一種大鼠腸道提取物在制備氣管平滑肌舒張藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種大鼠腸道提取物在制備氣管平滑肌舒張藥物中的應(yīng)用，所述大鼠腸道提取物的制備方法為將禁食后的大鼠麻醉，取腸道后浸泡于5～10mL溫度為0～4℃的磷酸緩沖溶液中30～60min，提取液用0.22μm濾膜過濾，濾液再用氫氧化鈉溶液調(diào)至pH7.40。本發(fā)明的大鼠腸道提取物所制備的氣管平滑肌舒張藥物藥理作用良好，可以有效舒張乙酰膽堿引起的氣管平滑肌收縮，為臨床提供了一種新型的哮喘治療藥物。
【專利說明】
一種大鼠腸道提取物在制備氣管平滑肌舒張藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種大鼠腸道提取物及其應(yīng)用，具體涉及一種大鼠腸道提取物在制備氣管平滑肌舒張藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]哮喘是由外界的或人體內(nèi)存在的某些過敏原引起的氣管的高度敏感性的疾病。由于氣管對(duì)刺激物的過度敏感反應(yīng)，導(dǎo)致氣管發(fā)生廣泛的可逆性痙攣、狹窄。臨床表現(xiàn)為發(fā)作性帶有哮鳴音的呼吸困難，持續(xù)數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)，經(jīng)治療或自行好轉(zhuǎn)。
[0003]目前，治療哮喘的藥物分為控制性藥物和緩解性藥物?？刂菩运幬锸侵感枰L期每日規(guī)律使用的藥物，這些藥物主要通過抗炎作用使哮喘維持臨床控制，其中包括吸入糖皮質(zhì)激素、全身用激素、白三烯調(diào)節(jié)劑、長效β2-受體激動(dòng)劑、緩釋茶堿、抗IgE抗體等;緩解性藥物是指按需使用的藥物，藥物通過解除支氣管痙攣從而緩解哮喘癥狀，其中包括速效吸入β2-受體激動(dòng)劑、全身用激素、吸入性抗膽堿能藥物、短效茶堿及短效口服β2-受體激動(dòng)劑等。無論是激素藥物還是β2-受體激動(dòng)劑藥物都存在不良反應(yīng)，長期口服激素可以引起骨質(zhì)疏松癥、高血壓、糖尿病、肥胖癥、白內(nèi)障、青光眼等;β2-受體激動(dòng)劑臨床使用時(shí)需間歇使用，不宜長期、單一使用，也不宜過量應(yīng)用，否則可引起骨骼肌震顫、低血鉀、心律紊亂等不良反應(yīng)，存在一定的弊端。因此，我們迫切需要開發(fā)一種新型、安全的哮喘藥物。
[0004]動(dòng)物組織(如羊胎盤、人胎盤等)由于含有極高的生物活性物質(zhì)，早已應(yīng)用于臨床，在《本草綱目》中記載，人、羊、豬等哺乳動(dòng)物的胎盤可以入藥，具有治虛勞損、安神養(yǎng)血、益氣補(bǔ)精的功效?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物組織提取物還具有治療皮膚燒創(chuàng)傷、消除妊娠紋、治療白癜風(fēng)等新功效，但目前還沒有研究報(bào)道大鼠腸道提取物在制備氣管平滑肌舒張藥物中的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種大鼠腸道提取物在制備氣管平滑肌舒張藥物中的應(yīng)用，具體涉及大鼠腸道提取物用于哮喘的治療。
[0006]實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0007]—種大鼠腸道提取物在制備氣管平滑肌舒張藥物中的應(yīng)用，所述大鼠為昆明大
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[0008]優(yōu)選的，所述氣管平滑肌舒張藥物用于治療哮喘。
[0009]優(yōu)選的，所述大鼠腸道提取物的制備方法包括如下步驟:
[0010](I)將大鼠禁食，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠；
