專利名稱：：一種減壓蒸餾法制備的細(xì)辛揮發(fā)油及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及細(xì)辛揮發(fā)油及其制備方法和用途，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：馬兜鈴科植物北細(xì)辛AsarumheterotropoidesFr.Schmidtvat.mandshuricum(Maxim.)Kitag.的干燥全草。細(xì)辛為常用中藥，具有解熱抗炎，鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜等藥理活性，主要藥效成分為揮發(fā)油。如三種細(xì)辛屬植物揮發(fā)油的鎮(zhèn)痛消炎作用研究，中華中醫(yī)藥雜志(原中國醫(yī)藥學(xué)報)，2006年第21巻第5期；細(xì)辛醚的研究進(jìn)展，中醫(yī)藥學(xué)刊，2006年7月，第24巻第7期，報道了細(xì)辛醚對神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等多種活性。針對細(xì)辛的提取工藝，報道針對揮發(fā)油的提取較多，如正交試驗優(yōu)化細(xì)辛揮發(fā)油提取及包合工藝的研究，中藥材第29巻第5期，2006年5月，報道了細(xì)辛揮發(fā)油的提取工藝取細(xì)辛80.0g，置揮發(fā)油提取器中，加入規(guī)定倍量水，浸泡一定時間，按《中國藥典》2000年版一部，附錄XD揮發(fā)油測定法(甲法)水蒸汽蒸餾規(guī)定時間，讀取揮發(fā)油量。優(yōu)選細(xì)辛提取揮發(fā)油的最佳工藝，發(fā)現(xiàn)浸泡時間、加水量對揮發(fā)油提取量無明顯影響，確定最佳揮發(fā)油提取條件為浸泡時間lh，加水量8倍，提取時間3h。此外，細(xì)辛揮發(fā)油的提取方法還有1、水蒸氣蒸餾法將遼細(xì)辛170g裝入揮發(fā)油提取器中，加水蒸餾6h，收集揮發(fā)油，稱重，萃取率為1.62%;2、微波萃取法將遼細(xì)辛樣品準(zhǔn)確稱量30g，裝入燒瓶中，加入IOOmL石油醚，在輻射時間200s，微波功率720W，溶劑用量300mL的條件下進(jìn)行微波萃取.用30mL石油醚洗滌燒瓶的殘渣，將濾液集中于一錐形瓶中.經(jīng)減壓蒸餾回收石油醚，用無水Na干燥樣品，24h后稱重，萃取率為5.46;3、超臨界C02萃取法準(zhǔn)確稱取遼細(xì)辛170g,裝入1L的萃取罐內(nèi)，超臨界C02萃取萃取壓力16MPa，萃取溫度32C，流量20kg/h;解析釜I壓力7MPa8MPa，溫度60C;解析釜II壓力4MPa6MPa，35°C，萃取時間為80min，每20min收集提取物稱量，萃取率為3.78，儲存于冰箱用GC—MS分析(不同方法提取的遼細(xì)辛揮發(fā)油指紋圖譜分析，測試技術(shù)學(xué)報，2004年第18巻第3期；超臨界C02萃取苕葉細(xì)辛揮發(fā)油，精細(xì)化工，2003年11月，第20巻第11期)。細(xì)辛有毒，現(xiàn)代毒理研究表明，細(xì)辛揮發(fā)油中黃樟醚的毒性較大，具有麻痹動物呼吸中樞的作用，也是致癌物質(zhì)。這一結(jié)果與臨床中細(xì)辛粉末的毒性大于煎劑的毒性相印證隨著煎煮時間的延長，強(qiáng)揮發(fā)性的黃樟醚將逐漸減少。有學(xué)者建議采用長時間煎煮的方法降低細(xì)辛的毒性(李述文，細(xì)辛治療坐骨神經(jīng)痛，中醫(yī)雜志，1993，34(7):391)，近年來還出現(xiàn)了采用精餾法去除黃樟醚的研究[蔡國琴，周俊，徐運；除去細(xì)辛揮發(fā)油中有害物質(zhì)黃樟醚方法的研究，中成藥，1997，19(7):37.]