含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液，該美白精華液由表皮細(xì)胞培養(yǎng)液制成，含有抑制酪氨酸酶(Tyr)表達(dá)的siRNA,阻斷皮膚組織黑色素細(xì)胞中的黑色素形成。該siRNA通過脂質(zhì)體包被，進(jìn)入皮膚，發(fā)揮基因抑制作用。表皮細(xì)胞培養(yǎng)液中富含表皮細(xì)胞分泌的生長因子、氨基酸和維生素，又添加了含量明確的細(xì)胞生長因子，并添加了甘油和玻尿酸，使該美白精華液增加了保濕效果。制備該精華液的方法包括針對tyr基因設(shè)計合成siRNA、制成siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物、獲取新生兒臍帶組織表皮、收集細(xì)胞培養(yǎng)液、過濾、濃縮、添加活性成分。該美白精華液從分子層面上阻斷了黑色素的生成，并為肌膚提供多種具有生理活性的內(nèi)源性營養(yǎng)成分，并且具有保濕效果。
【專利說明】含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種表皮細(xì)胞培養(yǎng)液制成的精華液，具體涉及一種抑制黑色素生成的siRNA的細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液。
【背景技術(shù)】
[0002]目前大多數(shù)美白化妝品中多含有雙氧水、對苯二酚、汞、鉛、酵素及香料等物質(zhì)，對肌膚具有直接刺激性，還可能導(dǎo)致肌膚敏感、色素沉著、痤瘡等，甚至致癌。而且由于此類化妝品中含有重金屬，長期使用會引起重金屬積聚，導(dǎo)致黑色素增多、沉著，甚至機(jī)體中毒。
[0003]市場上常見的精華液多為植物提取物，制作過程經(jīng)過多次有機(jī)溶劑提取純化，成品中含有有機(jī)溶劑殘留較多，會對皮膚造成過敏性刺激，甚至臟器損傷，不適合所有人群使用。改良美容精華液的制作方法，找到一種無有機(jī)物殘留、非化工合成的精華液制造方法，得到健康無副作用美容產(chǎn)品，是此技術(shù)的特色。
[0004]黑色素是廣泛存在于人的皮膚、粘膜、視網(wǎng)膜、軟腦膜及膽囊與卵巢等處。皮膚的黑色素細(xì)胞主要分布在表皮之基底層，也見于毛根及外毛鞘。人的表皮約有20億個黑色素細(xì)胞，重約一克，平均每平方毫米1560個對稱分布于全身。黑色素細(xì)胞能合成并分泌黑色素，因此是一種腺性細(xì)胞。然而黑色素的生物合成非常復(fù)雜，是通過色體(未成熟的黑色素)內(nèi)酪氨酸一酪氨酸酶反應(yīng)形成的。對小鼠的研究表明，超過127個基因影響毛色的形成過程。
[0005]酪氨酸酶(TYR)，是一種含銅酶，來源于胚胎神經(jīng)峭細(xì)胞，是黑素代謝和兒茶酚胺的關(guān)鍵酶，也是目前惟一已明確的黑色素代謝酶。酪氨酸酶具有多種特征性催化活性，既可以作為酪氨酸羥化酶、多巴氧化酶，又可以作為5，6 -二羥基吲哚氧化酶，在黑色素生成過程中起著至關(guān)重要的作用。黑色素細(xì)胞產(chǎn)生的黑色素在酪氨酸酶的作用下，由酪氨酸酶轉(zhuǎn)化為多巴，再經(jīng)一系列復(fù)雜的生化過程而生成。酪氨酸酶活性高，即與酪氨酸作用其產(chǎn)物黑色素生成增多，表現(xiàn)于面部皮膚上產(chǎn)生各種黑斑。因此，抑制酪氨酸酶活性是有效減少黑色素生成的一種途徑。而減少黑色素的生成，需要下調(diào)黑色素酶基因的表達(dá)。
[0006]目前，核糖核苷酸(RNA)干擾技術(shù)是基因調(diào)節(jié)的主要方法。該技術(shù)利用一段與目的基因同源的雙鏈RNA分子，利用RNA沉默通路來抑制目的基因的表達(dá)。目前應(yīng)用較廣泛的RNA干擾手段是siRNA (small interfering RNA)。siRNA是一段合成的雙鏈RNA分子，長度大約19nt，末端 帶有懸垂修飾，其反義鏈與目的基因mRNA互補(bǔ)。siRNA在RNA沉默通路中起中心作用，是對特定信使RNA進(jìn)行降解的指導(dǎo)要素。
[0007]現(xiàn)階段，基因藥物常用脂質(zhì)體進(jìn)行包封，用于體內(nèi)、體外制劑。脂質(zhì)體是將藥物包封于類脂雙分子層形成的薄膜中間所制成的超微型球狀載體制劑。脂質(zhì)體進(jìn)入體內(nèi)主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞系統(tǒng)吞噬而釋放藥物，并改變被包封藥物的體內(nèi)分布，提高藥物的治療指數(shù)，減少藥物的治療劑量，能夠降低藥物毒副作用、提高生物利用度、并具有長效緩釋作用。在研究的各種新型脂質(zhì)體中，熱敏脂質(zhì)體(溫度敏感脂質(zhì)體)是一個很有發(fā)展前途的分支，它有效利用了脂質(zhì)體和熱療的雙重優(yōu)勢來提高治療效果，降低毒副作用。體外用藥的脂質(zhì)體因皮膚溫度比自身溫度高，磷脂分子運(yùn)動加強(qiáng)，脂質(zhì)體膜的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，原來排列整齊致密的膠晶態(tài)磷脂雙分子層在較高溫度下變成疏松混亂的液晶態(tài)。小單層脂質(zhì)體(SUV)由于其高度彎曲的脂質(zhì)雙層張力較大，相變溫度低。本發(fā)明將脂質(zhì)體用于美容制品，既有利于藥物與皮膚直接接觸，在局部發(fā)揮藥效，又可避免因吸收而產(chǎn)生的不良反應(yīng)，同時有護(hù)膚、美容之功效。
