抑制宮頸癌細(xì)胞的中草藥組合物及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抑制宮頸癌細(xì)胞的中草藥組合物及制備方法，該中草藥組合物由原料有效成分組成，按重量份數(shù)計(jì)：瓜蔞有效成分1?10份，益母草有效成分1?10份，金銀花有效成分1?10份，菊花有效成分1?10份。本發(fā)明最大限度的提取了中草藥中的有效成分并將其進(jìn)行科學(xué)配伍，所得復(fù)方具有體外抑制宮頸癌細(xì)胞的作用。
【專利說明】
抑制宮頸癌細(xì)胞的中草藥組合物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及中草藥復(fù)配，具體涉及一種抑制宮頸癌細(xì)胞的中草藥組合物及制備方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)的常見惡性腫瘤，繼乳腺癌后，宮頸癌位居導(dǎo)致女性死亡 腫瘤的第二位。目前治療腫瘤的主要手段除了手術(shù)外，仍然是放療和化療。大多情況下，采 用手術(shù)、放化療綜合治療。但是化療藥物在治療過程中出現(xiàn)的耐藥性是治療中的難題，而中 草藥治療腫瘤有望避免放化療的毒性及腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生抗藥性等缺點(diǎn)，是因?yàn)橹胁菟幇?種成分，注重配伍提高協(xié)同療效及整體治療效果。在抑制腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，保護(hù)人體的造血 細(xì)胞及免疫系統(tǒng)?；蛘咄ㄟ^激活人體的某些免疫功能，達(dá)到自身控制或清除腫瘤細(xì)胞的狀 態(tài)。中藥有效成分的提取方法主要有傳統(tǒng)提取法、溶劑提取法和超臨界萃取法等。
[0003] 傳統(tǒng)提取法主要有水煎法、回流法、蒸餾法、滲漉法等，超臨界萃取等現(xiàn)代提取和 分離技術(shù)由于具有獲得提取物的純度高、操作方法簡便、環(huán)保節(jié)能等優(yōu)點(diǎn)而優(yōu)越性日益顯 著。但是，由于超臨界萃取使用的是新技術(shù)新設(shè)備，目前局限性也比較大，還難以應(yīng)用于提 取中藥有效成分的工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。溶劑提取法中常用的溶劑親水性由低到高為石油 醚，苯，氯仿，乙醚，乙酸乙酯，丙酮，乙醇，甲醇。經(jīng)檢索發(fā)現(xiàn)，乙醇因?qū)τ行С煞值奶崛≥^完 全而更為常用，是效果較佳的溶劑。
[0004]瓜萎是括樓或雙邊括樓的成熟果實(shí)，其化學(xué)成分主要有揮發(fā)油、留醇、脂肪酸、氨 基酸、蛋白質(zhì)、色素等。巢志茂等進(jìn)一步研究瓜萎化學(xué)成分，在甲醇滲漉物中分離并鑒定了 棕櫚酸、7-豆甾烯-3β-醇、7-豆甾烯醇-3-(H3-D-葡萄糖苷、半乳糖酸γ-內(nèi)酯和半乳糖。瓜 萎具有降低血清膽固醇、擴(kuò)張冠脈、抗心肌缺血、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、耐缺氧、抗 心律失常等作用，其提取液具有抑制癌細(xì)胞作用，能殺死體內(nèi)腹小癌細(xì)胞，對(duì)金黃色葡萄球 菌、綠膿桿菌、肺炎雙球菌、白色葡萄球菌等均有抑制作用。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道有"瓜蔞含藥血清 及彎齒琵甲對(duì)Hela細(xì)胞增殖抑制作用的研究"等。
