專(zhuān)利名稱(chēng):皮膚代謝的生物活化劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明主要涉及美容組合物。
本發(fā)明的目的是術(shù)語(yǔ)“代謝性生物活化”所指的經(jīng)美容途徑實(shí)現(xiàn)皮膚細(xì)胞活化和/或刺激的新概念。更具體說(shuō),本發(fā)明涉及一種皮膚代謝活化劑。
個(gè)人的生活方式、強(qiáng)烈的環(huán)境刺激、以及時(shí)間退化性生物學(xué)發(fā)展可導(dǎo)致皮膚組織生物學(xué)功能和生命能力隨時(shí)間而弱化。因此,看來(lái)必須重建或維持皮膚細(xì)胞(角質(zhì)形成細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞、黑素細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等等)的正常代謝和分解功能,以使其能與外界環(huán)境交換外部能量和功能性信息。
因此,本發(fā)明的一個(gè)目標(biāo)是通過(guò)外部能量的提供和細(xì)胞間信號(hào)的刺激相結(jié)合自然地提高或糾正皮膚的多種能力。能量提供和刺激之間的協(xié)同可使皮膚能通過(guò)活化皮膚中已有的代謝機(jī)制(分子的、細(xì)胞的、組織的機(jī)制)對(duì)任何皮膚攻擊或功能紊亂作出反應(yīng)及在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候通過(guò)表皮護(hù)理或治療來(lái)優(yōu)化皮膚和美容活性物質(zhì)之間的相互作用。
為此,本發(fā)明提供了一種含有生物活化系統(tǒng)的美容組合物,該系統(tǒng)包括第一,在水溶液中呈穩(wěn)定形式的ATP(三磷酸腺苷)與任選的ATP前體(例如四磷酸二鳥(niǎo)苷Gp4G或四磷酸二腺苷Ap4A)和,第二,至少一種能模擬皮膚多肽或皮膚蛋白質(zhì)的最多含6個(gè)氨基酸的生物擬肽,或作為所述肽或所述蛋白質(zhì)的激動(dòng)劑或拮抗劑的生物分子。
術(shù)語(yǔ)“美容組合物”是指其功能可維持、恢復(fù)或改善人體表面部分(主要是皮膚)外觀(guān)的組合物,而不論所述組合物的給予方法(即經(jīng)局部表面給予或體內(nèi)口服給予)。
術(shù)語(yǔ)“ATP前體”是指作為ATP的活體內(nèi)生物合成中間體的任何生化化合物;優(yōu)選該ATP前體是Gp4G(四磷酸二鳥(niǎo)苷)或Ap4A(四磷酸二腺苷)。
術(shù)語(yǔ)“生物擬肽”是指含有能模擬皮膚肽或皮膚蛋白的含最多6個(gè)氨基酸的任何肽或作為所述肽或所述蛋白的激動(dòng)劑或拮抗劑的生物分子,所述肽或蛋白參與或在皮膚生物合成或皮膚信息傳遞中發(fā)揮作用。
所選擇的擬肽宜包括能調(diào)節(jié)皮膚性質(zhì)和免疫力的肽或蛋白質(zhì)。作為本發(fā)明屬于生物活化系統(tǒng)的肽所模擬的皮膚肽或蛋白質(zhì)的實(shí)例選擇以下物質(zhì)
1)神經(jīng)遞質(zhì),包括兒茶酚胺(多巴胺、腎上腺素、去腎上腺素)、內(nèi)啡肽(例如β-內(nèi)啡肽)和腦啡肽(例如met-腦啡肽);作為實(shí)例,選擇以下物質(zhì)促生長(zhǎng)素抑制素;參見(jiàn)SEQ ID No.3,β-CGRP肽;參見(jiàn)SEQ ID No.6,β-內(nèi)啡肽;參見(jiàn)SEQ ID No.9,leu-腦啡肽;參見(jiàn)SEQ ID No.10,met-腦啡肽;參見(jiàn)SEQ ID No.11。
2)神經(jīng)肽,例如物質(zhì)P;參見(jiàn)SEQ ID No.1,神經(jīng)肽Y;參見(jiàn)SEQ ID No.2,神經(jīng)降壓素;參見(jiàn)SEQ ID No.4,α-CGRP肽(降鈣素基因相關(guān)肽);參見(jiàn)SEQ ID No.5,神經(jīng)激肽A和B,GRP肽(胃泌素釋放肽);參見(jiàn)SEQ ID No.7,緩激肽;參見(jiàn)SEQ ID No.8。
3)神經(jīng)激素,例如α-MSH(黑素細(xì)胞刺激激素)肽;參見(jiàn)SEQ ID No.12,ACTH(腎上腺皮質(zhì)激素)肽;參見(jiàn)SEQ ID No.13,“泌乳刺激素釋放”肽;參見(jiàn)SEQ ID No.14。
作為實(shí)例,本發(fā)明所用的生物擬肽所模擬的肽,是物質(zhì)P的拮抗劑或CGRP肽拮抗劑。
作為實(shí)例,本發(fā)明所用的生物擬肽所模擬的肽,是促生長(zhǎng)素抑制素的激動(dòng)劑。
作為實(shí)例,本發(fā)明所用的生物擬肽所模擬的肽,是神經(jīng)肽Y的拮抗劑或調(diào)節(jié)劑。
作為實(shí)例,本發(fā)明所用的生物擬肽的模擬的肽,是緩激肽受體的拮抗劑。
作為實(shí)例,本發(fā)明所用的生物擬肽所模擬的肽,是α-MSH的激動(dòng)劑或拮抗劑。
術(shù)語(yǔ)“模擬”或“模仿”是指認(rèn)為所述肽的特征在體外(具體在本發(fā)明的組合物中)表現(xiàn)出與參比生物分子(例如肽或蛋白質(zhì))體內(nèi)(例如在皮膚中)生物學(xué)功能相似或相近的生物學(xué)作用。
在整個(gè)說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中,術(shù)語(yǔ)“肽”應(yīng)當(dāng)理解為指多個(gè)未取代氨基酸構(gòu)成的序列以及序列中有些氨基酸(例如N末端氨基酸及/或C末端氨基酸)被可能有功能也可能無(wú)功能的基團(tuán)或取代物所取代的氨基酸序列。
這些肽可以通過(guò)常規(guī)的化學(xué)合成(在固相或均相液中)或從組成的氨基酸或其衍生物通過(guò)酶法合成(Kullman等,J.Biol.Chem.1980,255,8234)獲得。
這些肽也可以通過(guò)發(fā)酵經(jīng)或未經(jīng)遺傳工程改造的細(xì)菌菌株獲得從而產(chǎn)生需要的序列或其多種片段。
最后,這些肽可以通過(guò)提取動(dòng)植物(優(yōu)選植物來(lái)源的)蛋白質(zhì),隨后通過(guò)產(chǎn)生受控水解所述肽而獲得。植物中發(fā)現(xiàn)的許多蛋白質(zhì)往往在其結(jié)構(gòu)中包含有益的序列。受控水解使其能釋放這些肽片段。
按照本發(fā)明和第一種方案所述,美容組合物中所選擇的生物活化系統(tǒng)本身由該組合物的有效成分構(gòu)成。