[0008]本發(fā)明通過培養(yǎng)人表皮細(xì)胞，獲得富含促進(jìn)表皮細(xì)胞生長的各類生長因子的培養(yǎng)液，加入以上siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物，制成的精華液。該精華液不同于植物提取物，無鉛、汞、酒精、防腐劑、激素、香料等有害物質(zhì)殘留。本發(fā)明制成精華液，是生物【技術(shù)領(lǐng)域】衍生產(chǎn)品，利用人類表皮細(xì)胞培養(yǎng)液中的生物成分，與甘油、玻尿酸配伍，并且加入抑制黑色素產(chǎn)生的siRNA，制成具有生物活性的美容精華液，具有顯著的護(hù)膚效果。該產(chǎn)品的生產(chǎn)方法脫離了化工生產(chǎn)工藝，具有很高的安全性，具有較好的推廣和應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的在于提供抑制黑色素生成、純天然的細(xì)胞培養(yǎng)物精華液，為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液，由以下組分組成:表皮細(xì)胞培養(yǎng)液濃縮液79.3%、抑制黑色素的siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物0.5%、甘油20%和玻尿酸0.2%。
[0010]進(jìn)一步的，所述的表皮干細(xì)胞培養(yǎng)濃縮液是表皮干細(xì)胞培養(yǎng)液按照5:1的比例濃縮制成。
[0011]進(jìn)一步的，所述的抑制黑色素的SiRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物是由低熔點(diǎn)陽離子脂質(zhì)體(SUV)與SiRNA產(chǎn)物在無菌生理鹽水中按摩爾比1:1混合均勻得到的。
[0012]進(jìn)一步的，所述的siRNA為根據(jù)目的DNA序列設(shè)計的，長度為21nt，其序列為: 正義鏈:5’ GUACAACAGCCAU`CAGUCUUU
反義鏈:5’ CUCAUGUUGUCGGUAGUCAGA。
[0013]進(jìn)一步的，所述的目的DNA序列是從美國國家衛(wèi)生研究院的NCBI標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫中選酪氨酸酶基因if片段序列。
[0014]一種含有抑制黑色素生成的siRNA的細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液的制備方法，其特征是由下述步驟組成:
步驟I)選定目的DNA序列:本發(fā)明以酪氨酸酶作為靶點(diǎn)，根據(jù)美國國家衛(wèi)生研究院的NCBI標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫中選酪氨酸酶基因tyr片段序列為靶序列；
步驟2)設(shè)計并合成siRNA:根據(jù)tyr基因設(shè)計siRNA片段，并用化學(xué)合成法合成；步驟3))制備siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物:用低熔點(diǎn)陽離子脂質(zhì)體(SUV)與步驟2)得到的siRNA產(chǎn)物在無菌生理鹽水中按摩爾比1:1混合均勻，制成siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物；
步驟4)收集人表皮細(xì)胞培養(yǎng)液:采集獲取新生兒臍帶表皮細(xì)胞，原代培養(yǎng)3-5天，傳代培養(yǎng)3-6代，收集培養(yǎng)液；
步驟5)原液過濾:收集的細(xì)胞培養(yǎng)液經(jīng)過過濾系統(tǒng),濾去細(xì)胞碎片及微生物；
步驟6)過濾液濃縮:過濾液置于超濾管中低溫高速離心，得到的濃縮液置于4°C冰箱儲存；
步驟7)制備精華液:向步驟6所述的濃縮液中加入步驟3所述的siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物以及醫(yī)用甘油和玻尿酸原液，混合均勻。
[0015]進(jìn)一步的，所述的步驟I)中，目的DNA序列為:
ATGCTCCTGG CTGTTTTGTA CTGCCTGCTG TGGAGTTTCC AGACCTCCGC TGGCCATTTCCCTAGAGCCT GTGTCTCCTC TAAGAACCTG ATGGAGAAGG AATGCTGTCC ACCGTGGAGC GGGGACAGGAGTCCCTGTGG CCAGCTTTCA GGCAGAGGTT CCTGTCAGAA TATCCTTCTG TCCAATGCAC CACTTGGGCCTCAATTTCCC TTCACAGGGG TGGATGACCG GGAGTCGTGG CCTTCCGTCT TTTATAATAG GACCTGCCAGTGCTCTGGCA ACTTCATGGG ATTCAACTGT。
