外源酶解提取高含量dha+epa磷蝦油的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從南極磷蝦中提取高含量DHA+EPA磷蝦油的方法，所述的方法包括以下步驟：新鮮磷蝦勻漿，制備木瓜蛋白酶液，將酶液加入磷蝦勻漿液中調(diào)節(jié)pH值、溫度，酶解反應(yīng)后自然沉淀，取下層水解殘?jiān)靡掖冀崛危喜⑷蔚慕嵋簻p壓濃縮，水浴加熱。本發(fā)明的方法采用自溶與外源酶解結(jié)合的方式，工藝簡(jiǎn)單，更易于產(chǎn)業(yè)化，使用本發(fā)明的方法提取的磷蝦油中EPA+DHA含量高于70％。
【專利說(shuō)明】外源酶解提取高含量0…+0八磷蝦油的方法
【【技術(shù)領(lǐng)域】】
[0001]本發(fā)明涉及一種從南極磷蝦中提取磷蝦油的方法，具體地說(shuō)，是一種外源酶解提取高含量0撤十2？八磷蝦油的方法。
【【背景技術(shù)】】
[0002]南極磷蝦，又名大磷蝦或南極大磷蝦，是一種生活在南冰洋的南極洲水域的磷蝦。采用南極磷蝦制備而得的磷蝦油具有超強(qiáng)的降血脂、降血糖、降血壓、穿越血腦屏障營(yíng)養(yǎng)及活化腦部細(xì)胞和神經(jīng)，從而起到預(yù)防和治療腦血管疾病的作用；同時(shí)，還能預(yù)防和治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化，冠心病，預(yù)防發(fā)生心梗、支架、搭橋及二次復(fù)發(fā)等心血管疾??；南極磷蝦油還可以起到抗菌消炎，預(yù)防癌癥的發(fā)生發(fā)展，延緩衰老，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌等多重功效。
[0003]南極磷蝦油含有0郵職-3必需脂肪酸二十碳五烯酸(即八)和二十二碳六烯酸(0撤)。006職-3必需脂肪酸有很多促進(jìn)健康的益處，包括心血管，神經(jīng)，骨骼和關(guān)節(jié)，視力，皮膚保健等。其不飽和脂肪酸是自然界中唯一以磷脂型態(tài)結(jié)合03-3和多樣性超強(qiáng)抗氧化物(磷脂型奸青素八的分子結(jié)構(gòu)。南極磷奸油是含有豐富的維生素
2、維生素八、蝦青素、磷脂質(zhì)、類(lèi)黃酮的功能強(qiáng)大的抗氧化劑。南極磷蝦自身富含高效的消化腺蛋白酶。
[0004]磷蝦油的制備方法大致有以下幾種:
[0005]1、申請(qǐng)?zhí)枮?01210410940的發(fā)明《一種從干南極磷蝦中提取蝦油粗品并處理泡沫的工藝》，步驟如下:(1)干南極磷蝦，加入95?100%乙醇，攪拌提取處，用80目濾布擠濾后再用濾紙過(guò)濾，得濾液及濾渣；(2)向步驟(1)所得濾渣中加入95?100%乙醇，攪拌提取處，用80目濾布擠濾后再用濾紙過(guò)濾，得濾液及濾渣；向?yàn)V渣中再加入95?100%乙醇，攪拌提取處，用80目濾布擠濾后再用濾紙過(guò)濾，得濾液及濾渣；(3)將步驟(2)所得的濾液合并，真空濃縮，即得蝦油粗品。每1008干南極磷蝦(含水量為8%?10%)最終能得到19?20.728的蝦油粗品。
[0006]2、《南極磷蝦粗蝦油提取工藝優(yōu)化》一文研究了南極磷蝦粗蝦油的有機(jī)溶劑提取工藝。探討不同提取劑、提取劑混合比、提取時(shí)間、提取溫度和料液比對(duì)南極磷蝦粗蝦油得率的影響。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過(guò)響應(yīng)面分析確定最佳的提取工藝條件為:以正己烷+乙酸乙酯為提取劑、提取劑混合比71.3:28.7、料液比1:6.6、在57.81提取50—；此時(shí)粗蝦油得率為14.76%。
