蓮子心提取物在制備治療肺纖維化藥物的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了蓮子心提取物在制備治療肺纖維化藥物的應(yīng)用。本發(fā)明中所涉及中藥蓮子心為衛(wèi)生部頒布的藥食同源品種，實驗證明：蓮子心提取物能夠明顯抑制由TGF?β1誘導(dǎo)的HELF細(xì)胞增殖；顯著降低博來霉素誘導(dǎo)的小鼠血清中TGF?β1的含量，抑制博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺臟中HYP、MDA的表達(dá)，顯著改善博來霉素所致小鼠肺纖維化，對肺纖維化治療具有確切的療效。與現(xiàn)有的抗肺纖維化藥物相比，安全無毒無副作用。
【專利說明】
蓮子心提取物在制備治療肺纖維化藥物的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，涉及一種蓮子心提取物在制備治療肺纖維化藥物的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 特發(fā)性肺纖維化（IPF)是由多種誘因引起的肺部炎癥反應(yīng)、肺泡持續(xù)性損傷以及 胞外基質(zhì)反復(fù)被破壞、修復(fù)、重建，從而導(dǎo)致基質(zhì)過度沉積，最終造成肺組織結(jié)構(gòu)的改變和 肺功能喪失的一類疾病。臨床表現(xiàn)為干咳、進(jìn)行性呼吸困難，經(jīng)數(shù)月或數(shù)年逐漸惡化至衰竭 或死亡。
[0003] 近年來，全球范圍IPF發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升態(tài)勢。美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)網(wǎng)站 2012年6月公布的數(shù)據(jù)顯示，美國IPF患者達(dá)到50萬人，并且大約每年新增病人5萬人，每年 有4萬人死于該病。英國IPF患者約為13.2萬~20萬人，IPF發(fā)病率以每年約11 %的速度增 長。目前在歐洲有8~8.5萬患者。在我國IPF發(fā)病率為5/10萬每年，根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會呼吸病 分會間質(zhì)病學(xué)組對我國十余家醫(yī)院住院患者調(diào)查，IPF的患者同樣呈現(xiàn)逐年增多的趨勢。 IPF嚴(yán)重危害病人的生命和生活質(zhì)量，該病具有病情急劇惡化、存活時間短、病死率高的特 點?；颊唠S著病情的發(fā)展，肺功能逐漸下降以至于日益限制患者的日?；顒樱源_診之日后 患者的平均存活時間通常是2~5年，5年生存率僅有20%。
[0004] 肺間質(zhì)纖維化的形成中有炎癥免疫反應(yīng)參與，因此糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑是傳 統(tǒng)治療肺纖維化的藥物，它們可以抑制炎癥反應(yīng)和免疫過程，減輕肺泡炎癥，從而延緩肺纖 維化的進(jìn)程。然而最近研究發(fā)現(xiàn)，糖皮質(zhì)激素僅對20 %的IPF患者有效，并且長期服用糖皮 質(zhì)激素往往會合并肺部的細(xì)菌或真菌感染，存在明顯的局部及全身副作用。免疫抑制劑經(jīng) 常使用不僅存在潛在的嚴(yán)重副作用，而且對IPF治療基本無效。隨著我國中醫(yī)藥學(xué)的發(fā)展， 近年來發(fā)現(xiàn)許多中藥單體成分或復(fù)方在肺纖維化治療上具有顯著的療效，中藥治療肺纖維 化的方案得到廣泛關(guān)注，因此從中藥尋找新型的低毒高效抗肺纖維化藥物成為藥學(xué)研究的 重要課題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供蓮子心提取物在制備治療肺纖維化藥 物的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下：
[0007] 蓮子心提取物在制備治療肺纖維化藥物的應(yīng)用。
[0008] 含蓮子心提取物的制劑在制備治療肺纖維化藥物的應(yīng)用。