，該文獻(xiàn)報道了通過分段蒸餾,制備的細(xì)辛揮發(fā)油中甲基丁香酚與黃樟醚的含量為42.34%和7.74%;該實驗表明有毒物質(zhì)黃樟醚的揮發(fā)性大于甲基丁香酚，通過本實驗，可以設(shè)計出用蒸餾法棄出細(xì)辛蒸餾液的最先流份來提取細(xì)辛的揮發(fā)性成分的方法，可做到使含細(xì)辛揮發(fā)油的制劑安全有效。但采用該方法制備的揮發(fā)油中黃樟醚的含量仍然較高；有文獻(xiàn)報道采用高效液相色譜技術(shù)對北細(xì)辛的正己烷提取物中強(qiáng)毒性成分黃樟醚進(jìn)行了目標(biāo)去除，并采用霍恩氏法和二甲苯所致小鼠耳殼腫脹試驗對去除前后的提取物進(jìn)行急性毒性及抗炎藥理活性研究(程孟春，等，一種利用制備液相色譜特異性去除北細(xì)辛毒性成分的新方法，世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代現(xiàn)基礎(chǔ)研究，2006年第八巻第二期)，利用長時間蒸煮雖可有效去除黃樟醚，但同時甲基丁香酚等細(xì)辛的主要藥效成分也會被除掉了；用液相色譜技術(shù)去除黃樟醚的成本較高且不能大規(guī)模制備，在生產(chǎn)應(yīng)用中不能廣泛運用。目前文獻(xiàn)中報道的均是將細(xì)辛揮發(fā)油直接提取作為藥用部分，但是由于揮發(fā)油中的成分復(fù)雜，除了有效成分外，還有毒性成分，如黃樟醚，且有效成分中，各種成分發(fā)揮的藥效各異，目前尚沒有有效將細(xì)辛揮發(fā)油進(jìn)一步分離后進(jìn)行藥效監(jiān)控的相關(guān)文獻(xiàn)的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種細(xì)辛揮發(fā)油，本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了該揮發(fā)油的制備方法和用途。本發(fā)明提供了一種細(xì)辛揮發(fā)油，它是由下述方法制備而成取細(xì)辛提取揮發(fā)油粗品，再用減壓蒸餾的方法分離，在壓力為0.06mpa下，從36'C開始，每升高8。C收集一次餾出液，用棕色容量瓶密封，并分別依次標(biāo)上l-7號，8號為未餾出的揮發(fā)油，低溫保存，檢測含有黃樟醚的為7號，棄用；另將余下餾出液與8號揮發(fā)油混合，制備成本發(fā)明揮發(fā)油。所述的低溫保存為-l(TC溫度保存。其中，所述的組別與溫度范圍為l號36-44°C;2號44-52°C;3號52-60°C;4號:60-68。C;5號:68-76。C;6號:90國98。C;7號:98-106°C。8號由于溫度過高，未餾出。其中，含有甲基丁香酚的重量百分含量大于40%;黃樟醚的重量百分含量不高于2%。本發(fā)明還提供了一種制備權(quán)利要求1或2所述的細(xì)辛揮發(fā)油的方法，包括如下步驟a、取細(xì)辛提取揮發(fā)油粗品；b、分離a步驟所述的揮發(fā)油粗品用減壓蒸餾的方法分離，在壓力為0.06mpa下，從36"C開始，每升高8'C收集一次餾出液，用棕色容量瓶密封,并分別依次標(biāo)上l-7號，8號為未餾出的揮發(fā)油，低溫保存，檢測含有黃樟醚的為7號，棄用；另將l-8號餾出液與8號揮發(fā)油混合，制備成本發(fā)明揮發(fā)油。其中所述的低溫保存為-l(TC溫度保存。步驟b所述的組別與溫度范圍為l號36-44°C;2號44-52°C;3號52-60。C;4號60-68。C;5號68-76。C;6號90-98。C;7號98-106°C。8號溫度過高，未餾出。本發(fā)明還提供了細(xì)辛揮發(fā)油在制備鎮(zhèn)痛、抗炎的藥物中的用途。本發(fā)明還提供了細(xì)辛揮發(fā)油在制備免疫調(diào)節(jié)的藥物中的用途。