一種香榧提取物的制備方法及其抗腫瘤應用
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種香榧提取物的制備方法及其抗腫瘤應用。其制備方法包括如下步驟：a.將香榧假種皮干燥粉碎，過40目篩；b.將粉碎后的香榧假種皮粉末置于超聲裝置中，在70~80℃的條件下提取3~4h，提取液減壓濃縮，得濃縮液；c.將所得濃縮液加入大孔吸附樹脂柱中，乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮得香榧提取物粗品；d.將上述粗品采用高速逆流色譜分離純化得香榧提取物。經(jīng)藥效學評價，該提取物具有顯著的抗腫瘤效果，為開發(fā)應用新一代天然來源的抗腫瘤藥物開拓了新徑。
【專利說明】
一種香榧提取物的制備方法及其抗腫瘤應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種香榧提取物的制備方法及其抗腫瘤應 用。
【背景技術】
[0002] 香榧又名細榧、榧樹、香榧子，可供藥用，有止咳、潤肺、消痔、驅(qū)蛔等功效。其假種 皮作為香榧種子加工后的廢棄物，富含多種活性物質(zhì)，主要是一些萜類化合物和黃酮類物 質(zhì)，具有很強的藥理活性。研究表明，萜類化合物為香榧中主要的活性成分，在香榧的莖葉、 種子和果實中量最豐富，種類也很多，以二萜類化合物為主，近些年來，不少學者對香榧中 的某些二萜類化合物進行了大量的研究，發(fā)現(xiàn)這些二萜類化合物具有較強的抗腫瘤活性。 因此，香榧提取物具有很好的應用價值，可應用于醫(yī)藥、保健品等行業(yè)。
[0003] 現(xiàn)有提取香榧提取物的報道并不多見，超聲波提取香榧提取物，具有耗時少，收率 高，提取的活性成分也較多等優(yōu)點。因此，本發(fā)明對香榧提取物的制備方法及其在抗腫瘤方 面的研究十分必要，可以為其后續(xù)研究提供支持。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為滿足臨床需要，擴大用藥品種，更好地治療腫瘤，本發(fā)明提供一種香榧提取物的 制備方法及其在抗腫瘤藥物中的應用。
[0005] 本發(fā)明是通過如下技術方案完成的； a. 原料處理:將香榧假種皮干燥粉碎，過40目篩； b. 超聲波提取:將粉碎后的香榧假種皮粉末置于頻率為40KHz的超聲裝置中，加入原 料重量4~5倍的70~80%的乙醇溶液，在70~80 °C的條件下提取3~4h，提取液減壓濃縮，得濃縮 液； c. 大孔吸附樹脂富集:將所得濃縮液加入大孔吸附樹脂柱中，先用2~3倍柱體積的蒸 餾水洗脫，后用4~6倍柱體積的60~80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得香榧提取物粗 品； d. 純化:將上述粗品采用高速逆流色譜法分離純化，以氯仿-甲醇-水為兩相溶劑系 統(tǒng)，取上相做固定相、下相為流動相，主機轉(zhuǎn)速700-1000rpm，流速為l-3mL/min，收集目標流 分，回收試劑，真空干燥得產(chǎn)品。
[0006] 步驟C中所述的大孔吸附樹脂類型為D-101、AB-8或HPD100中的任意一種。
[0007] 步驟d中所述的氯仿-甲醇-水體積比為4:9:3。
[0008] 本發(fā)明制得的香榧提取物采用MTT法（四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法)進行抗 腫瘤活性測試。
[0009] 試驗用細胞株： T-98和U251-SP:人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞株;HLE:人肝癌細胞株;MM1-CB和HMV-1:人黑色 素瘤細胞株。
[0010] 方法：（1 )0.25%胰酶消化對數(shù)生長期細胞，10%NBS的RPMI 1640調(diào)細胞濃度50000 個/ml。96孔板1 OOul/孔。設溶劑對照，每組3平行孔。37 °C，5%C02、95%空氣的培養(yǎng)箱中預培 養(yǎng)24h，棄上清。
[0011] (2)加藥物5個10倍稀釋的濃度(溶劑為有二甲亞砜和水），為10-4 mol/L。
[0012] (3)細胞連續(xù)培養(yǎng)48h，每孔加入10μ1 5mg/ml的MTT溶液（以無血清培養(yǎng)基配制）， 繼續(xù)培養(yǎng)4h。
[0013] (4)吸去上清。加入200μ1 DMS0,輕輕振蕩以使甲臜完全溶解。570nm處用酶標儀測 定0D值。
[0014] (5)計算抑制率(％)=(對照0D-藥物0D)/對照0D*100% 實驗結果:本發(fā)明化合物的抑制率以相對于對照(添加 DMS0)的結果如下表1。
[0015] 表1香榧提取物的腫瘤細胞增值抑制率％
由表1可看出，香榧提取物具有良好的抑制腫瘤細胞生長的活性，其可在制備抗腫瘤藥 物中得到應用。
[0016] 本發(fā)明為制備抗腫瘤藥物提供了一種新的選擇。
[0017] 本發(fā)明所述香榧提取物在制備抗腫瘤藥物時，可按照常規(guī)的制劑方法以香榧提取 物為藥物活性成分，添加適宜的藥物載體，制成各種藥物劑型，如片劑、膠囊、滴丸、注射劑、 緩控釋劑等。