[0009] 所述制劑的劑型為顆粒劑、片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、口服液、泡騰片、分散 片、滴丸劑或糖漿劑。
[0010] 本發(fā)明的優(yōu)點：本發(fā)明中所涉及中藥蓮子心為衛(wèi)生部頒布的藥食同源品種，實驗 證明：蓮子心提取物能夠明顯抑制由TGF-βΙ誘導(dǎo)的HELF細(xì)胞增殖；顯著降低博來霉素誘導(dǎo) 的小鼠血清中TGF-βΙ的含量，抑制博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺臟中HYP、MDA的表達(dá)，顯著改善博 來霉素所致小鼠肺纖維化，對肺纖維化治療具有確切的療效。與現(xiàn)有的抗肺纖維化藥物相 比，安全無毒無副作用。
【附圖說明】
[0011]圖1為實施例6制備的蓮子心提取物不同劑量灌胃給藥對肺纖維化小鼠肺組織病 理影響(HE染色）
[0012] 其中A:正常對照組B:模型組C:陽性對照組D:高劑量組E:中劑量組F:低劑量組。
[0013] 圖2為實施例6制備的蓮子心提取物不同劑量灌胃給藥對肺纖維化小鼠肺組織病 理影響（masson染色）
[0014] 其中A:正常對照組B:模型組C:陽性對照組D:高劑量組E:中劑量組F:低劑量組。
【具體實施方式】
[0015] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。下面實施例用于進(jìn)一步說明本發(fā) 明但不限于本發(fā)明。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明范圍。
[0016] 蓮子心提取物，是用下述方法制成：
[0017] 1)蓮子心藥材粉碎；
[0018] 2)按重量比為1:8-10的比例，將粉碎后的蓮子心用水或體積濃度為30 % -85 %的 乙醇水溶液加熱回流提取2-4次，每次0.5-1.5小時，減壓濃縮得浸膏，冷凍干燥，凍干粉為 蓮子心提取物。
[0019] 上述浸膏的相對密度為1.30-1.35。
[0020] 實施例1
[0021]蓮子心提取物的提取方法，包括如下步驟：
[0022] 1)蓮子心藥材粉碎；
[0023] 2)將粉碎后的蓮子心用水加熱回流提取3次，每次1小時，合并濾液，減壓濃縮得相 對密度為1.35的浸膏，冷凍干燥，凍干粉為蓮子心提取物。
[0024] 3次提取，水為被提取物料的重量倍依次為10、8、8。
[0025] 實施例2
[0026]蓮子心提取物的提取方法，包括如下步驟：
[0027] 1)蓮子心藥材粉碎；
[0028] 2)將粉碎后的蓮子心用體積濃度為30 %乙醇水溶液，加熱回流提取4次，每次1小 時，合并濾液，減壓濃縮得相對密度為1.30的浸膏，冷凍干燥，凍干粉為蓮子心提取物。 [0029] 4次提取，30 %乙醇水溶液為被提取物料的重量倍依次為10、8、8、8。
[0030] 實施例3
[0031]蓮子心提取物的提取方法，包括如下步驟：
[0032] 1)蓮子心藥材粉碎；
[0033] 2)將粉碎后的蓮子心用體積濃度為50%乙醇水溶液，加熱回流提取4次，每次0.5 小時，合并濾液，減壓濃縮得相對密度為1.30的浸膏，冷凍干燥，凍干粉為蓮子心提取物。 [0034] 4次提取，50 %乙醇水溶液為被提取物料的重量倍依次為10、8、8、8。
[0035] 實施例4
[0036]蓮子心提取物的提取方法，包括如下步驟：
[0037] 1)蓮子心藥材粉碎；
[0038] 2)將粉碎后的蓮子心用體積濃度為60 %乙醇水溶液，加熱回流提取3次，每次1小 時，合并濾液，減壓濃縮得相對密度為1.35的浸膏，冷凍干燥，凍干粉為蓮子心提取物。 [0039] 3次提取，60 %乙醇水溶液為被提取物料的重量倍依次為10、8、8。
[0040] 實施例5
[0041] 蓮子心提取物的提取方法，包括如下步驟：
[0042] 1)蓮子心藥材粉碎；
[0043] 2)將粉碎后的蓮子心用體積濃度為70 %乙醇水溶液，加熱回流提取3次，每次1小 時，合并濾液，減壓濃縮得相對密度為1.32的浸膏，冷凍干燥，凍干粉為蓮子心提取物。 [0044] 3次提取，70 %乙醇水溶液為被提取物料的重量倍依次為10、8、8。
[0045] 實施例6
[0046] 蓮子心提取物的提取方法，包括如下步驟：
[0047] 1)蓮子心藥材粉碎；
