一種鳳尾草總黃酮的制備方法及其應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鳳尾草總黃酮的制備方法及其應(yīng)用。其制備方法包括如下步驟：（1）將鳳尾草切成2~3cm的小段，備用；（2）復(fù)合酶酶解；（3）超聲波提?。唬?）大孔吸附樹(shù)脂純化，收集洗脫液，減壓濃縮，即得鳳尾草總黃酮。經(jīng)藥效學(xué)評(píng)價(jià)，該提取物抗氧化效果明顯，可將其用于制備抗氧化的藥品中，具有原料產(chǎn)量大且價(jià)格低廉、療效顯著、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，是開(kāi)發(fā)新型高效的天然抗氧化劑的一個(gè)好選擇。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種鳳尾草總黃酮的制備方法及其應(yīng)用
[0001 ]
技術(shù)領(lǐng)域： 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鳳尾草總黃酮的制備方法及其應(yīng)用。
[0002]
【背景技術(shù)】： 自由基是人體生命活動(dòng)中多種生化反應(yīng)的中間代謝產(chǎn)物。細(xì)胞在正常的代謝過(guò)程中， 或者受到高能輻射，以及高壓氧、藥物、香煙煙霧和光化學(xué)空氣污染等作用，都會(huì)產(chǎn)生自由 基。
[0003] 研究表明，自由基從產(chǎn)生到衰亡的過(guò)程就是電子轉(zhuǎn)移的過(guò)程。在生命體系中，電子 的轉(zhuǎn)移是一種最基本的運(yùn)動(dòng)，而氧的得電子能力很強(qiáng)，因此，生物體內(nèi)許多化學(xué)反應(yīng)都與氧 有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)損害人體健康的自由基幾乎都與那些活性較強(qiáng)的含氧物質(zhì)有關(guān)，與這些物 質(zhì)相結(jié)合的自由基叫做活性氧自由基?；钚匝踝杂苫鶎?duì)人體的損害實(shí)際上是一種氧化過(guò) 程。因此，要降低自由基的損害，就要從抗氧化做起。
[0004] 據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，黃酮類(lèi)化合物分子中含有多電子的羥基部分，使其具有良 好的抗氧化性能，是一種天然抗氧化劑，具有清除人體中超氧離子自由基、抗衰老和增加機(jī) 體免疫力的生理活性作用。近30年來(lái)黃酮類(lèi)化合物一直是國(guó)內(nèi)外研究開(kāi)發(fā)利用的熱點(diǎn)，國(guó) 內(nèi)外許多專(zhuān)家對(duì)各種黃酮藥理作用做了較深入的研究，使得黃酮的藥理藥效研究有了很大 的發(fā)展。但有關(guān)鳳尾草主要活性成分總黃酮的藥理研究主要集中在其抗腫瘤作用上，對(duì)其 抗氧化性的研究尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。我國(guó)鳳尾草資源極其豐富，價(jià)格便宜，迫切需要廣大學(xué)者 在鳳尾草的植物化學(xué)、提取分離、藥理藥效和臨床應(yīng)用等方面進(jìn)行廣泛的研究，以充分發(fā)揮 我國(guó)的鳳尾草資源優(yōu)勢(shì)，開(kāi)發(fā)鳳尾草新藥，造福人類(lèi)。
[0005]

【發(fā)明內(nèi)容】
： 本發(fā)明的目的在于尋求新型高效的天然抗氧化劑的開(kāi)發(fā)利用，提供了一種鳳尾草總黃 酮的制備方法及其應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案完成的： (1) 原料處理:將鳳尾草切成2~3cm的小段，備用； (2) 酶解:將處理后的鳳尾草加入其質(zhì)量卜2倍的蒸餾水，再加入其原料質(zhì)量2~3%的復(fù) 合酶液，調(diào)節(jié)pH至4.5~5.5，在50 °C恒溫酶解2~3h; (3) 超聲波提取:將酶解后的溶液加入到頻率為40KHz的超聲裝置中，加入其原料質(zhì)量4 ~6倍的60~70%的乙醇溶液，于60~70°C的條件下，超聲提取2~4h，提取液濃縮至無(wú)醇味，備 用； (4) 大孔吸附樹(shù)脂純化:將所得濃縮液上大孔吸附樹(shù)脂柱，65~75%的乙醇溶液洗脫，收 集洗脫液，減壓濃縮，即得鳳尾草總黃酮。
