專利名稱：活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化性細(xì)胞障礙抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化性細(xì)胞障礙抑制劑。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，活性氧，尤其作為使生物體氧化的因素而為人們所知，但是，對(duì)生物體的 不良影響正成為一個(gè)問(wèn)題?；钚匝踉谏矬w細(xì)胞內(nèi)能量代謝過(guò)程中產(chǎn)生，可以分為過(guò)氧化 物(即氧分子的電子還原中產(chǎn)生的過(guò)氧化物陰離子· 02-)、雙氧水(H202)、乙烯基自由 基(·0Η)以及純態(tài)氧C02)等。這些活性氧是吞噬細(xì)胞的殺菌機(jī)構(gòu)所必須的，在驅(qū)除細(xì)菌、 癌細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮重要作用。但是，活性氧的過(guò)量生成攻擊構(gòu)成生物體內(nèi)膜和組織的生物體內(nèi)分子，誘發(fā)各種 疾病。由于細(xì)胞內(nèi)所含過(guò)氧化物歧化酶(SOD)的催化作用，通常，在生物體內(nèi)產(chǎn)生并成為其 他活性氧促發(fā)物質(zhì)的過(guò)氧化物逐漸被清除。當(dāng)過(guò)氧化物的產(chǎn)生過(guò)?；蛘逽OD的作用降低 時(shí)，則過(guò)氧化物的清除不充分，過(guò)氧化物的濃度增高，將引起類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等組織障礙、 心肌梗塞、腦中風(fēng)、白內(nèi)障、皺紋、糖尿病、動(dòng)脈硬化、肩膀酸痛、冷敏感等。尤其是因皮膚直接接受紫外線等環(huán)境因素的刺激，過(guò)氧化物容易影響器官，所以， 通過(guò)過(guò)氧化物濃度的上升，例如分解膠原蛋白等生物體組織、變形、架橋，生成能氧化各種 油脂、障礙細(xì)胞的過(guò)氧脂質(zhì)，由活性氧引起的障礙成為皮膚皺紋、皮膚彈性降低等老化的原 因；所以，通過(guò)抑制活性氧、生物體內(nèi)自由基的生成，可以預(yù)防、治療或改善皺紋形成、彈性 降低等皮膚老化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、貝切特氏病等組織傷害、心肌梗塞、腦中風(fēng)、白內(nèi)障、糖 尿病、動(dòng)脈硬化、肩膀酸痛、冷敏感等由活性氧參與的各種障礙?；钚匝跄芤鹧装Y、過(guò)氧脂質(zhì)的生成、各種酶失去活性、DNA受損等。這些氧化的 細(xì)胞障礙被認(rèn)為是皮膚粗糙、皺紋形成、皮膚彈性降低等皮膚老化的一個(gè)原因。所以，基于安全考慮，試圖將活性氧清除物質(zhì)、自由基清除物質(zhì)等從合適的天然物 中獲取，具有該作用的物質(zhì)有十字花科蕓苔屬植物的提取物(參照專利文獻(xiàn)1)等。另外， 作為抑制因活性氧而產(chǎn)生的氧化的細(xì)胞障礙，西洋黑種草、胡黃連、水牛膝草的提取物(參 照專利文獻(xiàn)2)正為人們所知。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的以來(lái)自安全性高的天然提取物并具有活性氧清除作用、自由基清 除作用、氧化的細(xì)胞障礙抑制作用的物質(zhì)為中心，提供以該物質(zhì)為有效成分的活性氧清除 劑、自由基清除劑、氧化的細(xì)胞障礙抑制劑。為達(dá)成以上目的，關(guān)于本發(fā)明的活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化的細(xì)胞障 礙抑制劑，其特征為以獼猴桃采摘果實(shí)的提取物為有效成分。在本發(fā)明中，“獼猴桃采摘果實(shí)”是指在獼猴桃栽培過(guò)程中，為了將獼猴桃采摘果 實(shí)的含糖量和大小提高到希望的范圍而隔開(kāi)距離(修剪)的果實(shí)，果實(shí)的具體情況是含糖 量為3. 0-7.0%，最佳為4.0-5. 5%;大小(長(zhǎng)半徑)為Hcm，最佳為2_3cm。