[0048] 2)將粉碎后的蓮子心用體積濃度為85%乙醇水溶液，加熱回流提取2次，每次1.5 小時，合并濾液，減壓濃縮得相對密度為1.34的浸膏，冷凍干燥，凍干粉為蓮子心提取物。 [0049] 2次提取，85 %乙醇水溶液為被提取物料的重量倍依次為8、8。
[0050] 實施例7
[00511將實施例1制備的蓮子心提取物，加入適量糊精，混合均勻，加入體積濃度70%乙 醇水溶液少許，制成軟材，過14目篩制粒，濕顆粒于60°C干燥，干顆粒過14目篩整粒，再過4 號篩篩取細(xì)粉，即得顆粒劑。
[0052] 實施例8
[0053] 將實施例2制備的蓮子心提取物，加入適量乳糖，混勻，用體積濃度95 %乙醇水溶 液制粒，干燥，裝入膠囊，制成硬膠囊劑。
[0054] 實施例9
[0055] 將實施例3制備的蓮子心提取物，加入適量蜂蜜，混合均勻，制成丸劑。
[0056] 實施例10
[0057] 將實施例4制備的蓮子心提取物，加入枸櫞酸、碳酸氫鈉、甜葉菊苷、木糖醇混勻， 用無水乙醇制粒，干燥，加入硬脂酸鎂，混勻，壓制成片，即得泡騰片。
[0058] 實施例11
[0059] 將實施例5制備的蓮子心提取物，加入纖維素、微晶纖維素、碳酸氫鈣混勻，用體積 濃度為50 %乙醇水溶液制粒，干燥，壓制成片，即得分散片。
[0060] 實施例12
[0061 ]將實施例6制備的蓮子心提取物，加入體積濃度為95 %乙醇水溶液使含醇量達(dá)到 50 %，冷藏靜置過夜，取上清液，濃縮，加入適量的苯甲酸鈉、山梨醇、吐溫-80、蔗糖，攪拌混 合均勻，加水定容，過濾，分裝，滅菌，即得口服液。
[0062]還可以采用常規(guī)技術(shù)手段制備片劑、軟膠囊劑、滴丸劑或糖漿劑。
[0063] 藥理實驗例
[0064] 一、蓮子心提取物對TGF-βΙ誘導(dǎo)的人胚肺成纖維(HELF)細(xì)胞增殖的影響
[0065] 1.實驗方法：
[0066] HELF細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，每2~3天傳代1次，取對數(shù)生長 期HELF細(xì)胞接種于96孔板(每孔8000個細(xì)胞），培養(yǎng)24h后吸去培養(yǎng)基。模型組及藥物干預(yù)組 加入TGF-βΙ (終濃度為lng/ml)進(jìn)行刺激，藥物干預(yù)組同時加入藥物(終濃度為0.1mg/ml)， 充分混勻，孵育48h后，每孔加入IOul的噻唑藍(lán)(MTT，5mg/ml)，繼續(xù)孵育4小時。4小時后棄去 上清液，加入150ul DMSO，振蕩IOmin，上酶標(biāo)儀檢測各孔的吸光度(OD)值。
[0067] 2.實驗結(jié)果
[0068]表1蓮子心提取物對TGF-βΙ誘導(dǎo)的HELF增殖的影響（?土s>
[0070] *ρ〈0 · 05 ;#Ρ〈0 · Ol 與模型組比較
[0071 ]二、蓮子心提取物對肺纖維化模型小鼠的干預(yù)作用
[0072] 1.實驗動物：昆明小鼠，雄性，體重18~20g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究中心 提供，動物生產(chǎn)許可證號:SCXK-(軍)-007。
[0073] 2.動物模型制作
[0074] (1)動物分組:實驗小鼠隨機分12組，每組10只。分別設(shè)為空白對照組、博來霉素模 型組、陽性對照組[地塞米松(天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn)）]和給藥組(按實施例1，2,6分 另Ij制備高、中、低劑量組）。
[0075] (2)造模方法:采用一次性氣管滴注法造小鼠肺纖維化模型。各組小鼠腹腔注射 100mg/kg戊巴比妥0.04ml麻醉，取仰臥固定位，常規(guī)消毒，行頸部正中切口，鈍性分離暴露 氣管，按照小鼠體重2mg/kg于氣管軟骨環(huán)間隙穿刺注入博來霉素，立即將動物直立并行旋 轉(zhuǎn)2min，盡量使藥液在肺內(nèi)分布均勻，然后縫合皮膚，待動物自然清醒后放置籠內(nèi)常規(guī)飼 養(yǎng)。NS組同前方法注入等體積生理鹽水。
[0076] (3)給藥方法:造模后第二天，給藥組給予實施例1，2，6的高中低劑量組，陽性對照 組給予地塞米松2mg/kg/d，空白對照組、模型組均以相同劑量的生理鹽水代替。每天1次，連 續(xù)21天。
[0077] (4)標(biāo)本采集：