[0007] 步驟(2)中所述的復(fù)合酶為質(zhì)量比3:1的纖維素酶和半纖維素酶。
[0008] 步驟(4)中所述的大孔吸附樹(shù)脂類(lèi)型為HPD-100、D-101、XDA-1。
[0009] 步驟(4)中所述的樹(shù)脂用量與原料的質(zhì)量比為1:1。
[0010] 本發(fā)明制得的鳳尾草總黃酮在制備具有抗氧化作用的藥物中的應(yīng)用 本發(fā)明獲得的鳳尾草總黃酮，通過(guò)對(duì)其清除超氧陰離子自由基(_〇2)2能力和清除DPPH 自由基能力等指標(biāo)的研究表明：鳳尾草總黃酮可以有效清除超氧陰離子自由基和DPPH自由 基。因此，鳳尾草總黃酮是開(kāi)發(fā)新型高效的天然抗氧化劑的一個(gè)好選擇。
[0011]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實(shí)施方式。
[0012]
【具體實(shí)施方式】： 實(shí)施例1: 將鳳尾草切成2~3cm的小段，加入其質(zhì)量1倍的蒸餾水，再加入其原料質(zhì)量2%的復(fù)合酶 液(質(zhì)量比為3:1的纖維素酶和半纖維素酶），調(diào)節(jié)pH至4.5,在50°C恒溫酶解2h;將酶解后的 溶液加入到頻率為40KHz的超聲裝置中，加入其原料質(zhì)量4倍的60%的乙醇溶液，于60 °C的條 件下，超聲提取2h，提取液濃縮至無(wú)醇味，將所得濃縮液上HPD-100大孔吸附樹(shù)脂柱，65%的 乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，即得鳳尾草總黃酮，經(jīng)UV檢測(cè)，鳳尾草總黃酮的含量 為79.09%。
[0013] 實(shí)施例2: 將鳳尾草切成2~3cm的小段，加入其質(zhì)量2倍的蒸餾水，再加入其原料質(zhì)量2.5%的復(fù)合 酶液(質(zhì)量比為3:1的纖維素酶和半纖維素酶），調(diào)節(jié)pH至5.5，在50°C恒溫酶解3h;將酶解后 的溶液加入到頻率為40KHz的超聲裝置中，加入其原料質(zhì)量6倍的70%的乙醇溶液，于65°C的 條件下，超聲提取3h，提取液濃縮至無(wú)醇味，將所得濃縮液上D-101大孔吸附樹(shù)脂柱，75%的 乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，即得鳳尾草總黃酮，經(jīng)UV檢測(cè)，鳳尾草總黃酮的含量 為82.13%。
[0014] 實(shí)施例3: 將鳳尾草切成2~3cm的小段，加入其質(zhì)量2倍的蒸餾水，再加入其原料質(zhì)量3%的復(fù)合酶 液(質(zhì)量比為3:1的纖維素酶和半纖維素酶），調(diào)節(jié)pH至5.0，在50°C恒溫酶解3h;將酶解后的 溶液加入到頻率為40KHz的超聲裝置中，加入其原料質(zhì)量5倍的65%的乙醇溶液，于70 °C的條 件下，超聲提取3h，提取液濃縮至無(wú)醇味，將所得濃縮液上XDA-1大孔吸附樹(shù)脂柱，70%的乙 醇溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，即得鳳尾草總黃酮，經(jīng)UV檢測(cè)，鳳尾草總黃酮的含量為 86.47%。
[0015] 具體藥效學(xué)研究實(shí)驗(yàn)： 將lg上述3個(gè)實(shí)施例中所得的鳳尾草總黃酮，分別用30%的乙醇將其溶解定容在50mL容 量瓶中，記為A、B、C，備用。
[0016] a.清除超氧陰離子自由基Γ〇2)2能力的測(cè)定 采用鄰苯三酚自氧化法，取50mmol/L Tris-HCl緩沖溶液(ρΗ=8.2)4.5mL，置于25°C水 浴中預(yù)熱20min，分別加入lmL樣品和0.4mL 25mmol/L鄰苯三酸溶液，混勾后于25°C水浴中 反應(yīng)5min后，加入8mol/L HC1 0.8mL終止反應(yīng)。自氧化管以lmL蒸餾水代替樣品管中樣品， 操作方法同樣品管，在325nm處測(cè)定吸光值，以等體積pH值8.2的Tris-HCl緩沖液為空白。結(jié) 果見(jiàn)表1: 超氧陰離子的清除率zUtHU/Ao] X100% 式中:Ao為自氧化管的吸光度； Μ為樣品管的吸光度。