在這種情況下,所選的生物擬肽使得“功能化”該美容組合物成為可能;例如通過(guò)選擇模仿α-MSH的擬肽獲得著色活性;相反地,通過(guò)選擇模仿α-MSH拮抗劑的擬肽獲得褪色活性;通過(guò)選擇模仿物質(zhì)P拮抗劑的擬肽獲得了舒緩作用;通過(guò)選擇模仿CGRP肽拮抗劑的擬肽獲得了抑制神經(jīng)起源興奮的作用;通過(guò)選擇模仿緩激肽拮抗劑的擬肽獲得了抑制耐受不良或致敏的作用。
如第二種方案所述,美容組合物中所選的生物活化系統(tǒng)增強(qiáng)了所述組合物中一種或多種有效成分的效力。
按照本發(fā)明,該生物活化系統(tǒng)的特征使其能夠恢復(fù)和/或維持表皮的天然活力。如果該美容組合物也包含皮膚營(yíng)養(yǎng)物和/或能保證皮膚細(xì)胞活力的水相物質(zhì),這一點(diǎn)尤其得以證實(shí)。
本發(fā)明也提供了以下實(shí)施方式ATP的穩(wěn)定形式是鈉鹽,例如ATP的二鈉鹽,該生物擬肽在皮膚結(jié)構(gòu)分子或皮膚中存在的酶的生物合成中具有功能性活性,該生物擬肽在皮膚的信息傳遞中具有功能性活性,并且,例如是皮膚中存在的激素或細(xì)胞因子的生物活性組份,該生物擬肽選自組氨酸-β-丙氨酰基肽(模擬過(guò)氧化物歧化酶)、肽段R-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser、肽段Tyr-Arg、肽段R-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser以及N-乙酰基-Tyr-Arg-R(模擬內(nèi)啡肽);R是任一氨基酸;肽段Lys-Thr-Thr-Lys-Ser、肽段Ala-Arg-His-Leu-Phe-Tyr(模擬α-MSH)以及肽段Gly-Gln-Asp-Pro-Val-Lys(模擬抑彈性酶蛋白),該生物擬肽是例如一種二肽;在這種情況下,該二肽可以對(duì)應(yīng)于分子式Arg R或His-R,其中R是任一氨基酸;或另外該二肽可以是寡聚體形式,其分子式為(R-R)n,其中1<n<3;例如,該二肽對(duì)應(yīng)于分子式(Arg-Lys)n,其中1<n<3,該生物擬肽是三肽,例如對(duì)應(yīng)于分子式Gly-His-Lys、Gly-Glu-Pro或Lys-Pro-Val,該生物擬肽是四肽,例如對(duì)應(yīng)于分子式Leu-Pro-Thr-Val、Lys-Thr-Ser-R或Gly-Glu-Pro-R;R是任一氨基酸,該生物擬肽是五肽,例如Val-Ala-Lys-Leu-R;R是任一氨基酸,該生物擬肽是六肽,例如該生物擬肽是Ala-R1-R2-R3-Phe-Try,其中R1、R2和R3各對(duì)應(yīng)于任一氨基酸,該美容組合物除生物活化系統(tǒng)之外可以包含氨基酸,所述氨基酸選自例如肌氨酸、脫羧肌肽和谷氨酰胺例如N-乙酰谷酰胺,本發(fā)明的美容組合物除生物活化系統(tǒng)之外可以包含蛋白質(zhì),例如選自過(guò)氧化物歧化酶、核酸內(nèi)切酶、光分解酶以及牛奶的細(xì)胞因子,該生物活化系統(tǒng)最多占所述組合物重量的10%,優(yōu)選占1%到10-7%之間,本發(fā)明的美容組合物包含至少一種可由本發(fā)明生物活化系統(tǒng)增強(qiáng)的美容活性成分,該美容組合物的常規(guī)形式是油包水或水包油乳劑,所述生物活化系統(tǒng)包含在溶液或水相中,本發(fā)明的生物活化系統(tǒng)中,ATP以及任選的ATP前體最多占重量的10%,優(yōu)選在0.01%和5%之間。
本發(fā)明組合物中存在的活性物質(zhì)的有效量,對(duì)應(yīng)于獲得期望結(jié)果所需的用量,并且本發(fā)明的組合物的組成取決于這些組合物的用途。
第一類(lèi)物質(zhì)包括用于健康皮膚以改進(jìn)美觀(guān)及舒適度的美容組合物。健康皮膚可定義為消除病理變化但不一定處于完美狀態(tài)。這種皮膚可具有干燥癥狀、刺激癥狀、與年齡或光化學(xué)老化相關(guān)的皺紋、皮脂分泌過(guò)多區(qū)域或色素減退或色素沉著過(guò)度區(qū)域。此外,健康皮膚可能需要暫時(shí)或長(zhǎng)期避光保護(hù)以更好地抵擋陽(yáng)光。
另一類(lèi)包括用于因疾病或藥物治療而變得脆弱的皮膚的組合物,用作預(yù)防手段或作為醫(yī)藥治療的延伸治療。
本發(fā)明的美容組合物也可以包含至少一種選自抗氧化劑、自由基清除劑、α-羥酸、女維生素、遮光劑或過(guò)濾劑、驅(qū)蟲(chóng)藥和消炎藥的美容活性物質(zhì)。
當(dāng)然,本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)小心選擇這種或這些任選的活性物質(zhì)和/或其用量,使得本發(fā)明的生物活化系統(tǒng)的有益性質(zhì)不會(huì)被或基本上不會(huì)被所設(shè)想的添加物質(zhì)所改變。優(yōu)選地,考慮應(yīng)當(dāng)尋求本發(fā)明生物活化系統(tǒng)與活性物質(zhì)之間具有協(xié)同作用。
本發(fā)明的組合物可以按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)進(jìn)行制備,尤其是那些用于制備水包油(O/W)或油包水(W/O)類(lèi)型乳劑的技術(shù)。
這些組合物具體可以單一乳劑或復(fù)合乳劑(雙重(O/W或W/O)或三重(W/O/W或O/W/O)乳劑,例如乳膏、乳液、膠體或乳膏-膠體)、粉末或固體管的形式提供,并可任選地包裝成氣霧劑以摩絲或噴霧形式提供。
當(dāng)本發(fā)明所的容組合物用于保護(hù)或護(hù)理人的表皮或用作防曬組合物時(shí),可以懸浮液或溶劑或脂質(zhì)分散液形式、或非離子泡囊分散液形式、或其它乳液形式(優(yōu)選水包油類(lèi),如乳膏或乳液)、以油膏、膠體、乳膏-膠體、固體管、粉末、化妝棒、氣霧摩絲或噴霧形式提供。
當(dāng)本發(fā)明的美容組合物用于保護(hù)毛發(fā)時(shí),可以是香波、洗液、膠體、乳液、或非離子泡囊分散液形式,并可以包含例如可洗去組分,在洗發(fā)前后、染發(fā)或漂白前后、卷發(fā)或頭發(fā)拉直過(guò)程中或前后應(yīng)用;該組合物也可以發(fā)型設(shè)計(jì)或護(hù)理洗液或膠體、吹干或頭發(fā)定型洗液或膠體或用于卷發(fā)、拉直、染發(fā)或頭發(fā)漂白成分的形式提供。
當(dāng)該組合物用作指甲、睫毛、眉毛或皮膚的化妝品(如表皮處理霜、粉底、唇膏、眼影、胭脂、眉毛膏或眼線(xiàn)膏)時(shí),可以以固體或糊狀、無(wú)水或有水形式提供,例如水包油或油包水乳劑、非離子泡囊分散液或其他懸浮液。
對(duì)于本發(fā)明組合物而言,pH是生理值,介于4-7之間。當(dāng)其局部使用時(shí),該組合物含有至少一種ATP和任選的與至少一種生物擬肽偶聯(lián)的前體,可將該組合物用于面部、頸部、頭皮、黏膜、指甲、軀干、胸部、足部、腿部或任何其他身體部位。
