干巴菌中活性物質(zhì)的提取工藝及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種干巴菌活性物質(zhì)的提取工藝，該提取方法簡便、快捷，適用于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)，并能夠最大程度地保持干巴菌中化學(xué)成分的活性。采用該方法提取的化學(xué)活性物質(zhì)，可以顯著抑制癌細(xì)胞生長，并且具有良好的抗氧化性和抗菌效果。
【專利說明】
干巴菌中活性物質(zhì)的提取工藝及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種活性物質(zhì)的提取工藝，特別涉及干巴菌中活性物質(zhì)的提取工藝。
【背景技術(shù)】
[0002] 干巴菌是云南省特有的珍稀野生食用菌，也叫對花菌、馬牙菌。其生長在滇中及滇 西的山林松樹間，產(chǎn)于七八月雨季，至今仍未實現(xiàn)人工栽培。干巴菌出土?xí)r，呈黃褐色，老熟 時，變成黑褐色。干巴菌含有豐富的鈣、鐵、蛋白質(zhì)、硫胺素，具有很高的營養(yǎng)價值。
[0003] 目前，國內(nèi)外對干巴菌的應(yīng)用研究主要集中于干巴菌的菌種分離、促繁擴(kuò)繁、發(fā)酵 培養(yǎng)和含菌絲體調(diào)味料的制備。但是關(guān)于干巴菌活性成分的提取研究和應(yīng)用幾乎未見報 道。事實上，干巴菌具有很重要的食療價值:例如，干巴菌含有豐富的抗氧化物質(zhì)，能清除人 體自由基，延緩衰老;含有豐富的抗菌物質(zhì)，能夠抑制炎癥的產(chǎn)生;具有抗癌的能力等等。
[0004] 目前常用的浸漬和索式提取法雖然可以提取得到干巴菌中的活性物質(zhì)，但是這些 方法提取效率較低，提取工藝復(fù)雜，消耗時間較長，產(chǎn)出較低，并且容易破壞提取物質(zhì)的活 性。因此，找到一種可以最大限度提取干巴菌中活性物質(zhì)的方法具有十分重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種簡便、快捷的干巴菌活性物質(zhì)的提取工藝。
[0006] 本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是： 一種干巴菌中活性物質(zhì)的提取工藝，包含以下步驟： 1) 將干巴菌充分烘干后，物理粉碎； 2) 粉碎后的干巴菌加入提取液，充分混勻； 3) 超聲水浴處理后，離心收集上清液。
[0007] 作為優(yōu)選的:所述粉碎至25~150目。
[0008] 作為優(yōu)選的:所述提取液為乙醇水溶液，其中乙醇含量(v/v)為40%~80%。
[0009] 作為優(yōu)選的:所述干巴菌與提取液的質(zhì)量體積比為1:5~70(g/mL)。
[0010] 作為優(yōu)選的：所述水浴溫度為30~75 °C。
[0011] 作為優(yōu)選的：提取工藝還包括將提取液與干巴菌充分混勻后，在溫度為-20~-40 °C條件下靜置4~8h。
[0012] 以上所述的提取工藝提取得到的干巴菌活性物質(zhì)在制備抗腫瘤制劑中的應(yīng)用。
[0013] 以上所述的提取工藝提取得到的干巴菌中活性物質(zhì)在制備抗氧化制劑中的應(yīng)用。
[0014] 以上所述的提取工藝提取得到的干巴菌中活性物質(zhì)在制備抗菌制劑中的應(yīng)用。
[0015] 本提取方法簡便、快捷，適用于大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)，并能夠最大程度地保持干巴菌 中生物活性化合物的活性，具有突破性的進(jìn)展。
【具體實施方式】
[0016] 實施例1、干巴菌活性物質(zhì)的提取I 新鮮食用菌用干凈塑料刀片去除表面的雜質(zhì)，烘干至恒重，去除雜質(zhì)后用料理機(jī)粉碎 為100目，稱取3g菌類樣品，加入70.15mL提取液，提取液為57.38%(v/v)乙醇溶液。在-30°c 低溫處理4h后，在40°C條件下超聲lOmin，超聲頻率為SOOwdOOOr離心30 min，收集上清 液。將上清液在40°C條件下蒸干，稱量得到的活性物質(zhì)的質(zhì)量為0.76 g。