[0007]中國(guó)專利文獻(xiàn)⑶:201310262319.7，公告日2013年9月18日公開(kāi)了一種低溫逆流提取南極磷蝦蝦油的方法，該方法運(yùn)用溶劑逆向?qū)υ线M(jìn)行提取，通過(guò)干燥粉碎、逆流提取、溶劑揮發(fā)，制備的南極磷蝦油主要成分及含量為:磷脂35-40 %、2？八13-18%、0擬8-12%。專利文獻(xiàn):201180067212.6，公告日2014年01月08日公開(kāi)了一種生產(chǎn)磷蝦油的方法，所述用于生產(chǎn)磷蝦油的方法包括以下步驟:準(zhǔn)備磷蝦；向所述磷蝦中添加蛋白酶以進(jìn)行酶反應(yīng)；提取二十碳五烯酸(即八)、二十二碳六烯酸(0撤)，使用該種方法制備的磷蟲(chóng)下油2？八含量為14-18%，0撤含量為8-12。上述方法能有效的從磷奸中提取磷奸油，但所提取的磷蝦油中0撤和20八的含量并不高。因此，研發(fā)一種從磷蝦中提取高含量的01^+2？八磷蝦油的方法是十分必要的。
【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0008]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種從南極磷蝦中提取高含量0^+2？^磷蝦油的方法。
[0009]本發(fā)明的再一的目的是，提供由上述方法制備的磷蝦油。
[0010]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
[0011]一種從南極磷蝦中提取高含量0撤—2？八磷蝦油的方法，包括如下步驟:
[0012](1)取新鮮的南極磷蝦勻漿，加入超純水，混合均勻，得磷蝦均漿液；
[0013](2)取木瓜蛋白酶，溶解于超純水中，得酶液；
[0014](3)將步驟⑵制備的酶液加入到步驟⑴制備的磷蝦均漿液中，調(diào)節(jié)邱至
6.0-7.0，于45-551酶解1.5-2.5卜；自然沉淀后分別得上層的水解液和下層的水解殘?jiān)?br> [0015](4)上層的水解液廢棄處理，取下層的水解殘?jiān)?5-100%的乙醇浸提，浸提溫度為48-521，浸提時(shí)間為1.5-2.5卜；浸提所得的殘?jiān)貜?fù)浸提兩次，合并三次浸提所得的浸提液；減壓濃縮，于801水浴加熱至乙醇揮發(fā)干凈，得磷蝦油。
[0016]步驟(1)中超純水用量為南極磷蝦質(zhì)量的5-7倍。
[0017]步驟⑵中酶液的濃度為1.5-3%。
[0018]步驟(2)中木瓜蛋白酶的質(zhì)量為南極磷蝦的1.5?2.5% ；優(yōu)選為2%。
[0019]步驟⑶中調(diào)節(jié)邱值至7.0。
[0020]步驟(3)中，酶解溫度為501。
[0021]步驟(3)中，酶解時(shí)間為2.511。
[0022]步驟⑷中浸提溫度為501，浸提時(shí)間為2匕。
[0023]所述新鮮磷蝦與乙醇的料液比為18:6-101111 ；優(yōu)選為18:61111。
[0024]為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
[0025]如上任一所述的方法制備的磷蝦油，所述的磷蝦油中撤含量為70-80%。
[0026]本發(fā)明中所選用的木瓜蛋白酶活力值為250口/呢。
[0027]本發(fā)明中所述的磷蝦即為南極磷蝦。
[0028]本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于:
[0029]1、利用磷蝦自溶特性，采用自溶+外源酶解的方式，更易于磷蝦油的提取。
[0030]2、不需要事先對(duì)磷蝦進(jìn)行干燥處理，工藝簡(jiǎn)單；易于產(chǎn)業(yè)化。
[0031〕 3、所得的磷蝦油中0撤—2？八含量〉70 %，較以往工藝有明顯提高(現(xiàn)有技術(shù)一般僅能達(dá)到60%左右
[0032]4、避免使用易爆炸的乙酸乙酯作為溶劑；選用的乙醇是工業(yè)常用溶劑，無(wú)毒，易回收，不易爆炸。
