一種復(fù)方鵝絨藤提取物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種復(fù)方鵝絨藤提取物及其制備方法，所述制備方法包括以下步驟：(1)按復(fù)方鵝絨藤配方選取相應(yīng)質(zhì)量的鵝絨藤和白花菜籽藥材(二者質(zhì)量比例范圍為10∶3～10∶30)，采用水或乙醇?水混合溶媒進行提取，濃縮；所得復(fù)方鵝絨藤提取液用大孔樹脂進行吸附，用水洗后，再用40?95％乙醇?水混合溶媒進行洗脫，洗脫液濃縮，干燥，即得。所述復(fù)方鵝絨藤提取物中含有小麥黃素?7?O?葡萄糖醛酸苷，含量不低于20mg/g；同時含有芹菜素，含量不低于2.0mg/g。本發(fā)明所述復(fù)方鵝絨藤提取物的制備工藝路線經(jīng)濟合理、效率高，容易實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】
一種復(fù)方鵝絨藤提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種復(fù)方鵝絨藤提取物，本發(fā)明同時涉及該提取物的制備方法，屬生 物醫(yī)藥領(lǐng)域。 技術(shù)背景
[0002] 復(fù)方鵝絨藤是發(fā)明人研制的民間驗方，由鵝絨藤、白花菜籽等藥材組成，用于治療 肩周炎、腰肌勞損等多種外周關(guān)節(jié)炎性疼痛。該方中鸛絨藤(Cynanchum chinense R.Br.) 為蘿摩科鵝絨藤屬植物地上莖葉，發(fā)明人在前期研究中，發(fā)現(xiàn)鵝絨藤提取物具有一定的抗 炎活性，其中主要有效成分為小麥黃素-7-0-葡萄糖醛酸苷、山奈酚-3-0-吡喃葡萄糖苷、小 麥黃素等黃酮類成分，并建立了其制備方法(劉江云等，一種鵝絨藤提取物及其制備方法， 專利號ZL201210384712.9)。白花菜籽為白花菜科植物白花菜（Cleome gynandra L.)的種 子，具有祛風散寒、活血止痛等功效[呂幫玉等，白花菜的研究進展，現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2014，
[3] :74]，和鵝絨藤具有協(xié)同作用，但其中的化學成分研究較為少見。本發(fā)明在對鵝絨藤、白 花菜籽主要化學成分進行分離鑒定的基礎(chǔ)上，首次研制了復(fù)方鵝絨藤提取物的制備工藝及 其質(zhì)量控制方法，從而完成了本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種工藝和質(zhì)量可控的復(fù)方鵝絨藤提取物。
[0004] 本發(fā)明提供的復(fù)方鵝絨藤提取物制備方法包括以下工藝步驟：
[0005] (1)按復(fù)方鵝絨藤配方選取相應(yīng)質(zhì)量的鵝絨藤和白花菜籽藥材，采用水或乙醇-水 混合溶媒進行提取，濃縮為濃縮液，加適量水稀釋，過濾，得復(fù)方鵝絨藤提取液；
[0006] (2)由（1)所得復(fù)方鵝絨藤提取液，采用預(yù)處理好的大孔樹脂進行吸附，先用水或 0-20 %乙醇洗脫，再用40-95 %乙醇洗脫，收集40-95 %乙醇洗脫液，合并后經(jīng)濃縮，干燥，即 得。
[0007] 所述工藝步驟(1)中，復(fù)方鵝絨藤配方相應(yīng)藥材包括鵝絨藤和白花菜籽，二者質(zhì)量 比例為10:3~10:30。所述鵝絨藤選自鵝絨藤屬植物(參見茍占平，楊永建，趙汝能.甘肅鵝 絨藤屬藥用植物資源調(diào)查.中草藥，2001,32:69-71)地上莖葉部位。鵝絨藤藥材采用本發(fā)明 所述分析方法檢測，應(yīng)含有小麥黃素-7-0-葡萄糖醛酸苷。所述白花菜籽為市售品，該藥材 采用本發(fā)明所述分析方法檢測，應(yīng)含有芹菜素。提取溶媒可采用常規(guī)的水或乙醇一水混合 溶媒提取，其中優(yōu)選40-80 %乙醇混合溶媒提取。
