專利名稱：4－[[(氰基亞氨基)[(1,2,2－三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的對映體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(R)-和(S)-對映體，含有它們的藥物組合物，以及使用這些對映體促進(jìn)毛發(fā)生長的方法。
背景技術(shù)：
鉀離子通道啟動劑如米諾地爾(Upjohn)，吡那地爾(Lilly)和二氮嗪(Shiseido and Schering-Plough)以其毛發(fā)生長刺激活性著稱。因此，美國專利4596812和4139619公開了米諾地爾在治療男性禿頂、斑禿和女性脫發(fā)中的用途。美國專利4057636公開了吡那地爾。DE3827467A公開了米諾地爾和氫化可地松或類視色素的聯(lián)合形式。
Atwal等的美國專利5011837公開了芳基氰基胍類，它們具有鉀離子通道激活活性，并用于高血壓和其它心血管疾病、多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、腎臟和泌尿問題治療以及促進(jìn)毛發(fā)的生長，例如，用于治療男性禿頂(斑禿)。這些芳基氰基胍類具有如下結(jié)構(gòu)
及其互變異構(gòu)體
和
包括其藥用鹽，其中R1是烷基、鏈烯基、鏈炔基、鹵代烷基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基或環(huán)烷基烷基；R2是
R3和R4彼此獨立地選自-R2、氫原子、烷基、鏈烯基、鏈炔基、鹵代烷基、鹵素、烷氧基、-NH烷基、-N-(烷基)2、-S-烷基、-O-芳基-烷基、-S-芳基烷基或-S-芳基、-O-芳基、-NH芳基-烷基，或者R2和R3一起與它們連接的兩個碳原子形成環(huán)基團(tuán)，該基團(tuán)選自
其中m＝1或2，n＝3-5，p＝2-4，X是O、NR5、CH2；而R5是氫原子或R1。
美國專利5011837的實施例1公開了4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]芐腈的制備
其為外消旋混合物的形式。
PCT申請WO 92/02225公開了鉀離子通道啟動機和5-α-還原酶抑制劑結(jié)合促進(jìn)毛發(fā)生長。
PCT申請WO 92/09259A公開了雄激素阻斷劑和鈣離子通道激活劑刺激毛發(fā)生長的用途。
發(fā)明描述按照本發(fā)明，令人意外地發(fā)現(xiàn)4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈，包括其藥用鹽的(R)-對映體具有顯著的毛發(fā)生長促進(jìn)活性，其活性優(yōu)于相應(yīng)的(S)-對映體及這些對映體的外消旋混合物。實際上，已發(fā)現(xiàn)(R)-對映體在刺激毛囊產(chǎn)生毛發(fā)生長方面比相應(yīng)的(S)-對映體本質(zhì)上更快，令人驚奇地并出乎意料地更有效。
本發(fā)明的上述(R)-對映體具有I結(jié)構(gòu)
此(R)-對映體I是基本上純的形式，即至少含99％純(R)-對映體和最多含1％(S)-對映體。
此外，按照本發(fā)明，已發(fā)現(xiàn)4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈，包括其藥用鹽的(S)-對映體具有優(yōu)異的毛發(fā)生長促進(jìn)活性。
本發(fā)明的上述(S)-對映體具有結(jié)構(gòu)II
此(S)-對映體II是基本上純的形式，即至少含99％純(S)-對映體和最多含1％(R)-對映體。