【【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】】
[0033]附圖1為不同邱條件下所得磷蝦油中0撤+213八含量的對(duì)比圖。圖中]3? = 5、邱=6、邱=7、邱=8分別對(duì)應(yīng)對(duì)比例1、實(shí)施例1、實(shí)施例2、對(duì)比例2。
[0034]附圖2為不同料液比條件下所得磷蝦油中0撤—2？八含量的對(duì)比圖。圖中料液比為1:6、1:10、1:14分別對(duì)應(yīng)實(shí)施例3、實(shí)施例4、對(duì)比例3。
[0035]附圖3為不同酶用量條件下所得磷蝦油中01^+2？八含量的對(duì)比圖。圖中酶含量為
0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%分別對(duì)應(yīng)對(duì)比例4、對(duì)比例5、實(shí)施例5、實(shí)施例6、實(shí)施例7。
[0036]附圖4為不同酶解時(shí)間下所得磷蝦油中0撤—2？八含量的對(duì)比圖。圖中酶解時(shí)間為111、1.511,211,2.51311分別對(duì)應(yīng)對(duì)比例6、對(duì)比例7、實(shí)施例8、實(shí)施例9、實(shí)施例10。
[0037]附圖5為不同酶解溫度下所得磷蝦油中0撤+213八含量的對(duì)比圖。圖中溫度為401、451、501、551、601、401分別對(duì)應(yīng)對(duì)比例8、實(shí)施例11、實(shí)施例12、實(shí)施例13、對(duì)比例9、對(duì)比例10。
【【具體實(shí)施方式】】
[0038]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說(shuō)明。
[0039]實(shí)施例1-2
[0040](1)取308新鮮的磷蝦，加入15001超純水，置于勻漿機(jī)中勻漿，備用；
[0041](2)取0.458木瓜蛋白酶(上海士鋒生物科技有限公司，活力值為250口/呢下同)，溶解于401111超純水中，制備得酶液；
[0042](3)將制備的酶液加入磷蝦勻漿液中，使用濃度為1?211101/1此1溶液、版10?溶液調(diào)節(jié)邱(實(shí)施例1調(diào)節(jié)邱為6.0，實(shí)施例2調(diào)節(jié)邱為7.0，對(duì)比例1調(diào)節(jié)邱為5.0，對(duì)比例2調(diào)節(jié)邱為8.0)，在551酶解2.51??；所得的酶解產(chǎn)物靜置，自然沉淀得到位于上層的水解液和位于下層的水解殘?jiān)?br> [0043](4)上層的水解液廢棄處理，取下層的水解殘?jiān)?8001體積濃度為95%的乙醇浸提，浸提溫度為481，浸提時(shí)間為2.51??；浸提所得到殘?jiān)貜?fù)浸提兩次，合并三次浸提所得的浸提液，減壓濃縮至18“，于常壓條件下801水浴加熱至乙醇揮發(fā)干凈，得南極磷蝦油。
[0044]分析所得磷蝦油中0撤及2？八含量如圖1所示，從圖1中可以看出:實(shí)施例1、實(shí)施例2所制備的南極磷蝦油中0撤和2？八含量高于對(duì)比例1、對(duì)比例2。
[0045]實(shí)施例3-4
[0046](1)取308新鮮的磷蝦，加入20001超純水，置于勻漿機(jī)中勻漿，備用；
[0047](2)取0.758木瓜蛋白酶(上海士鋒生物科技有限公司，活力值為250口/呢)，溶解于201111超純水中，制備得酶液；
