專利名稱：一種固定化酶酶解制取大豆油脂的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物油脂提取技術(shù)，尤其涉及一種固定化酶酶解制取大豆油脂的方法。
背景技術(shù)：
在水酶法提取大豆油脂的過程中，酶溶解于液相和物料混合在一起，無法從反應(yīng)體系中分離出來，不僅增加了成本，還造成了資源的浪費(fèi)，而且會(huì)對(duì)產(chǎn)品品質(zhì)有一定影響。固定化酶是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來的新技術(shù)，一般是將酶與不溶性載體結(jié)合起來，使酶在一定的空間內(nèi)呈封閉狀態(tài)，能連續(xù)的進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)后的酶通過過濾或離心等方法回收重復(fù)使用。然而固定化使用的試劑和載體成本高昂、固定效率偏低，真正投入工業(yè)化應(yīng)用的固定化酶不多，因而進(jìn)一步開發(fā)更簡便、更適用的固定化方法仍是該領(lǐng)域追求的目標(biāo)。交聯(lián)酶聚集體技術(shù)是一種無載體固定化酶技術(shù)，酶的固定化是通過對(duì)基本純化的、高濃度的蛋白質(zhì)樣品的共價(jià)交聯(lián)來實(shí)現(xiàn)的。該固定化方法獲得的固定化酶穩(wěn)定性好、活性高，成本低廉，設(shè)備簡單，無需其他載體，因而單位體積活性大、空間效率高，應(yīng)用范圍更廣。然而將交聯(lián)酶聚集體技術(shù)——無載體固定化酶技術(shù)應(yīng)用于水酶法提取大豆油脂的研究未見報(bào)道，現(xiàn)有的固定化酶提取大豆油脂的方法存在固定化載體成本高，提油率低等問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種固定化酶酶解制取大豆油脂的方法，達(dá)到簡化工藝、提高酶的重復(fù)利用率及降低成本的目的。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:
一種固定化酶酶解制取大豆油脂的方法，該方法包括以下步驟:(I)將protex-6L堿性蛋白酶溶解于磷酸鹽緩沖液中，加入乙醇沉淀聚集后再加入戊二醛進(jìn)行交聯(lián)得固定化protex-6L堿性蛋白酶；(2)大豆經(jīng)粉碎后進(jìn)行擠壓膨化預(yù)處理得到膨化物料，將膨化物料粉碎后與水混合得到混合液，所述加水量與膨化物料質(zhì)量比為5-9:1，調(diào)節(jié)混合液pH和溫度，再加入步驟(I)中得到的固定化酶進(jìn)行酶解得到酶解液，酶解后回收固定化酶，酶解液經(jīng)離心分即得大豆油脂。所述的固定化protex_6L堿性蛋白酶在以下工藝參數(shù)下制備:交聯(lián)pH 6_8，戊二醛濃度10-50%，交聯(lián)時(shí)間l-3h，游離酶添加量8000-12000U/g。所述的固定化protex_6L堿性蛋白酶制備的優(yōu)選參數(shù)為:交聯(lián)pH 6.98，戊二醛濃度32.5%，交聯(lián)時(shí)間2.02h，游離酶添加量10010U/g。所述的加水量與膨化物料質(zhì)量比優(yōu)選為6.79:1。所述的酶解在以下工藝參數(shù)下進(jìn)行:酶解溫度55_75°C，酶解pH 8_10，酶解時(shí)間2_4h，加酶量 4000-6000U/g。所述的酶解優(yōu)選參數(shù)為: 酶解溫度63.5°C，酶解pH 9.35，酶解時(shí)間3.5h，加酶量4895U/g。本發(fā)明方法采用無載體固定化堿性蛋白酶，首先用沉淀劑聚集酶，再加入交聯(lián)劑使酶聚集體交聯(lián)，即得交聯(lián)酶聚集體一一固定化堿性蛋白酶，該固定化酶由于無需成本高昂的載體，因此大大降低了成本，應(yīng)用此固定化酶提取大豆油脂，不僅提油率高，并且酶可回收重復(fù)使用，減少了資源的浪費(fèi)。


圖1是本發(fā)明方法的工藝路線 圖2交聯(lián)pH與戊二醛濃度交互對(duì)酶活力回收率的響應(yīng)面；
圖3交聯(lián)pH與交聯(lián)時(shí)間交互對(duì)酶活力回收率的響應(yīng)面；
圖4交聯(lián)pH與游離酶添加量交互對(duì)酶活力回收率的響應(yīng)面；
圖5戊二醛濃度與游離酶添加量交互對(duì)酶活力回收率的響應(yīng)面；
圖6酶解溫度與酶解pH交互對(duì)總油提取率的響應(yīng)面；
圖7酶解溫度與液料比交互對(duì)總油提取率的響應(yīng)面；
圖8酶解pH與酶解時(shí)間交互對(duì)總油提取率的響應(yīng)面；
圖9酶解pH與液料比交互對(duì)總油提取率的響應(yīng)面；
圖10酶解時(shí)間與液料比交互對(duì)總油提取率的響應(yīng)面。
具體實(shí)施方案下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明具體實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)描述，