本發(fā)明的組合物也可以包括傳統(tǒng)的化妝品佐劑,尤其是選自脂肪物質(zhì)、本發(fā)明上下文中具體所用以外的有機(jī)溶劑、乳化劑、離子或非離子增稠劑、柔軟劑、遮光劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)膚劑、硅氧烷、防泡劑、保濕液、維生素、芳香劑、防腐劑、表面活性劑、填充劑、聚合體、推進(jìn)劑、堿化或酸化劑、染料或任何其他化妝品中(尤其是生產(chǎn)乳劑形式的組合物)通常使用的成分。作為實(shí)例,在用于戶(hù)外環(huán)境和陽(yáng)光下的產(chǎn)品中,本發(fā)明的組合物包含屏蔽或反射物質(zhì)。
脂肪物質(zhì)可以由油或蠟或其混合物構(gòu)成,也包含脂肪酸、脂肪醇和脂肪酸酯。油可以選自動(dòng)物、植物、礦物或合成油,尤其是來(lái)自液體石油凍膠、石蠟油、揮發(fā)性或不揮發(fā)的硅氧烷油、異鏈烷烴、聚烯烴以及氟油和全氟油。類(lèi)似地,蠟可以選自顧名思義的動(dòng)物、化石、植物、礦物或合成蠟。
在極性油中,可以提及稱(chēng)為“Finsolv TN”的油、偏苯三酸十三酯(tridecyltrimellitate)、異壬酸異壬酯(isononyl isononanoate)、肉豆蔻酸異丙酯(isopropyl myristate)、decaprylyl carbonate、或Guerbet苯甲酸醇酯和苯甲酸羥酯,諸如CP Hall公司名為“Hallbrite BHB”的產(chǎn)品。
作為說(shuō)明,對(duì)于本發(fā)明具有水包油乳劑類(lèi)型載體的防曬配方而言,水相(具體包含親水性屏蔽物質(zhì))通常占相對(duì)于整個(gè)配方重量的50%到95%,優(yōu)選占重量的70%到90%,油相(具體包含親油性屏蔽物質(zhì))占相對(duì)于整個(gè)配方重量的5%到50%,優(yōu)選占重量的10%到30%,并且乳化劑占相對(duì)于整個(gè)配方重量的0.5%到20%,優(yōu)選占重量的2%到10%。
具體而言,本發(fā)明的組合物可獲得的形式,是完全值得注意的透明和半透明性質(zhì)的無(wú)水組合物。
利用本發(fā)明的美容組合物生產(chǎn)皮膚護(hù)理產(chǎn)品、針對(duì)皮膚、嘴唇和/或體表的化妝品、防曬產(chǎn)品、以及用于皮膚護(hù)理和/或治療的皮膚病學(xué)組合物也是本發(fā)明的一個(gè)主題。
本發(fā)明的組合物可以是用于例如皮膚、嘴唇和/或體表等角蛋白材料染色的皮膚病學(xué)或護(hù)理組合物的形式,防曬組合物或身體清潔組合物的形式,尤其是除臭產(chǎn)品或卸妝產(chǎn)品形式,棒狀形式。它尤其可以用作皮膚、體表或嘴唇護(hù)理的基礎(chǔ)(用以保護(hù)嘴唇免受寒冷和/或陽(yáng)光和/或風(fēng)侵害的唇膏,或皮膚、指甲或頭發(fā)的護(hù)理霜)。
本發(fā)明的組合物也可以是皮膚染色化妝品形式,尤其是任選地具有護(hù)理或治療性質(zhì)的粉底、腮紅、化妝口紅、眼影、遮瑕產(chǎn)品、眼線(xiàn)膏、身體化妝品;如任選地具有護(hù)理或治療性質(zhì)的唇膏等嘴唇化妝品;用于例如指甲或睫毛等體表部位的化妝品,尤其是睫毛膏形式,或用于眉毛和頭發(fā)的化妝品,特別是鉛筆形式。本發(fā)明的組合物具體可以是含該生物活化系統(tǒng)之外化妝和/或皮膚病學(xué)活性物質(zhì)的美容產(chǎn)品。
本發(fā)明的美容組合物也可以含珠光物質(zhì)、色素或其他的可以包裹的或不包裹金屬氧化物的納米色素(主要顆粒的平均大小通常在5-100納米之間,優(yōu)選在10-50納米之間),例如氧化鈦(無(wú)定形或結(jié)晶金紅石和/或銳鈦礦形式)、氧化鐵、氧化鋅、氧化鋯或氧化鈰或其混合物的納米色素,它們都是熟知的紫外線(xiàn)光保護(hù)物質(zhì)。此外,常規(guī)包裹物質(zhì)是氧化鋁和/或硬脂酸鋁。這種包裹的或未包裹的金屬氧化物納米色素在專(zhuān)利申請(qǐng)EP-A-0518772和EP-A-0518773中有具體描述。
當(dāng)然,本發(fā)明的組合物應(yīng)當(dāng)是美容學(xué)或皮膚病學(xué)上可以接受的,即應(yīng)當(dāng)包含無(wú)毒的生理學(xué)可接受的介質(zhì)并應(yīng)當(dāng)能用于人類(lèi)皮膚、體表或嘴唇。對(duì)于本發(fā)明的目的而言,術(shù)語(yǔ)“美容學(xué)可接受的”是指具有令人愉快的外觀(guān)、氣味和感覺(jué)的組合物。
試驗(yàn)試驗(yàn)1對(duì)L-瓜氨酰胺-L-精氨酸與或不與二鈉鹽形式的ATP聯(lián)合對(duì)正常人角質(zhì)形成細(xì)胞的細(xì)胞代謝的生物刺激活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
1.原理該過(guò)程包括測(cè)量血清缺乏(2%)培養(yǎng)基中成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物中ATP的量,與以下情況進(jìn)行比較富含不同濃度瓜氨酰胺-精氨酸的培養(yǎng)基,富含不同濃度ATP的培養(yǎng)基,富含不同濃度瓜氨酰胺-精氨酸和ATP的培養(yǎng)基,本試驗(yàn)的目的是評(píng)價(jià)所研究混合物與或不與二鈉鹽ATP聯(lián)合對(duì)于正常人角質(zhì)形成細(xì)胞ATP合成的激活作用。
2.方法細(xì)胞培養(yǎng)本試驗(yàn)在每孔105個(gè)細(xì)胞密度接種的6孔板上正常人角質(zhì)形成細(xì)胞體外培養(yǎng)物上進(jìn)行。
L-瓜氨酰胺-L-精氨酸為了確定本試驗(yàn)中應(yīng)用的濃度,對(duì)正常人角質(zhì)形成細(xì)胞先進(jìn)行了細(xì)胞活力檢測(cè)。
將L-瓜氨酰胺-L-精氨酸溶于水終濃度固定為0.1%。
使從10-4%到10-2%的6個(gè)稀釋度的L-瓜氨酰胺-L-精氨酸與細(xì)胞接觸24小時(shí)和48小時(shí)。將“水”環(huán)境作為對(duì)照。
對(duì)于本試驗(yàn)將測(cè)定接觸,L-瓜氨酰胺-L-精氨酸的兩個(gè)最高濃度(即0.0001%和0.01%)48小時(shí)后,細(xì)胞活力保持在高于80%的水平。
紫外線(xiàn)B照射將以105個(gè)細(xì)胞/每孔的密度接種在6孔板中的角質(zhì)形成細(xì)胞在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基(Epilfe Sigma)中培養(yǎng)48小時(shí)。在照射之前,去除培養(yǎng)基,細(xì)胞用PBS清洗,留下1毫升PBS與細(xì)胞接觸用于照射。使角質(zhì)形成細(xì)胞經(jīng)受20mJ/cm2紫外線(xiàn)B照射(312納米)。平行進(jìn)行相同的未照射條件作為對(duì)照。