[0048](3)將制備的酶液加入磷蝦勻漿液中，使用濃度為1?211101/1此1溶液、版10?溶液調(diào)節(jié)邱至7.0，在551酶解2.51??；所得的酶解產(chǎn)物靜置，自然沉淀得到位于上層的水解液和位于下層的水解殘?jiān)?br> [0049](4)上層的水解液廢棄處理，取下層的水解殘?jiān)?8%的乙醇浸提(實(shí)施例3乙醇用量為18001，實(shí)施例4乙醇用量為30001，對(duì)比例3乙醇用量為42001)，浸提溫度為521，浸提時(shí)間為1.51??；浸提所得到殘?jiān)貜?fù)浸提兩次，合并三次浸提所得的浸提液，減壓濃縮至22“，于常壓條件下801水浴加熱至乙醇揮發(fā)干凈，得南極磷蝦油。
[0050]分析所得磷蝦油中0撤及2？八含量如圖2所示，從圖2中可以看出:實(shí)施例3、實(shí)施例4所制備的南極磷蝦油中0撤和2？八含量高于對(duì)比例3。
[0051]實(shí)施例5-7
[0052](1)取308新鮮的磷蝦，加入17001超純水，置于勻漿機(jī)中勻漿，備用；
[0053](2)取木瓜蛋白酶(實(shí)施例5木瓜蛋白酶用量為0.458，實(shí)施例6木瓜蛋白酶用量為0.68，實(shí)施例7木瓜蛋白酶用量為0.758，對(duì)比例4木瓜蛋白酶用量為0.15^,對(duì)比例5木瓜蛋白酶用量為0.30，溶解于301111超純水中，制備得酶液；
[0054](3)將制備的酶液加入磷蝦勻漿液中，使用濃度為1?211101/1此1溶液、版10?溶液調(diào)節(jié)邱至6.0，在501酶解2.01??；所得的酶解產(chǎn)物靜置，自然沉淀得到位于上層的水解液和位于下層的水解殘?jiān)?br> [0055](4)上層的水解液廢棄處理，取下層的水解殘?jiān)?4001體積濃度為100%的乙醇浸提，浸提溫度為501，浸提時(shí)間為2.01?。唤崴玫綒?jiān)貜?fù)浸提兩次，合并三次浸提所得的浸提液，減壓濃縮至20“，于常壓條件下801水浴加熱至乙醇揮發(fā)干凈，得南極磷蝦油。
[0056]分析所得磷蝦油中0撤及2？八含量如圖3所示，從圖3中可以看出:實(shí)施例5、實(shí)施例6、實(shí)施例7所制備的南極磷蝦油中0撤和2？八含量高于對(duì)比例4、對(duì)比例5。
[0057]實(shí)施例8-10
[0058](1)取308新鮮的磷蝦，加入19001超純水，置于勻漿機(jī)中勻漿，備用；
[0059](2)取0.608木瓜蛋白酶，溶解于3001超純水中，制備得酶液；
[0060](3)將制備的酶液加入磷蝦勻漿液中，使用濃度為1?211101/1此1溶液、版10?溶液調(diào)節(jié)邱至6.5，在521酶解(實(shí)施例8酶解時(shí)間為1.5卜，實(shí)施例9酶解時(shí)間為2.0卜，實(shí)施例10酶解時(shí)間為2.5卜，對(duì)比例6酶解時(shí)間為1卜，對(duì)比例7酶解時(shí)間為310 ；所得的酶解產(chǎn)物靜置，自然沉淀得到位于上層的水解液和位于下層的水解殘?jiān)?br> [0061](4)上層的水解液廢棄處理，取下層的水解殘?jiān)?8001體積濃度為96%的乙醇浸提，浸提溫度為511，浸提時(shí)間為2.31??；浸提所得到殘?jiān)貜?fù)浸提兩次，合并三次浸提所得的浸提液，減壓濃縮至21“，于常壓條件下801水浴加熱至乙醇揮發(fā)干凈，得南極磷蝦油。
[0062]分析所得磷蝦油中0撤及2？八含量如圖4所示，從圖4中可以看出:實(shí)施例8、實(shí)施例9、實(shí)施例10所制備的南極磷蝦油中0撤和2？八含量高于對(duì)比例6、對(duì)比例7。
[0063]實(shí)施例11-13
[0064](1)取308新鮮的磷蝦，加入21001超純水，置于勻漿機(jī)中勻漿，備用；
[0065](2)取0.708木瓜蛋白酶，溶解于3501超純水中，制備得酶液；