一種固定化酶酶解制取大豆油脂的方法，該方法包括以下步驟:(I)將protex-6L堿性蛋白酶溶解于磷酸鹽緩沖液中，加入乙醇沉淀聚集后再加入戊二醛進(jìn)行交聯(lián)得固定化protex-6L堿性蛋白酶；(2)大豆經(jīng)粉碎后進(jìn)行擠壓膨化預(yù)處理得到膨化物料，將膨化物料粉碎后與水混合得到混合液，所述加水量與膨化物料質(zhì)量比為5-9:1，調(diào)節(jié)混合液pH和溫度，再加入步驟(I)中得到的固定化酶進(jìn)行酶解得到酶解液，酶解后回收固定化酶，酶解液經(jīng)離心分即得大豆油脂。所述的固定化protex_6L堿性蛋白酶在以下工藝參數(shù)下制備:交聯(lián)pH 6_8，戊二醛濃度10-50%，交聯(lián)時(shí)間l-3h，游離酶添加量8000-12000U/g。所述的固定化protex_6L堿性蛋白酶制備的優(yōu)選參數(shù)為:交聯(lián)pH 6.98，戊二醛濃度32.5%，交聯(lián)時(shí)間2.02h，游離酶添加量10010U/g。所述的加水量與膨化物料質(zhì)量比優(yōu)選為6.79:1。所述的酶解在以下工藝參數(shù)下進(jìn)行:酶解溫度55_75°C，酶解pH 8_10，酶解時(shí)間2_4h，加酶量 4000-6000U/g。所述的酶解優(yōu)選參數(shù)為:酶解溫度63.5°C，酶解pH 9.35，酶解時(shí)間3.5h，加酶量4895U/g。實(shí)施例1:制備無載體固定化堿性蛋白酶最佳參數(shù)的篩選試驗(yàn) I材料與方法1.1材料、試 劑 __
protex—6L堿性內(nèi)切蛋白酶丹麥novo公司
權(quán)利要求
1.一種固定化酶酶解制取大豆油脂的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟:(1)將pix)tex-6L堿性蛋白酶溶解于磷酸鹽緩沖液中，加入乙醇沉淀聚集后再加入戊二醛進(jìn)行交聯(lián)得固定化proteX-6L堿性蛋白酶；(2)大豆經(jīng)粉碎后進(jìn)行擠壓膨化預(yù)處理得到膨化物料，將膨化物料粉碎后與水混合得到混合液，所述加水量與膨化物料質(zhì)量比為5-9:1，調(diào)節(jié)混合液PH和溫度，再加入步驟(I)中得到的固定化酶進(jìn)行酶解得到酶解液，酶解后回收固定化酶，酶解液經(jīng)離心分即得大豆油脂。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化酶酶解制取大豆油脂的方法，其特征在于所述的固定化protex-6L堿性蛋白酶在以下工藝參數(shù)下制備:交聯(lián)pH 6-8,戍二醒濃度10-50%,交聯(lián)時(shí)間l_3h，游離酶添加量8000-12000U/g。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種固定化酶酶解制取大豆油脂的方法，其特征在于所述的固定化protex-6L堿性蛋白酶制備的優(yōu)選參數(shù)為:交聯(lián)pH 6.98，戊二醛濃度32.5%，交聯(lián)時(shí)間2.02h，游離酶添加量10010U/g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化酶酶解制取大豆油脂的方法，其特征在于所述的加水量與膨化物料質(zhì)量比優(yōu)選為6.79:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種固定化酶酶解制取大豆油脂的方法，其特征在于所述的酶解在以下工藝參數(shù)下進(jìn)行:酶解溫度55-75°C，酶解pH 8-10，酶解時(shí)間2_4h，加酶量4000-6000U/g。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種固定化酶酶解制取大豆油脂的方法，其特征在于所述的酶解優(yōu)選參數(shù)為:酶 解溫度63.50C，酶解pH 9.35，酶解時(shí)間3.5h，加酶量4895U/g。
全文摘要
一種固定化酶酶解制取大豆油脂的方法屬于植物油脂提取技術(shù)，該方法包括以下步驟(1)將堿性蛋白酶溶解于磷酸鹽緩沖液中，加入乙醇沉淀聚集后再加入戊二醛進(jìn)行交聯(lián)得交聯(lián)酶聚集體即固定化堿性蛋白酶；(2)大豆經(jīng)粉碎后進(jìn)行擠壓膨化預(yù)處理得到膨化物料，將膨化物料粉碎后與水混合，調(diào)節(jié)pH和溫度，再加入步驟(1)中得到的固定化酶進(jìn)行酶解，酶解后回收固定化酶，酶解液經(jīng)離心分離后，即得大豆油脂；本方法所需的工藝設(shè)備簡單，制備的固定化酶活性高，固定化時(shí)間短且無需成本高昂的載體，大大降低了成本，同時(shí)將該固定化酶應(yīng)用于水酶法提取大豆油脂中，不僅提油率高，并且酶可回收重復(fù)使用，減少資源浪費(fèi)，具有很好的經(jīng)濟(jì)效益和發(fā)展前景。
文檔編號(hào)C11B1/00GK103074152SQ20121057808
公開日2013年5月1日 申請(qǐng)日期2012年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月26日
發(fā)明者李楊, 江連洲, 齊寶坤, 馮紅霞, 王歡, 王中江, 王勝男, 隋曉楠 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)