[0008] 所述工藝步驟(2)中，所述大孔樹脂可選用非極性或弱極性大孔樹脂。洗脫時先用 水洗或0-20%乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用40-95%乙醇洗脫，其中優(yōu)選采用50-80%乙醇進行 洗脫。所述復(fù)方鵝絨藤提取物中，含有小麥黃素-7-0-葡萄糖醛酸苷，其含量不低于20mg/g; 同時含有芹菜素，其含量不低于2. Omg/g。
[0009] 本發(fā)明在前期鵝絨藤提取物研究基礎(chǔ)上，繼續(xù)深入研究了白花菜籽中的主要成 分，并首次建立了復(fù)方鵝絨藤提取物的制備工藝和質(zhì)量控制方法。所述研究結(jié)果具有獨創(chuàng) 性，并可應(yīng)用于白花菜籽藥材和復(fù)方鵝絨藤提取物的生產(chǎn)和相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。以下述 具體實施例進行說明。
【附圖說明】
[0010] 附圖1-4依次為實施例3中混合對照品溶液5(附圖1)、鵝絨藤藥材(附圖2)、白花菜 籽藥材(附圖3)、復(fù)方鵝絨藤提取物（附圖4)的液相色譜圖（紫外檢測波長330nm)。圖中，色 譜峰1、2依次為小麥黃素-7-0-葡萄糖醛酸苷、芹菜素。
【具體實施方式】
[0011] 本發(fā)明所述的復(fù)方鵝絨藤提取物是按以下實施例所表示的方法制造，所涉及到的 方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠掌握和運用的技術(shù)手段。但以下實施例不得理解為任何意義 上的對本領(lǐng)域發(fā)明權(quán)利要求的限制。
[0012] 實施例1:白花菜籽化學成分的提取分離
[0013] 白花菜籽中主要含有黃酮、生物堿等成分，具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌等作用，但未見相 關(guān)主要化學成分和含量測定報道。本發(fā)明首先對白花菜籽中的主要成分進行液相分析和分 離純化。
[0014] 白花菜籽(批號BZ140301，購自湖北武漢市）藥材800g，用5倍量70%乙醇溶液回流 提取2次，每次2h，合并兩次提取液，過濾，濾液減壓濃縮至約2L，用2L石油醚萃取兩次，取下 層水溶液，上預(yù)處理好的AB-8大孔樹脂柱，先用水洗4L，后依次用30 %乙醇、75 %乙醇、95 % 乙醇各3L洗脫;收集75 %乙醇洗脫部位，濃縮，上反相ODS柱，用40 % -70 %甲醇梯度洗脫，通 過液相檢測后合并化合物A流分，濃縮，干燥，得到化合物A(66mg)。化合物A經(jīng)匪R鑒定并與 相關(guān)化合物文獻數(shù)據(jù)對照，確證為芹菜素。
[0015] 實施例2:復(fù)方鵝絨藤提取物的制備
[0016] 復(fù)方鵝絨藤提取物的制備:分別稱取鵝絨藤莖葉(批號ER130901，采自新疆維吾爾 自治區(qū)石河子市郊）5kg、白花菜籽藥材10kg，混合，用75%乙醇100L加熱回流提取兩次，提 取液合并，減壓濃縮至約50L，靜置過夜，過濾，濾液上樣于AB-8大孔樹脂柱，依次用水100L、 70 %乙醇50L洗脫，收集70 %乙醇洗脫液，減壓濃縮，60度真空干燥，即得復(fù)方鵝絨藤提取 物。
[0017] 實施例3:復(fù)方鵝絨藤提取物的含量測定