本發(fā)明的對映體與多種無機或有機酸形成鹽。雖然其它鹽也可以用于分離和純化產(chǎn)物，但是優(yōu)選無毒的藥用鹽。這些藥用鹽包括與鹽酸、甲磺酸、硫酸、乙酸、馬來酸等形成的鹽。這些鹽通過此產(chǎn)物與等當(dāng)量的酸在這些鹽能形成沉淀的介質(zhì)中反應(yīng)獲得。
本發(fā)明還包括含4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈或其藥用鹽的(R)-對映體以及藥用載體的藥物組合物。
此外，本發(fā)明也包括含4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈或其藥用鹽的(S)-對映體以及藥用載體的藥物組合物。
本發(fā)明的(R)-對映體，即(R)-4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈可以按照下列反應(yīng)順序制備
本發(fā)明的4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(S)-對映體可以按照上述制備(R)-對映體的反應(yīng)順序制備，不同的是用(S)-α-甲基芐胺代替(R)-α-甲基芐胺，最終形成
其與4-氰基-N′-(4-氰基苯基)硫脲單鈉鹽反應(yīng)形成(S)-對映體(II)。
本發(fā)明的(R)-對映體I或本發(fā)明的(S)-對映體II可以與其它毛發(fā)生長促進(jìn)化合物一起配制。這些化合物如鉀離子通道啟動劑米諾地爾(Upjohn)和/或二氮嗪(Shiseido and Schering-Plough)，以及色滿卡林和吡那地爾；5-α-還原酶抑制劑如非那胸胺(Merck′s Proscar)，特拉唑嗪鹽酸鹽(Abbott′s Hytrin)或多沙唑嗪甲磺酸鹽(Pfizer′sCardura)；和/或雄激素阻斷劑如公開于PCT申請WO 92/09259A中的4-(5-甲氧基庚基)-六氫-2(1H)-戊搭烯酮(pentalenone)，血管收縮藥如倍他米松二丙酸鹽，皮質(zhì)類固醇如氫化可地松和東茛菪鹼及環(huán)丙孕酮乙酸鹽。
本發(fā)明的對映體可以通過局部、口服、非腸道或直腸途徑給藥，如美國專利5011837所述(引入于此作為參考)，優(yōu)選局部給藥。因此，本發(fā)明的對映體以適宜的局部制劑形式施用于需要毛發(fā)生長的皮膚區(qū)域。
此處使用的典型的局部制劑將包括含水或不含水制劑形式的常規(guī)軟膏、霜劑、洗劑、蠟、凝膠、糊劑、膠凍、噴霧劑、氣霧劑等。適宜的局部制劑的實例公開于美國專利4139619和4596812中，將它們引入此文作為參考。
本發(fā)明的對映體將以有效量使用，即足以促進(jìn)毛發(fā)生長或治療毛發(fā)生長疾病以便使毛發(fā)生長增加或產(chǎn)生毛發(fā)的量。典型的局部用組合物包括占該組合物重量約0.01至約15％，優(yōu)選約0.1至約10％的這些對映體。
含有本發(fā)明的對映體的該局部制劑可以施用于接受治療的區(qū)域，如人的頭皮，通過噴霧、輕擦或擦洗將此對映體施用于毛囊的區(qū)域。這些制劑可以以常規(guī)方式在毛發(fā)生長前、期間或隨后施用于治療區(qū)域，至少每天一次，并優(yōu)選每天兩次或多次。
附圖
顯示了本文中描述的(R)-和(S)-對映體各自每天施用一次對雄性C3H小鼠的毛發(fā)生長作用。
下列實施例代表了本發(fā)明的優(yōu)選實施方案。
實施例1(R)-4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈
A.(R)-1，2，2-三甲基丙基胺
按照Manley和Quast(J.Med.Chem.1992，35，2327-2340)所述方法，稍加改善，制備此標(biāo)題化合物。將頻那酮(29g，290mmol)、(R)-α-甲基芐基胺(17.6g，145mmol)和對甲苯磺酸一水合物(300mg)在甲苯(150ml)中的混合物，用Dean-Stark分離器回流3天(以從此反應(yīng)混合物中除去水)。蒸發(fā)溶劑并將此殘余物在約120-2℃(9mm)蒸餾得到21g(71％收率)的
