人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物,其由胚胎干細(xì)胞生物活性物質(zhì)與靈芝孢子生物活性物質(zhì)按照1：10?12的質(zhì)量比進(jìn)行混合。本發(fā)明還公開了人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物的制備方法。本發(fā)明組合物起到活化人體自身干細(xì)胞來進(jìn)行生理性修復(fù)或替代機(jī)體損傷、病變和衰老的組織細(xì)胞的作用，同時(shí)增強(qiáng)機(jī)體免疫力。
【專利說明】
人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物及制備方法，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]干細(xì)胞(stem cell)是一類具有自我復(fù)制能力(self-renewing)的多潛能細(xì)胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞。根據(jù)干細(xì)胞所處的發(fā)育階段分為胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell，ES細(xì)胞)和成體干細(xì)胞(somatic stem cell)。根據(jù)干細(xì)胞的發(fā)育潛能分為三類:全能干細(xì)胞(totipotent stem cell，TSC)、多能干細(xì)胞(pluripotent stemcell)和單能干細(xì)胞(unipotent stem cell)(專能干細(xì)胞)。干細(xì)胞(Stem Cell)是一種未充分分化，尚不成熟的細(xì)胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能，醫(yī)學(xué)界稱為“萬用細(xì)胞” O
[0003]靈芝孢子的化學(xué)成分可分為以下幾類:蛋白質(zhì)和氨基酸類、糖肽類、維生素類、胡蘿卜素、留醇類、三萜類、生物堿類、脂肪酸類、內(nèi)酯和無機(jī)離子等。靈芝孢予蛋白質(zhì)含量達(dá)18%，其中異亮氨酸、亮氨酸賴氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸等機(jī)體必需氨基酸的含量非常豐富，均離達(dá)10 g/kg。維生素類主要是維生素E(VE)，在每100 g孢子中，VE含量超過60mg，另外也含有少量的維生素C。靈芝孢子中富含多糖和寡糖，其中二糖、三糖、四糖的含量分別是1.94、1.67和2.5 mg/g。固醇類有麥角甾-7，22-乙烯_3β醇(ergosta-7，22-diene-3-ol)和β-谷留醇。從赤芝孢子粉的酸性提取物中還分離得到了一些三萜類化合物，它們是赤芝抱子酸A、B、C、E(ganosporeic acid A、B、C、E)和ganodenn anon-Trol。并且不斷在靈芝孢子中發(fā)現(xiàn)新的三萜類物質(zhì)，這些物質(zhì)具有良好的生物活性。靈芝絕子中的脂肪酸類有二十四烷酸、硬脂酸、棕櫚酸、二十二烷酸等。其內(nèi)酯類屬五環(huán)三萜內(nèi)脂，有赤芝孢子內(nèi)酯A和B。生物堿類有膽堿、甜菜堿和硫組氨酸甲基內(nèi)胺鹽。無機(jī)元素有鈣、磷、鐵、鎂、鈉、鋅、鍺砸等，其中有機(jī)鍺與人類的鍵康和疾病的防治有密切關(guān)系。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的是提供一種人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物，起到活化人體自身干細(xì)胞來進(jìn)行生理性修復(fù)或替代機(jī)體損傷、病變和衰老的組織細(xì)胞的作用，同時(shí)增強(qiáng)機(jī)體免疫力。
[0005]本發(fā)明的方案如下:人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物，由胚胎干細(xì)胞生物活性物質(zhì)與靈芝孢子生物活性物質(zhì)按照I: 10-12的質(zhì)量比進(jìn)行混合。
[0006]人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物的制備方法，包括以下步驟: a、人源干細(xì)胞物活性物質(zhì)的制備
將去內(nèi)血管和外層薄膜的胎盤切成l*lmm大小的小塊;將該小塊種植于間充質(zhì)干細(xì)胞培無血清培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，并放置于培養(yǎng)箱中；
每隔兩天半量換液，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)，使用0.33%磷酸酯酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化，以l.l-2.5X105cells/ml接種于培養(yǎng)皿中傳代培養(yǎng)，并收集更換的廢培養(yǎng)液于_80°C環(huán)境下保存；
重復(fù)多次后，分離、純化獲得高純度間充質(zhì)干細(xì)胞，并將濃度調(diào)整為2 X1MV ml密封，經(jīng)超低溫液氮反復(fù)凍融6-7次至細(xì)胞破碎，再通過低溫分離、純化，便可獲得高純度的胚胎干細(xì)胞物活性物質(zhì)。
[0007]b、靈芝孢子生物活性物質(zhì)的制備
將靈芝孢子粉在100w的紫外燈下輻射處理1.5小時(shí)；
將輻射處理過的靈芝孢子粉與水按1:10的重量比配比混合，并加入纖維素酶、維生素C，然后進(jìn)行超聲波振蕩，處理?xiàng)l件為22-35kHz，30-40°C超聲處理10-30小時(shí)；