在本發(fā)明中，“氧化的細(xì)胞障礙”是指因活性氧而產(chǎn)生的細(xì)胞障礙，尤其是炎癥、 過(guò)氧脂質(zhì)的生成、各種酶失去活性、DNA損傷等氧化障礙，也包括皮膚組織障礙等組織障礙。 另外，作為因活性氧而產(chǎn)生障礙的細(xì)胞僅限于因活性氧而產(chǎn)生障礙的生物體細(xì)胞，但不屬 于被特別限定的物質(zhì)。發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明，以天然物“獼猴桃采摘果實(shí)”的提取物為有效成分，可以提供安全性 很高的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細(xì)胞障礙抑制劑。
具體實(shí)施例方式以下對(duì)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施過(guò)程進(jìn)行說(shuō)明。關(guān)于本實(shí)施過(guò)程的活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化的細(xì)胞障礙抑制劑，以 獼猴桃(學(xué)名Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae))采摘果實(shí)的提取物為有 效成分。這里，在本實(shí)施過(guò)程中，“提取物”中含有以獼猴桃(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae))采摘果實(shí)為提取原料而得到的提取液、該提取液的稀釋液或濃 縮液、將該提取液干燥以后得到的干燥物、或者以上物質(zhì)的某一種粗/精加工物或精加工 物。稱猴桃(學(xué)名Actinidiachinensis Planch. (Actinidiaceae))是屬于稱猴桃 科獼猴桃屬的落葉攀緣灌木，在日本各地都有栽培，其果實(shí)很容易從栽培地區(qū)獲得。作為提 取原料而被利用的獼猴桃的部位是采摘果實(shí)。另外，在本發(fā)明中，作為提取原料而被利用的 獼猴桃(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae))的栽培品種沒(méi)有特別的限定，但 是，憬紅色、蘋果獼猴桃、紅心、金王、小林39、Viewer Country、始皇帝、淚珠、紅鮮、葡萄獼 猴桃、贊岐黃金、豐蜜等是使用的最佳品種。對(duì)于作為提取原料而被使用的獼猴桃的采摘果實(shí)，其含糖量為3. 0-7.0%，大小 (長(zhǎng)半徑)為l-4cm，最佳糖量為4. 0-5. 5 %，大小(長(zhǎng)半徑)為2_3cm。關(guān)于獼猴桃采摘果實(shí)的提取物，將提取原料用粉碎機(jī)器，通過(guò)提取的溶劑進(jìn)行提 取，最后得到提取物。作為提取的溶劑，使用極性溶劑比較好，例如水、親水性有機(jī)溶劑等，單獨(dú)或混合 兩種以上，在常溫或溶劑沸點(diǎn)以下使用比較好。作為提取的溶劑而使用的水除了純凈水、自來(lái)水、井水、礦泉水、溫泉水、淡水、酸 性或堿性離子水、海洋深層水等以外，也包括對(duì)它們處理后的水。對(duì)水的處理包括精制、加 熱、殺菌、過(guò)濾、離子交換、滲透壓調(diào)整、緩沖化等。因此，在本發(fā)明中，作為提取的溶劑而使 用的水，也包括精制水、熱水、離子交換水、生理食鹽水、磷酸緩沖液、磷酸緩沖生理食鹽水寸。作為提取的溶劑而使用的親水性有機(jī)溶劑有甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇等碳原子 數(shù)在1-5的低級(jí)脂肪族乙醇；丙酮、丁酮等低級(jí)脂肪族酮；1，3_丁二醇、丙二醇、丙三醇等碳 原子數(shù)在2-5的多價(jià)乙醇等。將兩種以上極性溶劑的混合液作為提取溶劑進(jìn)行使用時(shí)，其混合比例可以適當(dāng)?shù)?進(jìn)行調(diào)整。例如在使用水和低級(jí)脂肪族乙醇的混合液時(shí)，對(duì)于1體積的水，最好混合1-100
