專利名稱：用于共配制的酶和底物的輸送系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于共輸送酶和底物的液體劑型，其中至少一種酶封裝于聚合物基質(zhì)中。
背景技術(shù)：
在酶/底物系統(tǒng)的輸送中，一般會(huì)引起兩個(gè)問題。第一個(gè)問題是最佳效力依賴于保持合適的酶底物比例。第二個(gè)問題是酶必須與其底物物理分離，直至需要反應(yīng)的時(shí)刻。 克服這些問題的一個(gè)方式是將酶與底物分開包裝，在使用的時(shí)間點(diǎn)再將它們組合。但是，這一方法不方便、復(fù)雜，而且會(huì)導(dǎo)致使用時(shí)的混合誤差。而且還是昂貴的，因?yàn)槊附?jīng)常必需與穩(wěn)定物質(zhì)一起配制?？朔@些問題的另一個(gè)方法是提高干燥的酶和干燥的底物的共混物， 從而在保持合適的酶與底物的比例的同時(shí)達(dá)到物理分離。但是，經(jīng)常需要或是必需提供液體配方用于那些不是設(shè)立為處理粉末、顆?；蚱渌腆w產(chǎn)品的過程中。需要一種備選的方法。在相同的容器中組合酶和底物的共配制的方法將是需要的。這使得生產(chǎn)者能夠控制酶底物比例，在配方成分上節(jié)約成本，而且會(huì)提供給消費(fèi)者簡單、方便而且“即用型”的產(chǎn)品。在某些情況下，在相同的液體劑型中組合酶和底物能夠減輕毒性相關(guān)的情況(例如如果能夠?qū)⑵崦钢薪槲锱c漆酶本身在相同的容器中處理和傳送，能夠?qū)嵸|(zhì)上降低漆酶形成的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn))。Ounichi (美國專利 No. 4,898,781)和 Aronson (美國專利 No. 5，281，355)公開了用于洗衣和家庭護(hù)理應(yīng)用的酶的封裝，得到的產(chǎn)品僅僅包含酶，不包含反應(yīng)性底物。理想的將是生產(chǎn)其中酶與反應(yīng)性底物相分離的包含酶和底物的液體劑型。其中可使用這種共配制的應(yīng)用包括但不限于，酶漂白系統(tǒng)，例如與酯底物一起使用過水解酶(perhydrolase)；和酶染色系統(tǒng)，例如使用漆酶和染料前體底物。
發(fā)明概要本發(fā)明一方面提供了用于共配制的酶和底物的液體輸送系統(tǒng)，其中所述輸送系統(tǒng)是包含酶和該酶底物的組合物，其中所述酶封裝于水溶性的聚合物基質(zhì)中。該底物在與包含該酶的所述聚合物基質(zhì)接觸的基本上非水性的液相(即，小于約5%，小于約或小于約0. 5%的水)中，其中所述聚合物不溶于所述液相中。所述酶在所述聚合物基質(zhì)中保持催化潛力，但是在25°C下至少10天內(nèi)，基本上不與組合物中的底物反應(yīng)。在向該組合物中加入水之后，該聚合物基質(zhì)溶解，釋放該酶，允許發(fā)生與該底物的催化反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，組合物包含選自蛋白酶、纖維素酶、淀粉酶、果膠酶、過水解酶、過氧化物酶、碳水化合物氧化酶、酚氧化酶、角質(zhì)酶(cutinases)、脂肪酶、半纖維素酶、木聚糖酶、甘露聚糖酶、過氧化氫酶和漆酶及其混合物中的一種或多種酶。在一些實(shí)施方式中，組合物包含在相同的聚合物基質(zhì)中封裝的兩種或多種酶。在一些實(shí)施方式中，組合物包含在不同的聚合物基質(zhì)中封裝的兩種或多種酶。在一些實(shí)施方式中，組合物包含在相同的聚合物基質(zhì)中封裝的兩種或多種酶，和封裝于不同的聚合物基質(zhì)中的至少一種酶。在一些實(shí)施方式中，組合物包含至少一種表面活性劑。在一些實(shí)施方式中，聚合物基質(zhì)選自聚乙烯醇、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、瓜爾膠及其衍生物或共聚物。用于此處提供的組合物中的適宜聚合物是酶可以封裝在其中而且不會(huì)溶于水的聚合物。在一些實(shí)施方式中，含酶的聚合物基質(zhì)為懸浮于包含底物的基本上非水性的液體中的顆粒形式。在一個(gè)實(shí)施方式中，這些顆粒通過懸浮助劑保持懸浮。在一些實(shí)施方式中， 液體懸浮液在容器中，其包含足以用于和/或預(yù)期用于在使用酶/底物反應(yīng)的應(yīng)用中單獨(dú)使用(即單次量)的量的酶和底物，其中該容器可以打開來分發(fā)該液體，例如通過打開帽或蓋子。在一些實(shí)施方式中，液體懸浮物在可重封的容器中，該容器包含足以用于和/或預(yù)期用于多次(即，多次劑量)量的酶和底物，這使得可以通過打開和關(guān)閉容器帽、打開和關(guān)閉閥或分發(fā)端口等來重復(fù)分發(fā)該懸浮液。在一些實(shí)施方式中，含酶的聚合物基質(zhì)為密閉的(即密封的)容器形式，例如小袋或囊，而且底物在聚合物容器內(nèi)的基本上非水性的液體中。底物溶于或分散于基本上非水性的液相中，該液相可包括非水性液體(載液)。載液的實(shí)例包括但不限于，二醇類、非離子表面活性劑、乙醇、聚乙二醇、乙酸酯或其混合物。 液體或固體底物可與一種或多種載液組合，而且可以與載液混溶或懸浮于載液中。在一些實(shí)施方式中，載液包含加入其中以形成適于提高底物溶解度和/或降低封裝聚合物溶解性條件的鹽或PH緩沖劑。在一些實(shí)施方式中，載液是酶的底物，例如丙二醇二乙酸酯載液可以作為封裝于聚合物基質(zhì)中的過水解酶的底物，所述聚合物基質(zhì)不溶于丙二醇二乙酸酯， 所述聚合物基質(zhì)例如聚乙烯醇、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮。在許多實(shí)施方式中，該輸送呈現(xiàn)出比缺乏該聚合物的相當(dāng)?shù)妮斔拖到y(tǒng)更高的穩(wěn)定性。在一個(gè)實(shí)施方式，該酶為過水解酶，底物為酯底物，諸如，例如，乙酸酯，例如丙二醇二乙酸酯。在一些實(shí)施方式中，該酯底物為丙二醇二乙酸酯，包含過水解酶的聚合物為懸浮于該丙二醇二乙酸酯中的顆粒形式，或?yàn)閲@丙二醇二乙酸酯的封閉容器的形式，即，丙二醇二乙酸酯封閉于該聚合物容器中。在一些實(shí)施方式中，該酶為過水解酶，底物為酯底物，該組合物進(jìn)一步包括產(chǎn)生過氧化氫的化合物，例如選自過碳酸鈉、過硼酸鈉和過氧化脲(urea hydrogen peroxide)的化合物，而且在向該組合物中加入水之后產(chǎn)生過酸。在一些實(shí)施方式中，過酸選自過乙酸、 過壬酸、過丙酸、過丁酸、過戊酸和過己酸。在一個(gè)實(shí)施方式中，酯底物為丙二醇二乙酸酯， 而且該產(chǎn)生過氧化氫的化合物懸浮在該丙二醇二乙酸酯中。在一些實(shí)施方式中，該酶為過水解酶，該組合物包含用于生產(chǎn)單甘油酯和甘油二酯(例如?；w和醇受體)或山梨聚糖酯(例如?；w和山梨聚糖)的底物。在一些實(shí)施方式中，該酶為過水解酶，該組合物包含產(chǎn)生芳香酯的底物，例如芐基酯(例如?；w和揮發(fā)性醇，例如芐醇)。在一些實(shí)施方式中，該酶為酚氧化酶，例如漆酶，底物為漆酶中介物，例如選自2，2’-連氮基-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸酯)、丁香酰胺和丁香腈(syringonitrile)。本發(fā)明的各方面提供了用于其中使用酶活性的應(yīng)用中的組合物，例如去污劑組合物、織物加工組合物或個(gè)人護(hù)理組合物，其中該組合物包含酶和該酶的底物，其中該酶封裝于水溶性的聚合物基質(zhì)中，而且其中含酶的聚合物基質(zhì)與包含該底物的基本上非水性的液體溶液或懸浮液接觸而且與之不相溶，如本文所述。在另一方面，本發(fā)明提供了包含用于此處描述的共配制酶和底物的輸送系統(tǒng)或包含該輸送系統(tǒng)的組合物，和包裝的試劑盒。在一些實(shí)施方式中，該試劑盒進(jìn)一步包括使用方法說明書，例如去污方法、清潔方法、織物加工方法或個(gè)人護(hù)理方法。在一些實(shí)施方式中，該試劑盒進(jìn)一步包括將該輸送系統(tǒng)合并到配制的組合物中，以用于其中使用該酶對(duì)該底物的催化活性的方法中，例如去污劑組合物、織物加工組合物或個(gè)人護(hù)理組合物。本發(fā)明另一方面提供了一種去污的方法，包括(a)在過氧化氫源的存在下將本文所述含過水解酶的組合物加入到水中并混合，從而產(chǎn)生含水過酸溶液；和(b)將包含污染物的物品與該溶液接觸，從而降低該污染物的濃度。在一些實(shí)施方式中，該污染物包括選自肉毒桿菌毒素、炭疽毒素、蓖麻毒素、鯖魚毒素、雪卡毒素、河豚毒素、霉菌毒素或其組合的毒素。在一些實(shí)施方式中，該污染物包括選自細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲、阮病毒或其組合的病原體。在一些實(shí)施方式中，該物品選自硬表面、紡織品、食物、飼料、服飾品、小地毯、地毯、織物、醫(yī)療器械和獸醫(yī)器械。在一些實(shí)施方式中，水是已滅菌的。在一些實(shí)施方式中，在高溫下進(jìn)行對(duì)要去污的物品的接觸。本發(fā)明另一方面提供了一種漂白織物的方法，包括(a)在過氧化氫源的存在下將本文所述含過水解酶的組合物加入到水中并混合，從而產(chǎn)生含水過酸溶液；和(b)將織物與該溶液在適于使得該織物能可測(cè)增白的條件下接觸一定時(shí)間長度，從而產(chǎn)生漂白的織物。本發(fā)明另一方面提供了一種清潔的方法，包括在加入水的情況下，將包含污漬的物品與本文所述的去污劑組合物接觸，其中該污漬至少一部分被去除。在另一方面，本發(fā)明提供了一種漂白織物的方法，包括在加入水的情況下將織物與本文所述含酚氧化酶(例如漆酶)的組合物在適于使得該織物能可測(cè)增白的條件下接觸一定時(shí)間長度，其中所述組合物包含影響織物增白的中介物，從而產(chǎn)生漂白的織物。在另一方面，本發(fā)明提供了一種改變織物顏色的方法，包括在加入水的情況下將織物與本文所述含酚氧化酶(例如漆酶)的組合物在適于使得該織物能可測(cè)顏色改變的條件下接觸一定時(shí)間長度，其中所述組合物包含在使用的條件下影響織物顏色改變的中介物，從而產(chǎn)生改變顏色的織物。在另一方面，本發(fā)明提供了一種染發(fā)的方法，包括在加入水的情況下將頭發(fā)與本文所述含酚氧化酶(例如漆酶)的組合物在適于使得頭發(fā)能可測(cè)顏色改變的條件下接觸一定時(shí)間長度，其中所述組合物包含在使用的條件下影響頭發(fā)顏色改變的中介物，從而產(chǎn)生改變顏色的頭發(fā)。在另一方面，本發(fā)明提供了一種紙漿或紙漂白和/或去木質(zhì)化的方法，包括在加入水的情況下將紙漿或紙與本文所述含酚氧化酶(例如漆酶)的組合物在適于使得紙漿或紙能可測(cè)顏色改變和/或木質(zhì)素含量改變的條件下接觸一定時(shí)間長度，其中所述組合物包含影響顏色和/或木質(zhì)素含量改變的中介物，從而產(chǎn)生改變顏色和/或木質(zhì)素含量的紙漿或紙。在另一方面，本發(fā)明提供了一種酶活化木材纖維以生產(chǎn)木材復(fù)合物的方法，包括在加入水的情況下將木材與本文所述含酚氧化酶(例如漆酶)的組合物在適于使得木材復(fù)合物產(chǎn)量能可測(cè)改變的條件下接觸一定時(shí)間長度，其中所述組合物包含影響木材復(fù)合物產(chǎn)量改變的中介物，從而產(chǎn)生具有木材纖維結(jié)合改變的木材。在另一方面，本發(fā)明提供了一種處理廢水的方法，包括在加入水的情況下將廢水流與本文所述含酚氧化酶(例如漆酶)的組合物在適于使得廢水中苯酚濃度能可測(cè)降低的條件下接觸一定時(shí)間長度，其中所述組合物包含影響苯酚濃度降低的中介物，從而產(chǎn)生具有降低苯酚含量的廢水流。