[0005] 據(jù)文獻(xiàn)中報(bào)道，瓜蔞中抑制腫瘤細(xì)胞組分有三萜皂苷、蛋白等;益母草中有生物堿 類和黃酮類，金銀花中為多糖，菊花中為揮發(fā)油類等。然而未見報(bào)道將四味藥聯(lián)用來研究其 抑制腫瘤細(xì)胞作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于:提供一種抑制宮頸癌細(xì)胞的中草藥組合物及制備方法，將瓜 萎（Fructu s)、益母草（Herba Leonuri )、金銀花（Lonicera japon i ca J (CArjsa/? iA 這些能有效抑制腫瘤細(xì)胞的組分提取并結(jié)合起來，排除其它不必要 組分干擾的同時(shí)，使所得藥物療效確切，用于抑制宮頸癌細(xì)胞，工藝簡單，操作方便，環(huán)境友 好，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)解決方案是該中草藥組合物由原料有效成分組成，按重量份數(shù)計(jì)： 瓜蔞有效成分1-10份，益母草有效成分1-10份，金銀花有效成分1-10份，菊花有效成分1-10 份。
[0008] 其進(jìn)一步的優(yōu)化方案是該中草藥組合物由原料有效成分組成，按重量份數(shù)計(jì):瓜 蔞有效成分5-10份，益母草有效成分1-10份，金銀花有效成分1-10份，菊花有效成分1-10 份。
[0009] 其再進(jìn)一步的優(yōu)化方案是該中草藥組合物由原料有效成分組成，按重量份數(shù)計(jì)： 瓜蔞有效成分5-10份，益母草有效成分5-10份，金銀花有效成分1-10份，菊花有效成分1-10 份。
[0010] 其更進(jìn)一步的優(yōu)化方案是該中草藥組合物由原料有效成分組成，按重量份數(shù)計(jì)： 瓜蔞有效成分5-10份，益母草有效成分5-10份，金銀花有效成分5-10份，菊花有效成分1-5 份。
[0011]其最優(yōu)化方案是該中草藥組合物由原料有效成分組成，按重量份數(shù)計(jì):瓜蔞有效 成分10份，益母草有效成分10份，金銀花有效成分8份，菊花有效成分5份。
[0012]上述中草藥組合物的制備方法包括以下步驟： (1) 瓜蔞有效成分制備:瓜蔞，粉碎，過60目篩，加其4倍重量的質(zhì)量濃度95%乙醇超聲 提取3次，每次40 min，抽濾;藥渣用其3倍重量質(zhì)量濃度95%乙醇回流提取3次，每次Ih，將 提取液抽濾;合并兩次濾液，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/10，得濃縮液;用濃縮液5倍體積的 去離子水溶解，石油醚等體積萃取三次，合并，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干得粗品；粗品用甲醇 溶解后，通過硅膠柱層析分離，以石油醚：乙酸乙酯=12:1 (v/v)作為洗脫劑進(jìn)行洗脫，采用 恒定流速2 mL · min-S每20mL收集一次，共收集IOOmL結(jié)束;收集40-50min的餾分于50°C旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到白色非晶體性粉末，即為具有抑制宮頸癌細(xì)胞的瓜蔞有效成 分； (2) 益母草有效成分制備：益母草，粉碎，過60目篩，加其4倍重量質(zhì)量濃度95%乙醇回 流提取3次，每次lh，將提取液抽濾，合并，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/10,得濃縮液;濃縮液 用其5倍體積的去離子水溶解，乙酸乙酯等體積萃取三次，合并，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干得 粗品;粗品用甲醇溶解后，通過硅膠柱層析分離，以石油醚:丙酮=5: l(v/v)作為洗脫劑進(jìn)行 洗脫，采用恒定流速2 mL · min-I每20mL收集一次，共收集IOOmL結(jié)束;收集30-40min的餾分 于50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到了白色針晶粉末，即為具有抑制宮頸癌細(xì)胞的益母 草有效成分； (3) 金銀花有效成分制備:金銀花，粉碎，過60目篩，加其4倍重量水回流提取3次，每次 Ih，將提取液抽濾，合并，70°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/10，得濃縮液;濃縮液用其5倍體積的 去離子水溶解，用正丁醇等體積萃取三次，合并，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干得粗品；粗品用質(zhì) 量濃度20%甲醇溶解后，通過大孔樹脂(XAD-16)柱分離，樹脂量為25g，用質(zhì)量濃度80%乙醇 