照射以后(以及未照射的對(duì)照),去除PBS并將細(xì)胞置于不同研究條件下培養(yǎng)基含水的對(duì)照,培養(yǎng)基含0.001%L-瓜氨酰胺-L-精氨酸,培養(yǎng)基含0.01%L-瓜氨酰胺-L-精氨酸。
每種條件一式三份。
照射后接觸24小時(shí)或48小時(shí)后,回收條件培養(yǎng)物上清液。通過(guò)ELISA技術(shù)(R&DSystems,Abingdon,UK)測(cè)量了100微升上清液中角質(zhì)形成細(xì)胞分泌的內(nèi)皮素1的量。內(nèi)皮素-1水平用合成的人內(nèi)皮素-1制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果用蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)皮素-1的皮克數(shù)表示(pg ET-l/mg蛋白質(zhì))。
3.結(jié)果使用最低檢測(cè)濃度(0.0001%)的L-瓜氨酰胺-L-精氨酸接觸24小時(shí)導(dǎo)致與“水”對(duì)照相比,角質(zhì)形成細(xì)胞(未照射條件)內(nèi)皮素-1基礎(chǔ)性分泌提高了20%。在更高濃度下(0.01%),這一激活作用明顯增強(qiáng),達(dá)到70%。
UV B照射導(dǎo)致在“水”對(duì)照條件下的角質(zhì)形成細(xì)胞50%的內(nèi)皮素-1分泌刺激。與0.0001%L-瓜氨酰胺-L-精氨酸接觸24小時(shí)后,內(nèi)皮素-1的分泌與照射的“水”對(duì)照相比提高了6%。在0.001%濃度下,L-瓜氨酰胺-L-精氨酸的激活作用顯著提高到28%。
使用最低檢測(cè)濃度(0.0001%)的L-瓜氨酰胺-L-精氨酸接觸48小時(shí)導(dǎo)致與“水”對(duì)照相比,角質(zhì)形成細(xì)胞(未照射條件)內(nèi)皮素-1基礎(chǔ)性分泌提高了26%。在更高濃度下(0.01%),此激活作用更為明顯,達(dá)到了82%。
UV B照射導(dǎo)致在“水”對(duì)照條件下的角質(zhì)形成細(xì)胞40%的內(nèi)皮素-1分泌刺激。與0.0001%L-瓜氨酰胺-L-精氨酸接觸48小時(shí)后,內(nèi)皮素-1的分泌與照射的“水”對(duì)照相比提高了4%。在0.01%濃度下,L-瓜氨酰胺-L-精氨酸的激活作用顯著提高到63%。
4.結(jié)論在這樣確定的實(shí)驗(yàn)條件下,針對(duì)所選擇的稀釋度和培育時(shí)間,發(fā)現(xiàn)濃度為0.01%的L-瓜氨酰胺-L-精氨酸對(duì)正常人角細(xì)胞的內(nèi)皮素-1分泌具有顯著的激活作用。
在存在0.01%ATP時(shí),該激活作用增加20%。顯然ATP分子和L-瓜氨酰胺-L-精氨酸肽分子之間存在協(xié)同作用。
單用ATP進(jìn)行相同研究沒(méi)有顯示對(duì)內(nèi)皮素-1合成有任何作用。
試驗(yàn)2研究了ATP和二肽組合對(duì)正常人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。
研究的產(chǎn)品是二鈉鹽形式的ATP,β-丙氨酰胺-L-組氨酸(肌肽),瓜氨酰胺-精氨酸(exsy algine)。
1.研究目的本試驗(yàn)的目的是評(píng)價(jià)添加到培養(yǎng)基中的ATP和肽的組合對(duì)人成纖維細(xì)胞永生細(xì)胞系HaCaT細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。
在本試驗(yàn)中,兩種肽(β-丙氨酰胺-L-組氨酸(Dragoco)和L-瓜氨酰胺-L-精氨酸(Exsymol))同時(shí)和/或相伴隨地與ATP組合。
本研究在HaCaT細(xì)胞用標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基(含2%或10%胎牛血清(SVF)的DMEM(Sigma))制備的培養(yǎng)物中進(jìn)行。
2.技術(shù)將HaCaT細(xì)胞以低密度接種于96孔板的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基(DMEM+10%SVF)中并在接種后于該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)24小時(shí)。
第2天將細(xì)胞置于不同的研究條件下。
ATP、β-丙氨酰胺-L-組氨酸(肌肽)和L-瓜氨酰胺-L-精氨酸(exsy algine)的檢測(cè)濃度在預(yù)先進(jìn)行的細(xì)胞毒性研究后確定。
準(zhǔn)備了以下條件對(duì)照條件單獨(dú)培養(yǎng)基+SVF,僅含0.5%β-丙氨酰胺-L-組氨酸的條件,僅含0.5%L-瓜氨酰胺-L-精氨酸的條件,僅含1μg/ml ATP的條件,
含ATP(1μg/ml)+β-丙氨酰胺-L-組氨酸(0.5%)的條件,含ATP(1μg/ml)+L-瓜氨酰胺-L-精氨酸(0.5%)的條件,含ATP(1μg/ml)+β-丙氨酰胺-L-組氨酸(0.5%)+L-瓜氨酰胺-L-精氨酸(0.5%)的條件。
這些不同條件用含2%SVF的DMEM和含10%SVF的DMEM進(jìn)行制備。
每種條件一式三份。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不更換培養(yǎng)基。
細(xì)胞接種24小時(shí)后,在細(xì)胞與不同研究條件接觸之前對(duì)細(xì)胞密度進(jìn)行了評(píng)價(jià)(=T0),隨后在培養(yǎng)的第2天、第5天和第7天通過(guò)WST-1轉(zhuǎn)化法(450納米處讀取)評(píng)價(jià)了HaCaT細(xì)胞的生長(zhǎng)。
3.結(jié)果細(xì)胞生長(zhǎng)通過(guò)測(cè)量不同實(shí)驗(yàn)時(shí)間的細(xì)胞活力得以體現(xiàn)。所獲得的結(jié)果給出了關(guān)于T0時(shí)間初始細(xì)胞密度(將該值估計(jì)為等于100%)計(jì)算的細(xì)胞活力百分比。分析了不同產(chǎn)品在不同實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,與相同實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)未處理對(duì)照相比。
