酸與吉非替尼。
【附圖說明】
[0007] 圖1.熊果酸和吉非替尼單獨使用及聯(lián)合使用24 h后對A549細胞增殖的抑制結果； 圖2.熊果酸和吉非替尼單獨使用及聯(lián)合使用48 h后對A549細胞增殖的抑制結果； 圖3.熊果酸和吉非替尼單獨使用及聯(lián)合使用72 h后對A549細胞增殖的抑制結果； 圖4.熊果酸和吉非替尼單獨使用及聯(lián)合使用24 h后對H1975細胞增殖的抑制結果； 圖5.熊果酸和吉非替尼單獨使用及聯(lián)合使用48 h后對H1975細胞增殖的抑制結果； 圖6.熊果酸和吉非替尼單獨使用及聯(lián)合使用72 h后對H1975細胞增殖的抑制結果； 圖7.熊果酸和吉非替尼單獨使用及聯(lián)合使用24 h后對H1650細胞增殖的抑制結果； 圖8.熊果酸和吉非替尼單獨使用及聯(lián)合使用48 h后對H1650細胞增殖的抑制結果； 圖9.熊果酸和吉非替尼單獨使用及聯(lián)合使用72 h后對H1650細胞增殖的抑制結果。
【具體實施方式】
[0008] 為了使本發(fā)明所述的內容更加便于理解，下面結合【具體實施方式】對本發(fā)明所述的 技術方案做進一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0009] 實施例1 熊果酸和吉非替尼單獨使用及聯(lián)合使用24、48、72 h對A549細胞的增殖抑制作用:采用 標準MTT比色法測定了熊果酸和吉非替尼不同聯(lián)合比例對A549細胞株的增殖抑制活性。 [0010]將對數(shù)期的細胞，用胰酶消化后，細胞計數(shù)，配成8X10 4/ml的細胞濃度，將制得的 細胞懸液，每孔100 μL接種到96孔板，放于37°C、5%⑶2培養(yǎng)箱中；棄掉舊的培養(yǎng)基，每孔加 入100 μL含有不同藥物濃度梯度的培養(yǎng)基。置于37°C、5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24、48和72 h， 棄掉含藥培養(yǎng)基，每孔加入1〇〇 μL含有MTT(0.5 mg/ml)的無血清無酚紅培養(yǎng)基，繼續(xù)孵育4 h;小心吸取各孔中的上清液，每孔加入DMS0 150 uL，搖床中振蕩搖勻10 min，使藍紫色結 晶全部溶解，酶標儀(570 nm)測定各孔光吸收值(0D值），并計算細胞的存活率，結果如圖1-3所示。
[0011]如圖1所示，當藥物作用24 h之后，熊果酸在10 μΜ的條件下對A549細胞增殖抑制 的效果不明顯；吉非替尼在多25 μΜ的條件下，能明顯的抑制Α549細胞的增殖;UA和吉非替 尼（10 μΜ)聯(lián)合給藥組作用24 h就能很明顯的抑制Α549細胞的增殖，隨著吉非替尼藥物濃 度的增大，抑制效果越明顯，兩者聯(lián)用可以起到聯(lián)合增效抑制A549細胞增殖的作用；如圖2 所示，當藥物作用48 h之后，熊果酸在10 μΜ的條件下能明顯的抑制抑制A549細胞的增殖； 吉非替尼在多10 μΜ的條件下，能有效的抑制Α549細胞的增殖;但聯(lián)合給藥的時候，當吉非 替尼濃度多5 μΜ的條件下就能夠明顯的抑制細胞的增殖；如圖3所示，當藥物作用72 h之 后，熊果酸在10 μΜ的條件下細胞死傷達一半；吉非替尼多5 μΜ的條件下能夠抑制A549細胞 的增殖;而UA(10 μΜ)和吉非替尼（1，5，10, 20 μΜ)聯(lián)合作用72 h之后均能夠顯著抑制細 胞的增殖，且該增值抑制效果呈劑量依賴性。綜上結果可以發(fā)現(xiàn)，UA和吉非替尼聯(lián)用能夠明 顯降低吉非替尼的給藥劑量，從而降低藥物的毒副作用，并可以協(xié)同增效的抑制A549細胞 的增殖，該效果呈濃度依賴性和時間依賴性。