進(jìn)行洗脫，采用恒定流速2 mL · mirT1，共收集IOOmL，于40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到 了淡黃色粉末，即為具有抑制宮頸癌細(xì)胞的金銀花有效成分； (4) 菊花有效成分制備:菊花，粉碎，過60目篩，加其4倍重量水回流提取3次，每次lh，將 提取液抽濾，合并，70°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/10,得濃縮液;濃縮液用其5倍體積的去離子 水溶解，用正丁醇等體積萃取三次，合并，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干得粗品；粗品用質(zhì)量濃度 20%甲醇溶解后，通過大孔樹脂(AB-8)柱分離，樹脂量為25g，用質(zhì)量濃度70%乙醇進(jìn)行洗脫， 采用恒定流速2 mL · mirT1，共收集IOOmU于40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到了黃色粉 末，即為具有抑制宮頸癌細(xì)胞的菊花有效成分； (5)中草藥組合物制備:按重量份數(shù)計(jì)取:瓜蔞有效成分1-10份，益母草有效成分1-10 份，金銀花有效成分1-10份，菊花有效成分1-10份;混合，得中草藥組合物。
[0013] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在： (1)本發(fā)明操作方法簡單，工藝路線短，縮短了生產(chǎn)周期。
[0014] (2)本發(fā)明將幾味藥有效成分復(fù)配，改善了某一味藥物成分單一，提高了中藥對(duì)腫 瘤細(xì)胞的抑制效果。
[0015] (3)本發(fā)明的藥物安全可控，便于保管、貯存和運(yùn)輸。
[0016] (4)本發(fā)明采取的提取有效成分的方法主要為乙醇和水回流提取法，將中藥配伍 的傳統(tǒng)理論與現(xiàn)代藥學(xué)、植物化學(xué)結(jié)合起來，有效成分配伍，得有效抑制宮頸癌細(xì)胞的復(fù)方 藥物。
【附圖說明】
[0017] 圖1為本發(fā)明的工藝流程簡圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 以下以具體實(shí)施例來說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。 [0019] 本發(fā)明的中草藥組合物用二甲亞砜(DMSO)溶解使之成為lOOyg/mL濃度，用于細(xì)胞 試驗(yàn)，通過使用酶標(biāo)儀于570nm波長處讀取OD值，以此間接反映細(xì)胞增殖的情況。
[0020]實(shí)施例1:依以下步驟制備中草藥組合物 (1) 瓜蔞有效成分制備:瓜蔞，粉碎，過60目篩，加其4倍重量的質(zhì)量濃度95%乙醇超聲 提取3次，每次40 min，抽濾;藥渣用其3倍重量質(zhì)量濃度95%乙醇回流提取3次，每次Ih，將 提取液抽濾;合并兩次濾液，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/10，得濃縮液;用濃縮液5倍體積的 去離子水溶解，石油醚等體積萃取三次，合并，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干得粗品；粗品用甲醇 溶解后，通過硅膠柱層析分離，以石油醚：乙酸乙酯=12:1 (v/v)作為洗脫劑進(jìn)行洗脫，采用 恒定流速2 mL · min-S每20mL收集一次，共收集IOOmL結(jié)束;收集40-50min的餾分于50°C旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到白色非晶體性粉末，即為具有抑制宮頸癌細(xì)胞的瓜蔞有效成 分； (2) 益母草有效成分制備：益母草，粉碎，過60目篩，加其4倍重量質(zhì)量濃度95%乙醇回 流提取3次，每次lh，將提取液抽濾，合并，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/10,得濃縮液;濃縮液 