[0011](2)頸椎脫白法將大鼠處死，用消過毒的剪刀迅速開腹，沿腸系膜緣分離取出腸道，放入高鈣溶液中，去除腸道的腸系膜及周圍脂肪組織，再剖開腸道后浸泡于5?1mL溫度為O?4°C的磷酸緩沖溶液中30?60min，得到提取液；
[0012](3)將提取液用0.22μπι的濾膜過濾，濾液再用氫氧化鈉溶液調(diào)至ρΗ7.40，得到大鼠腸道提取物。
[0013]優(yōu)選的，所述的大鼠腸道提取物的制備方法，步驟(2)所述腸道為起始胃幽門向下13 cm，步驟(3)所述氫氧化鈉溶液的濃度為3?5mo I /L。
[0014]優(yōu)選的，所述氣管平滑肌舒張藥物的劑型為口服溶液劑。
[0015]所述磷酸緩沖溶液的配制:
[0016]步驟一:稱取二水磷酸二氫鈉31.2g，加純化水至1000ml溶解；
[0017]步驟二:稱取十二水磷酸氫二鈉71.6g，加純化水至1000ml溶解；
[0018]步驟三:取步驟一制備的磷酸二氫鈉溶液19ml，取步驟二制備的磷酸氫二鈉溶液81ml，將磷酸二氫鈉溶液和磷酸氫二鈉溶液混合均勻。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于:
[0020](I)本發(fā)明制備的大鼠腸道提取物藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明可以有效舒張乙酰膽堿引起的氣管平滑肌收縮，可作為一種新型氣管平滑肌舒張藥物，用于制備治療哮喘的藥物，可為臨床治療哮喘提供一種新的方案。
[0021](2)本發(fā)明大鼠腸道提取物制備方法簡便，成本低廉。
【具體實(shí)施方式】
[0022]為使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以更好的理解本發(fā)明并能予以實(shí)施，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。
[0023]實(shí)施例1大鼠腸道提取物的制備方法
[0024](I)將大鼠禁食，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠；
[0025](2)頸椎脫白法將大鼠處死，用消過毒的剪刀迅速開腹，沿腸系膜緣分離取出起始胃幽門向下13cm的腸道，放入高鈣溶液中，去除腸道的腸系膜及周圍脂肪組織，再剖開腸道后浸泡于5mL溫度為4°C的磷酸緩沖溶液中30min，得到提取液；
[0026](3)將提取液用0.22μπι的濾膜過濾，濾液再用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)至pH7.40，得到大鼠腸道提取物。
[0027]所述高鈣溶液的配制:取氯化鈉7.889g、氯化鉀0.3728g、葡萄糖1.982g、4-羥乙基呢嘆乙磺酸2.383g、氯化鎂0.2033g、氯化|丐0.22968，加無菌水至1000!111^，再用濃度為
0.5mol/L NaOH溶液調(diào)至pH 7.4。
[0028]實(shí)施例2大鼠腸道提取物的制備方法
[0029 ] (I)將大鼠禁食，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠；
[0030](2)頸椎脫白法將大鼠處死，用消過毒的剪刀迅速開腹，沿腸系膜緣分離取出腸道，放入高鈣溶液中，去除腸道的腸系膜及周圍脂肪組織，再剖開腸道后浸泡于1mL溫度為2 0C的磷酸緩沖溶液中45min，得到提取液；
[0031](3)將提取液用0.22μπι的濾膜過濾，濾液再用3mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)至pH7.40，得到大鼠腸道提取物。
[0032]實(shí)施例3大鼠腸道提取物的制備方法
[0033](I)將大鼠禁食，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠；