本發(fā)明還提供了細(xì)辛揮發(fā)油在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。本發(fā)明通過減壓蒸餾的方法可以在去除絕大部分黃樟醚的同時保留有效成分，臨床使用更安全，通過將揮發(fā)油中不同組分分離后配伍，藥效更明確、穩(wěn)定，可控性強(qiáng)；且具有成本低，儀器簡單，操作容易，能在生產(chǎn)中推廣，為臨床提供了一種新的選擇。以下通過具體實施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，但并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本發(fā)明作出各種改變和變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍。具體實施例方式實施例l本發(fā)明細(xì)辛揮發(fā)油的提取1、水蒸餾提取揮發(fā)油粗品試藥細(xì)辛購自杭州中藥飲片廠，經(jīng)鑒定為馬兜鈴科植物北細(xì)辛AsarumheterotropoidesFr.Schmidtvat.mandshuricum(Maxim.)Kitag.的干燥全草。方法取細(xì)辛500g，置揮發(fā)油提取器中，加入規(guī)定倍量水，浸泡一定時間，按《中國藥典》2000年版一部，附錄XD揮發(fā)油測定法(甲法)水蒸汽蒸餾規(guī)定時間，讀取揮發(fā)油量。餾出揮發(fā)油用棕色瓶收集，低溫保存(5°C)。除了采用該方法提取揮發(fā)油外，也可以采用目前文獻(xiàn)報道的其它方法提取揮發(fā)油。2、揮發(fā)油的組分分離取45ml揮發(fā)油用減壓蒸餾的方法分離，每隔8'C收集一次，收集到的餾出液用棕色容量瓶密封,其中，77-89。C未能收集到餾出液，已收集的餾出液分<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>3、檢測石英毛細(xì)管柱HP-5MS，50mX0.25mmX0.25tim;程序升溫60。C以8。C/min速度升至120。C，再以l(TC/min速度升至28(rC;載氣He;柱流量0.9ml/min;進(jìn)樣量lul;進(jìn)樣口溫度250。C;接口溫度230。C;柱壓80kPa;分流比50:1。采用黃樟醚及甲基丁香酚兩種標(biāo)品做對照，確定兩種成分的峰位。結(jié)果顯示黃樟醚在7號組分中，甲基丁香酚在未餾出組分中。4揮發(fā)油混合物的制備在98'C前，控制升溫速度，使液體l滴/秒的速度餾出；隨后將溫度控制在98-106。C，持續(xù)蒸餾直至沒有液體流出，棄去該部分，即7號組分；將未餾出的液體和98。C前餾出的混合。實施例2本發(fā)明揮發(fā)油中甲基丁香酚、黃樟醚的含量測定采用氣相色譜歸一化法測定實施例l中甲基丁香酚、黃樟醚在揮發(fā)油中的相對含量，參考文獻(xiàn)王棟，等，北細(xì)辛不同生長期甲基丁香酚和黃樟醚氣相色譜法定量分析，色譜，1997年1月第15巻第1期；所述的方法進(jìn)行測定，結(jié)果實施例1制備的揮發(fā)油中含有甲基丁香酚的重量百分含量為46.3%;黃樟醚的重量百分含量為1.7%。以下通過藥效學(xué)試驗證明本發(fā)明的有益效果。試驗例1遼細(xì)辛揮發(fā)油混合物鎮(zhèn)痛作用研究實驗材料1、藥材來源按實施例1的方法制備的揮發(fā)油。2、動物昆明小鼠，18-22g，由成都實驗動物飼養(yǎng)中心提供。3、藥品與試劑吐溫-80;硫酸嗎啡，北京萌蒂制藥有限公司，每片30mg,批號07042311;4、儀器電子分析天平；智能熱板儀方法1、熱板法取雌性小鼠，1822g，于實驗前l(fā)天放入熱板刺痛儀中，記錄從放入到出現(xiàn)舔后足的時間(即痛閾值)，取痛閾值為530s的合格小鼠60只，按痛閾值隨機(jī)分為3組，每組20只。