用其5倍體積的去離子水溶解，乙酸乙酯等體積萃取三次，合并，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干得 粗品;粗品用甲醇溶解后，通過硅膠柱層析分離，以石油醚:丙酮=5: l(v/v)作為洗脫劑進(jìn)行 洗脫，采用恒定流速2 mL · min-I每20mL收集一次，共收集IOOmL結(jié)束;收集30-40min的餾分 于50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到了白色針晶粉末，即為具有抑制宮頸癌細(xì)胞的益母 草有效成分； (3) 金銀花有效成分制備:金銀花，粉碎，過60目篩，加其4倍重量水回流提取3次，每次 Ih，將提取液抽濾，合并，70°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/10，得濃縮液;濃縮液用其5倍體積的 去離子水溶解，用正丁醇等體積萃取三次，合并，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干得粗品；粗品用質(zhì) 量濃度20%甲醇溶解后，通過大孔樹脂(XAD-16)柱分離，樹脂量為25g，用質(zhì)量濃度80%乙醇 進(jìn)行洗脫，采用恒定流速2 mL · mirT1，共收集IOOmL，于40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到 了淡黃色粉末，即為具有抑制宮頸癌細(xì)胞的金銀花有效成分； (4) 菊花有效成分制備:菊花，粉碎，過60目篩，加其4倍重量水回流提取3次，每次lh，將 提取液抽濾，合并，70°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/10,得濃縮液;濃縮液用其5倍體積的去離子 水溶解，用正丁醇等體積萃取三次，合并，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干得粗品；粗品用質(zhì)量濃度 20%甲醇溶解后，通過大孔樹脂(AB-8)柱分離，樹脂量為25g，用質(zhì)量濃度70%乙醇進(jìn)行洗脫， 采用恒定流速2 mL · mirT1，共收集IOOmU于40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到了黃色粉 末，即為具有抑制宮頸癌細(xì)胞的菊花有效成分； (5) 中草藥組合物制備:按重量份數(shù)計(jì)取:瓜蔞有效成分5mg，益母草有效成分5mg，金 銀花有效成分2.5mg，菊花有效成分5mg ;混合，得中草藥組合物。
[0021] 實(shí)施例1所得的中藥組合物用DMSO溶解并稀釋至終濃度為100yg/mL，于酶標(biāo)儀570 nm波長處檢測OD值，見表1〇
[0022]實(shí)施例2:同實(shí)施例1，其中金銀花有效成分為5mg。
[0023] 實(shí)施例3:同實(shí)施例1，其中金銀花有效成分為5mg，菊花有效成分為2.5mg。
[0024] 實(shí)施例4:同實(shí)施例1，其中金銀花有效成分為2.5mg，菊花有效成分為2.5mg。
[0025]實(shí)施例5:同實(shí)施例1，其中金銀花有效成分為4mg，菊花有效成分為2.5mg。
[0026] MTT法檢測:采用MTT法(全稱:3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽)檢 測實(shí)施例1-5所得的中藥組合物的抑制宮頸癌細(xì)胞的效果。
[0027] 處于對(duì)數(shù)生長期的Hela細(xì)胞經(jīng)0.25%細(xì)胞胰酶消化后，完全培養(yǎng)基重懸成細(xì)胞懸 液，用含10%胎牛血清的RP-MI1640培養(yǎng)液配制成單細(xì)胞懸液，以每毫升5 X IO4個(gè)細(xì)胞接種 于96孔培養(yǎng)板中，每孔體積IOOyL，分別取實(shí)施例1，2，3，4，5的中藥組合物，DMSO溶解使其最 終濃度為l〇〇yg/mL，于37°C、5% CO2飽和濕度下培養(yǎng)72小時(shí);并設(shè)空白對(duì)照和溶媒(DMSO)對(duì) 照，置于37°C含5% CO2孵箱中培養(yǎng)72 h后，每孔加 MTT(5 