培養(yǎng)2天后,對(duì)照條件觀(guān)察到相對(duì)于T0對(duì)照,細(xì)胞缺乏生長(zhǎng)和活力的維持,這可用用轉(zhuǎn)移到缺乏生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基(2%SVF)來(lái)解釋。
單加濃度為0.5%的β-丙氨酰胺-L-組氨酸顯著刺激了細(xì)胞的生長(zhǎng)(相對(duì)未處理的對(duì)照提高了22%)。但在0.1%濃度下沒(méi)有觀(guān)察到對(duì)生長(zhǎng)的影響。
單加ATP大大降低了細(xì)胞活力。
在β-丙氨酰胺-L-組氨酸中加入ATP導(dǎo)致對(duì)ATP細(xì)胞活力抑制作用的抑制,并刺激細(xì)胞在β-丙氨酰胺-L-組氨酸所檢測(cè)的2種濃度下超過(guò)了其單用時(shí)的水平。
單加濃度0.1%和0.5%的L-瓜氨酰胺-L-精氨酸與未處理對(duì)照相比沒(méi)有刺激細(xì)胞生長(zhǎng)(提高了5%)。
培養(yǎng)5天后,與T0相比,觀(guān)察到細(xì)胞活力有輕微降低,這是由于培養(yǎng)物保持在缺乏生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基中。
再次觀(guān)察到濃度為0.5%的β-丙氨酰胺-L-組氨酸對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的刺激作用(提高12%)。
單加ATP大大降低了細(xì)胞活力,這一影響在加入0.5%的β-丙氨酰胺-L-組氨酸后消失。
不論所使用的濃度,L-瓜氨酰胺-L-精氨酸單獨(dú)仍不能刺激細(xì)胞生長(zhǎng)。
4.結(jié)論在這樣確定的實(shí)驗(yàn)條件和檢測(cè)濃度下,看來(lái)單加ATP在接觸2到5天后大大降低了正常人成纖維細(xì)胞的活力(降低5%到10%)。
ATP和β-丙氨酰胺-L-組氨酸組合消除了ATP的細(xì)胞活力抑制作用并激活后者超過(guò)了單用β-丙氨酰胺-L-組氨酸所獲得的水平,這表明濃度0.5%時(shí)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有刺激作用。
不論所使用的濃度,ATP與L-瓜氨酰胺-L-精氨酸組合對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有刺激作用。
試驗(yàn)31.細(xì)胞培養(yǎng)從患包莖的嬰兒和新生兒的包皮制備正常人黑素細(xì)胞(MHN)培養(yǎng)物。將從皮膚片段獲得的黑素細(xì)胞置于補(bǔ)充了30微克/毫升牛垂體提取物(BPE)(LifeTechnologies,Paisley,England)、2%胎牛血清(SVF)(Dominique Dutscher,Brumath,F(xiàn)rance)、16nM佛波醇-12-豆蔻酸-13-醋酸酯(Sigma)、5微克/毫升胰島素和1.1μM氫化可的松(Sigma)的MCDB 153培養(yǎng)基(Sigma,St Louis,MO,USA)中。培養(yǎng)物保持在37℃含5%CO2的培養(yǎng)箱中。2到3周后獲得了黑素細(xì)胞的純培養(yǎng)物。
2.接觸時(shí)間、細(xì)胞和載玻片制劑的照射將所有待測(cè)組合物以最大允許濃度溶于DMSO中。進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)以確定對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞的亞毒濃度。DMSO終濃度總是低于2%。
使黑素細(xì)胞與該產(chǎn)物37℃接觸30分鐘,隨后用UV A輻射照射。UV a幅射光通過(guò)Bio-Sun UV-輻射器(Vilbert Lourmat,Marne la Vallee)產(chǎn)生。該裝置配備有發(fā)射312納米和/或365納米波長(zhǎng)的單頻燈泡。該燈泡通過(guò)RMW-365/312輻射計(jì)輸出計(jì)算的能量。對(duì)于UV A區(qū)間所釋放的能量是0.8J/cm2。照射后立即進(jìn)行“彗星”檢測(cè)。這些實(shí)驗(yàn)中包括兩種對(duì)照陰性對(duì)照未經(jīng)組合物處理但用UV A輻射照射的黑素細(xì)胞;用待測(cè)組合物處理30分鐘但沒(méi)受照射的黑素細(xì)胞。
陽(yáng)性對(duì)照沒(méi)經(jīng)組合物處理但受照射的黑素細(xì)胞。
用胰蛋白酶/EDTA(0.05%/0.02%)混合物處理2到3分鐘后,離心回收培養(yǎng)物并置于不含Ca2+和Mg2+的PBS緩沖液中(Sigma)。第二次離心后,將細(xì)胞(4.5-5.0×104個(gè)細(xì)胞)懸浮在0.5%低熔點(diǎn)(LMP)瓊脂糖(Sigma)中。將該混合物直接置于環(huán)境溫度干燥過(guò)夜的瓊脂糖(1.6%)層預(yù)光包被并用第2層瓊脂糖(0.8%)新鮮預(yù)包被的顯微鏡載玻片上。
3.“彗星”試驗(yàn)檢測(cè)(干載玻片技術(shù))和酶處理彗星試驗(yàn)方案是摻入了“干載玻片”技術(shù)[2]的De Mao等[1]的方案。
照射后,將載玻片置于裂解池(2.5M NaCl,100mM Na2EDTA,10mM Tris-HCl,pH10,1%的肌氨酸鈉,1%的triton X-100和10%DMSO)中。4℃裂解細(xì)胞60分鐘,隨后使DNA在強(qiáng)堿溶液中(1mM Na2EDTA和300mM NaOH,pH>13.0)室溫變性20分鐘。電泳(25V,300mA)20分鐘后,載玻片用Tris-HCl緩沖液(0.4M;pH 7.4)中和并在無(wú)水乙醇或甲醇中脫水。
4.顯微鏡觀(guān)察和影像分析載玻片用溴化乙錠溶液(75微升,2ng/ml)染色用配備了20BG-W二色濾片(激發(fā)波長(zhǎng)515-560納米;發(fā)射波長(zhǎng)590納米)和Apo D-Plan 20×物鏡的BH2-RFL熒光顯微鏡(Olympus,Japan)進(jìn)行觀(guān)察。用與Matrox IP-8獲得板相連的高靈敏度單色CCD攝像機(jī)(Cohu 4912-5000)進(jìn)行影像分析。全套裝置由Fenestra Komet軟件(KineticImaging,Liverpool,UK,3.1版)控制。
每個(gè)樣品共分析了100個(gè)細(xì)胞(每張載玻片50個(gè)細(xì)胞)。使用的參數(shù)是定義為“彗星”尾中DNA百分比的“尾巴DNA”。每組實(shí)驗(yàn)包含陰性對(duì)照(未照射細(xì)胞)和陽(yáng)性對(duì)照(不含待測(cè)組合物的照射細(xì)胞)。