圖1原理性描述了過水解酶催化的反應(yīng)。圖2展示了如實(shí)施例3所述的用PVA漆酶盤和ABTS漆酶中介物的酶浙濾實(shí)驗(yàn)結(jié)^ ο圖3展示了如實(shí)施例3所述的用PVA漆酶盤和SA漆酶中介物的酶浙濾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖4展示了如實(shí)施例3所述的用PVA漆酶盤和SN漆酶中介物的酶浙濾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖5展示了在如實(shí)施例3所述的12孔微滴定板實(shí)驗(yàn)中的牛仔布漂白結(jié)果。圖6展示了在如實(shí)施例3所述的耐洗牢度試驗(yàn)儀實(shí)驗(yàn)中的牛仔布漂白和染色結(jié)^ ο
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種用于共配制的酶和底物的輸送系統(tǒng)。此處記載的組合物包含封裝于包含水溶性聚合物的聚合物基質(zhì)中的酶。該組合物還包含該酶的底物。該封裝的酶可懸浮于一種基本上非水性的液體組合物中或以封閉的容器形式圍繞該基本上非水性的液體組合物，該基本上非水性的液體組合物包括底物，或由底物組成、或基本上由底物組成，底物諸如，舉例而言，液體底物、底物溶液、或固體底物顆?；虬孜锏哪z囊的液體懸浮液。 從封裝酶的聚合物釋放酶通過在水中稀釋而觸發(fā)。定義除非另外定義，此處只有的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員所一般理解的含義相同的含義。例如，Singleton和Minsbury，Dictionary of Microbiology and Molecular Biology,第二版，JohnWiley and Sons, NY(1994)；禾口 Hale 禾口 Marham,The Harper CollinsDictionary of Biology, Harper Perennial, NY(1991)為本領(lǐng)域技術(shù)人員提供了許多用于本發(fā)明的術(shù)語的一般性字典。與此處記載的方法和材料相似或等同的任何方法和材料可用于本發(fā)明的實(shí)施中。因此，通過整體參考說明書而更加完全地描述下面定義的術(shù)語。并且，此處使用的單數(shù)術(shù)語“一個(gè)”和“所述”包括其復(fù)數(shù)指代， 除非上下文另外清楚指明。除非另外說明，核酸以5'至3'的方向從左向右書寫，氨基酸序列以氨基端到羧基端的方向從左向右書寫。應(yīng)理解本發(fā)明不限于所描述的特定方法學(xué)、 實(shí)驗(yàn)方案和試劑，因?yàn)楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)使用它們的背景而對(duì)其進(jìn)行改變。通篇說明書中給定的每個(gè)上限值意欲包括每個(gè)更小的數(shù)值限制，相當(dāng)于這樣的更小數(shù)值限制明確記載于本文中。通篇說明書中給定的每個(gè)下限值包括每個(gè)更大的數(shù)值限制，相當(dāng)于這樣的更大數(shù)值限制明確記載于本文中。整個(gè)說明書中每個(gè)數(shù)值范圍包括落入該較寬數(shù)值范圍的每個(gè)較窄數(shù)值范圍，相當(dāng)于這樣的較窄數(shù)值范圍全部明確記載于本文中。此處使用的術(shù)語“酶”是指催化化學(xué)反應(yīng)的任何蛋白質(zhì)。酶的催化功能構(gòu)成其“活性”或“酶活性”。通常根據(jù)酶進(jìn)行的催化反應(yīng)的類型對(duì)酶分類，例如肽鍵的水解。此處使用的術(shù)語“底物”是指酶對(duì)其執(zhí)行其催化活性產(chǎn)生產(chǎn)物的底物(例如化學(xué)化合物)。此處使用的術(shù)語“純化的”和“分離的”是指污染物從樣品的移除和/或物質(zhì)(例如蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞等)，即，從其天然相關(guān)的至少一種成分中移除的物質(zhì)。例如，這些術(shù)語可指實(shí)質(zhì)上或基本上無在天然狀態(tài)下(例如完整的生物系統(tǒng))通常與之伴隨的成分的物質(zhì)。此處使用的術(shù)語“多核苷酸”是指任何長度、任何三維結(jié)構(gòu)的、單鏈或多鏈(例如單鏈、雙鏈、三股螺旋等)的核苷酸的聚合物形式，所述核苷酸包含脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和/或脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸的類似物或修飾形式，包括修飾的核苷酸或堿基或其類似物。由于遺傳密碼是簡并的，多于一個(gè)密碼子可用于編碼一個(gè)具體的氨基酸，本發(fā)明涵蓋編碼具體氨基酸序列的多核苷酸?？梢允褂萌魏晤愋偷男揎椇塑账峄蚝塑账犷愃莆?，只要該多核苷酸在使用條件下保持所需的功能性，包括提高核酸酶抗性的修飾(例如脫氧、2' -Ο-Me、硫代磷酸酯等)。為了檢測(cè)或捕獲還可以加入標(biāo)記物，例如放射性或非放射性標(biāo)記，或錨定物，例如生物素。術(shù)語多核苷酸還包括肽核酸(PNA)。多核苷酸可以天然反生或非天然發(fā)生。術(shù)語“多核苷酸”和“核酸”和“寡核苷酸”在本文中可互換使用。本發(fā)明的多核苷酸可包含RNA、DNA或二者，和/或其修飾形式和/或其類似物。核苷酸的序列可以被非核苷酸成分中斷。一個(gè)或多個(gè)磷酸二酯鍵可以被備選的連接基團(tuán)取代。備選的連接基團(tuán)包括但不限于如下實(shí)施例，其中磷酸被P (0) S ( “硫代酯”)、P (S) S ( “二硫代酯”)、 (0)NR2( “酰胺化物”)、P(0)R、P (O)OR'、⑶或 CH2 ( "formacetal")取代，其中各個(gè) R 或 R， 獨(dú)立地為H，或可選地含有醚(-0-)鍵、芳基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或芳烷基(araldyl)取代或未取代的烷基(1-20個(gè)碳)。多核苷酸的所有鍵不需要都相同。多核苷酸可以是線性的或環(huán)狀的，或包括線性和環(huán)狀部分的組合。此處使用的“多肽，，是指包含氨基酸而且被本領(lǐng)域技術(shù)人員鑒別為蛋白質(zhì)的任何組合物。此處使用常規(guī)單字母或三字母氨基酸編碼。術(shù)語“多肽”和“蛋白質(zhì)”在此可以互換使用，是指任何長度的氨基酸聚合物。該聚合物可以是線性的或分枝的，其可以包含修飾的氨基酸，而且其可以被非氨基酸中斷。該術(shù)語還涵蓋已經(jīng)天然修飾或通過介入修飾的氨基酸聚合物，例如二硫鍵形成、糖基化、脂化、乙?；?、磷酸化或任何其他操作或修飾，例如用標(biāo)記成分綴合。該定義還包括例如包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸類似物(包括例如非天然氨基酸等)以及本領(lǐng)域已知的其他修飾的多肽。如此處使用的，功能性和/或結(jié)構(gòu)性相似的蛋白質(zhì)被認(rèn)為是“相關(guān)蛋白質(zhì)”。在一些實(shí)施方式中，這些蛋白質(zhì)來自不同的屬和/或種，包括生物的綱間差異(例如細(xì)菌蛋白和真菌蛋白)。在另外的實(shí)施方式中，相關(guān)的蛋白質(zhì)來自相同的種。實(shí)際上，本發(fā)明并不是意圖限制此處記載的這些過程、方法和/或組合物為來自任何具體來源的相關(guān)蛋白。此外，術(shù)語“相關(guān)蛋白質(zhì)”涵蓋三級(jí)結(jié)構(gòu)同源物和一級(jí)序列同源物。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，該術(shù)語涵蓋有免疫性交叉反應(yīng)的蛋白質(zhì)。“過水解酶”是指能夠催化導(dǎo)致足夠高量過酸產(chǎn)生的過水解反應(yīng)(perhydrolysis reaction)，所述過酸適用于諸如清潔、漂白、滅菌或消毒用途。一般而言，用于此處所述方法中的過水解酶呈現(xiàn)高的過水解與水解的比例。在一些實(shí)施方式中，過水解酶包括、由下列物質(zhì)組成、或主要由下列物質(zhì)組成SEQ ID N0:1中顯示的恥垢分枝桿菌 (Mycobacteriumsmegmatis)過水解酶氨基酸序列，或其變體或同源物。在一些實(shí)施方式中， 過水解酶包括?；D(zhuǎn)移酶活性，并催化含水酰基轉(zhuǎn)移反應(yīng)。此處使用的術(shù)語“過水解”(“perhydrolyzation” 或“perhydrolyze” 或 "perhydrolysis")是指其中從酯和過氧化氫底物產(chǎn)生過酸的反應(yīng)。在一個(gè)實(shí)施方式中，過水解反應(yīng)用過水解酶催化，例如?；D(zhuǎn)移酶或芳基酯化酶。在一些實(shí)施方式中，過酸通過在過氧化氫(H2O2)存在下的通式為R1C^ = 0)0 的酯底物過水解產(chǎn)生，其中R1和&為相同或不同的有機(jī)部分。在一個(gè)實(shí)施方式中，-0 為-0H。在一個(gè)實(shí)施方式中，-0 被-NH2取代。 在一些實(shí)施方式中，過酸通過羧酸或酰胺底物的過水解產(chǎn)生。此處使用的術(shù)語“過酸”是指衍生自羧酸酯的分子，其已經(jīng)與過氧化氫反應(yīng)以形成能夠轉(zhuǎn)移其氧原子之一的高反應(yīng)性產(chǎn)物，例如通式RC( = 0)00H的有機(jī)酸。正是轉(zhuǎn)移氧原子的能力允許過酸例如過乙酸作為漂白劑發(fā)揮作用。術(shù)語“過氧化氫源”包括過氧化氫以及能夠自發(fā)或酶促產(chǎn)生過氧化氫作為反應(yīng)產(chǎn)物的系統(tǒng)成分。術(shù)語“過水解與水解的比例”是指在限定的條件下和限定的時(shí)間內(nèi)，過水解酶從酯底物酶促產(chǎn)生的過酸的量與酶促產(chǎn)生的酸的量之比例。此處使用的術(shù)語“酰基”是指具有通式RCO-的有機(jī)基團(tuán)，衍生自去除-OH基團(tuán)的有機(jī)酸。通常，?；煤缶Y“_oyl ”命名，例如甲?；菴H3CO-Cl,為從甲酸CH3CO-OH形成