[0078] 于給藥后第21天小鼠眼眶靜脈取血分離血清用于檢測TGF-βΙ，然后處死小鼠，開 胸分離雙肺，取右肺置于4%甲醛溶液中固定，常規(guī)石蠟切片。左肺組織勻漿，3 000r/min離 心IOmin后，提取上清用于組織MDA、HYP檢測(表2,3)。
[0079] 表2蓮子心提取物對博來霉素致肺纖維化小鼠血清TGF-βΙ的影響（s)
[0081 ] *p〈0 · 05 ;#P〈0 · 01 與模型組比較
[0082] 由上表結(jié)果可見，模型組小鼠血清中TGF-βΙ高于正常對照組，具有極顯著性差異 (P〈0.01)。實施例1、2中劑量組與模型組比較具有顯著性差異(P〈0.05)，高劑量組與模型組 比較具有極顯著性差異(P〈〇.01);實施例6給藥高劑量組、中劑量組較模型組有極顯著性差 異(P〈0.01)，低劑量組較模型組有顯著性差異(P〈0.05)，且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。
[0083] 表3蓮子心提取物對博來霉素致肺纖維化小鼠肺組織中HYP、MDA的影響（I 土 s )
[0085] *p〈0 · 05 ;#P〈0 · 01 與模型組比較
[0086] 由上表結(jié)果可見，模型組小鼠肺組織中HYP、MDA高于正常對照組，有極顯著性差異 (P〈0.01)。蓮子心提取物能夠降低小鼠肺組織中HYP含量，實施例1、2給藥高劑量組，與模型 組比較具有顯著性差異（P〈〇. 05)，實施例6給藥高劑量組較模型組有極顯著性差異（P〈 O.Ol)，中劑量組較模型組有顯著性差異(P〈〇.05);蓮子心提取物對MDA的影響由表中可見， 實施例1、2、6中劑量組與模型組比較具有顯著性差異(P〈0.05)，高劑量組與模型組比較具 有極顯著性差異(P〈〇. 01)。
[0087] (5)組織病理學(xué)觀察
[0088]利用HE染色的病理切片將肺泡炎分為4級:無肺泡炎（1分）；輕度肺泡炎(2分）：肺 泡隔因細(xì)胞浸潤增寬，病變范圍局限在全肺的20 %以下；中度肺泡炎(3分）：病變范圍占全 肺的20%~50%;重度肺泡炎(4分）：呈彌漫性分布，病變范圍>50%。利用Masson三色染色 的切片將肺間質(zhì)纖維化分為4級:無纖維化(1分）；輕度纖維化(2分）：受累范圍小于20%;中 度纖維化(3分）：受累范圍占全肺的20%~50%，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂;重度肺纖維化(4分）：受累 范圍大于50%，肺泡融合，肺實質(zhì)結(jié)構(gòu)紊亂。
[0089]表4蓮子心提取物對肺纖維化小鼠肺組織形態(tài)學(xué)的影響(?土s)
[0091]實施例6制備的蓮子心提取物不同劑量灌胃給藥對肺纖維化小鼠肺組織病理影響 (HE染色），見圖1，圖中A:正常對照組B:模型組C:陽性對照組D:高劑量組E:中劑量組F:低劑 量組。
[0092]實施例6制備的蓮子心提取物不同劑量灌胃給藥對肺纖維化小鼠肺組織病理影響 (masson染色)見圖2,圖中A:正常對照組B:模型組C:陽性對照組D:高劑量組E:中劑量組F: 低劑量組。
[0093]實驗證明：蓮子心提取物能夠明顯抑制由TGF-βΙ誘導(dǎo)的HELF細(xì)胞增殖；顯著降低 博來霉素誘導(dǎo)的小鼠血清中TGF-β 1的含量，抑制博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺臟中HYP、MDA的表 達(dá)，顯著改善博來霉素所致小鼠肺纖維化，對肺纖維化治療具有確切的療效。
【主權(quán)項】
1. 蓮子心提取物在制備治療肺纖維化藥物的應(yīng)用。2. 含蓮子心提取物的制劑在制備治療肺纖維化藥物的應(yīng)用。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征是所述制劑的劑型為顆粒劑、片劑、硬膠囊劑、軟 膠囊劑、丸劑、口服液、泡騰片、分散片、滴丸劑或糖漿劑。
【文檔編號】A61K36/62GK106074719SQ201610569792
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月18日
【發(fā)明人】高穎, 郭鵬, 曹波, 陳虹, 王火, 李覃, 謝紅, 李艷曉
【申請人】中國人民武裝警察部隊后勤學(xué)院