將超聲波處理后的孢子粉在_55°C真空冷凍干燥處理4-5小時(shí)；
然后采用超音速氣流粉碎機(jī)在_15°C到-10°C的溫度下進(jìn)行超音速氣流破壁、過篩，選取粒徑為550-600目的孢子粉；
C、組合物的制備方法
人源干細(xì)胞生物活性物質(zhì)與靈芝孢子生物活性物質(zhì)按照I: 10-12的質(zhì)量比進(jìn)行混合即得。
[0008]進(jìn)一步，所述的培養(yǎng)箱的培養(yǎng)環(huán)境為:5%⑶2、pH值:7.3、相對(duì)飽和濕度95%，溫度37。C。
[0009]進(jìn)一步，所述的水與纖維素酶、維生素C的質(zhì)量比為I:0.003:0.0012o
[0010]本發(fā)明可活化人體自身干細(xì)胞來進(jìn)行生理性修復(fù)或替代機(jī)體損傷、病變和衰老的組織細(xì)胞的作用，同時(shí)增強(qiáng)機(jī)體免疫力。
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)施例1
人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物，由胚胎干細(xì)胞生物活性物質(zhì)與靈芝孢子生物活性物質(zhì)按照I: 10的質(zhì)量比進(jìn)行混合。
[0012]制備方法，包括以下步驟:
a、胚胎干細(xì)胞物活性物質(zhì)的制備
將去內(nèi)血管和外層薄膜的胎盤切成l*lmm大小的小塊;將該小塊種植于間充質(zhì)干細(xì)胞培無血清培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，并放置于培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱的培養(yǎng)環(huán)境為:5%C02、pH值:7.3、相對(duì)飽和濕度95%，溫度37° C;每隔兩天半量換液，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)，使用0.33%磷酸酯酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化，以1.9 X 105cells/ml接種于培養(yǎng)皿中傳代培養(yǎng)，并收集更換的廢培養(yǎng)液于-80°C環(huán)境下保存;重復(fù)多次后，分離、純化獲得高純度間充質(zhì)干細(xì)胞，并將濃度調(diào)整為2 X 16個(gè)/ ml密封，經(jīng)超低溫液氮反復(fù)凍融7次至細(xì)胞破碎，再通過低溫分離、純化，便可獲得高純度的胚胎干細(xì)胞物活性物質(zhì)。
[0013]b、靈芝孢子生物活性物質(zhì)的制備
將靈芝孢子粉在100w的紫外燈下輻射處理2小時(shí);將輻射處理過的靈芝孢子粉與水按1:10的重量比配比混合，并加入纖維素酶、維生素C，然后進(jìn)行超聲波振蕩，處理?xiàng)l件為29kHz，33°C超聲處理22小時(shí)；將超聲波處理后的孢子粉在_55°C真空冷凍干燥處理4小時(shí);然后采用超音速氣流粉碎機(jī)在-110C的溫度下進(jìn)行超音速氣流破壁、過篩，選取粒徑為600目的孢子粉；
C、組合物的制備方法
人源干細(xì)胞生物活性物質(zhì)與靈芝孢子生物活性物質(zhì)進(jìn)行混合，即得。
[0014]實(shí)施例2
人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物，由胚胎干細(xì)胞生物活性物質(zhì)與靈芝孢子生物活性物質(zhì)按照1:11的質(zhì)量比進(jìn)行混合。
[0015]制備方法，包括以下步驟:
a、胚胎干細(xì)胞物活性物質(zhì)的制備
將去內(nèi)血管和外層薄膜的胎盤切成l*lmm大小的小塊;將該小塊種植于間充質(zhì)干細(xì)胞培無血清培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，并放置于培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱的培養(yǎng)環(huán)境為:5%C02、pH值:7.3、相對(duì)飽和濕度95%，溫度37° C;每隔兩天半量換液，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)，使用0.33%磷酸酯酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化，以2.2X105cellS/ml接種于培養(yǎng)皿中傳代培養(yǎng)，并收集更換的廢培養(yǎng)液于-80°C環(huán)境下保存;重復(fù)多次后，分離、純化獲得高純度間充質(zhì)干細(xì)胞，并將濃度調(diào)整為2 X 16個(gè)/ ml密封，經(jīng)超低溫液氮反復(fù)凍融7次至細(xì)胞破碎，再通過低溫分離、純化，便可獲得高純度的胚胎干細(xì)胞物活性物質(zhì)。
[0016]b、靈芝孢子生物活性物質(zhì)的制備
將靈芝孢子粉在100w的紫外燈下輻射處理2小時(shí);將輻射處理過的靈芝孢子粉與水按1:10的重量比配比混合，并加入纖維素酶、維生素C，然后進(jìn)行超聲波振蕩，處理?xiàng)l件為33kHz，31°C超聲處理17小時(shí)；將超聲波處理后的孢子粉在_55°C真空冷凍干燥處理4小時(shí);然后采用超音速氣流粉碎機(jī)在_14°C的溫度下進(jìn)行超音速氣流破壁、過篩，選取粒徑為580目的孢子粉；
C、組合物的制備方法
人源干細(xì)胞生物活性物質(zhì)與靈芝孢子生物活性物質(zhì)進(jìn)行混合，即得。
[0017]實(shí)施例3
人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物，由胚胎干細(xì)胞生物活性物質(zhì)與靈芝孢子生物活性物質(zhì)按照I: 12的質(zhì)量比進(jìn)行混合。