的?；取４颂幨褂玫男g(shù)語“?；笔侵钙渲蟹肿拥娜〈挥悯；〈幕瘜W(xué)轉(zhuǎn)化，或向分子中引入?；倪^程。此處使用的術(shù)語“轉(zhuǎn)移酶”是指催化官能團(tuán)從一個(gè)底物向另一個(gè)底物轉(zhuǎn)移的酶。此處使用的術(shù)語“酶促轉(zhuǎn)化”是指通過將底物或中介物接觸酶，使底物或中介物修飾為產(chǎn)物。在一些實(shí)施方式中，接觸通過將底物或中介物直接暴露至適當(dāng)?shù)拿竵磉M(jìn)行。在另一些實(shí)施方式中，接觸包括將底物或中介物暴露給表達(dá)和/或分泌該酶的有機(jī)體，和/或分別代謝所需底物和/或中介物為所需中介物和/或終產(chǎn)物的有機(jī)體。此處使用的“有效量的酶”是指達(dá)到在具體應(yīng)用(例如用于去污的通過酰基轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)生的過乙酸)中所需活性必須的酶量。本領(lǐng)域技術(shù)人員易于確定這種有效量，而且這種確定基于許多因素，例如使用的特殊酶變體、具體組合物、去污的方法、要去污的物品等。此處使用的涉及物質(zhì)(例如酶)或組合物時(shí)的術(shù)語“穩(wěn)定性”是指在確定環(huán)境條件下保持一定水平的功能活性一定時(shí)間階段的能力。另外，術(shù)語“穩(wěn)定性”在許多更加具體的涉及目的具體環(huán)境條件的上下文中使用。例如，此處使用的“熱穩(wěn)定性”是指物質(zhì)或組合物在升高的溫度下保持其功能(即不降解)的能力。穩(wěn)定性的實(shí)質(zhì)改變顯示為與不存在選定環(huán)境條件下存在的活性相比，要檢測(cè)的功能活性半衰期至少約5%或更多的升高或降低(在大部分實(shí)施方式中，其優(yōu)選升高)。涉及酶時(shí)此處使用的術(shù)語“化學(xué)穩(wěn)定性”是指在對(duì)其活性有副作用的化學(xué)品存在下酶的穩(wěn)定性。在一些實(shí)施方式中，這樣的化學(xué)品包括但不限于，過氧化氫、過酸、陰離子去污劑、陽離子去污劑、非離子去污劑、螯合劑等。但是，這并不意味著本發(fā)明限于任何具體化學(xué)穩(wěn)定性水平，也不限于化學(xué)穩(wěn)定性范圍。此處使用的“pH穩(wěn)定性”是指物質(zhì)(例如酶)或組合物在具體PH下行使功能的能力。多種PH下的穩(wěn)定性可以通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)量或通過此處記載的方法測(cè)量。 PH穩(wěn)定性的實(shí)質(zhì)改變顯示為與最優(yōu)pH下的活性相比，功能活性半衰期至少約5%或更多的升高或降低(在大部分實(shí)施方式中，其優(yōu)選升高)。這并不意味著本發(fā)明限于任何PH穩(wěn)定性水平或pH范圍。此處使用的“氧化穩(wěn)定性”是指物質(zhì)(例如酶)或組合物在氧化條件下(例如存在氧化化學(xué)品的情況下)行使功能的能力。此處使用的“熱穩(wěn)定性”是指蛋白質(zhì)在具體溫度下行使功能的能力。一般而言，大部分酶具有有限范圍的發(fā)揮功能的溫度。除了在溫和溫度范圍(如室溫)工作的酶，還有能夠在非常高或非常低的溫度下工作的酶?？梢杂靡阎椒y(cè)定熱穩(wěn)定性。熱穩(wěn)定性的實(shí)質(zhì)改變顯示為當(dāng)暴露于不同溫度(即較高或較低)時(shí)比酶活性最優(yōu)溫度下的酶活性，突變體的催化活性半衰期至少約5%或更多的升高或降低。然而，本發(fā)明并不是意圖限制此處記載的這些過程、方法和/或組合物為任何溫度穩(wěn)定性水平或溫度范圍。此處使用的“氧化化學(xué)品，，是指具有漂白能力的化學(xué)品。氧化化學(xué)品以適于漂白的量、pH和溫度存在。該術(shù)語包括但不限于過氧化氫和過酸。此處使用的術(shù)語“污染物”是指通過與其他物質(zhì)、材料或物品接觸或相關(guān)聯(lián)而使其不理想、不純和/或不適合使用的任何物質(zhì)。此處使用的術(shù)語“污染的物品”或“需要去污的物品”是接觸或關(guān)聯(lián)污染物和/或需要去污的任何物品或事物。這并不意味著該物品被限定為任何具體事物或類型的物品。 例如，在一些實(shí)施方式中，該物品為硬表面，而在另一些實(shí)施方式中，該物品為衣物制品。在又一些實(shí)施方式中，該物品為織物。在又一些實(shí)施方式中，該物品用于醫(yī)藥和/或獸醫(yī)領(lǐng)域。在一些實(shí)施方式中，該物品是外科器械。在另一些實(shí)施方式中，該物品用于運(yùn)輸(例如公路、跑道、軌道、火車、汽車、飛機(jī)、輪船等)。在另一些實(shí)施方式中，該術(shù)語涉及食物和/或食品，包括但不限于肉、肉副產(chǎn)品、魚、海產(chǎn)品、蔬菜、水果、奶制品、谷物、烘烤產(chǎn)品、青貯飼料、干草、草料等。實(shí)際上，該術(shù)語意圖涵蓋適于用本發(fā)明提供的方法和組合物去污的任何物品。此處適于的術(shù)語“去污”是指從污染的物品去除基本上全部或全部的污染物。在一些實(shí)施方式中，去污涵蓋消毒，而在其他實(shí)施方式中，該術(shù)語涵蓋滅菌。但是，這并不意味著該術(shù)語限定于這些實(shí)施方式，因?yàn)樵撔g(shù)語意在涵蓋無生命污染物以及微生物(例如細(xì)菌、真菌、病毒、阮病毒等)污染物的去除。此處使用的術(shù)語“消毒”是指從表面上去除污染物，以及抑制或殺死物品表面上的微生物。不應(yīng)理解為本發(fā)明限于任何具體的表面、物品或要除去的污染物或微生物。此處使用的使用“滅菌”是指殺死表面上的所有微生物有機(jī)體。此處使用的術(shù)語“殺孢子(sporicidal) ”是指殺死微生物孢子，包括但不限于真菌和細(xì)菌的孢子。該術(shù)語涵蓋有效防止孢子萌芽的組合物，以及使得孢子完全不能存活的組合物。此處使用的術(shù)語“殺細(xì)菌的”、“殺真菌的”和“殺病毒的”分別是指殺死細(xì)菌、真菌和病毒的組合物。術(shù)語“微生物殺滅劑”是指抑制任何微生物生長和/或復(fù)制的組合物，包括但不限于細(xì)菌、真菌、病毒、原生動(dòng)物、立克次氏體等。此處使用的術(shù)語“制細(xì)菌的”、“制真菌的”和“制病毒的”分別是指抑制細(xì)菌、真菌和病毒生長和/或復(fù)制的組合物。術(shù)語“制微生物的”是指抑制任何微生物生長和/或復(fù)制的組合物，包括但不限于細(xì)菌、真菌、病毒、原生動(dòng)物、立克次氏體等。此處使用的術(shù)語“清潔組合物”是指用于從待清潔的物品(例如紡織品、餐具、隱形眼鏡、其他固體物質(zhì)、頭發(fā)(香波)、皮膚(肥皂和洗面奶)、牙齒(漱口水、牙膏)等)去除不想要的化合物的組合物。該術(shù)語還涉及適用于清潔、漂白、消毒和/或滅菌任何物體和 /或表面的任何組合物。該術(shù)語意在包括但不限于去污劑組合物(例如液體和/或固體衣物去污劑和精細(xì)織物去污劑；硬表面清潔配方，例如用于玻璃、木、陶瓷和金屬柜臺(tái)上面和窗口的清潔配方；地毯清潔劑；烤箱清潔劑；織物增鮮劑；織物柔順劑；和紡織品和衣物預(yù)洗劑(pre-spotters)，以及餐具去污劑)。該術(shù)語進(jìn)一步涵蓋用于選定的具體類型的所需清潔組合物和產(chǎn)品形式(例如液體、凝膠、顆?；驀婌F組合物)的任何材料/化合物，只要該組合物與?；D(zhuǎn)移酶、過氧化氫源、PGDA和用于該組合物的任何其他酶或底物相容。清潔組合物材料的具體選擇易于通過考慮要清潔的表面、物品或織物，以及使用過程中的清潔條件所需的組合物形式來進(jìn)行。實(shí)際上，除非另外指明，此處使用的術(shù)語清潔組合物包括 粒狀或粉末形式的通用的或強(qiáng)效洗滌劑，特別是清潔去污劑；液體、凝膠或糊形式的通用洗滌劑，特別是所謂的強(qiáng)效液體型(HDL)；液體精細(xì)織物去污劑；餐具手洗洗滌劑或輕效型餐具洗滌劑，特別是那些高泡沫型的；機(jī)用餐具洗滌劑，包括家用和公共機(jī)構(gòu)用的各種片劑、 粒狀、液體和漂洗助劑類型；液體清潔和消毒劑，包括抗菌洗手型、清潔棒、漱口藥、假牙清潔劑、汽車或地毯香波、浴室清潔劑；洗發(fā)水和洗發(fā)劑；沐浴凝膠和泡沫浴和金屬清潔劑； 以及清潔助劑，例如漂白添加劑和“污漬棒”(stain-stick)或預(yù)處理型助劑。此處使用的術(shù)語“去污劑組合物”和“去污劑配方”是指要用于用來清潔弄臟的物品的洗滌介質(zhì)中的混合物。在一些實(shí)施方式中，該術(shù)語涉及紡織品和/或衣物洗滌(例如衣物去污劑)。在備選的實(shí)施方式中，該術(shù)語涉及其他去污劑，例如那些用于清潔盤碟、餐具等等的去污劑(例如餐具去污劑)。這并不意味著本發(fā)明限于任何具體的去污劑配方或組合物。實(shí)際上，除了過水解酶，例如?；D(zhuǎn)移酶，該術(shù)語意在涵蓋包含表面活性劑、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、氧化還原酶、助洗劑、漂白劑、漂白活化劑、上藍(lán)劑和熒光染料、結(jié)塊抑制劑、掩蔽劑、 酶激活劑、抗氧化劑和增溶劑的去污劑。此處使用的術(shù)語“酶相容的”，當(dāng)用于清潔組合物材料的上下文中時(shí)，是指不會(huì)降低酶活性至該相關(guān)酶不能如正常使用條件下所預(yù)期那般有效的材料。