[0016]進(jìn)一步的,所述的步驟3)中siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物的濃度為20ug/ml。
[0017]進(jìn)一步的，所述的步驟4)中原代培養(yǎng)基為NaHCO3含量0.37%的高糖DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清含量20% ;傳代培養(yǎng)基為NaHCO3含量0.37%的高糖DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清含量5%，消化細(xì)胞所用的消化液是不含EDTA的0.025%的胰酶，消化細(xì)胞的條件為37°C，CO2濃度5%，3分鐘；收集細(xì)胞培養(yǎng)液為細(xì)胞第3-6代的細(xì)胞培養(yǎng)液。
[0018]進(jìn)一步的，所述的步驟5)中細(xì)胞培養(yǎng)液原液過濾系統(tǒng)為孔徑0.22um的PES過濾系統(tǒng)。
[0019]進(jìn)一步的，所述的步驟6)中細(xì)胞培養(yǎng)液過濾液濃縮系統(tǒng)為:Millipore 5K超濾管，溫度4°C，離心力12000 g，離心2小時。
[0020]進(jìn)一步的，所述的步驟7)中精華液的siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物的終濃度為0.5% ;醫(yī)用甘油和玻尿 酸原液的終濃度為20%和0.2%。
[0021]本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果:
1.本發(fā)明不同于其他美白產(chǎn)品，用siRNA下調(diào)酪氨酸酶的表達(dá)量，因而阻斷了黑色素的合成，淡化色斑。由于不使用化學(xué)美白產(chǎn)品，避免了有害化學(xué)物質(zhì)損傷細(xì)胞、重金屬沉積等副作用。
[0022]2.本發(fā)明以低熔點(diǎn)脂質(zhì)體(SUV)作為體外用藥的載體，借助與低熔點(diǎn)脂質(zhì)體可以在體溫條件下改變結(jié)構(gòu)，釋放基因藥物的特點(diǎn)，有效釋放藥物，達(dá)到高效美白的效果。
[0023]3.本發(fā)明采用細(xì)胞培養(yǎng)方法，得到含有多種表皮細(xì)胞因子的培養(yǎng)液，這些分泌的細(xì)胞因子都是人體成分，可以直接被皮膚吸收，避免過敏反應(yīng)，無副作用。其中，每種細(xì)胞因子都具有各自不同作用:成纖維細(xì)胞生長因子能促進(jìn)成纖維細(xì)胞有絲分裂、中胚層細(xì)胞的生長，還可刺激血管形成，在創(chuàng)傷愈合及肢體再生中發(fā)揮作用；表皮細(xì)胞生長因子能促進(jìn)受損表皮的修復(fù)與再生，對燒傷、燙傷、光療、等多種表皮創(chuàng)傷的修復(fù)的功效十分顯著。
[0024]4.本發(fā)明富含細(xì)胞因子，因此不能使用高溫及化學(xué)滅菌的方式。因此本發(fā)明利用過濾法去除微生物污染，既避免了產(chǎn)品出現(xiàn)污染變質(zhì)問題，又保證生物活性成分不被高溫、輻射或化學(xué)殺菌劑改變結(jié)果，保證了產(chǎn)品中細(xì)胞因子的活性，使產(chǎn)品效果穩(wěn)定。
[0025]5.本發(fā)明加入了甘油和玻尿酸，在美白的同時增加了保濕效果，也增加了該液的濃稠度。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0026]此處所說明的附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，構(gòu)成本申請的一部分，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中:
圖1為含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液生產(chǎn)流程圖。【具體實(shí)施方式】
[0027]下面將參考附圖并結(jié)合實(shí)施例，來詳細(xì)說明本發(fā)明。
[0028]參照圖1所示，本實(shí)施例【具體實(shí)施方式】如下:
一種含有抑制黑色素生成的siRNA的細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液，由以下組分組成:表皮細(xì)胞培養(yǎng)液濃縮液79.3%、抑制黑色素的siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物0.5%、甘油20%和玻尿酸
0.2%。由下述步驟制備而成:
步驟I)選定目的DNA序列:本發(fā)明以酪氨酸酶作為靶點(diǎn)，根據(jù)美國國家衛(wèi)生研究院的NCBI標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫中選酪氨酸酶基因tyr片段序列為靶序列；其中，目的DNA序列為:
