淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片的制作方法
【技術領域】
[0001]本實用新型屬于生物醫(yī)學工程中藥物釋放系統(tǒng)技術領域，具體涉及一種淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片，該補片是一種載藥補片，在骨再生領域具有廣泛的應用前景。
【背景技術】
[0002]我國每年約有350萬人因不同原因出現(xiàn)骨缺損，骨手術移植約為150萬例，對替代骨的需求量非常大，尤其是大骨骼損傷的替代骨。隨著組織工程技術的快速發(fā)展，在體外構建具有成骨傳導性和成骨誘導性的人造替代骨是解決這一需求的重要途徑。骨架材料在組織工程骨構建中起著至關重要的作用。相比于其他合成材料，天然細胞外基質(ECM)材料由于其以下特點:I.優(yōu)異的生物相容性;2.最接近于體內細胞生長微環(huán)境的三維結構;3.為細胞生命活動提供了各種活性分子，一直被認為是理想的組織工程材料。豬小腸黏膜下層(SIS)是目前研究最多的天然細胞外基質材料，已通過美國Π)Α批準，被廣泛用來構建人造膀胱、人造尿道、人造食道、人造血管和人造皮膚等軟組織。SIS材料骨架成分膠原蛋白(collagen)已經(jīng)被廣泛用來作為骨架材料和藥物載體用于骨組織工程。SIS相比于膠原有兩大優(yōu)點:1.SIS是個天然的藥物庫，它保留了許多有利于骨再生的生物活性分子;2.SIS在取材上更加便利，成本也要遠低于膠原。國內外用SIS材料作為骨組織工程骨架材料報道已有一些，但是有一個問題使之無法進一步推廣使用:成骨誘導性的不足。通過在SIS上載入具有促進骨再生的藥物，并使之能夠實現(xiàn)緩慢釋放，將可以彌補這一缺陷。如果能解決這個難題，SIS材料將成為理想的骨組織工程材料。
[0003]骨組織工程中所需要的促進骨再生的藥物一直是一個研究熱點，BMP-2蛋白雖然是目前廣泛被認可和采用的最有效的成骨誘導因子，但是由于其非常昂貴，而采用BMP基因導入方法又存在一定的安全問題，因此它的臨床使用還是受到成本和安全性的制約。此外，BMP-2和其他蛋白藥物都存在穩(wěn)定性差、在體內半衰期短的問題，相應對于藥物釋放體系的要求非常高。因此尋找低成本、穩(wěn)定又可以高效誘導骨再生的小分子化合物來替代BMP是非常有意義的。目前治療骨質疏松的藥物主要通過抑制骨吸收來實現(xiàn)骨代謝的平衡，但是通過促進成骨細胞分化和骨再生的化合物非常少，非常有限的報道包括:他汀類藥物、異黃酮衍生物、TAK-778和賽菊芋黃素衍生物等。隨著現(xiàn)代分離技術的發(fā)展，從天然產(chǎn)物中提取各種化合物，難度和成本都要遠遠低于傳統(tǒng)的化學合成。中藥作為中華名族的瑰寶，記載了大量中草藥對于各種疾病的治療，其有效性也越來越得到世界范圍內的認可。植物藥淫羊藿一直以來被認為具有強筋鍵骨的作用，其主要活性成分淫羊藿苷在骨代謝中的功能和機制直到最近幾年才開始被逐漸研究。Chen Ke-Ming等人首次發(fā)現(xiàn)大鼠骨髓間充質干細胞經(jīng)過淫羊藿苷處理之后，細胞增殖加速，分化標志物ALP、0CN和礦物化都有增加，表明淫羊藿苷可能具有促進骨代謝的作用。我們的研究發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷可以通過上調Runx2表達和激活BMP信號通路來促進成骨細胞的分化;Hsieh等人也發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷通過激活BMP和NO信號通路來促進成骨細胞分化，同時BMP-2、Smad4、Runx2和OPG等基因表達上調。Chung等的研究發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷可以激活內皮細胞中的MEK/ERK和PI3K/Akt/eN0S信號通路來加速血管生成;在小鼠臨界骨損傷模型研究中，我們發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷-磷酸鈣水泥復合材料能夠在6周之后誘導小鼠體內頭蓋骨損傷處形成具有血管的新生骨。淫羊藿苷由于安全、經(jīng)濟，化學性質穩(wěn)定、促骨再生能力和促血管再生能力，是一種非常具有潛力的可以用于骨組織工程的藥物。但是目前尚未有在SIS上載入淫羊藿苷作為促進骨再生的緩釋藥物的相關報道。

【發(fā)明內容】

[0004]本實用新型所要解決的技術問題是，針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種具有極強的促骨再生能力的淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片。
