牛樟芝在抗前列腺增生藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】一種牛樟芝在抗前列腺增生藥物中的應(yīng)用，通過(guò)將牛樟芝干浸膏用于制備抑制前列腺增生的藥物，能夠降低前列腺上皮細(xì)胞高度、降低血清ACP、DHT含量以及減少前列腺中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)。本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)便、快速。發(fā)明所得牛樟芝提取物具有治療前列腺增生作用，效果可與西藥非那雄胺相媲美；同時(shí)，還具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，能夠抑制小鼠棉球肉芽腫脹、減少小鼠醋酸扭體次數(shù)，可用于緩解前列腺增生伴發(fā)的炎癥及疼痛。
【專利說(shuō)明】
牛樟芝在抗前列腺増生藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及的是一種藥物制備領(lǐng)域的技術(shù)，具體是一種牛樟芝在抗前列腺增生藥 物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 前列腺增生(benign prostatic hyperplasia，BPH)為中老年男性常見(jiàn)疾病，其發(fā) 病率伴隨人口的老齡化呈逐年上升的趨勢(shì)。有統(tǒng)計(jì)顯示，我國(guó)51歲到60歲年齡的男性發(fā)病 率高達(dá)70%以上。前列腺增生的主要臨床表現(xiàn)為一系列下尿路癥狀，如尿頻、尿線變細(xì)、排 尿費(fèi)力、尿潴留等，重癥患者可導(dǎo)致下尿路癥狀加重及上尿路受損或腎積水、腎功能衰竭 (LUTS)。有關(guān)前列腺增生的發(fā)病機(jī)制，認(rèn)為前列腺增生與機(jī)體激素內(nèi)分泌失調(diào)、生長(zhǎng)因子過(guò) 度表達(dá)及原癌基因的過(guò)度表達(dá)相關(guān)。此外，前列腺增生的同時(shí)往往伴有炎癥及疼痛等癥狀。 前列腺增生的治療方法分為手術(shù)治療及藥物治療。手術(shù)治療雖然效果較好，但也給患 者造成身體創(chuàng)傷，接受度不高。根據(jù)藥物作用機(jī)制及種類(lèi)，目前常用治療前列腺增生藥物一 般分為三種:5α-還原酶抑制劑、受體阻斷劑、中藥及植物制劑。西藥雖效果好，但會(huì)帶來(lái)諸 多不良反應(yīng)；中藥制劑及植物提取物存在服用劑量大、療程長(zhǎng)、見(jiàn)效慢的缺點(diǎn)。所以開(kāi)發(fā)一 種安全有效的治療藥物將會(huì)有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003] 牛棒芝（Antrodia cinnamomea T.T.Chang&W.N.Chou)為臺(tái)灣道地藥材，又名棒 芝、樟菇、牛樟菇、紅樟芝、血靈芝，屬擔(dān)子菌門(mén)菌葦綱無(wú)褶菌目多孔菌科薄孔菌屬。目前從 牛樟芝中分離得到的化學(xué)成分已超過(guò)兩百種，包括烷醛、芳香烴、羧酸、脂肪酸酯、腺苷等菌 類(lèi)初級(jí)代謝產(chǎn)物，另有精油、多糖體、三萜、超氧岐化酶、凝集素、微量元素、苯的衍生物、安 卓奎諾爾等。研究顯示，牛樟芝粗提物對(duì)肝癌、乳癌、血癌、胰腺癌等癌細(xì)胞均具有細(xì)胞毒作 用。但未見(jiàn)牛樟芝治療前列腺增生的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)制備繁瑣且多涉及使用二氯甲烷、甲醇、丙酮等多種有毒溶 劑，制備過(guò)程需使用MPLC等精密儀器，且需反復(fù)柱層析，成本高昂、得率低等缺陷，提出一種 牛樟芝在抗前列腺增生藥物中的應(yīng)用，制備方法簡(jiǎn)便、快速。發(fā)明所得牛樟芝提取物具有治 療前列腺增生作用，效果可與西藥非那雄胺相媲美；同時(shí)，還具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，能 夠抑制小鼠棉球肉芽腫脹、減少小鼠醋酸扭體次數(shù)，可用于緩解前列腺增生伴發(fā)的炎癥及 疼痛。
