專利名稱：一種含龜皮膠原組合物的護膚品及其制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種護膚品，具體涉及含膠原組合物的護膚品。
背景技術(shù)：
膠原是一種天然蛋白質(zhì)，廣泛存在于動物的皮膚、骨、軟骨、牙齒、肌腱韌帶和血管中，是結(jié)締組織極重要的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)，起著支撐器官、保護肌體的功能。膠原一般是白色透明、無分支的原纖維，在它的周圍是由粘多糖和其它蛋白質(zhì)構(gòu)成的基質(zhì)。膠原分解后產(chǎn)生的寡肽及氨基酸中均含有羥脯氨酸，這在其它蛋白分解產(chǎn)物中少見。因而測定尿中羥脯氨酸或含羥脯氨酸的短肽的含量，可作為判斷體內(nèi)膠原分解的指標。膠原具有很強的生物活性及生物功能，能參與細胞的遷移、分化和增殖，使骨、腱、軟骨和皮膚具有一定的機械強度。膠原因其弱的抗原性和良好的生物相容性，在燒傷、創(chuàng)傷、眼角膜疾病、美容、矯形、硬組織修復、創(chuàng)面止血等醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域用途廣泛。膠原蛋白是皮膚組織的主要蛋白質(zhì)成分，資源豐富，口感柔和、味道清淡，易于消化，也一直受到食品領(lǐng)域的關(guān)注，在許多食品中被用作功能物質(zhì)和營養(yǎng)成分。
隨著年齡的增長、肌膚的彈性降低、新陳代謝減慢而產(chǎn)生的生物垃圾，在水質(zhì)、空氣的污染、過度的陽光曝曬等自然界中存在的許多氧自由基誘導因子以及飲食不均、食物污染及壓力指數(shù)增加等因素誘導下加速了自由基的產(chǎn)生。大量的自由基蓄積在體內(nèi)臟器和皮膚上，很容易破壞膠原的分解和合成的代謝平衡，使人的自身抵抗力、機體創(chuàng)傷修復下降，膠原蛋白交聯(lián)老化，可影響到心血管、肺組織、腎臟、肝臟等行使正常的生理功能。同時肌膚容易失水干燥，膚色變暗，沒有光澤，出現(xiàn)皺紋。
申請人經(jīng)多年研究和實驗發(fā)現(xiàn)，膠原交聯(lián)、色素產(chǎn)生還有一個更重要的生化機制(Yin，D.，Biochemical basis of lipofuscin，ceroid，and age pigment-like fluorophores.Free Radic.Biol.Med.，1996，21871-888.)，老年色素(色斑)熒光物質(zhì)是人體基本生命過程中多種生化副反應的終產(chǎn)物，主要有與脂過氧化相關(guān)的通過羰基與蛋白質(zhì)氨基交聯(lián)而形成的熒光物質(zhì)；以及不需氧而與糖類有聯(lián)系的糖基化或美拉德反應而形成的熒光糖基化產(chǎn)物等。生物體內(nèi)老年色素的形成是動態(tài)的連續(xù)變化過程，各個生化過程產(chǎn)生的棕黃色老年色素物質(zhì)或游離存在、或結(jié)合到蛋白等其他生物分子上。從本質(zhì)上看，生化副反應損變失修性累積是生理性衰老過程的生化本質(zhì)(Yin，D.，Chen，K.，Theessentiai mechanisms of agingIrreparable damage accumulation of biochemicalside-reactions.Exp.Gerontol.，2005，40455-465).即申請人提出的廣義衰老學說。