此處使用的“衍生物”是指來自親本蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)，通過加入一個(gè)或多個(gè)氨基酸至C末端或N末端或兩端都加、在氨基酸序列的一個(gè)或多個(gè)不同位點(diǎn)處一個(gè)或多個(gè)氨基酸的取代、和/或在氨基酸序列的C端和N端的某一端或兩端和/或者在氨基酸序列的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)刪除一個(gè)或多個(gè)氨基酸，和/或在氨基酸序列的一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)插入一個(gè)或多個(gè)氨基酸。蛋白質(zhì)衍生物的制備經(jīng)常通過修飾編碼天然蛋白的DNA序列、該修飾的DNA序列向適宜宿主中的轉(zhuǎn)化和該修飾的DNA序列的表達(dá)以形成該衍生的蛋白質(zhì)來達(dá)成。相關(guān)的(和衍生的)蛋白質(zhì)涵蓋“變體”蛋白質(zhì)。變體蛋白質(zhì)會(huì)有少數(shù)幾個(gè)氨基酸殘基不同于親本蛋白質(zhì)，和/或變體蛋白質(zhì)之間也會(huì)有少數(shù)幾個(gè)氨基酸殘基相互不同。在一些實(shí)施方式中，不同的氨基酸殘基的數(shù)量是約1、2、3、4、5、10、20、25、30、35、40、45或50 中的任一種。在一些實(shí)施方式中，變體有約1至約10個(gè)氨基酸不同。在一些實(shí)施方式中，相關(guān)蛋白質(zhì)，例如變體蛋白質(zhì)，包括至少約35%、40^35%、 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%、99% 或 99. 5%氨基酸序列同一性中的任一種。此處使用的術(shù)語“類似序列”是指提供與參照蛋白質(zhì)相似功能、三級(jí)結(jié)構(gòu)和/或保守殘基的蛋白質(zhì)中的多肽序列。例如，在包含α-螺旋或β-折疊結(jié)構(gòu)的表位區(qū)域中，在類似序列中取代的氨基酸保持了相同的結(jié)構(gòu)元件。在一些實(shí)施方式中，提供類似的序列，其導(dǎo)致變體酶呈現(xiàn)與該變體所來源于的親本蛋白質(zhì)相似或提高的功能。此處使用的“同源蛋白質(zhì)”是指具有與參照蛋白質(zhì)(例如不同來源的過水解酶)相似功能(例如酶活性)和/或結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)(例如過水解酶)。同源物可來自進(jìn)化相關(guān)或不相關(guān)的物種。在一些實(shí)施方式中，同源物具有與參照蛋白相似的四級(jí)、三級(jí)和/或一級(jí)結(jié)構(gòu)，從而潛在地允許用同源物的類似區(qū)段或片段取代參照蛋白的區(qū)段或片段，而與用來自非同源蛋白的序列取代該區(qū)段或片段相比，具有對(duì)參照蛋白結(jié)構(gòu)和/或功能降低的破壞。此處使用的“野生型”、“天然的”和“天然發(fā)生的”蛋白質(zhì)是那些在大自然中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)。術(shù)語“野生型序列”是指在大自然中發(fā)現(xiàn)或天然發(fā)生的氨基酸或核酸序列。在一些實(shí)施方式中，野生型序列是蛋白質(zhì)工程方案(例如變體蛋白質(zhì)的生產(chǎn))的起始點(diǎn)。此處使用的術(shù)語“漂白”是指處理諸如纖維、紗線、紡織品、衣服或無紡布材料等織物材料以產(chǎn)生顏色更淺的所述纖維、紗線、紡織品、衣服或無紡布材料的方法。例如，此處使用的漂白是指通過去除、修飾或掩蔽纖維或其他織物材料中的生色化合物來對(duì)織物增白。 所以，“漂白”是指在適宜的PH和溫度條件下處理織物足夠長的時(shí)間，以有效增亮(即增白) 織物。可以用化學(xué)漂白劑和/或酶促產(chǎn)生的漂白劑進(jìn)行漂白。適宜漂白劑的例子包括但不限于C102、H2O2、過酸、NO2等。此處使用的術(shù)語“漂白劑”涵蓋能夠漂白織物的任何部分?？赡苄枰准せ顒?用于此處記載的過程、方法和組合物適宜化學(xué)漂白劑的實(shí)例為過氧化鈉、過硼酸鈉、高錳酸鉀和過酸。在一些方面，H2O2當(dāng)在原位已由酶促生成時(shí)，可以認(rèn)為是化學(xué)漂白劑?！盎瘜W(xué)漂白劑組合物”包含一種或多種化學(xué)漂白劑。術(shù)語“酶促漂白系統(tǒng)”或“酶促漂白組合物”包含能夠酶促產(chǎn)生漂白劑的一種或多種酶和底物。例如，酶促漂白系統(tǒng)可包含過水解酶、酯底物和過氧化氫源，用于生成過酸漂白劑。涉及含過水解酶的酶促漂白系統(tǒng)的“酯底物”是指包含酯鍵的過水解酶底物。包含脂肪族和/或芳香族羧酸和醇的酯可作為底物與過水解酶一起使用。在一些實(shí)施方式中， 該酯源為乙酸酯。在一些實(shí)施方式中，該酯源選自一種或多種丙二醇二乙酸酯、乙二醇二乙酸酯、甘油三乙酸酯、乙酸乙酯和三丁酸甘油酯。在一些實(shí)施方式中，酯源選自一種或多種下列酸的酯甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、辛酸、壬酸、癸酸、十二烷酸、十四酸、棕櫚酸、硬脂酸和油酸。
術(shù)語“過氧化氫源”是指從外源性(即外部或外面)來源加入到織物處理浴中的過氧化氫，或通過生成過氧化氫的氧化酶對(duì)底物的作用而原位生成的過氧化氫。“過氧化氫源”包括過氧化氫以及能夠自發(fā)或酶促產(chǎn)生過氧化氫作為反應(yīng)產(chǎn)物的系統(tǒng)成分。術(shù)語“產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶”是指催化涉及分子氧(O2)作為電子受體的氧化/ 還原反應(yīng)的酶。在這樣的反應(yīng)中，氧被還原成水(H2O)或過氧化氫(H2O2)。適用于此處的氧化酶為在其底物上產(chǎn)生過氧化氫(與水相對(duì))的氧化酶。產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶和適用于此處的其底物的例子為葡萄糖氧化酶和葡萄糖。其他可用于產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶包括醇氧化酶、乙二醇氧化酶、甘油氧化酶、氨基酸氧化酶等。在一些實(shí)施方式中，該產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶為碳水化合物氧化酶。此處使用的“織物，，是指纖維、紗線、紡織品、衣物和無紡布。該術(shù)語涵蓋從天然、 合成(例如制造的)和各種天然和合成混合物制備的織物。所以，術(shù)語“織物”涉及未加工和加工過的纖維、紗線、紡織過或編織的紡織品、無紡布和衣物。在一些實(shí)施方式中，織物包含纖維素。術(shù)語“需要加工的織物”是指需要退漿、煮練、漂白和/或染色的織物，或可能需要其他處理例如生物拋光、生物石洗和/或軟化的織物。術(shù)語“需要漂白的織物”是指不參考其他可能的處理的條件下需要漂白的織物。這些織物可以已經(jīng)進(jìn)行過其他處理，也可以沒有進(jìn)行過其他處理。同樣，這些織物可以需要或不需要后續(xù)處理。“紡織品”是指纖維和/或紗線的經(jīng)制造的裝配品(manufacturedassembly)，其相對(duì)于其厚度具有實(shí)質(zhì)表面積和足夠的內(nèi)聚力以產(chǎn)生可用于機(jī)械強(qiáng)度的裝配品。此處使用的術(shù)語“純化的”和“分離的”是指污染物從樣品的移除和/或從其天然相關(guān)的至少一種成分中移除的物質(zhì)(例如蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞等)。例如，這些術(shù)語可指實(shí)質(zhì)上或基本上無在天然狀態(tài)下通常與之伴隨的各成分的物質(zhì)，例如，完整的生物系統(tǒng)。術(shù)語“上漿”或“漿料”(size或sizing)是指用于織物工業(yè)中通過提高紗線抗磨損性和強(qiáng)度來改善織造性能的化合物。漿料通常由例如淀粉或淀粉樣化合物制成。此處使用的術(shù)語“退漿”是指從織物消除漿料(通常是淀粉)的過程，通常在進(jìn)行具體的修整、染色或漂白之前進(jìn)行。此處使用的“退漿酶”是指用于酶促去除漿料的酶。示例性的酶為淀粉酶、纖維素酶和甘露聚糖酶。此處使用的術(shù)語“煮練”是指去除雜質(zhì)，例如棉織品或其他織物中天然發(fā)現(xiàn)的大部分非纖維素化合物(例如果膠、蛋白質(zhì)、蠟質(zhì)、籽屑等)。除了天然的非纖維素雜質(zhì)，在一些實(shí)施方式中，煮練可以去除制造過程中引入的殘余物質(zhì)，例如紡紗、絡(luò)筒或上漿潤滑劑。在一些實(shí)施方式中，可以用漂白來從織物去除雜質(zhì)。術(shù)語“生物煮練酶(bioscouring enzyme) ”是指能夠去除至少一部分棉織品或其他織物中發(fā)現(xiàn)的雜質(zhì)的酶。術(shù)語“籽屑”是指即使在機(jī)械軋棉過程之后仍然存在于纖維上的諸如棉籽碎片、樹葉、梗和其他植株部分等不需要的雜質(zhì)。此處使用的術(shù)語“本色的(英文發(fā)音同gray) ”織物是指生產(chǎn)出來之后沒有進(jìn)行任何漂白、染色或修整處理的織物。例如，還沒有修整(退漿、煮練等)、漂白或染色的從織布機(jī)上取下的任何機(jī)織或編織的織品都可以稱為本色的織物。此處使用的術(shù)語“染色”是指向例如織物施加顏色，尤其是通過浸入到染色溶液中進(jìn)行的。術(shù)語“非棉纖維素的”纖維、紗線或織品是指主要包括纖維素類成分而不是棉的纖維、紗線或織品。這類成分的實(shí)例包括亞麻、苧麻、黃麻、亞麻、人造纖維、萊賽爾(lyocell)、 乙酸纖維素和源自非棉纖維素的其他相似成分。此處使用的術(shù)語“果膠酸裂合酶”是指一種類型的果膠酶?！肮z酶”表示根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)限定的果膠酶，其中果膠酶是一組裂解果膠底物(主要是聚(l，4-a-D-半乳糖醛酸酐)及其衍生物)糖苷鍵的酶(參見Sakai等人(1993)Advances in Applied Microbiology 39:213-294)。優(yōu)選地，此處使用的果膠酶是通過反式消除催化果膠酸(也叫聚半乳糖醛酸)中的α-1，4-糖苷鍵的隨機(jī)裂解的果膠酶，例如聚半乳糖醛酸酯裂解酶 (EC4. 2. 2. 2) (PGL)類，也叫做聚(1，4-α-D-半乳糖醛酸酐)裂解酶，也叫果膠酸裂合酶。術(shù)語“果膠”表示果膠酸酯、聚半乳糖醛酸和可以酯化至較高或較低程度的果膠。此處使用的術(shù)語“角質(zhì)酶”是指用于織物加工的植物、細(xì)菌或真菌來源的酶。