ATGCTCCTGG CTGTTTTGTA CTGCCTGCTG TGGAGTTTCC AGACCTCCGC TGGCCATTTCCCTAGAGCCT GTGTCTCCTC TAAGAACCTG ATGGAGAAGG AATGCTGTCC ACCGTGGAGC GGGGACAGGAGTCCCTGTGG CCAGCTTTCA GGCAGAGGTT CCTGTCAGAA TATCCTTCTG TCCAATGCAC CACTTGGGCCTCAATTTCCC TTCACAGGGG TGGATGACCG GGAGTCGTGG CCTTCCGTCT TTTATAATAG GACCTGCCAGTGCTCTGGCA ACTTCATGGG ATTCAACTGT ；
步驟2)設(shè)計并合成siRNA:根據(jù)tyr基因設(shè)計siRNA片段，并用化學(xué)合成法合成；設(shè)計的siRNA序列為:
正義鏈:5’ GUACAACAGCCAUCAGUCUUU 反義鏈:5’ CUCAUGUUGUCGGUAGUCAGA ；
步驟3)制備siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物:用商品化小單層脂質(zhì)體(SUV)與步驟2)得到的siRNA產(chǎn)物，在生理鹽水中按摩爾比1:1均勻混合，制成siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物，siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物的濃度為20ug/ml ；
步驟4)收集人表皮細(xì)胞培養(yǎng)液:采集獲取新生兒臍帶表皮細(xì)胞，原代培養(yǎng)3-5天，傳代培養(yǎng)3-6代，收集培養(yǎng)液；其中:原代培養(yǎng)基為NaHCO3含量0.37%的高糖DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清含量20% ;傳代培養(yǎng)基為NaHCO3含量0.37%的高糖DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清含量5%，消化細(xì)胞所用的消化液是不含EDTA的0.025%的胰酶，消化細(xì)胞的條件為37°C，CO2濃度5%，3分鐘；收集細(xì)胞培養(yǎng)液為細(xì)胞第3-6代的細(xì)胞培養(yǎng)液；
步驟5)原液過濾:收集的細(xì)胞培養(yǎng)液經(jīng)過孔徑0.22um的PES過濾系統(tǒng)，濾去細(xì)胞碎片及微生物；
步驟6)過濾液濃縮:過濾液置于超濾管中低溫高速離心，濃縮系統(tǒng)為=Millipore 5K超濾管，溫度4°C，離心力12000 g，離心2小時；以5:1的比例濃縮；將得到的濃縮液置于4°C冰箱儲存；
步驟7)制備精華液:向步驟6所述的濃縮液中加入步驟3所述的siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物以及醫(yī)用甘油和玻尿酸原液，混合均勻；其中:siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物的終濃度為0.5% ;甘油和玻尿酸原液的終濃度為20%和0.2%。
[0029]以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種含有抑制黑色素生成的SiRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液，其特征在于:由以下組分組成:表皮細(xì)胞培養(yǎng)液濃縮液79.3%、抑制黑色素siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物0.5%、甘油20%和玻尿酸0.2%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液，其特征在于:所述的表皮干細(xì)胞培養(yǎng)濃縮液是表皮干細(xì)胞培養(yǎng)液按照5:1的比例濃縮制成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液，其特征在于:所述的抑制黑色素的siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物是由低熔點(diǎn)陽離子脂質(zhì)體(SUV)與siRNA產(chǎn)物在無菌生理鹽水中按摩爾比1:1混合均勻得到的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液，其特征在于:所述的siRNA為根據(jù)目的DNA序列設(shè)計siRNA的，長度為21nt，序列為: 正義鏈:5’ GUACAACAGCCAUCAGUCUUU 反義鏈:5’ CUCAUGUUGUCGGUAGUCAGA。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液，其特征在于:所述的目的DNA序列是從美國國家衛(wèi)生研究院的NCBI標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫中選酪氨酸酶基因if片段序列。