本研究室有關(guān)龜膠蛋白質(zhì)組學的最新研究結(jié)果表明，烏龜?shù)拈L壽與其身體組織杰出的抗衰老功效密切相關(guān)。烏龜膠原組織在增齡過程中不發(fā)生與人類皮膚和血管類似的老化交聯(lián)改變則為龜膠抗衰老作用的重要表現(xiàn)之一(吳耀松，廖艷陽，印大中，膠原蛋白在美容中的應用及皮膚衰老機制研究進展，中華現(xiàn)代皮膚科學雜志，2004，1219-224.及向丹，賀慰光，印大中，朱澤瑞，冬眠烏龜體液與組織中可溶性蛋白質(zhì)的SDS電泳及熒光分析，中國科學學報，2004，147-53.)。
當前市場上的護膚品種類繁多，不少品種在皮膚保濕、防皺及抗衰老方面都有一些作用，但保濕時間短，防皺及抗衰老效果不明顯；而人們對護膚品在這方面功效的要求又越來越高，因此研制開發(fā)一種安全、保濕時間較長、防皺及抗衰老效果更為明顯的護膚品是人們的迫切需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種含龜皮膠原組合物的護膚品，以解決當前護膚品存在的上述問題。
實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案為含龜皮膠原組合物的護膚品，包括由油相原料和水相原料組成的基料以及具有一定功效的添加劑，本發(fā)明在添加劑中加入了龜皮膠原，龜皮膠原的加入量以重量百分比計為護膚品的2～8％。含龜皮膠原組合物的護膚品的制備方法，包括油相原料的溶解，水相原料的加入、加熱及滅菌，乳化與稀釋以及含龜皮膠原的添加劑的加入，龜皮膠原的制備方法，依次按下列步驟進行1)前處理龜皮先后用水及去離子水洗凈，洗凈的龜皮用0.5％～10％的稀堿溶液在室溫下浸泡1～5天，稀堿溶液的用量為1～10(升/千克龜皮)，再用去離子水反復沖洗堿處理的龜皮，直到pH 6.5～7.0，2)龜膠的提取把上述洗凈的龜皮加入pH 2.5～5.0的乙酸或中性去離子水，加入量以覆蓋龜皮即可，并添加蛋白酶，蛋白酶與龜皮的重量比為1∶10～1∶100，置于4℃酶解2～3天，過濾，提取重復3次，合并提取液，3)龜膠的純化將上述pH 2.5～5.0或中性的濾液，以3000～10000r/min離心，去渣取離心液，把離心后清液放入透析袋內(nèi)用去離子水透析，每隔3～4小時換水一次，直到用10％的AgNO3溶液檢驗無沉淀生成，此時pH值在6.5～7.0左右。
4)龜膠的酶解將膠原蛋白從透析袋中倒出，用適量水調(diào)節(jié)膠原粘稠度，用20000赫茲的超聲波處理10min，在pH＝5，溫度37℃條件下加1.5％胃蛋白酶與木瓜蛋白酶在恒溫水浴中水解12h，然后在60℃溫度下5min使酶失活，冷凍后于0～15℃保存，待用。
上述的蛋白酶包括胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶等中的至少一種。
下面結(jié)合附圖進一步詳述本發(fā)明


圖1為龜膠與牛皮膠原、豬皮膠原、標準膠原的電泳對照圖；圖中標號1-樣一是牛膠原蛋白； 2-樣二是豬皮膠原蛋白樣；3-樣三是標準I型膠原蛋白； 4-樣四是龜皮的膠原蛋白；5-樣五是龜皮的膠原蛋白圖2為2種膠原多肽的水分殘存率曲線；圖中線型—◆—-水-丙二醇 -豬膠 -龜膠圖3為羥脯氨酸紫外分光吸收值變化表。
龜是長壽動物，龜作為中藥材，主要是用龜板，而龜全身都是寶，隨著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展及中藥材龜板的取用，亦會副產(chǎn)大量的龜皮原料，是用于制作膠原蛋白的很好原料。