角質(zhì)酶是能夠水解底物角質(zhì)的脂解酶。角質(zhì)酶能夠分解在加工(例如煮練)織物中需要去除的脂肪酸酯和其他油類成分。“角質(zhì)酶”表示具有顯著的植物角質(zhì)水解活性的酶。具體而言， 角質(zhì)酶對(duì)植物葉上發(fā)現(xiàn)的生物聚酯聚合物角質(zhì)具有水解活性。適當(dāng)?shù)慕琴|(zhì)酶可以從許多不同的植物、真菌和細(xì)菌來源分離。此處使用的術(shù)語“α-淀粉酶”是指裂解淀粉的α-(1-4)糖苷鍵以產(chǎn)生麥芽糖分子(α-葡萄糖的二糖)的酶。淀粉酶是發(fā)現(xiàn)于唾液中的消化酶，也由許多植物產(chǎn)生。淀粉酶分解長鏈碳水化合物(例如淀粉)為較小的單元?！把趸€(wěn)定的” α-淀粉酶與非氧化穩(wěn)定的α-淀粉酶相比，特別是與該氧化穩(wěn)定的α-淀粉酶所源自的非氧化穩(wěn)定的α-淀粉酶相比，是抗氧化手段降解的α-淀粉酶。術(shù)語“蛋白酶”表示源自微生物(例如，真菌、細(xì)菌)或源自植物或動(dòng)物的蛋白質(zhì)或多肽的蛋白質(zhì)或多肽結(jié)構(gòu)域，而且具有催化裂解蛋白質(zhì)碳水化合物骨架一個(gè)或多個(gè)不同位點(diǎn)處肽鍵的能力。此處使用的“個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品”是指用于頭發(fā)、皮膚、頭皮和牙齒的清潔、漂白和/或消毒的產(chǎn)品，包括但不限于，香波、身體乳液、沐浴露、局部濕潤劑、牙膏和/或其他局部清潔劑。在一些實(shí)施方式中，這些產(chǎn)品用在人身上，而在其他實(shí)施方式中，這些產(chǎn)品可用于非人的動(dòng)物上，例如在獸醫(yī)應(yīng)用中。此處使用的“懸浮液”或“分散液”是指其中不連續(xù)的固體相分散到連續(xù)的液相中的兩相系統(tǒng)。此處使用的“懸浮助劑”是指加入到液體組合物中來防止或減少懸浮顆粒的沉降或漂浮的物質(zhì)。懸浮助劑通常通過增加載液的粘度或屈服應(yīng)力來發(fā)揮作用。具有有效屈服應(yīng)力的流體會(huì)僅僅當(dāng)施加大于屈服應(yīng)力的應(yīng)力時(shí)才會(huì)流動(dòng)，從而呈現(xiàn)剪切變稀和搖溶行為。有效的懸浮劑通常通過形成弱相互作用力橋接的顆粒或纖維的可逆網(wǎng)絡(luò)來發(fā)揮作用。懸浮劑的實(shí)例包括但不限于黃原膠和微纖纖維素，例如CELLULON (CP Kelco, SanDiego，CA)。此處使用的“封裝的”是指包含在周圍材料中的物質(zhì)。這可以包括本領(lǐng)域已經(jīng)記
14載的核 / 殼或基質(zhì)形態(tài)(參見例如"Microencapsulation，，Kirk-0thmer Encyclopedia of Chemical Technology,2005)。此處使用的“可混溶的”是指一種液體能與另一種液體以兩種液體的指定比例混合而不會(huì)分相。此處使用的“基質(zhì)”是指其中物質(zhì)被包封或包埋的材料。此處使用的“生物膜”是指包埋在細(xì)胞外聚合物基質(zhì)和各種有機(jī)和無機(jī)化合物中的微生物的集合。雖然一些生物膜可能含有單個(gè)物種的微生物，通常生物膜不僅包括不同物種的微生物，還包括不同類型的微生物。例如藻類、原生動(dòng)物、細(xì)菌及其他。酶/底物共輸送系統(tǒng)本發(fā)明提供了一種用于共配制的酶和底物的液體輸送系統(tǒng)，其中至少一種酶包封在聚合物基質(zhì)中并與該酶的底物一起配制。該底物位于聚合物基質(zhì)接觸的基本上非水性的液相中，其中該聚合物基質(zhì)不溶于該液相。包含酶的聚合物基質(zhì)可懸浮在包含底物的液相中或圍繞在包含底物的液相周圍。在該輸送系統(tǒng)中酶和底物不接觸，其中酶催化反應(yīng)不發(fā)生。當(dāng)接觸水時(shí)，聚合物基質(zhì)溶于水而且在水中酶具有對(duì)底物的催化活性，催化反應(yīng)發(fā)生。 組合物中可包括一種或多種酶，其中至少一種酶包封在聚合物基質(zhì)中。在一些實(shí)施方式中， 該輸送系統(tǒng)包含兩種或多種酶，包封在相同的聚合物基質(zhì)中或者不同的聚合物基質(zhì)中，而且該輸送系統(tǒng)包含這些酶中至少一種酶的底物。底物可溶于基本上非水性載液或懸浮基本上非水性載液中，聚合物基質(zhì)不溶于基本上非水性載液。選擇載液和聚合物以便聚合物基質(zhì)在儲(chǔ)存過程中保持固體形式而且不會(huì)溶脹。這可以通過例如低水含量、可逆交聯(lián)和/或低儲(chǔ)存溫度來達(dá)到。在一些實(shí)施方式中， 該液相包含少于約5 %、少于約1 %或少于約0. 5%的水，例如約4%，3 %，2%，1 %，0. 9%， 0. 8%,0. 7%,0. 6%,0. 5%,0. 4%,0. 3%,0. 2%或 0. 的水。輸送系統(tǒng)儲(chǔ)存過程中包封的酶基本上不與液相中的底物反應(yīng)。在一些實(shí)施方式中，在約25°C儲(chǔ)存至少約10天、2周、1月、2月、3月或更長期間內(nèi)，液相中少于約20%， 10%，5^,1%或0.5%的底物被轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。在一些實(shí)施方式中，在約37°C儲(chǔ)存至少約10 天、2周、1月、2月、3月或更長期間內(nèi)，液相中少于約20 %，10 %，5 %，1 %或0. 5 %的底物被轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。在一些實(shí)施方式中，在約50°C儲(chǔ)存至少約10天、2周、1月、2月、3月或更長期間內(nèi)，液相中少于約20 %，10 %，5 %，1 %或0. 5 %的底物被轉(zhuǎn)化成產(chǎn)物。在本文所述的輸送系統(tǒng)中，包封的酶在聚合物基質(zhì)中保持至少約50 %，60 %， 70 %, 80 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % 或基本上全部的初始催化潛力，可在接觸水時(shí)釋放，但是在25°C，37°C或50°C至少約10天、2周、1月、2月、3月或更長期間內(nèi)基本上不與該底物反應(yīng)。聚合物基質(zhì)該聚合物基質(zhì)包括、由下列物質(zhì)組成或基本上由下列物質(zhì)組成不溶于包含底物的載液但是溶于水的聚合物。在一些實(shí)施方式中，該聚合物基質(zhì)包括、由下列物質(zhì)組成或基本上由下列物質(zhì)組成聚乙烯醇、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、瓜爾膠、或其衍生物或共聚物、或其混合物。在一些實(shí)施方式中，聚合物基質(zhì)中包含一種或多種填料或增量劑(如淀粉，糖，陶土，滑石粉，碳酸鈣，二氧化鈦，纖維素纖維)，增塑劑(如甘油，山梨醇，丙二醇)，助溶劑，粘合劑，膨松劑(例如，聚丙烯酸酯，交聯(lián)羧甲纖維素鈉，甘醇酸淀粉鈉，低取代羥丙基纖維素，半乳甘露聚糖，Water-Lok, ZapLoc)，或脫模劑。在一些實(shí)施方式中，該聚合物為帶負(fù)電荷的聚合物，如包括葡糖醛酸和/或半乳糖醛酸殘基的雜多糖。這樣的多糖例如可包括產(chǎn)生這些酶本身的有機(jī)體生產(chǎn)的材料，而且可以作為污染物保持在部分純化的酶制品中，即使這些酶制品沒有這些污染物，它們本身也有有用的酶活性?？蛇x的或另外，這樣的多糖可以以占該料漿至多約1_5WT%或更多的量單獨(dú)加入。這樣的量相當(dāng)于那些酶本身的量。在一些實(shí)施方式中，這些多糖在噴霧干燥之前存在(或加入)。其他示例性聚合物為阿拉伯半乳聚糖、木糖半乳聚糖(xylogalalctans)， 一般是酸性聚糖。在一些實(shí)施方式中，該聚合物基質(zhì)包括蛋白、肽或其衍生物。一些或全部蛋白或肽可存在于發(fā)酵液、細(xì)胞培養(yǎng)基或部分純化的蛋白制品中，而且可以作為污染物保持在部分純化的酶制品中，這些酶制品即使不含這些污染物但本身具有有用的酶活性?？蛇x的或另外，這樣的多糖可以以占該料漿至多約1_5WT%或更多的量單獨(dú)加入。這樣的量相當(dāng)于那些酶本身的量。在多種實(shí)施方式中，酶(和可選擇底物)用包括但不限于溶劑流延(solvent casting method)，噴霧干燥，冷凍干燥/凍干，流化床噴涂，流化床結(jié)塊(fluid-bed agglomeration)，噴霧冷卻，濕法造粒，滾筒造粒，高剪切造粒，擠出，鍋包衣法(pan coating)，凝聚，凝膠和霧化的技術(shù)包封于聚合物中在具體實(shí)施方式
中，使用噴霧干燥。通常，包封于聚合物基質(zhì)中的酶小于50wt %。在多種實(shí)施方式中，包封于聚合物基質(zhì)中的酶量為約0. 01wt%至約50wt%、約0. lwt%至約25wt%，約10wt%，或約 2wt% 至約 5wt%。在一些實(shí)施方式中，含酶的聚合物基質(zhì)為懸浮于包含底物的基本上非水性的液體中的顆粒形式。在多種實(shí)施方式中，顆粒直徑約0. 1至約1000，約50至約250，約100至約 300，約200至約500，約400至約800，或約600至約1000微米。在一些實(shí)施方式中，聚合物基質(zhì)為厚度為約5至約1000，約50至約100，約100至約200，約200至約500，約500至約1000微米的膜形式。在一些實(shí)施方式中，含酶的聚合物基質(zhì)為膜形式，該膜形成圍繞包含該底物的液相的封閉容器(例如袋子、小袋或膠囊)。酶在各種實(shí)施方式中，輸送系統(tǒng)包含一種或多種蛋白酶、酯酶、絲氨酸水解酶、脂肪酶、過水解酶、氧化酶、酚氧化酶、漆酶、?；D(zhuǎn)移酶、芳基酯酶、過水解酶、淀粉酶、果膠酶、 木聚糖酶、纖維素酶、半纖維素酶、過氧化氫酶、過氧化物酶、碳水化合物氧化酶、甘露聚糖酶、植酸酶、果膠酶、過氧化物酶、糖類氧化酶、角質(zhì)酶、過氧化氫酶或其混合物。在一個(gè)實(shí)施方式中，輸送系統(tǒng)包含漆酶(多銅氧化酶，ECl. 10. 3. 2例如來自 Cerrena unicolor)和漆酶的中介物(底物)，如2，2 ‘-連氮基-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)，丁香腈(SN)，丁香酰胺(SA)和甲基丁香酯(MS)或10-羧丙基吩噻嗪(PTP)或歐洲專利 No. 1064359，1141321 或 0805465、美國專利 No. 6，329，332, PCT 申請(qǐng)No. 00/05349,或美國公開No. 