[0005] 本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 本發(fā)明涉及一種牛樟芝在抗前列腺增生藥物中的應(yīng)用，將牛樟芝干浸膏用于制備 抑制前列腺增生的藥物。
[0007] 所述的藥物能夠降低前列腺上皮細(xì)胞高度，改善前列腺組織病理學(xué)改變，并顯著 降低血清ACP、DHT含量，減少前列腺中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)。
[0008] 本發(fā)明另外涉及一種牛樟芝在抗前列腺增生藥物中的應(yīng)用，將牛樟芝干浸膏用于 制備抗炎鎮(zhèn)痛的藥物。
[0009]所述的牛棒芝，取自牛棒芝（Antrodia cinnamomea T.T.Chang&W.N.Chou)子實(shí) 體，經(jīng)研磨后采用乙醇回流提取并減壓濃縮后得到干浸膏，或乙醇回流提取并濃縮干燥后 通過(guò)乙醇重結(jié)晶得到干混懸或混懸劑。
【附圖說(shuō)明】
[0010]圖1為牛樟芝提取物對(duì)BPH大鼠前列腺組織病理學(xué)的影響示意圖；
[0011]圖中為HE染色，X400下的：（a)為空白，（b)為模型，（C)為非那雄胺，⑷為牛樟芝 低劑量組，（e)為牛樟芝高劑量組；
[0012] 圖2為牛樟芝提取物對(duì)BPH大鼠前列腺組織VEGF的影響示意圖；
[0013] 圖中為X400下的：（a)為空白，（b)為模型，（c)為非那雄胺，（d)為陰性對(duì)照，（e)為 牛樟芝低劑量，（f)為牛樟芝高劑量。
【具體實(shí)施方式】 實(shí)施例1
[0014] 本實(shí)施例制備一種治療前列腺增生的牛樟芝提取物，包括如下步驟：
[0015] 1)取原藥材牛樟芝子實(shí)體，挑去雜質(zhì)，剪碎或切碎；
[0016] 2)放入圓底燒瓶?jī)?nèi)，加提取溶劑65%~90%乙醇，料液比2~3g生藥/1000mL;
[0017] 3)回流提取 30 ~60min;
[0018] 4)提取液濾過(guò)，回收提取溶劑并減壓濃縮，得提取物干浸膏。
[0019] 下述試驗(yàn)，說(shuō)明本實(shí)施例所制備牛樟芝提取物具有抗丙酸睪酮誘導(dǎo)的大鼠前列腺 增生作用。
[0020] 實(shí)驗(yàn)材料:試驗(yàn)動(dòng)物:雄性SD大鼠，72只，體重160~180g。試驗(yàn)藥物:非那雄胺混懸 液0.25mg/mL(陽(yáng)性對(duì)照組）；牛樟芝提取物混懸液16mg生藥/mL(低劑量牛樟芝提取物）；牛 樟芝提取物混懸液48mg生藥/mL(高劑量牛樟芝提取物）。
[0021 ]試驗(yàn)方法:按照新藥藥效研究指導(dǎo)原則，制備大鼠前列腺增生模型。雄性SD大鼠隨 機(jī)分為5組，每組8只，分別為：空白組，模型組，非那雄胺組，牛樟芝醇提液低、高劑量組。造 模前適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，一周后除空白組，其余各組大鼠隔日皮下注射丙酸睪酮20mg/kg*d， 連續(xù)3周。造模3周后，各給藥組灌胃給藥，正常組及模型組灌胃5 % CMC-Na，給藥體積0.4mL/ 100g，非那雄胺組灌胃非那雄胺混懸液（lmg/kg*d)，牛樟芝各組按確定的劑量(低劑量組 72mg/kg*d、高劑量組216mg/kg*d)給藥，每日一次，連續(xù)灌胃30d。給藥期間，觀察大鼠一般 行為活動(dòng)，食欲、精神狀態(tài)，毛發(fā)光澤度及大小便等。各組大鼠末次給藥2h后麻醉，腹主動(dòng)脈 取血，處死大鼠，取前列腺，稱取前列腺濕重。按下式計(jì)算前列腺指數(shù):前列腺指數(shù)PI = (前 列腺重量/大鼠體重）X 100。
[0022] 取前列腺腹側(cè)葉相同部位用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋進(jìn)行切片，蘇木素-伊紅 染色，光鏡下檢視大鼠前列腺組織切片的病理形態(tài)變化。同時(shí)采用Image-pro plus 6.0測(cè) 量前列腺上皮細(xì)胞高度。