5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析直接計(jì)算了每個(gè)樣品TM(尾矩)分布頻率基于x2函數(shù)的非線(xiàn)性回歸。具體說(shuō),Bauer等[3]最近證明這些分布遵循x2函數(shù)。這一方法是建立在按照x2定律的分布的分析基礎(chǔ)上的。
代表該函數(shù)自由度的因子n(也稱(chēng)為x2TM)與損害程度(平均TM)直接相關(guān)。因子n在2(完整細(xì)胞)到15(極端損害的細(xì)胞,具有高斯分布頻率)之間變化。
自由度(n)可以用作DNA損傷的指標(biāo)。分布頻率用Excel 97電子表格(Microsoft)計(jì)算,非線(xiàn)性回歸用Table Curve 2D軟件(Jandel Scientific,5.0版)計(jì)算。
6.參考文獻(xiàn)[1]De Meo M,M.Laget M,Castegnaro M,Dumenil G.Genotoxic activityof potassium permanganate acidic sodium.Mutation Res.1991;260;295-306.Klaude M,Ericksson S,Nygren J,Annstrom G.The comet assaymechanismand technical consideration.Mutation Res.1996;363;89-96.Bauer E,Recknagel RD,F(xiàn)iedler U,Wollweber L,Bock C,GreulichK.O.The distribution of the tail moments in single cell electrophoresis(comet assay)obeys a chi-square(x2)not a gaussian distribution.MutationRes.1998;398101-110.
7.待測(cè)組合物的保護(hù)程度獲得了下表結(jié)果。
OTM-x2=尾矩x2通過(guò)OTM分布的標(biāo)準(zhǔn)化頻率的非線(xiàn)性回歸,計(jì)算該函數(shù)的自由度。在所有情況下該模式的概率是P<0.001。
NI未照射的黑素細(xì)胞。
NI+ATP用ATP(4mM)預(yù)處理30分鐘的未照射黑素細(xì)胞。
NI+Citru用瓜氨酰胺-精氨酸(4mM)預(yù)處理30分鐘的未照射的黑素細(xì)胞。
UV A用UV A輻射(0.8J/cm2)照射的黑素細(xì)胞。
UV A+ATP用UV A輻射(0.8J/cm2)照射并用ATP(4mM)預(yù)處理30分鐘的黑素細(xì)胞。
UVA+Citru用UV A輻射(0.8J/cm2)照射并用瓜氨酰胺-精氨酸(4mM)預(yù)處理30分鐘的黑素細(xì)胞。
NSUVA+Citru和UVA+ATP之間的差異不顯著。
瓜氨酰胺-精氨酸的保護(hù)程度比ATP的高得多。ATP分子和所述肽之間的協(xié)同作用非常明顯。
以下的實(shí)施例用以舉例說(shuō)明本發(fā)明,但不是對(duì)本發(fā)明范圍的限制。
實(shí)施例實(shí)施例1抗皺霜蔗糖硬脂酸酯 0.5-6%蔗糖雙硬脂酸酯 0.5-6%ATP二鈉鹽0.01-0.05%四磷酸二鳥(niǎo)苷(Gp4G) 0.5-1%辛酸/癸酸甘油三酯3-15%辛酸/癸酸/琥珀酸甘油三酯 3-15%神經(jīng)酰胺 30.05-1%棕櫚酸維生素C酯 0.01-0.1%維生素E醋酸酯0.05-1%尿素 0.5-2%氯化鈣 0.05-0.5%氯化鎂 0.05-0.5%β-丙氨酰胺-L-組氨酸 0.5-1%Gly-His-Lys(肽粉)10-5ppm絲氨酸 0.2-2%甘油 0.5-3%檸檬酸 0.1-0.5%檸檬酸三鈉 0.5-1.5%維生素A棕櫚酸酯 0.1-0.5%磷脂 0.1-0.4%過(guò)氧化物歧化酶 0.5-2%透明質(zhì)酸鈉 0.5-3%山梨酸鉀 0.2-0.5%
菌類(lèi)植物膠 0.1-0.5%黃原膠 0.1-0.5%水 加至100%芳香劑 qs防腐劑 qs實(shí)施例2保濕乳四磷酸二鳥(niǎo)苷(Gp4G) 0.5-1%磷脂 3%神經(jīng)酰胺 30.1%維生素A棕櫚酸酯 0.15%Steareth-20 0.2%Steareth-2 1-3%對(duì)羥基苯甲酸甲脂 0.25%氯化鈣 0.01%氯化鎂 0.01%水 qs 100%十八十六醇(Cetostearyl alcohol) 2-4%肉豆蔻酸肉豆蔻酯 2-4%肉豆蔻酸異丙酯 4%甘油 1%L-瓜氨酰胺-L-精氨酸 0.1-2%二甲基硅氧烷 0.5%羊毛脂醇 0.5%對(duì)羥基苯甲酸丙酯 0.25%實(shí)施例3保濕霜ATP二鈉鹽0.01-0.05%山梨聚糖油酸酯 3.5%聚山梨醇酯80 2-4%小麥胚芽油 3%
甜杏仁油 5%肉豆蔻酸異丙酯12%磷脂 0.5%神經(jīng)酰胺3 0.1%聚丙烯酰胺C14-13異鏈烷烴&Laureth-72-3.5%維生素A棕櫚酸酯 0.1%維生素E 0.05%PCA鈉 0.5%四磷酸二鳥(niǎo)苷(Gp4G)0.5-1%透明質(zhì)酸鈉0.1%水qs 100%L-瓜氨酰胺-L-精氨酸 0.1-2%防腐劑qs芳香劑qs實(shí)施例4防曬黑霜ATP二鈉鹽 0.01-0.05%辛基甲氧基肉桂酸(Neo Heliopan AV) 6.00%丁基甲氧基二苯甲酰甲烷3.00%(Butylmethoxydibenzoylmethane)(Parsol 1789)辛基三嗪酮2.00%(Uvinul T150)二(C12-13)烷基酒石酸酯8.00%(Cosmacol ETI)十六烷基醇0.50%二甲基硅氧烷 0.50%Coco辛酸鹽/癸酸鹽 8.00%PVP/二十烯共聚物(PVP/eicosene copolymer) 2.00%十六烷基磷酸鉀2.00%對(duì)羥基苯甲酸甲酯和丙酯0.25%EDTA二鈉 0.10%
BHT 0.05%卡波姆(Carbomer)10.00%四磷酸二鳥(niǎo)苷(Gp4G) 0.5-1%丙氨酰胺-L-組氨酸(肌肽) 0.8-1%丙二醇 5.00%氫氧化鉀4.05%苯基苯并咪唑磺酸(Eusolex 232) 2.00%維生素E醋酸酯 2.50%泛酰醇 1.00%MSH(Ala-His-Lys-Phe-Tyr)0.0001-0.00001%光解酶 0.1%水 qs 100%芳香劑 qs實(shí)施例5防曬修復(fù)日霜ATP二鈉鹽 0.01-0.05%乙氧二醇和黃瓜素8.00%Di-C12-13烷基酒石酸酯(Cosmacol ETI) 5.00%辛基甲氧基肉桂酸(Parsol MCX)5.00%丁基甲氧基二苯甲酰甲烷 2.00%(Butylmethoxydibenzoylmethane)(Parsol 1789)二甲基硅氧烷和三甲基硅氧硅酸鹽 3.00%維生素E醋酸酯 0.20%蔗糖雙硬脂酸酯 5.00%己二醇 5.00%對(duì)羥基苯甲酸丁酯、甲酯、丙酯+苯氧乙醇 0.40%L-瓜氨酰胺-L-精氨酸 0.1-2%水 qs 100%四磷酸二鳥(niǎo)苷(Gp4G) 1-1.5%MSH(Ala-His-Lys-Phe-Tyr)0.0001-0.00001%核酸內(nèi)切酶 0.2%