6.權(quán)利要求1所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液的制備方法，其特征在于:由下述步驟組成: 步驟I)選定目的DNA序列:本發(fā)明以酪氨酸酶作為靶點(diǎn)，根據(jù)美國國家衛(wèi)生研究院的NCBI標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫中選酪氨酸酶基因tyr片段序列為靶序列；` 步驟2)設(shè)計并合成siRNA:根據(jù)tyr基因設(shè)計siRNA片段，并用化學(xué)合成法合成； 步驟3)制備siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物:用低熔點(diǎn)陽離子脂質(zhì)體(SUV)與步驟2)得到的siRNA產(chǎn)物，在生理鹽水中按摩爾比1:1均勻混合，制成siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物； 步驟4)收集人表皮細(xì)胞培養(yǎng)液:采集獲取新生兒臍帶表皮細(xì)胞，原代培養(yǎng)3-5天，傳代培養(yǎng)3-6代，收集培養(yǎng)液； 步驟5)原液過濾:收集的細(xì)胞培養(yǎng)液經(jīng)過過濾系統(tǒng),濾去細(xì)胞碎片及微生物； 步驟6)過濾液濃縮:過濾液置于超濾管中低溫高速離心，得到的濃縮液置于4°C冰箱儲存； 步驟7)加入甘油及玻尿酸:向以上精華液中加入醫(yī)用甘油和玻尿酸原液，混合均勻。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種含有抑制黑色素生成siRNA的細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液的制備方法，其特征在于:所述的步驟I)中，目的DNA序列為: ATGCTCCTGG CTGTTTTGTA CTGCCTGCTG TGGAGTTTCC AGACCTCCGC TGGCCATTTCCCTAGAGCCT GTGTCTCCTC TAAGAACCTG ATGGAGAAGG AATGCTGTCC ACCGTGGAGC GGGGACAGGAGTCCCTGTGG CCAGCTTTCA GGCAGAGGTT CCTGTCAGAA TATCCTTCTG TCCAATGCAC CACTTGGGCCTCAATTTCCC TTCACAGGGG TGGATGACCG GGAGTCGTGG CCTTCCGTCT TTTATAATAG GACCTGCCAGTGCTCTGGCA ACTTCATGGG ATTCAACTGT。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液的制備方法，其特征在于:所述的步驟3)中siRNA-脂質(zhì)體復(fù)合物在復(fù)合物濃度為20ug/ml。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種含有抑制黑色素生成siRNA的細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液的制備方法，其特征在于:所述的步驟4)中原代培養(yǎng)基為NaHCO3含量0.37%的高糖DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清含量20% ;傳代培養(yǎng)基為NaHCO3含量0.37%的高糖DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清含量5%，消化細(xì)胞所用的消化液是不含EDTA的0.025%的胰酶，消化細(xì)胞的條件為37°C，CO2濃度5%，3分鐘；收集細(xì)胞培養(yǎng)液為細(xì)胞第3-6代的細(xì)胞培養(yǎng)液。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液的制備方法，其特征在于:所述的步驟5)中細(xì)胞培養(yǎng)液原液過濾系統(tǒng)為孔徑0.22um的PES過濾系統(tǒng)。
11.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種含有抑制黑色素生成的siRNA細(xì)胞培養(yǎng)物美白精華液的制備方法，其特征在于:所述的步驟6)中細(xì)胞培養(yǎng)液過濾液濃縮系統(tǒng)為:Millip0re 5K超濾管，溫度4°C，離心力12`000 g，離心2小時。
【文檔編號】A61Q19/02GK103860444SQ201410073669
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月3日
【發(fā)明者】周萱 申請人:奧思達(dá)干細(xì)胞有限公司