[0018] 藥材供試品溶液:參照復(fù)方鵝絨藤提取物相應(yīng)工藝進行制備。分別精密稱定鵝絨 藤藥材9.94g、白花菜籽藥材1148g，各用75%乙醇100mL加熱回流提取兩次，提取液合并，減 壓濃縮至約40ml，上樣于AB-8大孔樹脂柱，依次用水200ml、70%乙醇100mL洗脫，收集70% 乙醇洗脫液、減壓濃縮至約25ml，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，用甲醇定容，得儲備液;分別精密量 取該儲備液2ml至25ml容量瓶中，用甲醇定容，即得到相應(yīng)鵝絨藤、白花菜籽供試品溶液。 [0019] 對照品溶液:分別精密稱取對照品小麥黃素-7-〇-i3_D-葡萄糖醛酸苷10.0 Img、芹 菜素9.98mg于IOml容量瓶中，用甲醇定容制成相應(yīng)對照品儲備液A、B。分別依次精密量取對 照品儲備液AO·2、0·4、0·8、1·2、1·6、2·Oml，對照品儲備液BO.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.01111于 50ml容量瓶中，甲醇定容配制成系列小麥黃素-7-〇-i3-D-葡萄糖醛酸苷和芹菜素混合對照 品溶液1-6。
[0020]色譜條件:Agilentl260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；色譜柱為Cosmosi I 5&8-厶1?-11(4.6\250111111，54111);流動相為0.1%乙酸溶液以)-乙腈(8)，梯度洗脫(0~151^11， 18%-25%B ;15~16min，25%-45%B;16~25min，45%;B-60%B ;25~30min，60%-80%B); 紫外檢測波長330nm;流速1.0 ml/min，柱溫30°C ;進樣量20μ1。在此條件下，小麥黃素-7-0-葡萄糖醛酸苷和芹菜素的線性方程分別為7=17.72#9.062(1?2 = 0.9996)、7 = 29.37^ 23 · 52，（R2 = O · 9990)，線性范圍依次為4 ·004-40 ·04、1 · 996-19 · 96yg。
[0021]樣品測定:取實施例2中復(fù)方鵝絨藤提取物和上述相應(yīng)鵝絨藤、白花菜籽供試品溶 液，經(jīng)HPLC分析，測定結(jié)果見表1。液相色譜圖見附圖1-4。
[0022]表1樣品測定結(jié)果(n = 3)
[0024]根據(jù)測定結(jié)果，暫定復(fù)方鵝絨藤提取物中小麥黃素 -7-0-葡萄糖醛酸苷和芹菜素 的含量依次不得低于20mg/g、2. Omg/g。
【主權(quán)項】
1. 一種復(fù)方鵝絨藤提取物，特征在于所述復(fù)方鵝絨藤提取物由以下步驟制備獲得： (1) 按復(fù)方鵝絨藤配方選取相應(yīng)質(zhì)量的鵝絨藤和白花菜籽藥材，采用水或乙醇-水混合 溶媒進行提取，濃縮為濃縮液，加適量水稀釋，過濾，得復(fù)方鵝絨藤提取液； (2) 由（1)所得復(fù)方鵝絨藤提取液，采用預(yù)處理好的大孔樹脂進行吸附，先用水或0-20 %乙醇洗脫，再用40-95 %乙醇洗脫，收集40-95 %乙醇洗脫液，合并后經(jīng)濃縮，干燥，即 得;所述復(fù)方鵝絨藤提取物中含有小麥黃素-7-0-葡萄糖醛酸苷和芹菜素。2. 根據(jù)權(quán)利要求1的復(fù)方鵝絨藤提取物，特征在于所述步驟（1)中鵝絨藤和白花菜籽藥 材的質(zhì)量比例范圍為10:3~10:30。3. 根據(jù)權(quán)利要求2的復(fù)方鵝絨藤提取物，特征在于所述復(fù)方鵝絨藤提取物中含有小麥 黃素-7-0-葡萄糖醛酸苷，其含量不低于20mg/g;同時含有芹菜素，其含量不低于2. Omg/g。
【文檔編號】A61K36/27GK106074648SQ201610444240
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月20日
【發(fā)明人】劉江云, 王增尚, 王川, 陳虹
【申請人】蘇州大學