為無色油狀物。將此物質(zhì)溶解于無水THF(210ml)中并在0-2℃用硼烷-THF復(fù)合物(1M，206ml，206mmol)處理。讓此混合物的溫度回到室溫，攪拌5小時并真空濃縮。向所得油狀殘余物中小心加入乙醇(300ml)，并將此混合物回流1小時并再次真空濃縮。將此殘余物在堿性氧化鋁(活性級1/己烷)上進(jìn)行色譜純化得到無色油狀物。質(zhì)子NMR和HPLC(YMC C18S3 4.6X50mm柱/水-甲醇-磷酸90∶10∶0.2至10∶90∶0.2梯度)表明此物質(zhì)被約10％的(S，R)-非對映異構(gòu)體污染。因此，將此混合物再進(jìn)行閃式色譜(硅膠/己烷-乙酸乙酯-三乙胺95∶5∶0.1)得到
(11.45g，55.8mmol，收率54％)。上述化合物(11.45g)和10％鈀碳(1.5g)加入乙醇(230ml)中，并在氫氣中攪拌12小時。將此混合物過濾并將含標(biāo)題化合物的濾液(約230ml)用于下步反應(yīng)，該濾液為約0.24M的乙醇溶液(假設(shè)收率100％)。
B.N-氰基-N′-(4-氰基芐基)硫脲單鈉鹽
按照美國專利5011837的實施例1部分A制備此標(biāo)題化合物。
C.(R)-4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈
向部分B化合物(6.0g，26.8mmol)的DMF(150ml)溶液中，依次加入部分A化合物的溶液(約0.24M的乙醇溶液，112ml，26.8mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(WSC)(6.0g，31.3mmol)。將此混合物室溫下攪拌3小時，用乙酸乙酯稀釋，并用1N鹽酸、水和鹽水依次洗滌。將有機層用硫酸鎂干燥，濃縮并將此粗品通過閃式色譜在硅膠上(己烷-乙酸乙酯-三乙胺75∶25∶0.2)純化得到無色泡沫。將此物質(zhì)用異丙醇重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物，為白色固體(4.15g，57.6％)，mp159-160℃；[α]D-180℃＝1，MeOH；通過手性HPLC測定的對映體純＝99％(ChiralPak AD柱/己烷-異丙醇-三乙胺80∶20∶0.2)；MS270(M+H)+；1H NMR(CDCl3)δ 8.65(br s，1H)，7.69(d，2H，J＝8.79 Hz)，7.37(d，2H，J＝8.79 Hz)，4.93(br d，1H)，3.83(m，1H)，1.10(d，1H，J＝6.45 Hz)，0.90(s，9H).
元素分析C15H19N5理論值C，66.89H，7.11N，26.00實測值C，66.71H，7.14N，25.98實施例2(S)-4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈
此標(biāo)題化合物由實施例1部分B的化合物和(S)-1，2，2-三甲基丙基胺(按照Manley和Quast，J.Med.Chem.1992，35，2327-2340制備)通過與實施例1部分C描述的相同方法制備。獲得的產(chǎn)物為無色固體，mp 158-159℃；[α]D+189℃＝1，MeOH；通過手性HPLC測定的對映體純＝99.4％(ChiralPak AD柱/已烷-異丙醇-三乙胺80∶20∶0.2)；MS270(M+H)+；1H NMR(CDCl3)δ 8.43(br s，1H)，7.69(d，2H，J＝8.79 Hz)，7.37(d，2H，J＝8.79 Hz)，4.93(br d，1H)，3.83(m，1H)，1.10(d，1H，J＝6.45Hz)，0.90(s，9H).