本發(fā)明的護膚品中除了加入蘆薈提取物、前花青素與維生素A外，還加入了2～8％的龜皮膠原，龜皮膠原組織在增齡過程中不發(fā)生與人類皮膚和血管類似的老化交聯(lián)改變，因此具有抗衰老作用，還具有長時間的保濕效果。同時加入與龜皮膠原相配伍的蘆薈提取物、前花青素與維生素A能增強護膚品的美白、清除自由基和滋潤的功效。
龜皮膠原蛋白及含龜皮膠原蛋白組合物的護膚品的制備方法如下1、前處理把龜皮先后用水與去離子水洗凈，洗凈的龜皮用0.5％～10％的稀堿溶液在室溫下浸泡處理1～5天，稀堿溶液的用量為1～10(升/千克龜皮)，再用去離子水反復沖洗堿處理的龜皮，直到pH 6.5～7.0。
2、龜膠的提取一般蛋白質(zhì)的提取方法分為堿法、酸法和酶法。酸水解法迅速而徹底，但色氨酸全部被破壞，絲氨酸和酪氨酸部分被破壞，且產(chǎn)品得率低。堿水解法迅速且徹底，但含羥基和巰基的氨基酸，全部被破壞且產(chǎn)生消旋作用(結(jié)構(gòu)變異)。為更好更完全地得到活性蛋白，采用酶解法。將上述洗凈的龜皮加入pH 2.5～5.0的乙酸或中性去離子水，加入量以覆蓋龜皮即可，并添加蛋白酶，蛋白酶與龜皮的重量比為1∶10～1∶100，在4℃酶解2～3天，過濾，龜膠的提取重復3次，合并提取液。
3、龜膠的純化將上述pH 2.5～5.0或中性的濾液，用3000～10000r/min離心機離心，去渣取離心液，把離心后清液放入透析袋內(nèi)透析，用去離子水透析，每隔3～4小時換水一次，直到用10％的AgNO3溶液檢驗無沉淀生成，此時pH值在6.5～7.0左右。
4、龜膠的酶解將膠原蛋白從透析袋中倒出，用適量水調(diào)節(jié)膠原粘稠度，用20000赫茲的超聲波處理10min，在pH＝5，溫度37℃條件下加1.5％胃蛋白酶與木瓜蛋白酶在恒溫水浴中水解12h，然后在60℃溫度下5min使酶失活，冷凍后于0～15℃保存，待用。
本發(fā)明采用的龜皮可以是新鮮的也可冰凍保存的，先用自來水沖洗，再用去離子水沖洗。所用的龜皮有海龜、兩棲類龜、陸龜、旱龜?shù)三攲俚钠つw。
上述的蛋白酶包括胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、微生物酶中至少一種。
從圖1可以看出純化的龜膠與牛皮膠原、豬皮膠原以及標準膠原的純度較高，分子大小、亞基構(gòu)成相似。
5、含龜皮膠原的組合物護膚品作為本發(fā)明化妝品中所用典型的添加劑或賦形劑，包括油相原料和水相原料，其中油相原料有動植物油，礦物油，脂油，蠟，高級醇，脂肪醇，硅油，磷脂，脂肪醇醚，多元醇脂等，水相原料有水溶性聚合物，粘土礦物質(zhì)和凈化水，三乙醇胺等。還可根據(jù)需要加入pH調(diào)節(jié)劑，表面活性劑，抗氧化劑，螯合劑，防腐劑，防霉劑，顏料物和香料等。另外，也可以與具有增白美容作用或皮膚化妝作用的其他活性成分，如血液循環(huán)促進劑，消毒劑，消炎劑，細胞活化劑，維生素類，氨基酸類，潤濕劑和角質(zhì)層分離劑等結(jié)合使用。
本發(fā)明產(chǎn)品進行了動物實驗，用該產(chǎn)品涂布受試動物大白鼠后，觀察大白鼠皮膚的刺激反應、皮膚中羥脯氨酸含量。實驗結(jié)果為受試大白鼠皮膚均無紅腫異常發(fā)生，該產(chǎn)品大白鼠皮膚中羥脯氨酸含量有明顯提高(見圖3)實驗方法大白鼠6只雌雄各半剪去背部鼠毛面積5cm2，用0.1克該產(chǎn)品涂于無毛皮膚每日二次，每次0.1克連續(xù)3個月，觀察有無刺激反應。同時取皮用氯氨T法進行羥脯氨酸含量分析。后進行人體皮膚試驗也沒發(fā)現(xiàn)有任何刺激現(xiàn)象。