實驗前禁食16h，不禁水。給藥前再測l次痛閾值，作為正常痛閾值。陽性對照組皮下注射嗎啡10mg/kg;陰性對照組灌胃同體積5%吐溫-80(0.2ml/20g體重)；實驗組分別灌胃O.15ml/kg。每隔30分鐘測定一次反應(yīng)時間，以60s為限，如痛閾超過60s，按60s計。室溫15"C。2、醋酸扭體法取雌性小鼠60只體重1822g，隨機(jī)分為3組(給藥劑量同上)。灌胃給藥30min后腹腔注射0.6。/。醋酸0.2ml，觀察注射后至開始出現(xiàn)扭體的時間，記錄注射后20min內(nèi)每只小鼠的扭體次數(shù)，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗。表1熱板法實驗數(shù)據(jù)(減壓蒸餾)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表2細(xì)辛揮發(fā)油對醋酸所致疼痛產(chǎn)生扭體的次數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結(jié)論:用減壓蒸餾方法制備的細(xì)辛揮發(fā)油具有顯著的鎮(zhèn)痛效果，但起效時間較嗎啡晚。試驗例2細(xì)辛揮發(fā)油消炎實驗實驗材料弗氏完全佐劑取羊毛脂加熱溶解后取30mL置于研缽中,稍冷卻后,邊研磨邊加液體石臘至50ml液體石臘加完，高壓消毒，然后按5mg/ml加入卡介苗。實驗儀器足趾容積測量儀動物模型-大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎原理大鼠佐劑關(guān)節(jié)炎有人的RA(類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)有許多相似性，大鼠腳掌內(nèi)注射弗氏完全佐劑致炎后，35天炎癥達(dá)到高峰，約1112天在非注射部位(后足、前足、耳、鼻、尾巴)出現(xiàn)繼發(fā)炎癥病變，并能下調(diào)IL-1、IL-6、TNFa;上調(diào)IL-2等。實驗方法1、預(yù)防性試驗取50只健康雄性Wistar大鼠，體g^200250g。隨機(jī)分為5組，陰性對照組灌胃2ml5%吐溫-80;揮發(fā)油低、中、高劑量組分別灌胃0.15，0.30,0.60ml/kg;陽性對照組灌胃阿司匹林157mg/kg。給藥前測量足跖體積并劃線，在注射弗氏佐劑前3天開始給藥；第3天給藥同時按每只0.1ml將弗氏佐劑注于各組大鼠左后足墊內(nèi)，弗氏佐劑注射一次。在致炎后18小時測一次足跖體積，后兩天每天測量一次，實驗數(shù)據(jù)用t檢驗處理。2、治療性試驗取50只健康雄性Wistar大鼠，ffi^200250g。隨機(jī)分為5組，陰性對照組灌胃2ml5%吐溫-80;揮發(fā)油小、中、大劑量組分別灌胃0.15,0.30,0.60ml/kg;陽性對照組灌胃阿司匹林157mg/kg。試驗第一日，測正常兩后足跖體積，按每只0.1ml將弗氏佐劑注于各組大鼠左后足墊內(nèi)，弗氏佐劑注射一次，再持續(xù)給藥一周，每天測量足跖體積，并計算實驗前后足體積差及足體積抑制百分率，實驗數(shù)據(jù)用t檢驗處理。3、繼發(fā)病變試驗取50只健康雄性Wistar大鼠，^200~250g。隨機(jī)分為5組，陰性對照組灌胃2ml5Q/。吐溫-80;揮發(fā)油小、中、大劑量組分別灌胃0.15，0.30,0.60ml/kg;陽性對照組灌胃阿司匹林157mg/kg。試驗第一日，測正常兩后足跖體積，按每只0.1ml將弗氏佐劑注于各組大鼠左后足墊內(nèi)，弗氏佐劑注射一次，待出現(xiàn)顯著繼發(fā)性炎癥(一般為第ll日)，再持續(xù)給藥2周，每天測量足跖體積，觀察全身癥狀，并計算實驗前后足體積差及足體積抑制百分率，實驗數(shù)據(jù)用t檢驗處理。