[0017]表1鳳尾草總黃酮清除超氧陰離子自由基能力測(cè)定(X土S)
' 鳳尾草總黃酮對(duì)清除超氧陰離子自由基有較好的清除效果，清除率隨樣品中總黃酮含1 量的增加而增大。由表1可以看出，鳳尾草總黃酮對(duì)超氧陰離子自由基的清除率尤為顯著， 明顯強(qiáng)于Vc(在濃度為lmg/mL時(shí)，清除率為70.54%)。
[0018] b.鳳尾草總黃酮對(duì)DPPH自由基的清除作用 在試管中分別加入2.00mL各濃度的鳳尾草總黃酮溶液，編號(hào)為A、B、C，加入 2. OOmLO. 2mml/LDPPH乙醇溶液，搖勻，放置30min，以2.OOmL無(wú)水乙醇代替樣品和2.00mL70% 乙醇混合后作為參比，測(cè)定517nm波長(zhǎng)處的吸光度(仏）。空白對(duì)照組以2.OOmL無(wú)水乙醇代替 樣品，測(cè)定517nm波長(zhǎng)處的吸光度(A〇)，同時(shí)測(cè)定2 · OOmL待測(cè)液與2 · OOmL無(wú)水乙醇在517nm 波長(zhǎng)處的吸光度(Aj)。以Vc為對(duì)照品。結(jié)果見(jiàn)表2: DPPH自由基清除率按以下公式計(jì)算： 清除率=[Αο - (Ai-Aj)]/ ΑοΧΙΟΟ% 式中:A〇-不加黃酮的吸光值，Ai-測(cè)定液的吸光值，Aj-黃酮的本底吸光值。
[0019] 表2鳳尾草總黃酮對(duì)DPHH自由基能力測(cè)定土S)
從表2中可以看出，隨著含量的增加，鳳尾草總黃酮清除DPPH自由基的能力隨著濃度的 增大而增大，有明顯的劑量依賴(lài)性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明鳳尾草總黃酮是良好的質(zhì)子供體，具有顯 著的抗氧化作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種鳳尾草總黃酮的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 原料處理:將鳳尾草切成2~3cm的小段，備用； (2) 酶解:將處理后的鳳尾草加入其質(zhì)量1~2倍的蒸餾水，再加入其原料質(zhì)量2~3%的復(fù) 合酶液，調(diào)節(jié)pH至4.5~5.5，在50 °C恒溫酶解2~3h; (3) 超聲波提取:將酶解后的溶液加入到頻率為40KHz的超聲裝置中，加入其原料質(zhì)量4 ~6倍的60~70%的乙醇溶液，于60~70°C的條件下，超聲提取2~4h，提取液濃縮至無(wú)醇味，備 用； (4) 大孔吸附樹(shù)脂純化:將所得濃縮液上大孔吸附樹(shù)脂柱，65~75%的乙醇溶液洗脫，收 集洗脫液，減壓濃縮，即得鳳尾草總黃酮。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鳳尾草總黃酮的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述 的復(fù)合酶為質(zhì)量比3:1的纖維素酶和半纖維素酶。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鳳尾草總黃酮的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述 的大孔吸附樹(shù)脂類(lèi)型為HPD-100、D-101、XDA-1。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鳳尾草總黃酮的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述 的樹(shù)脂用量與原料的質(zhì)量比為1:1。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鳳尾草總黃酮在制備具有抗氧化作用的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P39/06GK106038617SQ201610299594
【公開(kāi)日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年5月9日
【發(fā)明人】楊成東
【申請(qǐng)人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司