[0005]本實用新型解決上述技術問題所采用的技術方案為:淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片，該補片的微觀結構包括SIS膠原纖維骨架和加載于SIS膠原纖維骨架上的淫羊藿苷，所述的SIS膠原纖維骨架為網(wǎng)狀纖維結構，所述的淫羊藿苷為顆粒狀，所述的淫羊藿苷附著于所述的SIS膠原纖維骨架上。
[0006]本實用新型淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片，在SIS膠原纖維骨架上附著顆粒狀的淫羊藿苷，建立穩(wěn)定的藥物釋放體系，將SIS膠原纖維骨架和淫羊藿苷這兩個極具潛力的骨組織工程元素結合起來，形成的淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片復合材料可靠、穩(wěn)定，對淫羊藿苷安全、經(jīng)濟、化學性質穩(wěn)定及優(yōu)異的促骨再生能力和促血管再生能力等特性加以充分利用，該淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片是一種載藥補片，具有極強的促骨再生能力，在骨再生領域具有廣泛的應用前景。
[0007]作為優(yōu)選，所述的淫羊藿苷的顆粒度為0.3?5μηι;作為進一步優(yōu)選，所述的淫羊藿苷的顆粒度為0.3?0.6μπι，以確保淫羊藿苷的均勻釋放效果。
[0008]作為優(yōu)選，所述的淫羊藿苷的附著量為20?80yg/cm2，以確保淫羊藿苷藥效的充分發(fā)揮。
[0009]與現(xiàn)有技術相比，本實用新型的優(yōu)點在于:本實用新型淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片，在SIS膠原纖維骨架上附著顆粒狀的淫羊藿苷，建立穩(wěn)定的藥物釋放體系，將SIS膠原纖維骨架和淫羊藿苷這兩個極具潛力的骨組織工程元素結合起來，形成的淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片復合材料可靠、穩(wěn)定，對淫羊藿苷安全、經(jīng)濟、化學性質穩(wěn)定及優(yōu)異的促骨再生能力和促血管再生能力等特性加以充分利用，該淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片是一種載藥補片，具有極強的促骨再生能力，在骨再生領域具有廣泛的應用前景。
【附圖說明】
[0010]圖1為本實用新型淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片的結構示意圖；
[0011]圖2為實施例一的淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片的淫羊藿苷釋放曲線；
[0012]圖3為實施例一的淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片體外生物學活性驗證結果。
【具體實施方式】
[0013]以下結合實施例對本實用新型作進一步詳細描述。
[0014]實施例一:淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片，如圖1所示，其微觀結構包括SIS膠原纖維骨架I和加載于SIS膠原纖維骨架I上的淫羊藿苷2，SIS膠原纖維骨架I為網(wǎng)狀纖維結構，淫羊藿苷2為顆粒狀，顆粒度為0.3?0.6μπι，淫羊藿苷2附著于SIS膠原纖維骨架I上，淫羊藿苷2的附著量為33.2±5.6yg/cm20
[0015]實施例二:淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片，如圖1所示，其微觀結構包括SIS膠原纖維骨架I和加載于SIS膠原纖維骨架I上的淫羊藿苷2，SIS膠原纖維骨架I為網(wǎng)狀纖維結構，淫羊藿苷2為顆粒狀，顆粒度為0.3?5μπι，淫羊藿苷2附著于SIS膠原纖維骨架I上，淫羊藿苷2 的附著量為 56.2±8.8yg/cm20
[0016]對于實施例一的淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片，進行如下實驗檢測及性能驗證:
[0017]1、微觀結構
[0018]將保存在PBS緩沖液中的實施例一的淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片取出，置于通風室溫條件直至完全干燥，用掃描電鏡觀察補片表面特征，作為對比，未加載藥物的SIS膠原纖維骨架作為空白對照組。從實施例一的補片的SEM圖片可見，在SIS膠原纖維骨架上附著了大量的藥物分子，即顆粒狀的淫羊藿苷。
[0019]2、淫羊藿苷SIS補片的體外釋放曲線
[0020]將保存在PBS緩沖液中的實施例一的淫羊藿苷-小腸黏膜下層補片取出并放入24孔板，加入400yL新鮮PBS緩沖液，室溫下震蕩搖晃24h，然后將