[0018]制備方法，包括以下步驟:
a、胚胎干細(xì)胞物活性物質(zhì)的制備
將去內(nèi)血管和外層薄膜的胎盤切成l*lmm大小的小塊;將該小塊種植于間充質(zhì)干細(xì)胞培無血清培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，并放置于培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱的培養(yǎng)環(huán)境為:5%C02、pH值:7.3、相對(duì)飽和濕度95%，溫度37° C;每隔兩天半量換液，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)，使用0.33%磷酸酯酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化，以18X105cellS/ml接種于培養(yǎng)皿中傳代培養(yǎng)，并收集更換的廢培養(yǎng)液于-80°C環(huán)境下保存;重復(fù)多次后，分離、純化獲得高純度間充質(zhì)干細(xì)胞，并將濃度調(diào)整為2 X 16個(gè)/ ml密封，經(jīng)超低溫液氮反復(fù)凍融7次至細(xì)胞破碎，再通過低溫分離、純化，便可獲得高純度的胚胎干細(xì)胞物活性物質(zhì)。
[0019]b、靈芝孢子生物活性物質(zhì)的制備
將靈芝孢子粉在100w的紫外燈下輻射處理1.2小時(shí);將輻射處理過的靈芝孢子粉與水按1:10的重量比配比混合，并加入纖維素酶、維生素C，然后進(jìn)行超聲波振蕩，處理?xiàng)l件為33kHz，36°C超聲處理16小時(shí)，水與纖維素酶、維生素C的質(zhì)量比為1:0.003:0.0012;將超聲波處理后的孢子粉在_55°C真空冷凍干燥處理4小時(shí);然后采用超音速氣流粉碎機(jī)在-12°C的溫度下進(jìn)行超音速氣流破壁、過篩，選取粒徑為560目的孢子粉；
C、組合物的制備方法
人源干細(xì)胞生物活性物質(zhì)與靈芝孢子生物活性物質(zhì)進(jìn)行混合，即得。
[0020]盡管上文對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】給予了詳細(xì)描述和說明，但是應(yīng)該指明的是，我們可以依據(jù)本發(fā)明的構(gòu)想對(duì)上述實(shí)施方式進(jìn)行各種等效改變和修改，其所產(chǎn)生的功能作用仍未超出說明書所涵蓋的精神時(shí)，均應(yīng)在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物，其特征在于，由胚胎干細(xì)胞生物活性物質(zhì)與靈芝孢子生物活性物質(zhì)按照I: 10-12的質(zhì)量比進(jìn)行混合。2.人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: a、人源干細(xì)胞物活性物質(zhì)的制備 將去內(nèi)血管和外層薄膜的胎盤切成l*lmm大小的小塊;將該小塊種植于間充質(zhì)干細(xì)胞培無血清培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中，并放置于培養(yǎng)箱中； 每隔兩天半量換液，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)，使用0.33%磷酸酯酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化，以l.l-2.5X105cells/ml接種于培養(yǎng)皿中傳代培養(yǎng)，并收集更換的廢培養(yǎng)液于_80°C環(huán)境下保存； 重復(fù)多次后，分離、純化獲得高純度間充質(zhì)干細(xì)胞，并將濃度調(diào)整為2X 16個(gè)/ ml密封，經(jīng)超低溫液氮反復(fù)凍融6-7次至細(xì)胞破碎，再通過低溫分離、純化，便可獲得高純度的胚胎干細(xì)胞物活性物質(zhì)； b、靈芝孢子生物活性物質(zhì)的制備 將靈芝孢子粉在100w的紫外燈下輻射處理1-2小時(shí)； 將輻射處理過的靈芝孢子粉與水按1:10的重量比配比混合，并加入纖維素酶、維生素C，然后進(jìn)行超聲波振蕩，處理?xiàng)l件為22-35kHz，30-40°C超聲處理10-30小時(shí)； 將超聲波處理后的孢子粉在_55°C真空冷凍干燥處理4-5小時(shí)； 然后采用超音速氣流粉碎機(jī)在_15°C到-10°C的溫度下進(jìn)行超音速氣流破壁、過篩，選取粒徑為550-600目的孢子粉； C、組合物的制備方法 人源干細(xì)胞生物活性物質(zhì)與靈芝孢子生物活性物質(zhì)按照1:10-12的質(zhì)量比進(jìn)行混合即得。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物的制備方法，其特征在于，所述的培養(yǎng)箱的培養(yǎng)環(huán)境為:5%C02、pH值:7.3、相對(duì)飽和濕度95%，溫度37° C。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人源干細(xì)胞與靈芝孢子生物活性物質(zhì)組合物的制備方法，其特征在于，所述的水與纖維素酶、維生素C的質(zhì)量比為I:0.003:0.0012o
【文檔編號(hào)】A61K36/074GK106038616SQ201610376243
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年5月31日
【發(fā)明人】張正亮, 鄭家德
【申請(qǐng)人】安徽惠恩生物科技股份有限公司