[0023] 麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈采血收集于真空采血管中，室溫放置lh，4°C冰箱過(guò)夜，第2天 取出離心，取上層血清-80°C保存。室溫均勻解凍后，按試劑盒步驟檢測(cè)大鼠血清中酸性磷 酸酶(ACP)、雙氫睪酮(DHT)的含量。
[0024]鏈霉親和素-生物素復(fù)合物(SABC)免疫組化法檢測(cè)VEGF的表達(dá)。
[0025] 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以mean土sd表示，數(shù)據(jù)處理采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用One-way AN0VA;計(jì)數(shù)資料采用秩和檢驗(yàn);p<0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0026] 試驗(yàn)結(jié)果
[0027] 1)對(duì)前列腺指數(shù)的影響
[0028] 表1體現(xiàn)了牛樟芝提取物對(duì)前列腺增生大鼠前列腺指數(shù)的影響。模型組大鼠的前 列腺指數(shù)(PI)顯著高于空白組(P<〇.05)，非那雄胺組大鼠的前列腺指數(shù)顯著低于模型組 (p<0.05);而牛樟芝提取物組與模型組相比有減小的趨勢(shì)。
[0029 ]表1.牛樟芝提取物對(duì)BPH大鼠前列腺指數(shù)的影響(mean 土 s d，η = 8)
[0030] #Ρ<0.05,與空白組比較;*Ρ<0.05廣Ρ<0.01.，與模型組比較。
[0031 ] 2)對(duì)前列腺增生大鼠血清中酸性磷酸酶、雙氫睪酮含量的影響
[0032]表2體現(xiàn)了牛樟芝提取物對(duì)前列腺增生大鼠血清中酸性磷酸酶、雙氫睪酮含量的 影響。模型組與空白組比較，血清ACP、DHT含量升高，差異極顯著(ρ<0.01);牛樟芝低劑量 及高劑量組與模型組相比血清ACP、DHT含量低，差異顯著(ρ<0.05)。
[0033] 表2.牛樟芝提取物對(duì)ΒΡΗ大鼠血清中ACP及DHT的影響(mean 土 sd，η = 8)
[0034] ，<0.01，與空白組比較;$<0.05，，<0.01.，與模型組比較。
[0035] 3)對(duì)前列腺增生大鼠的前列腺組織形態(tài)影響
[0036] 圖2體現(xiàn)了牛樟芝提取物對(duì)前列腺增生大鼠的前列腺組織形態(tài)影響。正常組腺體 排列清楚，腺腔結(jié)構(gòu)清晰完整，前列腺上皮細(xì)胞呈單層柱狀排列。模型組腺體數(shù)目增多，單 位面積腺體數(shù)目密度增大，上皮細(xì)胞明顯增厚，部分區(qū)域結(jié)構(gòu)為多層，排列紊亂，大多數(shù)腺 體具有乳頭狀突起，且間質(zhì)纖維組織及平滑肌組織增多，說(shuō)明造模成功。牛樟芝低劑量組腺 腔明顯減少，管腔細(xì)胞多為單層柱狀排列，間質(zhì)少而疏松。牛樟芝高劑量組、非那雄胺組前 列腺腺體上皮細(xì)胞呈單層或復(fù)層排列，上皮細(xì)胞多呈高柱狀或立方狀，乳頭狀結(jié)構(gòu)明顯減 少(圖1 )，表明牛樟芝高劑量組有顯著抑制前列腺增生的作用。
[0037] 按照半定量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)各給藥組前列腺增生病理形態(tài)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。 經(jīng)秩檢驗(yàn)，與空白組相比，模型組明顯發(fā)生前列腺增生的病理改變(P<〇. 01)。與模型組相 比，非那雄胺、牛樟芝高劑量組經(jīng)給藥后可顯著減輕大鼠前列腺增生癥狀(p<0.01);牛樟 芝低劑量組亦可一定程度減輕大鼠前列腺增生癥狀(P<〇.05)。
[0038] 表3.牛樟芝提取物對(duì)BPH大鼠前列腺組織形態(tài)的影響(mean 土 sd，η = 8)
[0039] 表示前列腺腺體基本正常，腺上皮基本正常，間質(zhì)基本正常；"+"表示腺體基本 正常，腺上皮有所增生，間質(zhì)基本正常；"++"表示腺體增生，腺上皮增生，間質(zhì)增生；"+++"表 示腺體明顯增生，腺上皮明顯增生，間質(zhì)明顯增生。
[0040] 4)牛樟芝提取物對(duì)ΒΡΗ大鼠前列腺上皮細(xì)胞高度的影響