丙氨酰胺-L-組氨酸(肌肽)0.5-1%芳香劑 qs實(shí)施例6柔軟光修復(fù)乳液礦物油 2.00%四磷酸二鳥(niǎo)苷(Gp4G) 0.5-1%Di-C12-13烷基酒石酸酯(Cosmacol ETI)4.00%辛基硬脂酸酯 3.00%異戊基-對(duì)-甲氧基肉桂酸(Parsol MCX) 5.00%丁基甲氧基二苯甲酰甲烷 1.00%(Butylmethoxydibenzoylmethane)(Parsol 1789)3-二異硬脂酰聚甘油酯 4.00%PEG-20月桂酸甘油酯 1.00%卡波姆(Carbomer) 0.4%丙二醇 2.00%防腐劑 0.50%黃原膠 0.30%三乙胺 0.85%苯基苯并咪唑磺酸(Neo Heliopan Hydro) 2.5%乙酰酪氨酸 2.00%丙氨酰胺-L-組氨酸(肌肽)0.5-1%Gly-His-Lys(肽粉) 10-5ppm水 qs 100%芳香劑 qs實(shí)施例7脫過(guò)敏臉?biāo)了?癸酸/琥珀酸甘油三酯 1-10%維生素C棕櫚酸酯0.01-0.1%甘油硬脂酸酯 1-5%硬脂酸 1-5%維生素E醋酸酯 0.1-1%
辛酸/癸酸甘油三酯 1-15%ATP二鈉鹽 0.01-0.05%維生素B60.01-0.05%檸檬酸 0.1-0.5%葡萄糖酸鋅 0.1-1%檸檬酸三鈉 1-2.5%L-瓜氨酰胺-L-精氨酸 0.1-2%四磷酸二鳥(niǎo)苷(Gp4G) 0.5-1%甘油1-4%維生素A棕櫚酸酯 0.01-1%d-泛酰醇0.1-1%鼠李糖 0.1-1%L-巖藻糖0.01-1%乳鐵傳遞蛋白/乳過(guò)氧化物酶 0.01-1%過(guò)氧化物歧化酶 0.01-1%聚丙烯酰胺/C13-14異鏈烷烴/laureth-7 0.2-1%水 qs 100%實(shí)施例8柔軟身體乳液丙烯酸聚合物0.1-1.5%甘草次酸0.1-1%乙三胺 0.1-2%丁烯乙二醇 0.5-4%ATP二鈉鹽 0.01-0.05%維生素C棕櫚酸酯 0.01-0.1%維生素E棕櫚酸酯 0.1-1%維生素B60.01-0.05%檸檬酸 0.1-0.5%葡萄糖酸鋅 0.1-1%檸檬酸三鈉 1-2.5%L-精氨酸0.1-2%
維生素A棕櫚酸酯0.01-1%d-泛酰 0.1-1%L-巖藻糖 0.1-1%乳鐵傳遞蛋白/乳過(guò)氧化物酶 0.01-1%丙氨酰胺-L-組氨酸(肌肽)0.5-1%R-Gly-Gln-Pro-Arg 15-20ppm過(guò)氧化物歧化酶 0.01-1%山梨酸鉀 0.1-0.6%防腐 qs水 qs 100%實(shí)施例9油性皮膚舒緩霜丙二醇 1-8%山梨聚糖單月桂酸酯 0.5-5%二甲基硅氧烷共聚多元醇(Dimethicone copolyol) 0.1-5%水楊酸 0.01-0.5%EDTA二鈉 0.05-0.5%四磷酸二鳥(niǎo)苷(Gp4G) 0.5-1%ATP二鈉鹽 0.01-0.05%葡萄糖酸鋅 0.01-1%維生素C棕櫚酸酯0.01-0.1%維生素E棕櫚酸酯0.1-1%維生素B6 0.01-0.05%檸檬酸 0.1-0.5%氯化鈉 0.1-1.5%檸檬酸三鈉 1-2.5%L-精氨酸 0.1-2%維生素A棕櫚酸 0.01-1%d-泛酰醇 0.1-1%鼠李糖 0.1-1%L-巖藻糖 0.01-1%
乳鐵傳遞蛋白/乳過(guò)氧化物酶 0.01-1%Gly-His-Lys(肽粉) 10-5ppm過(guò)氧化物歧化酶 0.01-1%防腐劑 qs水 qs 100%實(shí)施例10卸裝洗液四磷酸二鳥(niǎo)苷(Gp4G) 1-2%ATP二鈉鹽 0.1-0.5%檸檬酸三鈉 1-2.5%甘油0.5-3%己烯乙二醇 45%d-泛酰醇0.1-1%丙氨酰胺-L-組氨酸(肌肽) 0.5-1%防腐劑(對(duì)羥基苯甲酸甲酯和苯氧乙醇) qs水 qs 100%
序列描述SEQ ID No.1H-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Mer-H2(11A)SEQ ID No.2H-Tyr-Pro-Ser-Lys-Pro-Asp-Asn-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Pro-Ala-Glu-Asp-Met-Ala-Arg-Tyr-Tyr-Ser-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Ile-Asn-Leu-Ile-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(36AA)SEQ ID No.3H-Ala-Gly-Cys-Lys-Asn-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH(14AA)SEQ ID No.4pGlu-Leu-Tyr-Glu-Asn-Lys-Pro-Arg-Arg-Pro-Tyr-Ile-Leu-OH(13AA)SEQ ID No.5H-Ala-Cys-Asp-Thr-Ala-Thr-Cys-Val-Thr-His-Arg-Leu-Ala-Gly-Leu-Leu-Ser-Arg-Ser-Gly-Gly-Val-Val-Lys-Asn-Asn-Phe-Val-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2(37AA)SEQ ID No.6H-Ala-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Val-Thr-His-Arg-Leu-Ala-Gly-Leu-Leu-Ser-Arg-Ser-Gly-Gly-Met-Val-Lys-Ser-Asn-Phe-Val-Pro-Thr-Asn-V al-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2(37AA)SEQ ID No.7H-Val-Pro-Leu-Pro-Ala-Gly-Gly-Gly-Thr-Val-Leu-Thr-Lys-Met-Tyr-Pro-Arg-Gly-Asn-His-Trp-Ala-val-Gly-His-Leu-Met-NH2(27AA)SEQ ID No.8H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH(9AA)SEQ ID No.9H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-Glu-OH(31AA)SEQ ID No.10H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-OH(5AA)SEQ ID No.11H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-OH(5AA)SEQ ID No.12Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2(13AA)SEQ ID No.13H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Asn-Gly-Ala-Glu-Asp-Glu-Ser-Ala-Glu-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu-Phe-OH(39AA)SEQ ID No.14H-Ser-Arg-Thr-His-Arg-His-Ser-Met-Glu-Ile-Arg-Thr-Pro-Asp-Ile-Asn-Pro-Ala-Trp-Tyr-Ala-Ser-Arg-Gly-Ile-Arg-Pro-Val-Gly-Arg-Phe-NH2(31AA)