實驗結(jié)束后處死動物取血清檢測IL-1、TNF-a。根據(jù)試劑盒說明書用放免法檢測IL-1、TNF-a。表l細(xì)辛揮發(fā)油對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹的抑制作用組別劑量實驗前足體積/ml實驗后足體積/ml足體積差/ml陰性對照一0.62±0.111.34±0.140.72±0.07陽性對照157mgkg—10.58±0.131.01±0.100.44±0.04*細(xì)辛揮發(fā)油除黃樟醚組分(預(yù)防)0.15mlkg一10.66±0.101.25±0.110.58±0.04*0.3mlkg—10.56±0.110.97±0.130.40±0.05*0.6mlkg—10.68±0.121.15±0.100.48±0.05*陰性對照一0.65±0.131.36±0.110.71±0.08陽性對照157mg*kg—10.60±0.121.02±0.110.42±0.05細(xì)辛揮發(fā)油除黃樟醚組分(治療)0.15mlkg-10.67±0.111.20±0.130.53±0.040.3mlkg-10.69±0.131.15±0.120.47±0.030.6mlkg—10.60±0.131.10±0.100.51±0.05陰性對照一0.66±0.151.45±0.110.79±0.07陽性對照157mgkg-10.58±0.111.12±0.110.55±0.05細(xì)辛揮發(fā)油除黃樟醚組分(繼發(fā)病變)0.15mlkg-10.68±0.141.30±0.150.62±0.040.3mlkg—10.57±0.121.12±0.140.53±0.070.6mlkg—10.63±0.111.17±0.110.53±0.04表2細(xì)辛揮發(fā)油對細(xì)胞因子的影響組別劑量IL-1(ng/ml)TNFa(ng/ml)陰性對照—1.90±0.216.23±0.22陽性對照157ragkg—10.69±0.072.78±0.13細(xì)辛揮發(fā)油除黃樟醚組分(預(yù)防)0.15mlkg—10.89±0.122.62±0.210.3mlkg—10.76±0.152.55土0.190.6mlkg-10.77±0.152.65±0.15陰性對照—2.27±0.196.37±0.23陽性對照157mgkg一10.76±0.132.56±0.12細(xì)辛揮發(fā)油除黃樟醚組分(治療)0.15mlkg-10.79±0.102.41±0.130.3mlkg—10.69土0.132.53±0.100.6mlkg—10.73±0.182.45±0.18陰性對照一2.45±0.206.77±0.26陽性對照157mgkg-10.81±0.113.12±0.15細(xì)辛揮發(fā)油除黃樟醚組分(繼發(fā)病變)0.15mlkg-10.88±0.262.93±0.160.3mlkg-10.78±0.222.77±0.120.6mlkg—10.80±0.192.69±0.18結(jié)論:從表1可知，在預(yù)防、治療及關(guān)節(jié)炎繼續(xù)發(fā)病變的實驗中，減壓蒸餾法提取的細(xì)辛揮發(fā)油混合物效果與陽性對照組接近，中劑量組的效果最好，大劑量組的效果反而有所下降。對血清的檢測發(fā)現(xiàn)，揮發(fā)油能明顯下調(diào)血清中IL-l和TNFa。從表2可知，9在治療和繼發(fā)病變實驗中，揮發(fā)油的效果比陽性對照組好；而在預(yù)防實驗中效果接近陽性對照組。中、大劑量組血清中IL-l和TNF(i的量較小劑量組低。上述試驗證明，本發(fā)明細(xì)辛揮發(fā)油具有明顯鎮(zhèn)痛、抗炎、免疫調(diào)節(jié)的作用，用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，藥效明確，且以中劑量的藥效最佳，為臨床提供了一種新的選擇。