[0041] 表4體現(xiàn)了牛樟芝提取物對(duì)前列腺增生大鼠的前列腺上皮細(xì)胞高度的影響。與空 白組相比，模型組的上皮細(xì)胞高度明顯增加(Ρ<〇.05);與模型組相比，牛樟芝各組均能顯 著減小前列腺上皮細(xì)胞高度。
[0042] 表4.牛樟芝對(duì)ΒΡΗ大鼠前列腺上皮細(xì)胞高度的影響(mean 土 sd，η = 8)
[0043] ##卩<0.01，與空白組比較;><0.05，，<0.01.，與模型組比較。
[0044] 5)牛樟芝提取物對(duì)ΒΡΗ大鼠前列腺組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)表達(dá)的影響 [0045] 正常組前列腺組織VEGF表達(dá)呈弱陽(yáng)性;模型組表達(dá)為強(qiáng)陽(yáng)性，表現(xiàn)為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) 目增多，大部分為深棕黃色，染色較深;非那雄胺組較模型組陽(yáng)性細(xì)胞減少，染色變淺;牛樟 芝各給藥組均較模型組情況有所改善，染色較淺，陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)目有所減少;具體情況見(jiàn) 圖2。
[0046] 6)牛樟芝提取物對(duì)ΒΡΗ大鼠前列腺上皮細(xì)胞中VEGF表達(dá)的影響
[0047]表5體現(xiàn)了牛樟芝提取物對(duì)前列腺增生大鼠前列腺上皮細(xì)胞中VEGF平均光密度的 影響。VEGF的表達(dá)在模型組中最高，平均光密度值最大，與正常組比較有顯著性差異（P< 0.01);給予牛樟芝治療后VEGF的表達(dá)均較模型組明顯下降，平均光密度值降低(P<0.01)。 [0048] 表5.牛樟芝提取物對(duì)BPH大鼠前列腺中VEGF的影響(mean 土 sd，η = 8)
[0049] #Ρ<0.05,與空白組比較;*Ρ<0.05廣Ρ<0.01.，與模型組比較。
[0050] 根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，牛樟芝提取物可顯著降低丙酸睪酮誘導(dǎo)的前列腺增生大 鼠前列腺指數(shù)，降低前列腺上皮細(xì)胞高度，改善前列腺組織病理學(xué)改變，并顯著降低血清 ACP、DHT含量，減少前列腺中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)。 實(shí)施例2
[0051] 本實(shí)施例采用與實(shí)施例1相同的方法，制備一種具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用的牛樟芝提取 物，用于治療前列腺增生伴發(fā)的炎癥及疼痛。
[0052] 下述試驗(yàn)，說(shuō)明本實(shí)施例所制備牛樟芝提取物具有鎮(zhèn)痛、抗炎作用。
[0053] 試驗(yàn)動(dòng)物：ICR小鼠，SPF級(jí)，18~22g，雌雄各半。
[0054]試驗(yàn)方法 [0055] 1)小鼠扭體法
[0056] ICR小鼠隨機(jī)分為8組：生理鹽水組(NS)、陽(yáng)性對(duì)照藥阿司匹林組(Asp40mg/kg)，牛 樟芝組(低劑量組：104mg/kg、中劑量組：208mg/kg、高劑量組:416mg/kg)每組10只，雌雄各 半。各組小鼠分別給予生理鹽水或相應(yīng)藥物，每天灌胃給藥1次，連續(xù)5d。末次給藥lh后，每 只小鼠腹腔內(nèi)注射1 %冰醋酸〇. 2mL，致使小鼠產(chǎn)生扭體反應(yīng)。扭體反應(yīng)表現(xiàn)為:小鼠腹部明 顯內(nèi)凹，后肢向后伸展，臀部高起等一系列動(dòng)作，以一次完整的扭體反應(yīng)計(jì)一次。扭體反應(yīng) 在注射冰醋酸后15min內(nèi)出現(xiàn)頻率高，潛伏期約為3min，因此以注射冰醋酸3min后的15min 內(nèi)發(fā)生的小鼠扭體次數(shù)，作為疼痛的定量指標(biāo)，與空白組相比給藥組的扭體次數(shù)越多表明 鎮(zhèn)痛效果越不明顯，反映供試藥鎮(zhèn)痛的效果差異，并計(jì)算各給藥組對(duì)小鼠扭體反應(yīng)的抑制 率。