[0012] 實施例2 采用金氏修正式計算熊果酸和吉非替尼兩者聯(lián)合給藥在不同配比下作用24、48、72 h 對A549細胞的協(xié)同作用，篩選出最佳的藥物配比，結果如表1-3所示。計算出UA=10 μΜ的條 件下對Α549細胞的抑制率為ΕΑ，計算出不同吉非替尼濃度對Α549細胞的抑制率為ΕΒ1、ΕΒ2、 ΕΒ3等，再計算出兩者聯(lián)合給藥在不同配比下對Α549細胞的抑制率分別為EC1、EC2、EC3等， 通過以下公式計算聯(lián)合用藥指數(shù)q值，q=EC/(EB+EA_EB*EA)，當q值>1.15為協(xié)同效應，0.85〈 q〈l. 15為相加效應，q〈0.85為詰抗效應。通過上述聯(lián)合用藥指數(shù)的計算進一步判斷兩種藥 物聯(lián)合用藥的最終藥效。
[0013] 如表1-3所示，熊果酸和吉非替尼兩者聯(lián)合給藥在不同配比下作用24、48、72 h對 A549細胞，當吉非替尼在低濃度的條件下兩者聯(lián)藥效基本為相加效應；當吉非替尼在高濃 度的條件下兩者聯(lián)藥效基本為協(xié)同效應，可以協(xié)同的抑制A549細胞的增殖，藥物濃度越大， 抑制越明顯。
[0014] 實施例3 熊果酸和吉非替尼單獨使用及聯(lián)合使用24、48、72 h對H1975細胞的增殖抑制作用，步 驟同實施例1，結果如圖4-6所示。
[0015]如圖4所示，當藥物作用24 h之后，UA在10 μΜ的條件下抑制H1975細胞增殖的效果 不明顯；吉非替尼在多25 μΜ的條件下，能表現(xiàn)出明顯的抑制Η1975細胞的增殖；當兩者聯(lián)合 給藥時吉非替尼多5 μΜ時就能表現(xiàn)出明顯抑制Η1975細胞的增殖，且隨著濃度的增大抑制 細胞的增殖更明顯，聯(lián)合給藥可以起到協(xié)同抑制腫瘤細胞的增殖;如圖5所示，當藥物作用 48 h之后，UA在10 μΜ的條件下可以明顯的抑制細胞的增殖;吉非替尼在多10 μΜ的條件下， 能有效的抑制Η1975細胞的增殖;但聯(lián)合給藥的時候，當吉非替尼濃度多1 μΜ的條件下就能 夠表現(xiàn)出明顯的抑制細胞的增殖;吉非替尼濃度在5 μΜ的條件，細胞存活率大約為40%，與 單用吉非替尼相比能明顯的抑制細胞的增殖;如圖6所示，當藥物作用72 h之后，熊果酸在 10 μΜ的條件下細胞存活率大約為50%;吉非替尼多5 μΜ的條件下能夠有效的抑制H1975細 胞的增殖;但聯(lián)合給藥時，吉非替尼在多1 μΜ的條件下細胞存活率大約為50%。綜上結果可 以發(fā)現(xiàn)，UA和吉非替尼聯(lián)用能夠明顯降低吉非替尼的給藥劑量，且呈濃度依賴性和時間依 賴性的抑制H1975細胞的增殖，隨著吉非替尼藥物濃度的增大，抑制細胞的增殖更明顯，兩 者聯(lián)用可以起到協(xié)同抑制H1975細胞的增殖。
[0016] 實施例4 采用金氏修正式計算UA和吉非替尼兩者聯(lián)合給藥在不同配比下作用24、48、72 h對 H1975細胞的協(xié)同作用，篩選出最佳的藥物配比，方法同實施例2,結果如表4-6所示。