保水實驗準確稱取1.0g膠原蛋白多肽，溶于一定量的蒸餾水中，并定容至100ml，然后量取1ml樣液，將其平鋪于直徑為10cm的培養(yǎng)皿中，至于恒溫恒濕的培養(yǎng)箱中，每隔10min測一次樣液的水分殘存率。同時用蒸餾水做對比。結(jié)果表明，龜皮膠原多肽的水分殘存率明顯高于豬膠多肽(見圖2)。
本發(fā)明的化妝品可按需要配制成霜劑、油劑、乳劑、膏劑、保濕乳液、面膜、乳狀洗液等。
本發(fā)明研制的護膚品經(jīng)檢測符合化妝品衛(wèi)生化學標準和微生物標準；經(jīng)動物試驗，對大白鼠皮膚無刺激無過敏反應。產(chǎn)品在大白鼠皮膚中羥脯氨酸含量有明顯提高，保水性也明顯比同類高，因此本發(fā)明研制的護膚品具明顯抑制脂質(zhì)過氧化物的功效并含有皮膚抗交聯(lián)老化的因子，因而具有祛斑、防皺、保濕功能；本發(fā)明制備的龜膠純度高，成本低，具有開發(fā)應用的前景。
具體實施例方式
本護膚品發(fā)明兩個應用實施例。
實施例3巴西龜皮膠原的制備1將冰凍保存的巴西龜皮1千克用15℃的自來水沖洗干凈，去掉鱗片和皮下組織，再用去離子水沖洗干凈。
2用5％的Na2CO3溶液10升浸泡沖洗干凈后的龜皮5天左右，再用水充分清洗堿處理的龜皮，直到呈中性。
3在上述處理的龜皮里加入pH 2.5的乙酸5升，并加入10克胃蛋白酶，于4℃下酶解2天，用紗布過濾，殘渣再次酶解，處理同上，合并濾液。
4用5000r/min的離心機離心，去渣取清液，把離心后清液放入透析袋內(nèi)，用去離子水透析，每3～4小時換一次水，直到用10％的AgNO3溶液檢驗無沉淀生成，此時pH值在6.5～7.0左右。
5龜膠的酶解將膠原蛋白從透析袋中倒出，用適量水調(diào)節(jié)膠原粘稠度，用20000赫茲的超聲波處理10min，在pH＝5，溫度37℃條件下加1.5％胃蛋白酶與木瓜蛋白酶在恒溫水浴中水解12h，然后在60℃溫度下5min使酶失活，冷凍后于0～15℃保存，待用。
實施例4烏龜皮膠原的制備1將新鮮的烏龜皮500克用20℃的自來水沖洗干凈，去掉皮下組織，再用去離子水沖洗干凈。
2用0.5％的NaOH溶液1升浸泡沖洗干凈后的龜皮1天左右，再用水充分清洗堿處理的龜皮，直到呈中性。
3在上述處理的龜皮里加入中性水2.5升，并加入50克木瓜蛋白酶，于4℃下酶解2天，用紗布過濾，殘渣再次酶解，處理同上，合并濾液。
4用10000r/min的離心機離心，去渣取清液，把離心后清液放入透析袋內(nèi)，用去離子水透析，每3～4小時換一次水，直到用10％的AgNO3溶液檢驗無沉淀生成，此時pH值在6.5～7.0左右。
5龜膠的酶解將膠原蛋白從透析袋中倒出，用適量水調(diào)節(jié)膠原粘稠度，用20000赫茲的超聲波處理10min，在pH＝5，溫度37℃條件下加1.5％胃蛋白酶與木瓜蛋白酶在恒溫水浴中水解12h，然后在60℃溫度下5min使酶失活，冷凍后于0～15℃保存，待用。
實施例5龜膠化妝品的制備油相將實施例1或2中油相原料加入到融解鍋中，進行加熱，在不斷攪拌下加熱至70～75℃，使其充分溶化。要避免過度加熱和長時間加熱以防止原料成分氧化變質(zhì)。容易氧化的油分、防腐劑和乳化劑等可在乳化之前加入油相，溶解均勻即可進行乳化。
水相先將30％～50％去離子水加入到融解鍋中，同時加入實施例1或2中水相原料，攪拌下加熱至90～100℃，維持20分鐘滅菌，待用。如配方中含有水溶性聚合物，應單獨配制，將其溶解在水中，在室溫下充分攪拌使其均勻溶脹，防止結(jié)團，如有必要還可進行均質(zhì)，在乳化前加入水相。要避免長時間加熱，以免引起粘度變化。為補充加熱和乳化時揮發(fā)掉的水分，可按配方多加3％～5％的水。