4體積的低級(jí)脂肪族乙醇；在使用水和低級(jí)脂肪族酮的混合液時(shí)，對(duì)于1體積的水，最好混合 1-100體積的低級(jí)脂肪族酮；在使用水和多價(jià)乙醇的混合液時(shí)，對(duì)于1體積的水，最好混合 1-100體積的多價(jià)乙醇。在提取處理中，將提取的原料中所含的可溶性成分在提取溶劑中溶解，無(wú)特殊限 定，可以采用常用的方法。例如在相當(dāng)于提取原料5-15倍(比重)的提取溶劑中，浸入提 取原料，在常溫或回流加熱下，提取可溶性成分；然后，通過(guò)過(guò)濾并清除殘?jiān)@得提取液。 對(duì)于獲得的提取液，為了得到該提取液的稀釋液或濃縮液、該提取液的干燥物、粗/精制物 或精制物，根據(jù)常用方法，進(jìn)行稀釋、濃縮、干燥、精制等處理。在精制中，可以通過(guò)活性炭處理、吸附樹(shù)脂處理、離子交換樹(shù)脂處理等進(jìn)行實(shí)施。 獲得的提取液可以直接作為活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細(xì)胞障礙抑制劑的有效 成分進(jìn)行使用，但是，如果作為濃縮液或干燥物，則比較容易使用。獼猴桃采摘果實(shí)的提取物具有特有的氣味，所以，在不降低其生理活性的情況下， 可以實(shí)施以退色、除臭等為目的的精制，但在用于皮膚化妝品等方面時(shí)，不能大量使用。因 此，即使未精制也可以使用。如上所述，從獼猴桃采摘果實(shí)獲得的提取物具有活性氧清除作用、自由基清除作 用、氧化的細(xì)胞障礙抑制作用，所以，可以利用其各個(gè)作用，將其作為活性氧清除劑、自由基 清除劑、氧化的細(xì)胞障礙抑制劑的有效成分進(jìn)行使用。另外，從下述的實(shí)施事例可以看出，獼猴桃采摘果實(shí)從獲得的提取物具有表皮角 化細(xì)胞增殖促進(jìn)作用、絲聚蛋白原mRNA發(fā)現(xiàn)促進(jìn)作用、紫外線照射引起的細(xì)胞障礙抑制作 用，因此，利用其各自的作用，可以將該提取物作為抗老化劑、表皮角化細(xì)胞增殖促進(jìn)劑、絲 聚蛋白原mRNA發(fā)現(xiàn)促進(jìn)劑、紫外線照射引起的細(xì)胞障礙抑制劑的有效成分。關(guān)于上述各種藥劑的成分，可以只是獼猴桃采摘果實(shí)的提取物，也可以是獼猴桃 采摘果實(shí)的提取物的制劑。在獼猴桃采摘果實(shí)的提取物中，使用糊精、環(huán)糊精等藥物學(xué)上允許的物質(zhì)及其他 任何助劑，根據(jù)通常的方法，可以制成粉末狀、顆粒狀、藥丸狀、液狀等任意形式。此時(shí)，可以 使用助劑，例如賦形齊 、結(jié)合劑、崩潰劑、潤(rùn)滑齊 、穩(wěn)定齊 、除臭劑等。另外，獼猴桃采摘果實(shí) 的提取物可以與其他成分(皮膚化妝品等)一起使用。另外，對(duì)于本實(shí)施過(guò)程的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細(xì)胞障礙抑制劑， 如果需要，可以與具有活性氧清除作用、自由基清除作用、氧化的細(xì)胞障礙抑制作用的其他 天然提取物等一起作為有效成分進(jìn)行使用。關(guān)于本實(shí)施過(guò)程的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細(xì)胞障礙抑制劑的使用 方法，通常，有經(jīng)皮實(shí)施等，但是，最好靈活采取符合預(yù)防、治療等的方法(經(jīng)皮實(shí)施、經(jīng)黏 膜實(shí)施)。關(guān)于本實(shí)施過(guò)程的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細(xì)胞障礙抑制劑的使用 量，也要根據(jù)疾病種類、重癥程度、患者的個(gè)人差另I」、使用方法、使用期間等，進(jìn)行合理增減。關(guān)于本實(shí)施過(guò)程的活性氧清除劑，通過(guò)獼猴桃采摘果實(shí)的提取物所擁有的活性氧 清除作用，可以預(yù)防、治療或改善皺紋形成、彈性降低等皮膚老化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、貝切特 氏病等組織傷害、心肌梗塞、腦中風(fēng)、白內(nèi)障、糖尿病、動(dòng)脈硬化、肩膀酸痛、冷敏感等由活性 氧參與的各種障礙。然而，關(guān)于本實(shí)施過(guò)程的活性氧清除劑，也可以用于以上用途以外能發(fā)揮活性氧清除作用的所有用途。關(guān)于本實(shí)施過(guò)程的自由基清除劑，通過(guò)獼猴桃采摘果實(shí)的提取物所擁有的自由 基清除作用，可以預(yù)防或改善皺紋形成、彈性降低等皮膚老化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、貝切特氏 病等組織傷害、心肌梗塞、腦中風(fēng)、白內(nèi)障、糖尿病、動(dòng)脈硬化、肩膀酸痛、冷敏感等由活性氧 (自由基)參與的各種障礙。