2008/0196173中公開的中介物。在一個(gè)實(shí)施方式中，漆酶包括、由下列物質(zhì)組成或基本上由下列物質(zhì)組成如下SEQ ID NO :1所描述的氨基酸序列，或其變體或同源物，其具有至少70，75，80，85，86，87，88. 89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，乃至 99 % 或更多序列同一性，或 PCT 申請(qǐng)?zhí)?W02008/076322所描述的氨基酸序列，或其變體或同源物，其至少具有70，75，80，85，90， 91，92，93，94，95，96，97，98 或 99，乃至 99. 5%或更多序列同一性。AIGPVADLHIVNKDLAPDGV QRPTVLAGGTFPGTLITGQK⑶NFQLNVIDDLTDDRMLTPTSIHWHGFFQKGTAWADGPAFVTQCPIIADNSFLYDF DVPDQAGTFWYHSHLSTQYCDGLRGAFWYDPNDPHKDLYDVDDGGTVITLADWYHVLAQTWGAATPDSTLINGLG RSQTGPADAELAVISVEHNKRYRFRLVSISCDPNFTFSVDGH匪TVIEVDGVNTRPLTVDSIQIFAGQRYSFVLNAN QPEDNYWIRAMPNIGRNTTTLDGKNAAILRYKNASVEEPKTVGGPAQSPLNEADLRPLVPAPVPGNAVPGGADINHR LNLTFSNGLFSINNASFTNPSVPALLQILSGAQNAQDLLPTGSYIGLELGKVVELVIPPLAVGGPHPFHLHGHNFffV VRSAGSDEYNFDDAILRDVVSIGAGTDEVTIRFVTDNPGPWFLHCHIDWHLEAGLAIVFAEGINQTAAANPTPQAWD ELCPKYNGLSASQKVKPKKGTAI(SEQ ID NO 1).在一些實(shí)施方式中，輸送系統(tǒng)包含過水解酶(例如，?；D(zhuǎn)移酶、芳基酯酶)和底物以產(chǎn)生過酸(例如?；w，如酯底物，例如丙二醇二乙酸酯(PGDA))，和過氧化氫源 (如，過碳酸鈉、過硼酸鈉和過氧化脲)，或酶催化的過氧化氫產(chǎn)生系統(tǒng)，例如，產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶和其底物(如，葡萄糖氧化酶和葡萄糖)。在一些實(shí)施方式中，其過水解酶是天然存在于恥垢分枝桿菌的過水解酶。在一些實(shí)施方式中，過水解酶包括、由下列物質(zhì)組成或基本上由下列物質(zhì)組成SEQ ID N0:2所述氨基酸序列或其變體或同源物。在一些實(shí)施方式中，過水解酶包括、由下列物質(zhì)組成或基本上由下列物質(zhì)組成與SEQ ID NO :4所述氨基酸序列具有至少約80%，85%，90%，91%， 92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，99%，甚至99. 5%或以上的同一性之氨基酸序列。恥垢分枝桿菌過水解酶的氨基酸序列如下所示 MAKRILCF⑶SLTWGWVPVEDGAPTERFAPDVRWTGVLAQQLGADFEVIEEGLSARTTNIDDPTDPRLN GASYLPSCLATHLPLDLVIIMLGTNDTKAYF RRTPLDIALGMSVLVTQVLTSAGGVGTTYPAPKVLVVSPPPLAP MPHPWFQLIFEGGEQKTTELARVYSALASFMKVPFFDAGSVISTDGVDGIHFTEANNRDLGVALAEQVRSLL(SEQ ID NO 2)相應(yīng)編碼恥垢分枝桿菌過水解酶多聚核苷酸序列(5‘ -3')為ATGGCCAAGCGAATTCTGTGTTTCGGTGATTCCCTGACCTGGGGCTGGGTCCCCGTCGAAGACGGGGCA CCCACCGAGCGGTTCGCCCCCGACGTGCGCTGGACCGGTGTGCTGGCCCAGCAGCTCGGAGCGGACTTCGAGGTGAT CGAGGAGGGACTGAGCGCGCGCACCACCAACATCGACGACCCCACCGATCCGCGGCTCAACGGCGCGAGCTACCTGC CGTCGTGCCTCGCGACGCACCTGCCGCTCGACCTGGTGATCATCATGCTGGGCACCAACGACACCAAGGCCTACTTC CGGCGCACCCCGCTCGACATCGCGCTGGGCATGTCGGTGCTCGTCACGCAGGTGCTCACCAGCGCGGGCGGCGTCGG CACCACGTACCCGGCACCCAAGGTGCTGGTGGTCTCGCCGCCACCGCTGGCGCCCATGCCGCACCCCTGGTTCCAGT TGATCTTCGAGGGCGGCGAGCAGAAGACCACTGAGCTCGCCCGCGTGTACAGCGCGCTCGCGTCGTTCATGAAGGTG CCGTTCTTCGACGCGGGTTCGGTGATCAGCACCGACGGCGTCGACGGAATCCACTTCACCGAGGCCAACAATCGCGA TCTCGGGGTGGCCCTCGCGGAACAGGTGCGGAGCCTGCTGTAA-3’ (SEQ ID NO 3).在一些實(shí)施方式中，過水解酶包括在一個(gè)或多個(gè)氨基酸位點(diǎn)的一個(gè)或多個(gè)取代， 其位點(diǎn)相當(dāng)于如SEQ ID NO :2所述恥垢分枝桿菌過水解酶氨基酸序列的位點(diǎn)。在一些實(shí)施方式中，過水解酶包括任何一項(xiàng)選自下述氨基酸的取代或其任何組合，Ml，K3，R4，15，L6， C7, D10, Sll, L12, T13, W14, W16, G15, V17, P18, V19, D21，G22，A23, P24, T25, E26, R27, F28, A29, P30, D31, V32, R33, W34, T35, G36, L38, Q40, Q41, D45, L42, G43, A44, F46, E47, V48,149，E50, E51, G52, L53, S54, A55, R56, T57, T58, N59, 160，D61, D62, P63, T64, D65, P66, R67, L68, N69, G70, A71, S72, Y73, S76, C77, L78, A79, T80, L82, P83, L84, D85, L86, V87, N94, D95, T96, K97, Y99F100, R101, R102, P104, L105, D106, 1107，A108, L109, G110, Mill, S112, V113, L114, V115, T116, Q117, V118, L119, T120, S121, A122, G124, V125, G126, T127, T128, Y129, P146, P148, W149, F150, 1153，F(xiàn)154, 1194，和 F196。在一些實(shí)施方式中，過水解酶包括在一個(gè)或多個(gè)氨基酸位點(diǎn)的一個(gè)或多個(gè)以下取代，其位點(diǎn)相當(dāng)于如SEQ ID NO :2所述恥垢分枝桿菌過水解酶氨基酸序列的位點(diǎn)L12C，Q 或 G ；T25S, G 或 P ；L53H, Q，G 或 S ；S54V, L A，P，T 或 R ；A55G 或 T ；R67T, Q，N，G，E，L 或 F ； K97R ；V125S, G，R，A 或 P ；F154Y ；F196G。在一些實(shí)施方式中，過水解酶包括在氨基酸位點(diǎn)的氨基酸取代的組合，其位點(diǎn)相當(dāng)于如SEQ ID N0:2所述恥垢分枝桿菌過水解酶氨基酸序列的氨基酸位點(diǎn)L12I+S54V; L12M+S54T ；L12T+S54V ；L12Q+T25S+S54V ；L53H+S54V ；S54P+V125R ；S54V+V125G ； S54V+F196G ；S54V+K97R+V125G ；或 A55G+R67T+K97R+V125G。在一些實(shí)施方式中，液體懸浮液包含過水解酶和底物以產(chǎn)生單甘油酯或甘油二脂 (如，?；w和醇受體)或山梨聚糖酯(如，?；w和山梨聚糖)。在一些實(shí)施方式中， 液體懸浮液含有過水解酶和底物以產(chǎn)生芳香酯，例如，芐酯(如，?；w和揮發(fā)性醇，例如，芐醇)在一些實(shí)施方式中，酶是過水解酶且輸送系統(tǒng)包含酯底物或酯底物的混合物，例如，醋酸酯，例如，丙二醇二乙酸酯(PGDA)，醋酸乙酯，醋酸丁酯，乙酸己酯，乙酸辛酯，丙酸乙酯，丙酸丁酯，丙酸己酯，醋酸異戊酯，香茅醇乙酸酯，香茅醇丙酸酯，醋酸十二烷基酯， Neodol 23-3醋酸酯，Neodol 23_9醋酸酯，乙二醇二乙酸酯，甘油三乙酸酯，三丁酸甘油酯，甲氧基乙酸乙酯，乙酸芳樟酯，丁酸乙酯，異丁酸乙酯，乙基-2-甲基丁酸酯，異戊酸乙酯，異戊酸二乙酯，馬來酸二乙酯，乙醇酸乙酯，或其混合物。在一些實(shí)施方式中，輸送系統(tǒng)包含包封在相同或不同的聚合物基質(zhì)中的蛋白酶和至少一種其他蛋白酶敏感的酶，即可由蛋白酶水解的酶，或蛋白酶和蛋白酶敏感的酶其一是包封在聚合物基質(zhì)中且其他酶在輸送系統(tǒng)的液相中，并且蛋白酶對(duì)蛋白酶敏感的酶實(shí)質(zhì)上沒有催化活性，直到向輸送系統(tǒng)中加入水。載體液體輸送系統(tǒng)在載體液體中包括包封酶的底物，其中聚合物基質(zhì)(酶被包封在其中) 基本上是不溶的。載體液體的非限制性實(shí)例包括乙二醇，非離子表面活性劑，乙醇，聚乙二醇，和醋酸酯。在一些實(shí)施方式中，載體液體本身，是酶的底物?？蛇x的輔助成分在一些實(shí)施方式中，輸送系統(tǒng)包括一種或多種表面活性劑，即，非離子，陰離子，陽離子，兩性，兼性離子的，或半極性非離子表面活性劑，或其混合物。在一些實(shí)施方式中，傳遞系統(tǒng)包括一種或多種懸浮助劑，螯合劑，穩(wěn)定劑，乳化劑，緩沖劑，和/或其混合物。組合物本發(fā)明提供如本文所述的包含酶/底物共同輸送系統(tǒng)的組合物。典型的組合物包括清潔組合物，消毒組合物，去污組合物，紡織加工組合物，漂白組合物，紡織印染組合物， 個(gè)人護(hù)理組合物，染發(fā)組合物，紙漿或紙張加工組合物，生產(chǎn)木材復(fù)合物的組合物，廢水處理組合物，烘焙組合物，釀造組合物，動(dòng)物飼料組合物，淀粉加工組合物，和/或乙醇發(fā)酵組合物。輸送系統(tǒng)可以存儲(chǔ)在組合物中或可在使用時(shí)混合到組合物中。在一個(gè)實(shí)施方式中，洗滌劑組合物是供清洗應(yīng)用使用。