先將上述將水相加入到油相中，進行均質(zhì)乳化攪拌，開始乳化體是W/O型，隨著水相的加入，變型成為O/W型乳化體，稱為濃縮乳化體。
再加入剩余50％～70％未經(jīng)加熱而經(jīng)過紫外線滅菌的去離子水進行稀釋，因為濃縮乳化體的外相是水，所以乳化體的稀釋能夠順利完成，此過程中，乳化體的溫度下降很快。當去離子水加完后，乳化體的溫度能下降到50～60℃。
此時加入防腐劑、香精，緩慢攪拌冷卻到40℃左右時，加入龜皮膠原蛋白、維生素等添加劑，攪拌均勻冷卻至16℃停止，瓶裝，并進行質(zhì)量評定。
權(quán)利要求
1.一種含龜皮膠原組合物的護膚品，包括由油相原料和水相原料組成的基料以及具有一定功效的添加劑，本發(fā)明的特征在于添加劑中加入了龜皮膠原，龜皮膠原的加入量以重量百分比計為護膚品的2～8％。
2.如權(quán)利要求1所述的含龜皮膠原組合物的護膚品的制備方法，包括油相原料的溶解，水相原料的加入、加熱及滅菌，乳化與稀釋以及含龜皮膠原組合物的添加劑的加入，本發(fā)明的特征在于龜皮膠原的制備方法，依次按下列步驟進行1)、前處理龜皮先后用水及去離子水洗凈，洗凈的龜皮用0.5％～10％的稀堿溶液在室溫下浸泡1～5天，稀堿溶液的用量為1～10(升/千克龜皮)，再用去離子水反復沖洗堿處理的龜皮，直到pH6.5～7.0；2)、龜膠的提取把上述洗凈的龜皮加入PH2.5～5.0的乙酸或中性去離子水，加入量以覆蓋龜皮即可，并添加蛋白酶，蛋白酶與龜皮的重量比為1∶10～1∶100，置于4℃酶解2～3天，過濾，龜膠的提取重復3次，合并提取液；3)、龜膠的純化將上述PH2.5～5.0或中性的濾液，以3000～10000r/min離心，去渣取離心液，把離心后清液放入透析袋內(nèi)用去離子水透析，每隔3～4小時換水一次，直到用10％的AgNO3溶液檢驗無沉淀生成，此時pH值在6.5～7.0左右；4)、龜膠的酶解將膠原蛋白從透析袋中倒出，用適量水調(diào)節(jié)膠原粘稠度，用20000赫茲的超聲波處理10min，在pH＝5，溫度37℃條件下加1.5％胃蛋白酶與木瓜蛋白酶在恒溫水浴中水解12h，然后在60℃溫度下5min使酶失活，冷凍后于0～15℃保存，待用。
3.如權(quán)利要求2所述的一種龜膠的制備方法，其特征在于所述的蛋白酶包括胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶等中的至少一種。
全文摘要
本發(fā)明涉及含龜皮膠原組合物的護膚品。發(fā)明在添加劑中加入了龜皮膠原，龜皮膠原的加入量以重量百分比計為護膚品的2～8％。龜皮膠原的制備采用酶解法提取并保留了微量物質(zhì)的天然活性。把提取的龜膠等制成產(chǎn)品配以添加劑制成護膚品。本發(fā)明制備的龜膠純度高，成本低，經(jīng)檢測符合化妝品衛(wèi)生標準和微生物標準；經(jīng)動物試驗，對大白鼠皮膚無刺激無過敏反應。產(chǎn)品對大白鼠皮膚中羥脯氨酸含量有明顯提高，保水性也明顯比同類高。此護膚品具明顯抑制脂質(zhì)過氧化物的功效并含有皮膚抗交聯(lián)老化的因子，也具有祛斑、防皺、保濕功能。
文檔編號A61Q19/00GK1785160SQ200510032379
公開日2006年6月14日 申請日期2005年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月15日
發(fā)明者印大中, 吳耀松, 廖艷陽, 鄧燕, 朱澤瑞, 賀慰光 申請人:湖南師范大學