然而，關(guān)于本實(shí)施過(guò)程的自由基清除劑，也可以用于以上用途 以外能發(fā)揮自由基清除作用的所有用途。關(guān)于本實(shí)施過(guò)程的氧化的細(xì)胞障礙抑制劑，通過(guò)獼猴桃采摘果實(shí)的提取物所擁有 的氧化的細(xì)胞障礙抑制作用，可以抑制因活性氧引起的細(xì)胞障礙，結(jié)果是可以預(yù)防或改善 皮膚粗糙、皺紋形成、皮膚彈性降低等皮膚老化等。然而，關(guān)于本實(shí)施過(guò)程的細(xì)胞障礙抑制 劑，也可以用于以上用途以外能發(fā)揮細(xì)胞障礙抑制作用的所有用途。獼猴桃采摘果實(shí)的提取物具有活性氧清除作用、自由基清除作用、氧化的細(xì)胞障 礙抑制作用，在用于皮膚時(shí)，使用效果和安全性俱佳，所以，若配合皮膚化妝品使用，則效果 更佳。此時(shí)，對(duì)于皮膚化妝品，可以直接與獼猴桃采摘果實(shí)的提取物一起使用，也可以與 獼猴桃采摘果實(shí)的提取物制成的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細(xì)胞障礙抑制劑一 起使用。通過(guò)同時(shí)使用獼猴桃采摘果實(shí)的提取物或者由該提取物制成的活性氧清除劑、自 由基清除劑、氧化的細(xì)胞障礙抑制劑，能對(duì)皮膚化妝品提供活性氧清除作用、自由基清除作 用、氧化的細(xì)胞障礙抑制作用。對(duì)于與獼猴桃采摘果實(shí)的提取物一起使用的皮膚化妝品，其種類不固定，例如軟 膏、霜、乳液、洗劑、面膜、底妝等。將獼猴桃采摘果實(shí)的提取物等與皮膚化妝品一起使用時(shí)，根據(jù)皮膚化妝品的種 類，可以適當(dāng)調(diào)整提取物的用量。但是，合適的比例為0.0005-0. 45%重量(固體時(shí))，最佳 比例為0. 005-0. 05%重量(固體時(shí))。另外，由下文的實(shí)施事例可以看出，與獼猴桃熟透果 實(shí)的提取物相比，在更低濃度下，獼猴桃采摘果實(shí)的提取物具有活性氧清除作用、自由基清 除作用、氧化的細(xì)胞障礙抑制作用、紫外線照射引起的細(xì)胞障礙抑制作用、表皮角化細(xì)胞增 殖促進(jìn)作用、絲聚蛋白原mRNA發(fā)現(xiàn)促進(jìn)作用。所以，即使獼猴桃采摘果實(shí)的提取物與皮膚 化妝品的比例很低-0. 0005-0. 001%重量(固體時(shí))，也能使皮膚化妝品產(chǎn)生理想的作用。上述皮膚化妝品不影響獼猴桃采摘果實(shí)的提取物所具有的活性氧清除作用、自由 基清除作用、氧化的細(xì)胞障礙抑制作用、紫外線照射引起的細(xì)胞障礙抑制作用、表皮角化細(xì) 胞增殖促進(jìn)作用、絲聚蛋白原mRNA發(fā)現(xiàn)促進(jìn)作用，可以與普通皮膚化妝品生產(chǎn)中使用的主 要藥劑、助劑或其他成分(例如收斂劑、殺菌/抗菌劑、紫外線吸收劑、保濕劑、細(xì)胞刺激 劑、消炎/抗過(guò)敏劑、抗氧化/活性氧清除劑、油脂類、油性物質(zhì)、碳?xì)漕悺⒅舅犷?、乙醇類?酯類、表面活性劑、香料等)同時(shí)使用。這樣，通過(guò)同時(shí)使用，使其成為大眾商品，以與上述 成分發(fā)生增效作用，并產(chǎn)生極佳的使用效果。上述皮膚化妝品具有很高的安全性，而且，在由活性氧清除作用、自由基清除作 用、氧化的細(xì)胞障礙抑制作用、紫外線照射引起的細(xì)胞障礙抑制作用、表皮角化細(xì)胞增殖促 進(jìn)作用、絲聚蛋白原mRNA發(fā)現(xiàn)促進(jìn)作用組成的群里選擇1種或2種以上的作用，可以預(yù)防、 治療或改善皺紋形成、彈性降低等皮膚老化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、貝切特氏病等組織傷害、心肌梗塞、腦中風(fēng)、白內(nèi)障、糖尿病、動(dòng)脈硬化、肩膀酸痛、冷敏感等由活性氧參與的各種障礙。另外，本實(shí)施過(guò)程的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細(xì)胞障礙抑制劑可完全 用于人，但是，各作用效果明顯，也可以用于人以外的動(dòng)物?！