實施例3實施例1的(R)-對映體和實施例2的(S)-對映體在動物模型中對毛發(fā)生長作用的比較如下實驗的目的是比較和評價實施例1的(R)-對映體和實施例2的(S)-對映體在動物模型中對毛發(fā)生長的體內(nèi)作用。在C3H小鼠中比較這兩種對映體對毛發(fā)生長的局部作用。
動物模型C3H小鼠是研究毛發(fā)生長的有用的模型。其此用途是基于以下事實此動物的皮膚色素沉著是由毛囊的黑素細(xì)胞提供的，而不是表皮提供的。在毛發(fā)生長終期或毛囊的休止期，皮膚是粉紅色的。在毛發(fā)生長初期或生長期的早期，皮膚突然變?yōu)榛疑耶?dāng)毛發(fā)生長初期期進(jìn)一步發(fā)展時，皮膚的顏色變暗。在此研究中，用目測作為毛發(fā)生長初期誘導(dǎo)的體內(nèi)實驗。此外，隨著毛發(fā)生長初期進(jìn)展，皮膚的厚度增加，由薄毛發(fā)生長終期皮膚變?yōu)榭蓹z測的厚毛發(fā)生長初期皮膚。因此，根據(jù)皮膚顏色和皮膚的顯微厚度，由這些小鼠提供了靈敏的、可等量的和方便的毛發(fā)生長期的評價方法。
使用20只一組，六至七周齡的雄性C3H小鼠，其毛囊處于毛發(fā)生長的休止起。在其生命的此階段，毛囊保持在毛發(fā)生長終期期多達(dá)30天或更長。這為篩選藥物提供了適當(dāng)?shù)目梢晻r間。改善毛發(fā)生長的化合物刺激毛囊從毛發(fā)生長終期到毛發(fā)生長初期期。此刺激通過毛囊周期的毛發(fā)生長終期期縮短證明。
用氯胺酮/甲苯噻嗪(100mg/kg和12mg/kg)腹膜內(nèi)給藥麻醉動物，而其限定的背側(cè)區(qū)域的毛發(fā)被齊根剪掉。
將50微升的2％的實施例1的(R)-對映體和2％的實施例2的(S)-對映體以及載體本身施用于背側(cè)區(qū)域，給粉紅色皮膚的動物進(jìn)行局部治療，每天1次，每周5天。使用的載體是乙醇/丙二醇/水，60/30/10。治療持續(xù)至少4-5周。
每天觀察對動物的副作用及被測位置的變化。記錄所有的觀察結(jié)果。每周評價被測位置皮膚顏色及毛發(fā)生長的變化。在此以及中，用目測的皮膚從粉紅色變?yōu)榛疑八鶎?dǎo)致的毛發(fā)生長來評價藥物作用。
結(jié)果在治療期間，誘發(fā)了毛囊刺激的動物的百分率在附圖中給出。在這兩種對映體之間觀察到的最顯著的現(xiàn)象是發(fā)生毛囊刺激的時間不同。實施例1的(R)-對映體的開起作用時間為第7天，而實施例2的(S)-對映體是第11天。載體對照開始作用的時間時間第28天。用實施例1的(R)-對映體治療的第11天，在40％的被測小鼠中引起的毛囊刺激，而實施例2的(S)-對映體只是5％。第14天，用實施例1的(R)-對映體治療的50％的動物表現(xiàn)出毛囊刺激，而實施例2的(S)-對映體是25％。第28天，用實施例1的(R)-對映體治療的85％的動物表現(xiàn)出毛囊刺激，而實施例2的(S)-對映體是65％。因此，在整個治療期間，實施例1的(R)-對映體治療組比實施例2的(S)-對映體治療組顯示了更高的毛囊刺激機率。
附圖顯示了每天局部使用1次實施例1的(R)-對映體和實施例2的(S)-對映體的作用。
總之，在C3H小鼠中得到的這些結(jié)果表明，就其對毛囊刺激的作用而言，在實施例1的(R)-對映體和實施例2的(S)-對映體之間，存在顯著的差別；具體地講，(R)-對映體比相應(yīng)的(S)-對映體起作用更快。
特別是考慮到這些對映體各自的相關(guān)舒張能力，其一般被看作毛發(fā)生長促進(jìn)性質(zhì)的指示(《血管舒張藥治療的副作用》(Side Effects ofVasodilator Therapy)，W.A.Pettinger等，Hypertension，1988，Vol.11，II-34至II-36，及《米諾地爾刺激人脫發(fā)頭皮的皮膚血流通過激光多普勒速度測量法和照相脈沖體積描記法》，R.C.Wester等，J.Invest.Dermatol.，184，Vol.82，515-517)，這些結(jié)果確實令人驚奇和出乎意料。