[0017] 實施例2、干巴菌活性物質(zhì)的提取Π 新鮮食用菌用干凈塑料刀片去除表面的雜質(zhì)，烘干至恒重，去除雜質(zhì)后用料理機(jī)粉碎 為100目，稱取3g菌類樣品，加入70.15mL提取液，提取液為57.38%(v/v)乙醇溶液。在-20°c 低溫處理6h后，在40°C條件下超聲lOmin，超聲頻率為SOOwdOOOr離心30 min，收集上清 液。將上清液在40°C條件下蒸干，稱量得到的活性物質(zhì)的質(zhì)量為0.84 g。
[0018] 實施例3、干巴菌活性物質(zhì)的提取m 新鮮食用菌用干凈塑料刀片去除表面的雜質(zhì)，烘干至恒重，去除雜質(zhì)后用料理機(jī)粉碎 為25目，準(zhǔn)確稱量3g干巴菌，加入120mL提取液，提取液為40%( v/v)乙醇溶液。在-20°C低溫 處理6h后，在75°C條件下超聲15min，超聲頻率為550w。5000r離心30 min，收集上清液。將 上清液在40°C條件下蒸干，稱量得到的活性物質(zhì)的質(zhì)量為0.72 g。
[0019] 實施例4、干巴菌活性物質(zhì)的提取IV 新鮮食用菌用干凈塑料刀片去除表面的雜質(zhì)，烘干至恒重，去除雜質(zhì)后用料理機(jī)粉碎 為25目，準(zhǔn)確稱量3g干巴菌，加入15mL提取液，提取液為40%( v/v)乙醇溶液。在-25 °C低溫處 理6h后，在75°C條件下超聲15min，超聲頻率為550?。500(^離心30 min，收集上清液。將上 清液在40°C條件下蒸干，稱量得到的活性物質(zhì)的質(zhì)量為0.68g。
[0020] 實施例5、干巴菌活性物質(zhì)的提取V 新鮮食用菌用干凈塑料刀片去除表面的雜質(zhì)，烘干至恒重，去除雜質(zhì)后用料理機(jī)粉碎 為50目，準(zhǔn)確稱量3g干巴菌，加入160mL提取液，提取液為50%( v/v)乙醇溶液。在-40°C低溫 處理5h后，在30°C條件下超聲8min，超聲頻率為GOOwjOOOr離心30 min，收集上清液。將上 清液在40°C條件下蒸干，稱量得到的活性物質(zhì)的質(zhì)量為0.42g。
[0021] 實施例6、干巴菌活性物質(zhì)的提取VI 新鮮食用菌用干凈塑料刀片去除表面的雜質(zhì)，烘干至恒重，去除雜質(zhì)后用料理機(jī)粉碎 為50目，準(zhǔn)確稱量3g干巴菌，加入160mL提取液，提取液為50%( v/v)乙醇溶液。在-35°C低溫 處理4h后，在30°C條件下超聲8min，超聲頻率為GOOwjOOOr離心30 min，收集上清液。將上 清液在40°C條件下蒸干，稱量得到的活性物質(zhì)的質(zhì)量為0.66g。
[0022] 實施例7、干巴菌活性物質(zhì)的提取W 新鮮食用菌用干凈塑料刀片去除表面的雜質(zhì)，烘干至恒重，去除雜質(zhì)后用料理機(jī)粉碎 為150目，準(zhǔn)確稱量3g干巴菌，加入21 OmL提取液，提取液為80%( v/v)乙醇溶液。在-35°C低溫 處理4h后，在60 °C條件下超聲20min，超聲頻率為800w。5000r離心30 min，收集上清液。將 上清液在40°C條件下蒸干，稱量得到的活性物質(zhì)的質(zhì)量為0.72g。
[0023] 實施例8、干巴菌活性物質(zhì)的提取VI 新鮮食用菌用干凈塑料刀片去除表面的雜質(zhì)，烘干至恒重，去除雜質(zhì)后用料理機(jī)粉碎 為150目，準(zhǔn)確稱量3g干巴菌，加入21 OmL提取液，提取液為80%( v/v)乙醇溶液。在-40°C低溫 處理8h后，60°C條件下超聲20min，超聲功率為SOOwjOOOr離心30 min，收集上清液。將上清 液在40°C條件下蒸干，稱量得到的活性物質(zhì)的質(zhì)量為0.64g。