[0066](3)將制備的酶液加入磷蝦勻漿液中，使用濃度為1?211101/1此1溶液、版10?溶液調(diào)節(jié)邱至7.0，酶解2.01！(實(shí)施例11酶解溫度為451，實(shí)施例12酶解溫度為501，實(shí)施例13酶解溫度為551，對(duì)比例8酶解溫度為401，對(duì)比例9酶解溫度為601，對(duì)比例10酶解溫度為701 )；所得的酶解產(chǎn)物靜置，自然沉淀得到位于上層的水解液和位于下層的水解殘?jiān)?br> [0067](4)上層的水解液廢棄處理，取下層的水解殘?jiān)?0001體積濃度為97%的乙醇浸提，浸提溫度為491，浸提時(shí)間為1.81??；浸提所得到殘?jiān)貜?fù)浸提兩次，合并三次浸提所得的浸提液，減壓濃縮至21“，于常壓條件下801水浴加熱至乙醇揮發(fā)干凈，得南極磷蝦油。
[0068]分析所得磷蝦油中0撤及2？八含量如圖4所示，從圖5中可以看出:實(shí)施例11、實(shí)施例12、實(shí)施例13所制備的南極磷蝦油中0撤和即八含量高于對(duì)比例8、對(duì)比例9、對(duì)比例10。
[0069]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種從南極磷蝦中提取高含量DHA+EPA磷蝦油的方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)取新鮮的南極磷蝦勻漿，加入超純水，混合均勻，得磷蝦均漿液； (2)取木瓜蛋白酶，溶解于超純水中，得酶液；所述木瓜蛋白酶的質(zhì)量為南極磷蝦質(zhì)量的的 1.5-2.5% ； (3)將步驟(2)制備的酶液加入到步驟(I)制備的磷蝦均漿液中，調(diào)節(jié)pH至6.0-7.0，于45-55°C酶解1.5-2.5h ；自然沉淀后分別得上層的水解液和下層的水解殘?jiān)? (4)上層的水解液廢棄處理，取下層的水解殘?jiān)?5-100%的乙醇浸提，浸提溫度為48-52°C，浸提時(shí)間為1.5-2.5h ;浸提所得的殘?jiān)貜?fù)浸提兩次，合并三次浸提所得的浸提液；減壓濃縮，于80°C水浴加熱至乙醇揮發(fā)干凈，得磷蝦油。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(I)中超純水用量為南極磷蝦質(zhì)量的5-7 倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中酶液的濃度為1.5-3%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中木瓜蛋白酶的質(zhì)量為南極磷蝦質(zhì)量的2%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中調(diào)節(jié)pH值至7.0。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，酶解溫度為50°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，酶解時(shí)間為2.5h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中浸提溫度為50°C，浸提時(shí)間為2h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述新鮮磷蝦與乙醇的料液比為lg:6-10ml ;優(yōu)選為 lg:6ml。
10.權(quán)利要求1-9任一所述的方法提取的磷蝦油，其特征在于，所述磷蝦油中EPA+DHA含量為70-80%。
【文檔編號(hào)】C11B1/10GK104450163SQ201410740489
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月8日
【發(fā)明者】沈俊慧, 畢燕龍 申請(qǐng)人:上海市同濟(jì)醫(yī)院