mg/mL)20yL，作用4 h后棄上清;各 孔加入150yL DMSO，振蕩IOmin，使形成的甲瓚結(jié)晶物充分溶解;在酶標(biāo)儀570nm波長處檢 測OD值，記錄結(jié)果;細(xì)胞抑制率(％) =(對(duì)照組平均OD值一給藥組組平均OD值)/對(duì)照組平均OD 值X 100%;由表1可知，相同濃度用MTT法測定中藥組合物對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖影響，比例是1: 1:0.8:0.5為最優(yōu)選擇，此時(shí)培養(yǎng)72 h后細(xì)胞抑制率達(dá)68.9%;由表2可知，選擇1:1:0.8:0.5 比例的不同濃度的藥物進(jìn)行MTT法試驗(yàn)，細(xì)胞培養(yǎng)72h后，100yg/mL，200yg/mL和300yg/mL藥 物組的細(xì)胞抑制率分別是68.9%，84.7%，81.8%;在使用200yg/mL藥物組濃度時(shí)，細(xì)胞的抑制 率較lOOyg/mL藥物組顯著提高，至84.7%，而其后隨著濃度的增加，細(xì)胞抑制率的上升趨勢 又趨于平緩，300yg/mL藥物處理組細(xì)胞抑制率為81.8%，與200yg/mL處理組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異， 因此200yg/mL藥物處理組是抑制細(xì)胞增殖的較佳劑量組；由表1，表2,觀察得出200yg/mL藥 物組且比例是1:1:0.8:0.5時(shí)抑制細(xì)胞增殖活性最佳，其細(xì)胞抑制率為84.7%;因此200yg/ mL藥物且比例是1:1:0.8:0.5是最佳比例有效成分復(fù)方藥物。
[0028] 表1不同比例復(fù)方時(shí)MTT法檢測Hela宮頸癌細(xì)胞抑制率
注：1、2、3、4、5中的比例均為瓜蔞、益母草、金銀花、菊花中有效成分的比例。 [0029] 表2相同比例不同濃度復(fù)方時(shí)MTT法檢測Hela宮頸癌細(xì)胞抑制率
注：：1、2、3、4、5中的比例均為瓜蔞、益母草、金銀花、菊花中有效成分的比例。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 抑制宮頸癌細(xì)胞的中草藥組合物，其特征是:該中草藥組合物由原料有效成分組成， 按重量份數(shù)計(jì):瓜蔞有效成分1-10份，益母草有效成分1-10份，金銀花有效成分1-10份，菊 花有效成分1-10份。2. 如權(quán)利要求1所述的抑制宮頸癌細(xì)胞的中草藥組合物，其特征是:該中草藥組合物由 原料有效成分組成，按重量份數(shù)計(jì):瓜蔞有效成分5-10份，益母草有效成分1-10份，金銀花 有效成分1-10份，菊花有效成分1-10份。3. 如權(quán)利要求1所述的抑制宮頸癌細(xì)胞的中草藥組合物，其特征是:該中草藥組合物由 原料有效成分組成，按重量份數(shù)計(jì):瓜蔞有效成分5-10份，益母草有效成分5-10份，金銀花 有效成分1-10份，菊花有效成分1-10份。4. 如權(quán)利要求1所述的抑制宮頸癌細(xì)胞的中草藥組合物，其特征是:該中草藥組合物由 原料有效成分組成，按重量份數(shù)計(jì):瓜蔞有效成分5-10份，益母草有效成分5-10份，金銀花 有效成分5-10份，菊花有效成分1-5份。5. 如權(quán)利要求1所述的抑制宮頸癌細(xì)胞的中草藥組合物，其特征是:該中草藥組合物由 原料有效成分組成，按重量份數(shù)計(jì):瓜蔞有效成分10份，益母草有效成分10份，金銀花有效 成分8份，菊花有效成分5份。6. 