[0057] 2)小鼠棉球肉芽腫法
[0058]取ICR小鼠，10 %水合氯酸0. lmL/10g麻醉，鼠板固定，在無(wú)菌條件下，在小鼠背部 切l(wèi)cm長(zhǎng)小口，將10mg滅菌棉球(棉球預(yù)先經(jīng)高壓滅菌及青霉素鈉處理)埋入小鼠右前肢腋 窩皮下并縫合，術(shù)后外涂青霉素鈉粉末抗感染。將小鼠隨機(jī)分為8組(n = 10):空白組，陽(yáng)性 對(duì)照組(醋酸可的松1.8mg/kg · d)，牛樟芝牛樟芝低、中、高劑量組。空白組給藥劑量與醋酸 地塞米松組等容量。手術(shù)后次日開(kāi)始灌胃給藥連續(xù)7d;末次給藥lh后，處死并剝離取出棉球 肉芽組織，60°C恒溫干燥箱中放置24h后，稱取棉球重量，稱得重量減去原棉球重量即為增 生的肉芽干重，以肉芽干重為評(píng)價(jià)指標(biāo)，并計(jì)算出肉芽腫脹抑制率。
[0059] 試驗(yàn)結(jié)果
[0060] 表6、7表明，本發(fā)明牛樟芝提取物三個(gè)劑量組與生理鹽水組相比均可顯著減小醋 酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，抑制小鼠棉球肉芽組織增生。標(biāo)明牛樟芝提取物具有抗炎鎮(zhèn)痛 作用，可用于治療前列腺增生伴發(fā)的炎癥及疼痛。
[0061 ] 表6.牛樟芝提取物對(duì)醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)抑制作用(mean ± sd，η = 10)
[0062] *Ρ<0·05，**Ρ<0·01·，與空白組比較。
[0063 ]表7.牛樟芝提取物對(duì)小鼠棉球肉芽腫的抑制作用(mean 土 s d，η = 10)
[0064] 乍<0.05，，<0.01.，與空白組比較。
[0065] 上述具體實(shí)施可由本領(lǐng)域技術(shù)人員在不背離本發(fā)明原理和宗旨的前提下以不同 的方式對(duì)其進(jìn)行局部調(diào)整，本發(fā)明的保護(hù)范圍以權(quán)利要求書(shū)為準(zhǔn)且不由上述具體實(shí)施所 限，在其范圍內(nèi)的各個(gè)實(shí)現(xiàn)方案均受本發(fā)明之約束。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種牛樟芝在抗前列腺增生藥物中的應(yīng)用，其特征在于，將牛樟芝干浸膏用于制備 抑制前列腺增生的藥物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述的抑制前列腺增生是指降低人或大鼠前 列腺上皮細(xì)胞高度、降低血清ACP、DHT含量以及減少前列腺中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是，所述的牛樟芝，取自牛樟芝（Antrodia cinnamomea T. T. Chang&W.N.Chou)子實(shí)體，經(jīng)研磨后采用乙醇回流提取并減壓濃縮后得到 干浸膏。4. 一種牛樟芝在抗前列腺增生藥物中的應(yīng)用，其特征在于，將牛樟芝干浸膏用于制備 抗炎鎮(zhèn)痛的藥物。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征是，所述的牛樟芝，取自牛樟芝（Antrodia cinnamomea T. T. Chang&W.N.Chou)子實(shí)體，經(jīng)研磨后采用乙醇回流提取并減壓濃縮后得到 干浸膏。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征是，所述的牛樟芝，取自牛樟芝（Antrodia cinnamomea T. T. Chang&W. N. Chou)子實(shí)體，經(jīng)研磨后采用乙醇回流提取并濃縮干燥后通過(guò) 乙醇重結(jié)晶得到干混懸或混懸劑。
【文檔編號(hào)】A61K36/07GK106063800SQ201610620474
【公開(kāi)日】2016年11月2日
【申請(qǐng)日】2016年8月1日
【發(fā)明人】李曉波, 管榮良, 周龍, 王夢(mèng)月, 彭穎, 張遠(yuǎn)騰
【申請(qǐng)人】上海交通大學(xué), 上海勤生緣生物科技有限公司