權(quán)利要求
1.一種美容組合物,其特征在于,所述組合物包括一種生物活化系統(tǒng),該系統(tǒng)包括,第一,水溶液中穩(wěn)定形式的ATP(三磷酸腺苷)與任選的例如Gp4G(四磷酸二鳥(niǎo)苷)或Ap4A(四磷酸二腺苷)等ATP前體,以及第二,至少一種含有最多6個(gè)氨基酸的能模擬皮膚多肽或皮膚蛋白質(zhì)的生物擬肽,或所述皮膚多肽或所述皮膚蛋白質(zhì)的激動(dòng)劑或拮抗劑的生物分子。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述穩(wěn)定形式是ATP鈉鹽,例如二鈉鹽。
3.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述生物擬肽在皮膚的結(jié)構(gòu)性分子或皮膚中存在的酶的生物合成中具有功能性活性。
4.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述生物擬肽在皮膚的信息傳遞中具有功能性活性并且是例如皮膚中存在的激素或細(xì)胞因子的生物學(xué)活性組分。
5.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述生物擬肽選自組氨酸-β-丙氨酰胺肽、R-Gly-Gln-Pro-Arg肽、Tyr-Arg肽、R-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser肽、N-乙酰-Tyr-Arg-R、Lys-Thr-Thr-Lys-Ser肽、Ala-Arg-His-Leu-Phe-Tyr肽(或α-MSH)以及Gly-Gln-Asp-Pro-Val-Lys肽(或抑彈性酶蛋白);其中R是任何一種氨基酸。
6.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述生物擬肽是一種二肽。
7.如權(quán)利要求6所述的組合物,其特征在于,所述二肽對(duì)應(yīng)于分子式Arg-R或His-R,其中R是任何一種氨基酸。
8.如權(quán)利要求6所述的組合物,其特征在于,所述二肽具有分子式為(R-R)n的寡聚物形式,其中1<n<3。
9.如權(quán)利要求8所述的組合物,其特征在于,所述二肽對(duì)應(yīng)于分子式(Arg-Lys)n,其中1<n<3。
10.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述生物擬肽是一種三肽。
11.如權(quán)利要求10所述的組合物,其特征在于,所述三肽是Gly-His-Lys或Gly-Glu-Pro。
12.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述生物擬肽是一種四肽。
13.如權(quán)利要求12所述的組合物,其特征在于,所述四肽是Leu-Pro-Thr-Val或Lys-Thr-Ser-R或Gly-Glu-Pro-R;其中R是任何一種氨基酸。
14.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述生物擬肽是一種五肽,例如Val-Ala-Lys-Leu-R;其中R是任何一種氨基酸。
15.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述生物擬肽是一種六肽。
16.如權(quán)利要求15所述的組合物,其特征在于,所述生物擬肽是Ala-R1-R2-R3-Phe-Try,其中R1、R2和R3各自等于任何一種氨基酸。
17.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述組合物包含一種氨基酸,例如選自肌氨酸、脫羧肌肽和谷氨酰例如N-乙酰谷氨酰胺。
18.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述組合物包含一種蛋白質(zhì),例如選自過(guò)氧化物歧化酶、核酸內(nèi)切酶、光解酶和牛奶的細(xì)胞因子。
19.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述生物活化系統(tǒng)最多構(gòu)成所述組合物重量的10%,優(yōu)選在1%和10-7%之間。
20.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述組合物包含至少一種可由所述生物活化系統(tǒng)增效的美容活性成分。
21.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述組合物是油包水或水包油形式,所述生物活化系統(tǒng)包含在水相中。
22.如權(quán)利要求1所述的組合物,其特征在于,所述生物活化系統(tǒng)、ATP和任選的ATP前體構(gòu)成最多10%的重量,優(yōu)選在0.01%和5%之間。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種美容組合物,其含有的一種生物活性系統(tǒng)包括(i)水溶液穩(wěn)定形式的ATPC(三磷酸腺苷)和任選的ATP前體,如Gp4g(四磷酸二鳥(niǎo)苷)或Ap4A(四磷酸二腺苷);(ii)至少一種含有最多6個(gè)氨基酸的生物擬肽,其能模擬皮膚多肽或皮膚蛋白質(zhì)的作用,或上述多肽或蛋白質(zhì)的激動(dòng)劑或拮抗劑的生物分子。本發(fā)明的組合物采取油包水或水包油乳劑形式,所述生物活性系統(tǒng)包含在水相中。
文檔編號(hào)A61Q19/00GK1731973SQ200380107877
公開(kāi)日2006年2月8日 申請(qǐng)日期2003年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月30日
發(fā)明者吉恩-諾埃爾·托雷爾, G·雷德茲尼爾克 申請(qǐng)人:吉恩-諾埃爾·托雷爾