[0034](2)頸椎脫白法將大鼠處死，用消過毒的剪刀迅速開腹，沿腸系膜緣分離取出腸道，放入高鈣溶液中，去除腸道的腸系膜及周圍脂肪組織，再剖開腸道后浸泡于SmL溫度為O°C的磷酸緩沖溶液中60min，得到提取液；
[0035](3)將提取液用0.22μπι的濾膜過濾，濾液再用3mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)至pH7.40，得到大鼠腸道提取物。
[0036]實(shí)施例4大鼠腸道提取物的非臨床藥效學(xué)研究
[0037]1.實(shí)驗(yàn)材料
[0038]1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0039]性成熟且健康的昆明小鼠，平均年齡6?8周，購于湖北省疾病預(yù)防控制中心。小鼠飼養(yǎng)在20?25°C室溫溫度和50?60%濕度環(huán)境下，并且光-暗循環(huán)間隔時(shí)間為12小時(shí)。
[0040]1.2實(shí)驗(yàn)儀器和試劑
[0041]大鼠腸道提取物(自制);無水乙醇(國藥化學(xué)試劑有限公司)；
[0042I乙酰膽堿(美國Sigma公司)；倒置顯微鏡(Nikon公司)；
[0043]張力換能器JH-2型(中國北京航天醫(yī)學(xué)工程研究所)；
[0044]錐形瓶(崇州市蜀?；び邢挢?zé)任公司)；
[0045]HV-4型離體組織器官恒溫灌流系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)；
[0046]超級(jí)恒溫水浴鍋Hff-1OOO(成都泰盟科技有限公司)；
[0047]生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)BL-420S(成都泰盟科技有限公司)。
[0048]1.3實(shí)驗(yàn)溶液配制
[0049]1.3.1高鈣溶液的配制
[0050]取氯化鈉7.889g、氯化鉀0.3728g、葡萄糖1.982g、4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.383g、氯化鎂0.2033g、氯化鈣0.2296g，加無菌水至lOOOmL，再用濃度為0.5mol/L NaOH溶液調(diào)至pH7.4。
[0051 ] 1.3.2乙酰膽堿溶液的配制
[0052 ] 取乙酰膽堿16.3mg，用高鈣溶液溶解并稀釋至I OOOmL。
[0053]2.實(shí)驗(yàn)方法
[0054]2.1小鼠氣管的獲取
[0055]運(yùn)用頸椎脫臼法將小鼠處死，然后將小鼠固定在解剖板上，噴灑75wt%酒精，用消過毒的剪刀沿著胸腔剪到頸部，暴露出氣管后，在喉結(jié)處剪開，用鑷子輕提喉結(jié)，剪刀斜著30度剪去左右兩邊的結(jié)締組織，最后分離出氣管與心肺組織，迅速置于預(yù)冷的高鈣溶液中。將組織固定于解剖盤中，清除氣管周圍的各種結(jié)締組織，然后將氣管上端到支氣管前端剪斷。
[0056]2.2張力換能器試驗(yàn)系統(tǒng)調(diào)試
[0057]對(duì)儀器經(jīng)行校準(zhǔn)后打開氧氣閥門，調(diào)節(jié)供氧量在合適的范圍，以保證組織的基本耗氧量但又不干擾測試基線，再打開張力換能系統(tǒng)，采樣率設(shè)為100HZ，打開恒溫控制系統(tǒng)，保證離體組織溫度恒定為37°C，每個(gè)浴槽置有6mL高鈣溶液，儀器預(yù)熱0.5小時(shí)，備用。
[0058]2.3氣管的處理及張力換能器的樣品上樣
[0059]截取長度為5_的氣管，將小鼠氣管通過掛鉤銜接張力換能器試驗(yàn)系統(tǒng)，置于含有6mL 37 °C高鈣溶液并持續(xù)通氧的恒溫水浴槽內(nèi)。前負(fù)荷設(shè)置為300mg，每15分鐘更換一次高鈣溶液，連續(xù)四次。平衡60分鐘后，用ΙΟΟμπιοΙ/L乙酰膽堿進(jìn)行預(yù)刺激，使氣管處于最佳收縮狀態(tài)，洗脫后恢復(fù)至基線。