[0018] 下面將結合【具體實施方式】進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限 于下列實施方式。
[0019]
【具體實施方式】： 實施例1: 將香榧假種皮干燥粉碎，過40目篩;將粉碎后的香榧假種皮粉末置于頻率為40KHz的超 聲裝置中，加入原料重量4倍的70%的乙醇溶液，在70 °C的條件下提取3h，提取液減壓濃縮， 得濃縮液;將所得濃縮液加入HPD100大孔吸附樹脂柱中，先用2倍柱體積的蒸餾水洗脫，后 用4倍柱體積的60%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得香榧提取物粗品；取氯仿-甲醇-水 按4:9:3體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動相，將 粗品用下相溶解，開啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相栗入色譜柱中，再以2mL/min流 速栗入流動相，并通過進樣閥連續(xù)進樣，控制轉(zhuǎn)速為850r/min，收集流出液，濃縮，干燥得香 榧提取物，檢測含量95.8%。
[0020] 實施例2: 將香榧假種皮干燥粉碎，過40目篩;將粉碎后的香榧假種皮粉末置于頻率為40KHz的超 聲裝置中，加入原料重量5倍的80%的乙醇溶液，在75 °C的條件下提取4h，提取液減壓濃縮， 得濃縮液;將所得濃縮液加入D-101大孔吸附樹脂柱中，先用3倍柱體積的蒸餾水洗脫，后用 5倍柱體積的70%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得香榧提取物粗品；取氯仿-甲醇-水按 4:9:3體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動相，將粗 品用下相溶解，開啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相栗入色譜柱中，再以lmL/min流速 栗入流動相，并通過進樣閥連續(xù)進樣，控制轉(zhuǎn)速為l〇〇〇r/min，收集流出液，濃縮，干燥得香 榧提取物，檢測含量97.2%。
[0021] 實施例3: 將香榧假種皮干燥粉碎，過40目篩;將粉碎后的香榧假種皮粉末置于頻率為40KHz的超 聲裝置中，加入原料重量4倍的75%的乙醇溶液，在80 °C的條件下提取4h，提取液減壓濃縮， 得濃縮液;將所得濃縮液加入AB-8大孔吸附樹脂柱中，先用3倍柱體積的蒸餾水洗脫，后用6 倍柱體積的80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得香榧提取物粗品；取氯仿-甲醇-水按 4:9:3體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動相，將粗 品用下相溶解，開啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相栗入色譜柱中，再以3mL/min流速 栗入流動相，并通過進樣閥連續(xù)進樣，控制轉(zhuǎn)速為700r/min，收集流出液，濃縮，干燥得香榧 提取物，檢測含量93.4%。
【主權項】
1. 一種香榧提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： a. 原料處理:將香榧假種皮干燥粉碎，過40目篩； b. 超聲波提取:將粉碎后的香榧假種皮粉末置于頻率為40KHz的超聲裝置中，加入原 料重量4~5倍的70~80%的乙醇溶液，在70~80 °C的條件下提取3~4h，提取液減壓濃縮，得濃縮 液； c. 大孔吸附樹脂富集:將所得濃縮液加入大孔吸附樹脂柱中，先用2~3倍柱體積的蒸 餾水洗脫，后用4~6倍柱體積的60~80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得香榧提取物粗 品； d. 純化:將上述粗品采用高速逆流色譜法分離純化，以氯仿-甲醇-水為兩相溶劑系 統(tǒng)，取上相做固定相、下相為流動相，主機轉(zhuǎn)速700-1000rpm，流速為l-3mL/min，收集目標流 分，回收試劑，真空干燥得產(chǎn)品。2. 根據(jù)權利要求1所述的一種香榧提取物的制備方法，其特征在于，步驟c中所述的大 孔吸附樹脂類型為D-101、AB-8或HPD100中的任意一種。3. 根據(jù)權利要求1所述的一種香榧提取物的制備方法，其特征在于，步驟d中所述的氯 仿-甲醇-水體積比為4:9:3。4. 根據(jù)權利要求1所述的香榧提取物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
【文檔編號】A61K36/13GK106038618SQ201610307143
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月11日
【發(fā)明人】楊成東
【申請人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司