矊?shí)施例〕以下表示實(shí)施事例和比較事例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，本發(fā)明不受以下各例的 限制?！矊?shí)施例1〕獼猴桃采摘果實(shí)提取物的制造在稱猴桃(Actinidiachinensis Planch. (Actinidiaceae)，憬紅色種)采摘果實(shí) (含糖量4. 3%，長(zhǎng)半徑:2cm)的粉碎物200g中，加入提取溶劑(精制水)400mL，在30°C條 件下加溫、提取1小時(shí)，熱過(guò)濾。關(guān)于殘?jiān)瑒t進(jìn)行同樣的提取處理。將獲得的提取液混合， 在減壓條件下濃縮，干燥以后，得到獼猴桃采摘果實(shí)的提取物5. 5g?！脖容^例〕獼猴桃果實(shí)提取物的制造除了稱猴桃(Actinidia chinensis Planch. (Actinidiaceae)，憬紅色種)熟透果 實(shí)(含糖量13.4%，長(zhǎng)半徑5cm)的粉碎物200g以外，其他內(nèi)容與實(shí)施事例1相同，得到 獼猴桃果實(shí)的提取物18. 5g?！苍囼?yàn)例1〕過(guò)氧化物清除作用試驗(yàn)(NBT法)關(guān)于實(shí)施事例1的獼猴桃采摘果實(shí)提取物、比較事例1的獼猴桃果實(shí)提取物，按照 以下方法，對(duì)過(guò)氧化物清除作用進(jìn)行試驗(yàn)。在試驗(yàn)管內(nèi)加入0. 05M的NaHC03緩沖液(pH10. 2) 2. 4mL,再加入3mM的黃嘌呤、 3nM 的 EDTA、50ug/mL 的牛血清清蛋白溶液、0. 75mM 的 NBT (nitroblue tetrazolium)，每次 0. lmL，然后加入樣品溶液(實(shí)施事例1和比較事例1，樣品的濃度請(qǐng)參照下表1)0. lmL，在 25°C條件下放置10分鐘。然后，加入酶溶液“黃嘌呤氧化酶”0. lmL，立即攪拌，在25°C條件 下使其反應(yīng)20分鐘。之后，加入6mM的氯化銅0. ImL,使反應(yīng)停止，測(cè)試波長(zhǎng)560nm時(shí)的吸 光度。在不加入酶溶液的情況下，實(shí)施同樣的操作、吸光度的測(cè)試；然后，在不加入樣品 溶液而加入蒸餾水的情況下，實(shí)施同樣的測(cè)試。根據(jù)得到的結(jié)果，由以下公式算出過(guò)氧化物 清除率(％)。過(guò)氧化物清除率(%) = {1-(A-B) / (C-D)} X 100這里，A表示“酶溶液添加、樣品溶液添加時(shí)的吸光度”，B表示“酶溶液不添加、樣 品溶液添加時(shí)的吸光度”，C表示“酶溶液添力卩、樣品溶液不添加時(shí)的吸光度”，D表示“酶溶 液不添加、樣品溶液不添加時(shí)的吸光度”。結(jié)果如表1所示。表1
權(quán)利要求
1.一種活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化性細(xì)胞障礙抑制劑，其特征在于，包括 活性氧清除劑，所述活性氧清除劑以獼猴桃采摘果實(shí)的提取物為有效成分。
2.一種活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化性細(xì)胞障礙抑制劑，其特征在于，包括 自由基清除劑，所述自由基清除劑以獼猴桃采摘果實(shí)的提取物為有效成分。
3.一種活性氧清除劑、自由基清除劑以及氧化性細(xì)胞障礙抑制劑，其特征在于，包括 自由基清除劑，所述自由基清除劑以獼猴桃采摘果實(shí)的提取物為有效成分；氧化性細(xì)胞障 礙抑制劑，所述氧化性細(xì)胞障礙抑制劑以獼猴桃采摘果實(shí)的提取物為有效成分。
全文摘要
本發(fā)明提供一種以安全性高的天然提取物為有效成分的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細(xì)胞障礙抑制劑。在本發(fā)明所說(shuō)明的活性氧清除劑、自由基清除劑、氧化的細(xì)胞障礙抑制劑中，獲取獼猴桃采摘果實(shí)的提取物。
文檔編號(hào)A61Q19/08GK102125585SQ20101056571
公開(kāi)日2011年7月20日 申請(qǐng)日期2010年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月12日
發(fā)明者小谷麻由美, 田部早已, 藤田晃人 申請(qǐng)人:株式會(huì)社布倫克蕾喜