除了在此所述的酶/底物共同輸送系統(tǒng)，洗滌劑組合物可能包含一種或多種洗滌劑成分，選自表面活性劑，助洗劑， 漂白劑，漂白劑的前體，酶穩(wěn)定劑，絡(luò)合劑，螯合劑，發(fā)泡調(diào)節(jié)劑，防腐蝕劑，防靜電劑，染料， 香料，殺菌劑，殺真菌劑和活化劑。輸送系統(tǒng)可以存儲(chǔ)在洗滌劑組合物中或可在使用時(shí)混合到組合物中。使用方法清潔方法在此所述酶/底物共同輸送系統(tǒng)可用于清潔方法。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供清潔方法，包括水存在下使用清潔劑組合物接觸帶有污漬的物品，該組合物包含在此所述的酶/底物共同輸送系統(tǒng)，其中至少去除一部分污漬。在此所述清洗方法所適合使用的酶包括但不限于，蛋白酶，淀粉酶，過水解酶，氧化酶，脂肪酶，纖維素酶，木聚糖酶，甘露聚糖酶，酯酶，角質(zhì)酶，聚酯酶，果膠酶，酚氧化酶，過氧化氫酶，溶菌酶和半纖維素。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了在洗滌過程中抑制染料從染色織物轉(zhuǎn)移到其他織物的方法，包括水存在下的在此所述的酶/底物共同輸送系統(tǒng)，其中輸送系統(tǒng)包含具漂白能力的酶，例如，酚氧化酶，如漆酶，或過氧化物酶，其至少有一部份浙濾自染色的和/或臟的織物的有色物質(zhì)被漂白，從而防止有色物質(zhì)在洗滌時(shí)再沉積在其他織物上。紡織品加工方法所述酶/底物共同輸送系統(tǒng)可用于紡織品加工方法。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供漂白織物的方法，包括在水存在時(shí)，并且在適宜衡量紡織品漂白作用的條件下，用含有至少一種具有漂白能力的酶和底物的酶/底物共同輸送系統(tǒng)接觸織物一段時(shí)間，例如，過水解酶和產(chǎn)生過酸的底物或酚氧化酶(例如，漆酶)和產(chǎn)生漂白效果能力的中介物，從而產(chǎn)生漂白紡織品。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了改變紡織品顏色(例如，染色的紡織)的方法，其中包括在水存在時(shí)，并且在適宜衡量紡織品顏色變化的條件下，將紡織品接觸含有能夠改變紡織品顏色的酶和底物的酶/底物共同輸送系統(tǒng)，例如，酚氧化酶(例如，漆酶)， 和能夠影響顏色變化的中介物，在水存在下，一段時(shí)間長度和在適合條件下，以能夠衡量紡織，從而產(chǎn)生顏色變化的紡織品。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供單一過程中聯(lián)合預(yù)處理紡織品的方法，其中的酶/ 底物共同輸送系統(tǒng)包括至少兩中紡織品加工酶。例如，用于退漿，煮練和漂白的聯(lián)合方法， 包括在此所述的過水解酶和底物(例如，酯底物和過氧化氫源)，和淀粉酶和果膠酶。聯(lián)合煮練和漂白過程，包括在此所述的過水解酶和底物和果膠酶。聯(lián)合退漿和漂白過程，包括在此所述的過水解酶和底物和淀粉酶。在此所述的聯(lián)合紡織品預(yù)處理方法中的果膠酶可單獨(dú)使用或與一種或更多種酶聯(lián)合使用，如蛋白酶，脂肪酶，纖維素酶，角質(zhì)酶，和/或半纖維素酶。用過水解酶消毒、滅菌和/或去污的方法本發(fā)明的酶/底物共輸送系統(tǒng)(和含有這些組合物的相關(guān)系統(tǒng)和試劑盒)可用在去污、殺菌和/或消毒物品的一系列方法中。在一些實(shí)施方式中，去污的方法包括(a)提供此處所述的酶/底物共輸送系統(tǒng)，所述共輸送系統(tǒng)包括包封于水溶性聚合物中的具有過水解酶活性的酶，其中所述活性包括至少2 1的過水解與水解的比例；過氧化氫源；和酯底物；和(b)將該組合物加入到水中，在足以溶解該聚合物基質(zhì)的條件和時(shí)間長度和小于約9. 0的pH下混合，以產(chǎn)生以重量計(jì)至少約0. 16%過乙酸的水溶液，例如至少約20分鐘；和(c)將包含污染物的物品暴露至該溶液。在一些實(shí)施方式中，去污的方法包括(a)提供酶/底物共輸送系統(tǒng)，所述共輸送系統(tǒng)包括包封于水溶性聚合物中的?；D(zhuǎn)移酶、過氧化氫源和丙二醇二乙酸酯；(b)將該組合物加入到水中，在足以溶解該聚合物基質(zhì)的條件和時(shí)間長度下混合，以產(chǎn)生以重量計(jì)至少約0. 16%過乙酸的水溶液，例如至少約20分鐘；和(c)將包含污染物的物品暴露至該溶液。在一些實(shí)施方式中，過氧化氫源為產(chǎn)生過氧化氫的化合物，例如選自過碳酸鈉、過硼酸鈉和過氧化脲。在一些實(shí)施方式中，過氧化氫源為酶促系統(tǒng)，例如產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶及其底物，例如葡萄糖氧化酶和葡萄糖。產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶可以包封于聚合物基質(zhì)(與過水解酶包封的聚合物基質(zhì)相同或與之分離)中或溶于或懸浮于該輸送系統(tǒng)的液相中。產(chǎn)生過氧化氫的氧化酶的底物可以包封于聚合物基質(zhì)(與過水解酶包封的聚合物基質(zhì)相同或與之分離)中或溶于或懸浮于該輸送系統(tǒng)的液相中。取決于要去除的污染物的具體類型，暴露物品至過酸溶液的步驟可以在寬范圍的時(shí)間階段內(nèi)進(jìn)行。例如，在某些消毒過程中，短至約30秒、1分鐘、5分鐘或10分鐘的暴露時(shí)間可能就足夠了。然而，在其他應(yīng)用中(例如去除生物膜)，可能需要暴露該物品相當(dāng)長的時(shí)間階段，例如約30分鐘、1小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)或更長，以達(dá)到足夠的去污水平。同樣，可根據(jù)污染物的具體類型來調(diào)節(jié)暴露步驟中過酸溶液的溫度。在一個(gè)實(shí)施方式中，暴露溫度為溶液制備的環(huán)境溫度，例如通常為約18-25°C。在其他實(shí)施方式中，可用更高的溫度來促進(jìn)去污過程。通常，較高溫度會(huì)加速過酸溶液的反應(yīng)性，從而加速去污過程。所以，在一些實(shí)施方式中，暴露步驟可以用約30°C，37°C，45°C，50°C，60°C，75°C，90°C或更高溫度的過酸溶液進(jìn)行。在該方法的一個(gè)實(shí)施方式中，含酶的聚合物基質(zhì)為水溶性容器的形式，其中底物封閉于液相中，該容器被加入到水中。去污方法可用于廣泛的污染物，包括選自由肉毒桿菌毒素、炭疽毒素、蓖麻毒素、鯖魚毒素、雪卡毒素、河豚毒素、真菌毒素及其任意組合組成的組中的毒素；和選自由細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲、朊病毒及其任意組合組成的組中的病原體。例如此處公開的方法可用于下述物質(zhì)污染的材料的去污，包括但不限于有毒化學(xué)品、芥子氣、VX毒劑、炭疽桿菌(B. anthracis)孢子、鼠疫桿菌(Y. pestis)、F. tularensis、真菌和毒素(如肉毒桿菌、蓖麻毒素、真菌毒素等)，以及感染性病毒顆粒感染的細(xì)胞(如，黃病毒、正粘病毒、副粘病毒、沙拉病毒、棒狀病毒、蟲媒病毒、腸道病毒、布尼亞病毒等)的。在一些實(shí)施方式中，所述至少一種病原體選自芽孢桿菌屬物種、炭疽桿菌、梭狀芽孢桿菌屬物種、肉毒梭菌 (C. botulinum)、產(chǎn)氣莢膜梭菌(C. perfringens)、李斯特菌屬物種、假單胞菌屬物種、葡萄球菌屬物種、鏈球菌屬物種、沙門氏菌屬物種、志賀菌屬物種、大腸桿菌、耶爾森菌屬物種、 鼠疫菌(Y. pestis)、弗朗西斯菌屬物種、F. tularensis、彎曲桿菌屬(Camplyobacter)物
20種、弧菌屬物種、布魯氏桿菌屬物種、隱孢子蟲屬物種、賈第蟲屬物種、環(huán)孢子蟲屬物種和毛線蟲屬物種。用此處所述的輸送系統(tǒng)產(chǎn)生的過酸溶液及其使用方法對(duì)于生物膜去污有效。生物膜的一個(gè)特征是其中的微生物合作或協(xié)同作用。經(jīng)驗(yàn)上發(fā)現(xiàn)生物膜中存活的微生物比在生物膜之外的微生物能夠更好地抗微生物劑。所以，病原性生物膜的去除代表在去污和/或消毒器械中的一個(gè)特別困難的問題。在一些實(shí)施方式中，用來產(chǎn)生過酸溶液的穩(wěn)定的組合物用于去除生物膜，包括選自下組的一種或多種病原性細(xì)菌所形成的生物膜芽孢桿菌屬物種、炭疽桿菌、梭狀芽孢桿菌屬物種、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、李斯特菌屬物種、假單胞菌屬物種、葡萄球菌屬物種、 鏈球菌屬物種、沙門氏菌屬物種、志賀菌屬物種、大腸桿菌、耶爾森菌屬物種、鼠疫菌、弗朗西斯菌屬物種、F. tularensis、彎曲桿菌屬物種、弧菌屬物種、布魯氏桿菌屬物種、隱孢子蟲屬物種、賈第蟲屬物種、環(huán)孢子蟲屬物種和毛線蟲屬物種及其任意組合。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的方法制備的過酸溶液可用于生物膜的去污，所述生物膜選自下組中綠膿桿菌 (Pseudomonasaeruginosa)、金Jt^1 葡萄王求菌(Staphylococcus aureus) (SRffC—10943)、單核細(xì)胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes) (ATCC19112)及其任意組合。在一個(gè)實(shí)施方式中，通過在45°C暴露至0. 16wt% PAA溶液(從含過水解酶的酶/ 底物共輸送系統(tǒng)中產(chǎn)生)中45分鐘可以基本上除去(即減少約500-1000倍)污染不銹鋼器械的包含假單胞菌屬、葡萄球菌屬和/或李斯特菌屬的細(xì)菌培養(yǎng)物的病原性生物膜。在多種實(shí)施方式中，用此處所述的包含過水解酶的輸送系統(tǒng)去污的方法用于消毒 /去污廣泛的污染物品，包括硬表面、織品、食物、飼料、衣服、地毯、小地毯、織物、醫(yī)療器械、 獸醫(yī)器械，例如用于藥物和生物技術(shù)過程的不銹鋼物品和裝置，包括大的反應(yīng)器。用此處所述的輸送系統(tǒng)酶促產(chǎn)生的過酸溶液非常適用于清潔不銹鋼物品和裝置， 因?yàn)樗芤褐羞^酸與產(chǎn)生的相應(yīng)酸的比例大大高于市售的溶液。例如，用MsAcT的S54V變體、過碳酸鹽和丙二醇二乙酸酯(PGDA)的穩(wěn)定組合物產(chǎn)生的過乙酸(PAA)溶液將具有大約 10 1的PAA與乙酸的比例。