[0024]實施例9、干巴菌活性物質(zhì)的抗菌效果 各取實施例1~8中制備得到的干巴菌活性物質(zhì)10mg，分別檢測干巴菌活性物質(zhì)對大腸 桿菌、乙型副傷寒沙門氏菌、蠟樣芽胞桿菌、金黃色葡萄球菌等四種細(xì)菌的抗菌效果。具體 檢測方法是:根據(jù)微肉湯稀釋法，在96微孔板中加入事先制備好的菌懸液、MH肉湯、樣品，使 得每個孔內(nèi)的菌液濃度相同，生長對照由去離子水、MH肉湯和菌懸液組成。之后，將96微孔 板放在混勻器上混勻。放入酶標(biāo)儀，在630nm條件下讀取培養(yǎng)前吸光度。然后，將其放入37°C 恒溫箱中培養(yǎng)21個小時。最后，讀取培養(yǎng)后的吸光度(630nm)。通過吸光度改變值計算抑菌 率。得到結(jié)果如表1所示： 表1干巴菌活性物質(zhì)的抗菌效果(％)
實施例10、干巴菌活性物質(zhì)的抗癌效果 各取實施例1~8中制備得到的干巴菌活性物質(zhì)10mg，采用MTT法分別檢測干巴菌活性 物質(zhì)對A549肺癌細(xì)胞、HepG2肝癌細(xì)胞、MCF-7乳腺癌細(xì)胞和HT-29大腸癌細(xì)胞四種癌細(xì)胞生 長的影響。得到結(jié)果如表2所示： 表2干巴菌活性物質(zhì)的抗癌效果(*100%)
實施例11、干巴菌活性物質(zhì)的抗氧化效果 各取實施例1~8中制備得到的干巴菌活性物質(zhì)10 mg，采用ABTS自由基清除能力測定 法測定提取的干巴菌活性物質(zhì)的抗氧化效果，得到結(jié)果如表3所示： 表3干巴菌活性物質(zhì)的抗氧化效果(μπιο? Trolox/g)
以上實施例僅為介紹本發(fā)明的優(yōu)選案例，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，在不背離本發(fā)明 精神的范圍內(nèi)所進(jìn)行的任何顯而易見的變化和改進(jìn)，都應(yīng)被視為本發(fā)明的一部分。
【主權(quán)項】
1. 一種干巴菌中活性物質(zhì)的提取工藝，包含以下步驟： 1) 將干巴菌充分烘干后，物理粉碎； 2) 粉碎后的干巴菌加入提取液，充分混勻； 3) 超聲水浴處理后，離心收集上清液。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取工藝，其特征在于:所述粉碎至25~150目。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取工藝，其特征在于:所述提取液為乙醇水溶液，其中乙醇 含量(v/v)為40%~80%。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取工藝，其特征在于:所述干巴菌與提取液的質(zhì)量體積比為 1:5~70(g/mL)。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取工藝，其特征在于:所述水浴溫度為30~75 °C。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取工藝，其特征在于:提取工藝還包括將提取液與干巴菌充 分混勻后，在溫度為-20~-40 °C條件下靜置4~8h。7. 權(quán)利要求1~6中任一項所述的提取工藝提取得到的干巴菌中活性物質(zhì)在制備抗腫 瘤制劑中的應(yīng)用。8. 權(quán)利要求1~6任一項所述的提取工藝提取得到的干巴菌中活性物質(zhì)在制備抗氧化 制劑中的應(yīng)用。9. 權(quán)利要求1~6任一項所述的提取工藝提取得到的干巴菌中活性物質(zhì)在制備抗菌制 劑中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/00GK106038615SQ201610400704
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月8日
【發(fā)明人】李華斌, 徐冬平, 李莎, 鄭潔, 周玥, 周通
【申請人】中山大學(xué)