權(quán)利要求1、細(xì)辛揮發(fā)油，其特征在于它是由下述方法制備而成取細(xì)辛提取揮發(fā)油粗品，再用減壓蒸餾的方法分離，在壓力為0.06mpa下，從36℃開始，每升高8℃收集一次餾出液，用棕色容量瓶密封，并分別依次標(biāo)上1-7號，8號為未餾出的揮發(fā)油，低溫保存，檢測含有黃樟醚的為7號，棄用；另將余下餾出液與8號揮發(fā)油混合，制備成本發(fā)明揮發(fā)油。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的細(xì)辛揮發(fā)油，其特征在于所述的組別與溫度范圍為l號36-44°C;2號44-52°C;3號52-60°C;4號60-68°C;5號68-76。C;6號:90-98。C;7號:98-106。C。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的細(xì)辛揮發(fā)油，其特征在于含有甲基丁香酚的重量百分含量大于40%;黃樟醚的重量百分含量不高于2%。4、一種制備權(quán)利要求l-3任一一項所述的細(xì)辛揮發(fā)油的方法，包括如下步驟a、取細(xì)辛提取揮發(fā)油粗品；b、分離a步驟所述的揮發(fā)油粗品用減壓蒸餾的方法分離，在壓力為0.06mpa下，從36'C開始，每升高8'C收集一次餾出液，用棕色容量瓶密封，并分別依次標(biāo)上l-7號，8號為未餾出的揮發(fā)油，低溫保存，檢測含有黃樟醚的為7號，棄用；另將余下餾出液與8號揮發(fā)油混合，制備成本發(fā)明揮發(fā)油。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的細(xì)辛揮發(fā)油的制備方法，其特征在于步驟b所述的組別與溫度范圍為l號36-44°C;2號44-52°C;3號52-60°C;4號60-68。C;5號:68-76。C;6號:90-98。C;7號:98-106°C。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的細(xì)辛揮發(fā)油的制備方法，其特征在于步驟b所述的低溫保存為-l(TC溫度保存。7、權(quán)利要求1-3任一一項所述的細(xì)辛揮發(fā)油在制備鎮(zhèn)痛、抗炎的藥物中的用途。8、權(quán)利要求1-3任一一項所述的細(xì)辛揮發(fā)油在制備免疫調(diào)節(jié)的藥物中的用途。9、權(quán)利要求l-3任一一項所述的細(xì)辛揮發(fā)油在制備治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物中的用途。全文摘要本發(fā)明提供了一種細(xì)辛揮發(fā)油，它是由下述方法制備而成取細(xì)辛提取揮發(fā)油粗品，再用減壓蒸餾的方法分離，在壓力為0.06MPa下，從36℃開始，每升高8℃收集一次餾出液，用棕色容量瓶密封，并分別標(biāo)上1-7號，8號為未餾出的揮發(fā)油，低溫保存，檢測含有黃樟醚的為7號，棄用；另將余下餾出液與8號揮發(fā)油混合，制備成本發(fā)明揮發(fā)油。本發(fā)明還提供了該揮發(fā)油的用途；本發(fā)明通過減壓蒸餾的方法可以在去除絕大部分黃樟醚的同時保留有效成分，臨床使用更安全，通過將揮發(fā)油中不同組分分離后配伍，藥效更明確、穩(wěn)定，可控性強(qiáng)；且具有成本低，儀器簡單，操作容易，能在生產(chǎn)中推廣，為臨床提供了一種新的選擇。文檔編號C11B3/00GK101530442SQ20091012761公開日2009年9月16日申請日期2009年3月12日優(yōu)先權(quán)日2008年3月12日發(fā)明者偉嚴(yán),許志暉,益郭,蕊黃申請人:四川師范大學(xué)