[0017] 如表4-6所示，熊果酸和吉非替尼兩者聯(lián)合給藥在不同配比下作用24、48、72 h對 H1975細胞，當吉非替尼在低濃度的條件下兩者聯(lián)藥效基本為相加效應;當吉非替尼在高濃 度的條件下兩者聯(lián)藥效基本為協(xié)同效應，可以協(xié)同的抑制H1975細胞的增殖，藥物濃度越 大，抑制越明顯。
[0018] 實施例5 熊果酸和吉非替尼單獨使用及聯(lián)合使用24、48、72 h對H1650細胞的增殖抑制作用，步 驟同實施例1，結果如圖7-9所示。
[0019] 如圖7所示，當藥物作用24 h之后，UA在10 μΜ的條件下抑制H1650細胞增殖的效果 不明顯；吉非替尼在多10 μΜ的條件下，能表現(xiàn)出明顯的抑制Η1650細胞的增殖；當兩者聯(lián)合 給藥時吉非替尼多10 μΜ的條件下抑制細胞的增殖比單用吉非替尼來得明顯，且隨著濃度 的增大抑制細胞的增殖更明顯，聯(lián)合給藥可以起到協(xié)同抑制腫瘤細胞的增殖;如圖8所示， 當藥物作用48 h之后，UA在10 μΜ的條件下可以明顯的抑制細胞的增殖;吉非替尼在彡10 μ Μ的條件下，能有效的抑制H1650細胞的增殖;但聯(lián)合給藥的時候，當吉非替尼濃度多2 μΜ的 條件下就能夠表現(xiàn)出明顯的抑制細胞的增殖;吉非替尼濃度在5 μΜ的條件，細胞存活率大 約為40%，與單用吉非替尼相比能明顯的抑制細胞的增殖；如圖9所示，當藥物作用72 h之 后，熊果酸在10 μΜ的條件細胞存活率大約為50%;吉非替尼多5 μΜ的條件下能夠有效的抑 制Η1650細胞的增殖;但聯(lián)合給藥時，吉非替尼在多1 μΜ的條件就能夠表現(xiàn)抑制Η1650細胞 的增殖。綜上結果可以發(fā)現(xiàn)，UA和吉非替尼聯(lián)用能夠明顯降低吉非替尼的給藥劑量，且呈濃 度依賴性和時間依賴性的抑制Η1650細胞的增殖，隨著吉非替尼藥物濃度的增大，抑制細胞 的增殖更明顯，兩者聯(lián)用可以起到協(xié)同抑制Η1650細胞的增殖。
[0020] 實施例6 采用金氏修正式計算UA和吉非替尼兩者聯(lián)合給藥在不同配比下作用24、48、72 h對 H1650細胞的協(xié)同作用，篩選出最佳的藥物配比，方法同實施例2,結果如表7-9所示。
[0021] 如表7-9所示，熊果酸和吉非替尼兩者聯(lián)合給藥在不同配比下作用24、48、72 h對 H1650細胞，當吉非替尼在低濃度的條件下兩者聯(lián)藥效基本為相加效應;當吉非替尼在高濃 度的條件下兩者聯(lián)藥效基本為協(xié)同效應，可以協(xié)同的抑制H1650細胞的增殖，藥物濃度越 大，抑制越明顯。
【主權項】
1. 一種具有抗癌活性的藥物組合物，其特征在于包含物質的量比為10-20:1-25的熊果 酸與吉非替尼。2. 如權利要求1所述的藥物組合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
【文檔編號】A61K31/5377GK106038571SQ201610519528
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月5日
【發(fā)明人】邵敬偉, 鄭桂容, 江凱
【申請人】福州大學