如權(quán)利要求1所述的抑制宮頸癌細(xì)胞的中草藥組合物的制備方法，其特征是該中草 藥組合物的制備方法包括以下步驟： (1) 瓜蔞有效成分制備:瓜蔞，粉碎，過60目篩，加其4倍重量的質(zhì)量濃度95%乙醇超聲 提取3次，每次40 min，抽濾;藥渣用其3倍重量質(zhì)量濃度95%乙醇回流提取3次，每次lh，將 提取液抽濾;合并兩次濾液，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/10，得濃縮液;用濃縮液5倍體積的 去離子水溶解，石油醚等體積萃取三次，合并，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干得粗品；粗品用甲醇 溶解后，通過硅膠柱層析分離，以石油醚：乙酸乙酯=12:1 (v/v)作為洗脫劑進(jìn)行洗脫，采用 恒定流速2 mL · min-S每20mL收集一次，共收集100mL結(jié)束;收集40-50min的餾分于50°C旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到白色非晶體性粉末，即為具有抑制宮頸癌細(xì)胞的瓜蔞有效成 分； (2) 益母草有效成分制備：益母草，粉碎，過60目篩，加其4倍重量質(zhì)量濃度95%乙醇回 流提取3次，每次lh，將提取液抽濾，合并，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/10,得濃縮液;濃縮液 用其5倍體積的去離子水溶解，乙酸乙酯等體積萃取三次，合并，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干得 粗品;粗品用甲醇溶解后，通過硅膠柱層析分離，以石油醚:丙酮=5: l(v/v)作為洗脫劑進(jìn)行 洗脫，采用恒定流速2 mL · min-I每20mL收集一次，共收集100mL結(jié)束;收集30-40min的餾分 于50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到白色針晶粉末，即為具有抑制宮頸癌細(xì)胞的益母草 有效成分； (3) 金銀花有效成分制備：金銀花，粉碎，過60目篩，加其4倍重量水回流提取3次，每次 lh，將提取液抽濾，合并，70°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/10，得濃縮液;濃縮液用其5倍體積的 去離子水溶解，用正丁醇等體積萃取三次，合并，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干得粗品；粗品用質(zhì) 量濃度20%甲醇溶解后，通過大孔樹脂(XAD-16)柱分離，樹脂量為25g，用質(zhì)量濃度80%乙醇 進(jìn)行洗脫，采用恒定流速2 mL · mirT1，共收集100mL，于40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到 了淡黃色粉末，即為具有抑制宮頸癌細(xì)胞的金銀花有效成分； (4) 菊花有效成分制備:菊花，粉碎，過60目篩，加其4倍重量水回流提取3次，每次lh，將 提取液抽濾，合并，70°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至原體積的1/10,得濃縮液;濃縮液用其5倍體積的去離子 水溶解，用正丁醇等體積萃取三次，合并，50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干得粗品；粗品用質(zhì)量濃度 20%甲醇溶解后，通過大孔樹脂(AB-8)柱分離，樹脂量為25g，用質(zhì)量濃度70%乙醇進(jìn)行洗脫， 采用恒定流速2 mL · mirT1，共收集100mL，于40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥后得到了黃色粉 末，即為具有抑制宮頸癌細(xì)胞的菊花有效成分； (5)中草藥組合物制備：按重量份數(shù)計(jì)取:瓜蔞有效成分1-10份，益母草有效成分1-10 份，金銀花有效成分1-10份，菊花有效成分1-10份;混合，得中草藥組合物。
【文檔編號(hào)】A61K36/533GK106074689SQ201610627589
【公開日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年8月3日 公開號(hào)201610627589.7, CN 106074689 A, CN 106074689A, CN 201610627589, CN-A-106074689, CN106074689 A, CN106074689A, CN201610627589, CN201610627589.7
【發(fā)明人】賈建波, 程倩, 李 東, 朱春, 孫金鳳
【申請(qǐng)人】淮陰工學(xué)院