而市售的PAA溶液通常含有比PAA多的乙酸，甚至具有相反的比例(1 10)。升高的PAA與乙酸的比例降低或完全避免了在PAA處理之后對(duì)不銹鋼物品或裝置進(jìn)行進(jìn)一步鈍化處理的需要。所以，在一些實(shí)施方式中，用本發(fā)明的穩(wěn)定組合物產(chǎn)生的過酸溶液可用于消毒用于藥物和生物技術(shù)過程的不銹鋼物品和裝置，包括大反應(yīng)器。在一些實(shí)施方式中，過酸溶液可用于在單個(gè)步驟中消毒不銹鋼物品和裝置，而不需任何進(jìn)一步用鈍化劑對(duì)該不銹鋼的處理。在又一些實(shí)施方式中，此處所述的輸送系統(tǒng)可用于食品和/或飼料的去污，包括但不限于蔬菜、水果和其他食品和/或飼料物品。實(shí)際上，可預(yù)期的是本發(fā)明可用于水果、 蔬菜、蛋、肉等的表面清潔。實(shí)際上，預(yù)期本發(fā)明可用于食品和/或飼料工業(yè)來從各種食物和/或飼料物品去除污染。在一些實(shí)施方式中，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的食品藥品管理局和 /或其他食品安全實(shí)體所設(shè)定的食物和/或飼料去污的方法都可以使用本發(fā)明。在進(jìn)一步的實(shí)施方式中，需要去污的物品選自硬表面、織品、食物、飼料、衣服、地毯、小地毯、織物、醫(yī)療器械和獸醫(yī)器械。在一些實(shí)施方式中，食物選自水果、蔬菜、魚、海鮮和肉。在一些進(jìn)一步的實(shí)施方式中，硬表面選自家居表面和工業(yè)表面。在一些實(shí)施方式中， 家居表面選自廚房工作臺(tái)、水槽、茶幾、切削板、桌子、架子、食物準(zhǔn)備儲(chǔ)存區(qū)域、浴室用具、地板、天花板、墻壁和臥室區(qū)域。在一些備選的實(shí)施方式中，工業(yè)表面選自食品加工區(qū)域、飼料加工區(qū)域、桌子、架子、地板、天花板、墻壁、水槽、切削板、飛機(jī)、汽車、火車和輪船。試劑盒本發(fā)明還提供包括多個(gè)部分試劑盒或多個(gè)試劑盒。在一個(gè)實(shí)施方式中，試劑盒提供此處所述的酶/底物共輸送系統(tǒng)，和在應(yīng)用中使用的說明書，包括任何此處所述的方法 (例如清潔方法或織物加工方法)，其中當(dāng)稀釋到水中時(shí)酶活性可用。提供適宜的包裝。此處使用的“包裝”是指習(xí)慣用于系統(tǒng)的固體基質(zhì)或材料，并能夠?qū)⒋颂幩龅脑噭┖械某煞志S持在固定的范圍內(nèi)，所述成分例如酶/底物共輸送系統(tǒng)。說明書可以以印刷形式或電子介質(zhì)的形式提供，例如軟盤、CD或DVD，或以能夠得到說明書的網(wǎng)址的形式提供。下列實(shí)施例意在說明而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例實(shí)施例1用溶劑流延方法制備含酶的聚乙烯醇(PVA)基質(zhì)。一份液體酶濃縮物(約35mg/ ml酶)加入到9份10%聚合物溶液中，充分混合。將該溶液鋪展到玻璃片上，室溫干燥。干燥的聚合物膜含有約3. 5質(zhì)量％的酶，厚約50-100 μ m。把這些膜切到4mm直徑的圓盤，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。用于該實(shí)驗(yàn)中的PVA聚合物是兩種不同的杜邦商品級(jí)別$1^110151-05(88%水解，500標(biāo)稱聚合度)和Elvanol 71-30 (98%水解，1500標(biāo)稱聚合度)。酶浙濾為了評(píng)價(jià)酶的浙濾，37°C下將圓盤在玻璃瓶中丙二醇二乙酸酯(PGDA)中孵育約 46小時(shí)。孵育之后，從玻璃瓶中取出圓盤，過量的PGDA用紙巾吸除。將圓盤放到細(xì)1 H2O 中溶解PVA。用pNB速率法測(cè)量各個(gè)預(yù)孵育的圓盤中的酶活性，與新鮮切下，未進(jìn)行PGDA孵育的圓盤的活性比較。pNB速率法如下所述反應(yīng)方程式
權(quán)利要求
1.一種用于共配制的酶和底物的液體輸送系統(tǒng)，其中所述輸送系統(tǒng)是包含酶和該酶底物的組合物，其中所述酶封裝于水溶性的聚合物基質(zhì)中。
2.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，其中所述底物存在于基本上非水性的液相中，所述液相接觸所述酶封裝于其中的所述聚合物基質(zhì)，其中所述聚合物不溶于所述液相。
3.如權(quán)利要求2所述的輸送系統(tǒng)，其中所述基本上非水性的液相包含少于約5%的水。
4.如權(quán)利要求2所述的輸送系統(tǒng)，其中所述基本上非水性的液相包含少于約的水。
5.如權(quán)利要求2所述的輸送系統(tǒng)，其中所述基本上非水性的液相包含少于約0.5%的水。
6.如權(quán)利要求2所述的輸送系統(tǒng)，其中所述酶在所述聚合物基質(zhì)中保持催化能力，但是在25 °C下至少10天內(nèi)，基本上不與所述組合物中的底物反應(yīng)。
7.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，其中在向該組合物中加入水之后，該聚合物基質(zhì)溶解，釋放酶，使得酶與該底物的催化反應(yīng)發(fā)生。
8.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，包括一種或多種選自由蛋白酶、纖維素酶、淀粉酶、 果膠酶、過水解酶、過氧物酶、碳水化合物氧化酶、酚氧化酶、角質(zhì)酶、脂肪酶、半纖維素酶、 木聚糖酶、甘露聚糖酶、過氧化氫酶和漆酶及其混合物組成的組中的酶。
9.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，包括在相同的聚合物基質(zhì)中封裝的兩種或多種酶。
10.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，包括在不同的聚合物基質(zhì)中封裝的兩種或多種酶。
11.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，還包括至少一種表面活性劑。
12.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，其中所述聚合物基質(zhì)選自由聚乙烯醇、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、瓜爾膠及其衍生物或共聚物組成的組中。
13.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，其中所述酶封裝于顆粒形式的聚合物基質(zhì)中，該顆粒懸浮于包含所述底物的基本上非水性液體中。
14.如權(quán)利要求13所述的輸送系統(tǒng)，其中所述顆粒通過懸浮助劑保持懸浮。
15.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，其中所述底物溶于或分散于基本上非水性的液相中，所述液相可任選地包含非水性液體(載液)。
16.如權(quán)利要求15所述的輸送系統(tǒng)，其中所述載液選自由乙二醇、非離子表面活性劑、 乙醇、聚乙二醇、乙酸酯及其混合物組成的組中。
17.如權(quán)利要求15所述的輸送系統(tǒng)，其中所述載液為所述酶的底物。
18.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，其中所述酶為過水解酶，而且所述底物為酯底物。
19.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，其中所述酶為過水解酶，而且所述底物為丙二醇二乙酸酯。
20.如權(quán)利要求1-19中任一項(xiàng)所述的輸送系統(tǒng)，進(jìn)一步包括產(chǎn)生過氧化氫的化合物， 所述化合物選自過碳酸鈉、過硼酸鈉和過氧化脲，其中向所述組合物中加入水之后產(chǎn)生過酸。
21.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，其中所述酶為漆酶，而且所述底物為漆酶中介物。
22.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，其中所述酶為酚氧化酶，而且所述底物選自由2， 2'-連氮基-雙(3-乙基苯并噻唑林-6-磺酸酯)、丁香酰胺和丁香腈組成的組中。
23.如權(quán)利要求1所述的輸送系統(tǒng)，其中所述酶為過水解酶，而且所述底物為酯底物， 而且所述輸送系統(tǒng)還包括過硼酸鈉。
24.如權(quán)利要求23所述的輸送系統(tǒng)，其中所述輸送系統(tǒng)與缺乏所述聚合物的相當(dāng)輸送系統(tǒng)相比提高了貯存穩(wěn)定性。
25.—種試劑盒，包含如權(quán)利要求1-22中任一項(xiàng)所述的用于共配制的酶和底物的輸送系統(tǒng)和使用說明。
26.一種漂白織物的方法，包括(a)在過氧化氫源存在下將如權(quán)利要求18-20中任一項(xiàng)所述的輸送系統(tǒng)加入到水中并混合，從而產(chǎn)生含水過酸溶液；和(b)將織物與該溶液在適于測(cè)量該織物增白的條件下接觸一定時(shí)間長度，從而產(chǎn)生漂白的織物。
27.一種去污的方法，包括(a)在過氧化氫源存在下將如權(quán)利要求18-20中任一項(xiàng)所述的輸送系統(tǒng)加入到水中并混合，從而產(chǎn)生含水過酸溶液；和(b)將包含污染物的物品與所述溶液接觸，從而降低所述污染物的濃度。
28.如權(quán)利要求沈或27所述的方法，其中所述過氧化氫源為過硼酸鈉。
全文摘要
本發(fā)明提供包括酶和底物共輸送系統(tǒng)的方法、組合物、系統(tǒng)和試劑盒。該液體輸送系統(tǒng)包括至少一種封裝于水溶性聚合物基質(zhì)中的酶和在載液中的該酶的底物，所述聚合物基質(zhì)不溶于所述載液。當(dāng)加入水時(shí)，該聚合物基質(zhì)溶解，從基質(zhì)釋放酶，使其可以對(duì)底物進(jìn)行催化反應(yīng)。
文檔編號(hào)C11D3/386GK102203231SQ200980143637
公開日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2009年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月3日
發(fā)明者M·斯通納, M-Y·潤, N·T·貝克爾 申請(qǐng)人:丹尼斯科美國公司