因此，雖然表示(R)-對映體的血管舒張能力的IC50為47±17 nM，而(S)-對映體的為157±35 nM，如上所述，(R)-對映體在治療11天內(nèi)產(chǎn)生了毛發(fā)生長，其對毛發(fā)生長的促進(jìn)能力比相應(yīng)的(S)-對映體大8倍。
權(quán)利要求
1.4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(R)-對映體或其藥用鹽。
2.權(quán)利要求1的(R)-對映體，基本上與其相應(yīng)的S-對映體分離。
3.權(quán)利要求1的(R)-對映體具有如下結(jié)構(gòu)
其為基本上純的形式。
4.權(quán)利要求1的(R)-對映體，其對映體純度至少為99％。
5.含有權(quán)利要求1所述(R)-對映體和藥用載體的藥物組合物。
6.一種藥物的聯(lián)合形式，其中包括權(quán)利要求1所述的R-對映體，及與其聯(lián)合的另一種毛發(fā)生長促進(jìn)劑。
7.促進(jìn)毛發(fā)生長的方法，該方法包括給需要此治療的患者使用治療有效量的4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(R)-對映體，或其藥用鹽。
8.權(quán)利要求7所述的方法，其中(R)-對映體經(jīng)系統(tǒng)或局部給藥。
9.權(quán)利要求7所述的方法，其中(R)-對映體經(jīng)局部給藥。
10.權(quán)利要求7所述的方法，其中(R)-對映體以霜劑、洗劑、液體制劑或軟膏制劑的形式給藥。
11.治療男性禿頂?shù)姆椒?，包括給需要治療的患者使用治療有效量的權(quán)利要求1所述的R-對映體。
12.4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(S)-對映體或其藥用鹽。
13.權(quán)利要求12的(S)-對映體，基本上與其相應(yīng)的(R)-對映體分離。
14.權(quán)利要求12的(S)-對映體具有如下結(jié)構(gòu)
其為基本上純的形式。
15.權(quán)利要求12的(S)-對映體，其對映體純度至少為99％。
16.含有權(quán)利要求12所述(S)-對映體和藥用載體的藥物組合物。
17.一種藥物的聯(lián)合形式，其中包括權(quán)利要求12所述的S-對映體，及與其聯(lián)合的另一種毛發(fā)生長促進(jìn)劑。
18.促進(jìn)毛發(fā)生長的方法，該方法包括給需要此治療的患者使用治療有效量的4-[[(氰基亞氨基)[(1，2，2-三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(S)-對映體，或其藥用鹽。
19.權(quán)利要求18所述的方法，其中(S)-對映體經(jīng)系統(tǒng)或局部給藥。
20.權(quán)利要求18所述的方法，其中(S)-對映體經(jīng)局部給藥。
21.權(quán)利要求18所述的方法，其中(S)-對映體以霜劑、洗劑、液體制劑或軟膏制劑的形式給藥。
22.治療男性禿頂?shù)姆椒?，包括給需要治療的患者使用治療有效量的權(quán)利要求12所述的S-對映體。
全文摘要
4－[[(氰基亞氨基)[(1,2,2－三甲基丙基)氨基]甲基]氨基]芐腈的(R)－對映體以及相應(yīng)的(S)－對映體用于促進(jìn)毛發(fā)生長,如對于男性禿頂。
文檔編號A61Q7/00GK1265589SQ98807919
公開日2000年9月6日 申請日期1998年8月3日 優(yōu)先權(quán)日1997年8月13日
發(fā)明者K·S·阿特瓦爾 申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司