[0060]2.4大鼠腸道提取物對(duì)乙酰膽堿預(yù)收縮的舒張作用
[0061]將小鼠氣管通過掛鉤銜接張力換能器試驗(yàn)系統(tǒng)，置于含有6mL37°C高鈣溶液并持續(xù)通氧的恒溫水浴槽內(nèi)。前負(fù)荷設(shè)置為300mg，每15分鐘更換一次高鈣溶液，連續(xù)四次。平衡60分鐘后，用ΙΟΟμπιοΙ/L乙酰膽堿進(jìn)行預(yù)刺激三次，使氣管肌張力達(dá)到SOOmg以上，洗脫后恢復(fù)至基線，再加入乙酰膽堿使氣管預(yù)收縮15分鐘，再分別給予500yL實(shí)施例1?3制備的大鼠腸道提取物作用于小鼠氣管。
[0062]3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0063]小鼠氣管用ΙΟΟμπιοΙ/L乙酰膽堿進(jìn)行預(yù)刺激三次，使氣管肌張力達(dá)到SOOmg以上，洗脫后恢復(fù)至基線，再加入乙酰膽堿使氣管預(yù)收縮15分鐘，小鼠氣管張力為llmN，分別加入500yL實(shí)施例1?3制備的大鼠腸道提取物，加入實(shí)施例1制備的大鼠腸道提取物后小鼠氣管張力下降到3mN，加入實(shí)施例2制備的大鼠腸道提取物后小鼠氣管張力也下降到3mN，加入實(shí)施例3制備的大鼠腸道提取物后小鼠氣管張力下降到4mN，說明大鼠腸道提取物能抑制乙酰膽堿誘發(fā)的預(yù)收縮，能舒張氣管平滑肌，用于哮喘的治療。其中，小鼠氣管張力(mN)=拉力(mg)/氣管重量(mg)，即單位重量的氣管平滑肌拉力。
[0064]實(shí)施例5大鼠腸道提取物口服溶液的制備
[0065](I)取純化水80mL，溫度控制在20?30 °C，加入木糖醇8g、苯甲酸鈉0.1g,攪拌至完全溶解，再用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)至pH7.40，得到溶液A;
[0066](2)將溶液A降溫至5?10°C，加入1mL大鼠腸道提取物，再加純化水至100mL，攪拌均勻、灌裝，制備10支大鼠腸道提取物口服溶液。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種大鼠腸道提取物在制備氣管平滑肌舒張藥物中的應(yīng)用。2.如權(quán)利要求1所述的大鼠腸道提取物在制備氣管平滑肌舒張藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述氣管平滑肌舒張藥物用于治療哮喘。3.如權(quán)利要求1所述的大鼠腸道提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)將大鼠禁食，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉大鼠； (2)頸椎脫白法將大鼠處死，用消過毒的剪刀迅速開腹，沿腸系膜緣分離取出腸道，放入高鈣溶液中，去除腸道的腸系膜及周圍脂肪組織，再剖開腸道后浸泡于5?1mL溫度為O?4°C的磷酸緩沖溶液中30?60min，得到提取液； (3)將提取液用0.22μπι的濾膜過濾，濾液再用氫氧化鈉溶液調(diào)至pH7.40，得到大鼠腸道提取物。4.如權(quán)利要求3所述的大鼠腸道提取物的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述腸道為起始胃幽門向下13cm，步驟(3)所述氫氧化鈉溶液的濃度為3?5mol/L。5.如如權(quán)利要求1所述的大鼠腸道提取物在制備氣管平滑肌舒張藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述氣管平滑肌舒張藥物的劑型為口服溶液劑。
【文檔編號(hào)】A61K35/38GK106074608SQ201610571718
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年7月19日
【發(fā)明人】劉慶華, 王倩, 于孟飛
【申請(qǐng)人】中南民族大學(xué)